При гнойно-воспалительных заболеваниях
| Вид материала | Документы |
- Гнойно воспалительных заболеваний, 39.54kb.
- Тематический план лекций по микробиологии для студентов 3 курса вечернего отделения, 52.04kb.
- Методическое письмо 2004, 1057.38kb.
- Прогнозирование тяжести течения и исходов осложненных гнойно-воспалительных заболеваний, 1080.2kb.
- Перечень экзаменационных вопросов на вступительный экзамен в ординатуру по специальности, 50.94kb.
- Методическое письмо 2004 г. Министерство здравоохранения и социального развития российской, 468.42kb.
- Гнойно-воспалительные заболевания органов малого таза, 173.22kb.
- Оценка метаболитов микрофлоры при воспалительных заболеваниях пародонта. 14. 01., 347.36kb.
- Курсовая терапия инфекционно-воспалительных заболеваний мочеполовой сферы, 40.55kb.
- Календарно-тематический план лекций по репродуктологии кафедра акушерства, гинекологии, 83.5kb.
Материал и методы исследования
Материалом исследования служила кровь животных и человека, отдельные компоненты крови, кровезаменители, лимфа, моча, биологические и патологические жидкости организма, сапрофитная микрофлора человека и лабораторных животных, синтезированные липосомы и их компоненты
Клиническая часть исследований выполнена на 485 пациентах. В экспериментальной части работы были использованы лабораторные животные: собаки (56 особей); крысы белые беспородные половозрелые обоего пола (523 особи); мыши линии СВА половозрелые обоего пола (420 особей).
В опытах in vitro в разделе изучения механизмов изменения биологической активности бензилпенициллина в облученной рентгеновскими лучами крови и кровезаменителей проведено 210 экспериментов.
В процессе выполнения клинико-экспериментальных исследований были использованы современные, а также модифицированные или разработанные нами методы исследования:
- квантовая обработка крови для осуществления гемотерапии с помощью ЭКОК, ИОК, УФО;
- озонирование физиологического раствора для последующей озонотерапии;
- биотехнологические: создание иммунолипосом для вакцинопрофилактики и терапии стафилококковой инфекции;
- гематологические: общеклинический анализ крови с помощью общепринятых методов и на гемоанализаторе AVL 995 (Австрия);
- биохимические: активность ферментов пентозо-фосфатного пути окисления глюкозы в эритроцитах: Г-6-ФДГ в мкМ НАДФН/гНв в 1 мин и транскетолаза в мкМ с-7ф/гНв; содержание нуклеиновых кислот - ДНК и РНК в плазме крови в мг/л; общий белок сыворотки крови в г/л; серомукоидная фракция гликопротеидов крови в мг % в нашей модификации, белковые фракции сыворотки крови в % - иммуно- и электрофоретически; белковые и небелковые SH-группы; активность ацетилхолинэстеразы эритроцитов; интенсивность ПОЛ и активность АОС; активность гормонов (кортизол, альдостерон, инсулин радиоиммунологически; содержание средних молекул в сыворотке, а также активность ЛДГ и КФК стандартными методами;
- иммунологические: активность факторов гуморальной и клеточной неспецифической защиты: лизоцим - турбидиметрическим способом с тест-культурой Micrococcus lysodeikticus штамм 266 S, -лизины - фотоколориметрически с тест-культурой Bacillis subtilis штамм № 83, БАС - нефелометрически с тест культурой E. coli O-111, комплемент (СН50) по 50% гемолизу; фагоцитарная активность полинуклеаров периферической крови с тест-микробом S. aureus 209P; оксидантная активность нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия - НСТ-тест; количество сывороточных иммуноглобулинов классов IgG, IgA и IgM методом диффузии в агар по Mancini; состояние клеточного иммунитета по содержанию Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций методом розеткообразования с эритроцитами барана или мыши; определение активности индуцированного иммунитета в тесте расчета АОК селезенки по методу Ерне; количество R-белков иммунохимическим методом;
- фармакологические: определение биологической активности антибиотиков в жидкостях методом диффузии в агар; количественная оценка включения антибиотика в лимфоциты крови в собственной модификации;
- фармакокинетический: распределение антибиотиков в организме при различных способах парентерального введения;
- микробиологические: идентификация возбудителей, выделенных из патологических жидкостей; моделирование стафилококкового и протейного сепсиса с учетом летальности, количественный учет микроорганизмов из гомогената внутренних органов;
- статистические: методы непараметрической статистики;
- радиологические: метод ЭКОК на установке «Перенос» с расчетом дозиметрии облучения; математический расчет терапевтической дозы рентгеновского облучения донорской крови и других биологических жидкостей;
- цитогенетические (расчет числа хромосомных аберраций клеток костного мозга облученного организма;
- морфологические (гистологическое исследование паренхиматозных органов и их сосудистой сети на окрашенных мазках);
- хирургические: методика артерио-венозного шунтирования для выполнения ЭКОК; моделирование инфицированной кожно-мышечной раны у собак и крыс и планиметрическая оценка скорости ее заживления; метод аспирационного и аспирационно-промывного дренирования раны при остеомиелите; дренирование и катетеризация лимфатических сосудов стопы для осуществления эндолимфатического подведения антибиотиков в организм; оперативные пособия в соответствии с нозологической формой заболевания;
- функциональная органометрия органов и систем (количественное измерение электрокожного сопротивления в БАТ с помощью аппарата “Старт”;
- биорезонансное тестирование in vitro и клиническое применение лекарственных препаратов в сверхнизких концентрациях.
Подробно специальные методы исследования описаны в соответствующих разделах диссертации.
Автор принимал непосредственное участие в планировании и выполнении экспериментальных и клинических иммунологических и микробиологических исследований, определении некоторых биохимических и фармакокинетических констант, динамической оценки функционального резерва больных и их лечения гомеопатическими средствами в условиях хирургического стационара и поликлиники.
^ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
В процессе изучения ЭКОК интактных собак было выявлено, что бета-облучение крови в дозе 6-12 Гр не приводит к развитию лучевого синдрома. Наоборот, спустя 1-3 сут после сеанса облучения содержание лейкоцитов периферической крови возрастает с 9554±1452 в мкл до 15700±1936 и 15318±1846 в мкл, соответственно (Р<0,05), и остается выше нормы до 5-6 сут эксперимента. Аналогично, но в несколько более поздние сроки после ЭКОК (с 3 по 7 неделю опыта) в крови увеличивается содержание эритроцитов: в среднем на 22% (Р<0,05). На протяжении всего эксперимента в крови опытных животных значительно повышено содержание гемоглобина. С 4 сут и до конца исследования статистически значимо увеличивается показатель гематокрита (в среднем на 17%, Р<0,05). В то же время отсутствует существенная динамика изменений показателя СОЭ и серомукоида, что свидетельствует об отсутствии острофазных изменений метаболизма в организме собак с ЭКОК.
При изучении активности ряда факторов гуморальной и клеточной неспецифической резистентности организма животных после ЭКОК установлены следующие закономерности. Активность лизоцима сыворотки крови несколько снижается сразу после облучения крови (с 2,97±0,17 мкг/мл до 2,47±0,21 мкг/мл, Р>0,05) и более значимо спустя сутки (на 38%, Р<0,05). Однако, дальнейшая динамика данного показателя свидетельствует о статистически значимом и стабильном повышении данного показателя к 7-14 суткам опыта на 28% и 23%, соответственно. В последующие сроки активность лизоцима остается в пределах нормы. Еще в большей степени к 7-14 сут после облучения крови повышаются литические свойства β-лизинов крови (на 34% и 57%, соответственно, Р<0,05), оставаясь немного повышенным до конца наблюдения. Об отсутствии деструктивного влияния ионизирующего облучения крови на организм свидетельствует также стабильность комплемента (С-Н 50 ед), активность которого на протяжении всего периода исследования остается без изменения. Пул сывороточных иммуноглобулинов, определяемых по относительному содержанию электрофоретической фракции γ-глобулинов крови, на протяжении опыта также остается без изменений, что свидетельствует о стабильности иммуногенеза. Система белков сыворотки крови в целом (за исключением некоторого прироста α1-глобулина) на протяжении всего эксперимента не претерпевает существенных изменений, что также подтверждает отсутствие радиотоксического эффекта облучения крови вне организма. Сразу после облучения происходит незначительное снижение % фагов (с 37% до 34%). К концу первой недели опыта наблюдается неуклонный прирост фагоцитирующих нейтрофилов до 46%, а к концу первого месяца – до 57% (Р<0,05). Параллельно в фагоцитах к 7 суткам возрастет количество поглощенных тест-микробов (до 4,4±0,4 кокка на фагоцит, против 3,8±0,5 микроба в исходе) и сохранение этой тенденции до окончания эксперимента (до 5,1±0,7 кокка; Р<0,05). Результаты исследования энергетических и репаративных процессов в организме собак после ЭКОК позволили установить, что активность ключевых ферментов пентозофосфатного пути расщепления глюкозы: Г-6-ФДГ и транскетолазы изменяется после облучения крови неравнозначно. Так, активация транскетолазы спустя 1 т 3 сут. опыта возрастает на 70% и 60%, соответственно (Р<0,05) и остается достоверно повышенной на 30% и 46%, соответственно до 6-7 недель эксперимента. Активность Г-6-ФДГ после ЭКОК изменяется фазно с достоверным повышением на 67% к 3 сут. опыта и снижением на 33% к 14 сут. В отдаленные сроки исследования активность этого фермента колеблется в пределах физиологической нормы. Содержание нуклеиновых кислот плазмы крови также возрастает после ЭКОК, но в разной степени: ДНК – к 4 неделе опыта на 78%, Р<0,05, в то время как содержание РНК достоверно увеличивается с 50,7±6,4 мг/л до 78,3±9,0 мг/л непосредственно после облучения (прирост составляет 54%), оставаясь повышенным в среднем на 36% (Р>0,05) до конца опыта. В облученной крови происходит изменение связывающей способности биополимеров, что подтверждается значительным (в 20-30 раз) повышением биологической активности бензилпенициллина с 1 по 7 сутки. Этот феномен в дальнейшем был учтен при разработке метода гемоантибиотикотерапии ГВЗ в клинике.
Таким образом, показано, что радиационное β-облучение крови вне организма интактных собак не вызывает выраженных деструктивных изменений со стороны крови и гуморально-клеточных реакций проявления резистентности организма, наоборот, способствует некоторой активизации ряда показателей адаптации организма.
^ ЭКОК у собак с экспериментальными кожно-мышечными гнойными ранами показало следующее. В течение первых 7 суток после моделирования раны развивается анемизация животных, при этом число эритроцитов снижается на 16% (Р<0,05). Облучение крови в шунте в дозе 6-8 Гр производили спустя 7 сут.; контролем служили животные с раной без ЭКОК. Из полученных данных следует, что анемия у подопытных собак выражена меньше, чем у животных без облучения крови, так как содержание эритроцитов у собак опытной группы было в среднем на 12% выше, чем у животных контрольной группы. Одновременно в течение первых 7 сут. снижается содержание гемоглобина с 17,2±0,4 г/% в исходе до 15,0±0,5 г/%; Р<0,05). Примечательно, что после ЭКОК восстановление содержания гемоглобина протекает у животных опытной группы быстрее (к 14 сут.) чем в контроле. В процессе развития гнойной раны регистрируется выраженный лейкоцитоз к 3 и 7 суткам (прирост числа лейкоцитов составляет 51% и 40%, соответственно; Р<0,05). У животных опытной группы через 3 сут после облучения крови число лейкоцитов в 3 раза превышает исходный уровень (Р<0,05), в то время как у контрольных собак прирост составляет только 50% (Р<0,05). Спустя 7 сут. после облучения крови существенных различий в содержании лейкоцитов у животных обеих групп не выявляется. Индикатор степени повреждения тканей – СОЭ остро реагирует при данной патологии, возрастая на 29% и 98%, соответственно к 3 и 7 сут. опыта (Р<0,05). Облучение крови способствует более существенной нормализации данного показателя, чем в контрольной группе (Р>0,05).
Динамика факторов гуморальной и клеточной неспецифической защиты при использовании ЭКОК в динамике заживления кожно-мышечной раны в целом характерна для острого воспалительного процесса, однако у опытных собак адаптивные изменения ФГНЗ и клеточной резистентности более выражены. Это проявляется умеренным повышением активности лизоцима, комплемента и β-лизинов (Р>0,05) на фоне стабильного уровня относительного содержания фагоцитирующих полинуклеаров после ЭКОК, что косвенно подтверждает снижение интенсивности воспаления у животных опытной группы. На 7 сут эксперимента в крови значительно увеличивается (с 21,9±3,5% до 83,7±13,3%, Р<0,05) число лимфоцитов, спонтанно образующих «розетки» с эритроцитами барана и являющихся прототипом Т-лимфоцитов человека, однако в динамике наблюдения снижение их относительного содержания в обеих группах животных было однотипным.
Показатели белково-углеводного обмена отражают состояние умеренно выраженной диспротеинемии, характерной для воспалительного процесса как у опытных, так и контрольных животных. Транзиторный иммунодефицит регистрируется в виде снижения относительного содержания γ-глобулинов крови с 1 по 7 сутки опыта (с 8,4±1,3% в исходе до 5,9±1,0% и 7,3±1,0%, соответственно; Р>0,05). После облучения крови происходит значительное, но кратковременное увеличение иммуноглобулинов до 11,4±1,9% (Р>0,05). У собак с облучением крови наблюдается ускоренное заживление кожно-мышечной раны (в сроки от 3 до 7 сут. после ЭКОК ее площадь уменьшалась ежедневно в среднем на 3,8-8,1%, в то время как у контрольных животных – лишь на 2,3%). По-видимому, снижение инфицированности гнойной раны, является одной из причин снижения напряженности иммунитета и % γ-глобулинов у опытных собак в более отдаленные сроки эксперимента. В пользу данного предположения свидетельствует изменение микробного пейзажа раны после облучения крови. Выявлено существенное снижение количества микробных ассоциаций: со 100% до 15% с тенденцией к выделению монокультур. Об усилении пластических процессов на фоне ЭКОК свидетельствует динамика содержания РНК, ДНК и общих сульфгидрильных групп в плазме крови. Значительное возрастание данных показателей на протяжении всего эксперимента отражает усиление окислительно-восстановительных и репаративных процессов в тканях, влияющих на заживление раны (рис 1)..
Результаты, полученные при ЭКОК интактных собак и животных с экспериментальной гнойной раной позволили установить в целом благоприятные последствия радиационного облучения крови вне организма на процессы энергообеспечения, синтетических процессов, иммунологической реактивности и микробиологических аспектов инфекционно-воспалительного процесса. В связи с этим была разработана система квантовой гемотерапии при помощи трансфузии облученной рентгеновскими лучами донорской крови для лечения ряда нозологических форм нозокомиальной патологии. Тестом изменения биологических свойств облучаемой крови явилось определение в ней антимикробной активности бензилпенициллина. Было показано, что по мере облучения рентгеновскими лучами донорской крови наблюдается волнообразное изменение биологических свойств антибиотика, в особенности при интенсивности облучения 1 Гр и 100 Гр. Это позволило рассчитать дозовые нагрузки облучения донорской крови, исходя из объема ампулы 250 мл при ее дилюции в организме реципиента в 10, 20 и 25 раз в зависимости от массы тела и с учетом сохранения высокой активности антибиотика.
^ Квантовая гемотерапия гнойно-септических заболеваний (перитонита, обширных гнойных ран, хронического остеомиелита) осуществлялась с помощью трансфузии 250 мл изолированно облученной рентгеновскими лучами донорской крови на следующий день после оперативного вмешательства. Больным контрольной группы производили переливание равного объема необлученной крови доноров в те же сроки. Все больные основной группы отмечали субъективное улучшение качества жизни: самочувствия, сна, аппетита и физической активности в среднем на 2-3 сут. раньше, чем в контрольной. Заживление послеоперационной раны у больных основной группы также протекало благоприятнее. Аналогичным образом происходила нормализация температурной кривой. После трансфузии ИОК наблюдается более раннее купирование лейкоцитоза и снижение относительного количества полинуклеарных лейкоцитов к 4-м суткам в среднем с 7,0±2,5% до 1,4±0,2%, что свидетельствует об обратном развитии воспаления. Оценка cостояния естественного гуморального иммунитета, основанная на определении концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов IgG, IgA и IgM позволила установить, что наиболее выраженный иммунодефицит по содержанию всех классов иммуноглобулинов наблюдается у больных с перитонитом (таблица 1).
Таблица 1
Динамика сывороточных иммуноглобулинов (г/л) при квантовой гемотерапии
у больных перитонитом
| Класс антител | Группы больных | Исход | 3 сутки | 7 сутки |
| 16,0 2,1 IgG | ИОК | | 18,4 3,5 | 23,9 7,6 |
| | контроль | 6,1 0,7 | 5,9 0,9 | |
| IgA 2,6 0,9 | ИОК | | 4,9 0,9 | 3,2 1,8 |
| | контроль | 1,5 0,4 | 1,5 0,4 | |
| IgM 2,5 0,4 | ИОК | | 4,5 1,5 | 2,3 1,2 |
| | контроль | 0,7 0,2 | 0,9 0,8 |
В меньшей степени снижение концентрации сывороточных антител регистрируется у больных с обширными гнойными ранами и с хроническим остеомиелитом. Под влиянием трансфузии ИОК иммунодефицит у больных с перитонитом не только купируется, но также происходит значительное (на 44% увеличение концентрации антитоксических антител класса IgG к 7 сут. наблюдения, на 88% - подъем IgA, обеспечивающего иммунную защиту слизистых оболочек и кожи, на 3 сут. наблюдения и на 80% - увеличение содержания IgM, как первой линии защиты организма от микробных поражений. В процессе гемотерапии облученной кровью больных с обширными гнойными ранами и остеомиелитом также по сравнению с исходным уровнем повышается содержание всех классов иммуноглобулинов в крови, но в меньшей степени, чем при перитоните.
^ Применение ИОК в восстановительном лечении больных с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки после операции резекции желудка показало, что трансфузия облученной крови, производимая одномоментно с операцией не только предотвращает развитие транзиторного иммунодефицита, наблюдаемого в контрольной группе больных, которым переливали кровезаменители, но, наоборот, стимулирует гуморальный иммунитет, снижая риск возникновения послеоперационных гнойных осложнений. При исследовании базовых показателей клеточного иммунитета: Т- и В-лимфоцитов крови этих больных также выявляется иммунопротективный эффект ИОК. Относительное содержание этих видов иммунокомпетентных клеток в послеоперационном периоде было ближе к норме в опытной, чем в контрольной группе.
^ Комплексная терапия с использованием переливания ИОК апробирована при лечении 72 больных рецидивирующей формой рожистого воспаления, которые в зависимости от получаемого лечения были распределены на три группы сравнения: I группа – получавшие обычное комплексное лечение, включающее антибиотикотерапию; II группа – получавшие лечение, аналогичное I-й группе и дополнительно трансфузию 250 мл необлученной донорской крови; III группа – получавшие лечение, аналогичное I-й группе и дополнительно трансфузию 250 мл облученной рентгеновскими лучами донорской крови.
Преимущества лечения больных III-й группы, заключается в более ранней (в среднем в 2 раза) и значительной нормализации температурной кривой, гиперемии и отека зоны рожистого воспаления, а также скорости эпителизации булл. Значительный интерес представляет оценка иммунного статуса у данной категории больных, так как основой рецидивирования рожи считается дефект иммунной системы (таблица 2)
Таблица 2
Состояние клеточного иммунитета у больных рожей
в зависимости от метода лечения
| | Показатели клеточного иммунитета | |||
| Группы | Т-РОК (1333 117 в 1 мкл) | В-РОК (318 26 в 1 мкл) | ||
| больных | до лечения | после лечения | до лечения | после лечения |
| I группа | 528 49 | 587 43 | 253 22 | 262 27 |
| II группа | 433 106 | 379 46 | 235 48 | 165 18 |
| III группа | 427 91 | 960 117* | 264 39 | 351 53 |
Показано, что исходное состояние иммунитета характеризуется выраженным дефицитом Т- и В-РОК, а также иммуноглобулинов сыворотки крови (таблица 3).
Таблица 3
Состояние гуморального иммунитета у больных рожей в зависимости от
метода лечения
| | Показатели гуморального иммунитета | |||||
| Группы | IgG (13,6 г/л) | IgA (3,4 г/.л) | IgM (2,8 г/л) | |||
| больных | до лечения | после лечения | до лечения | После лечения | до лечения | после лечения |
| I группа | 9,7 0,9 | 8,9 0,5 | 5,1 0,5 | 5,2 0,5 | 1,6 0,2 | 1,9 0,3 |
| II группа | 11,1 3,8 | 12,4 4,8 | 3,1 0,9 | 5,0 1,4 | 0,9 0,3 | 1,8 0,7 |
| III группа | 9,7 0,8 | 12,1 1,6 | 3,4 0,5 | 4,8 0,9 | 0,6 0,1 | 0,8 0,1 |
Под влиянием проводимой терапии у больных всех трех групп наблюдается частичное восстановление показателей клеточного иммунитета особенно леченых облученной кровью. В равной степени это относится к показателям уровня сывороточных иммуноглобулинов и анти-О-стрептолизина, которые исходно снижены, а затем частично восстанавливаются в процессе лечения. Установлено, что на протяжении полутора лет последующего наблюдения ни один из обследованных не предъявил жалоб на рецидив заболевания при сохранении на достаточном уровне показателей иммунореактивности. Выявлено статистически значимое увеличение относительного содержания Т-РОК с 33±3% до 55±5% (Р<0,001) спустя 3 месяца после проведенного лечения облученной кровью с сохранением Т-клеточного звена иммунитета в пределах нижней границы нормы (50±4%; Р<0,001) вплоть до 18 месяца наблюдения. Умеренно выраженное повышение относительного содержания В-РОК также сохраняется до конца срока наблюдения. Через 3 и 9 месяцев регистрируется прирост IgG с 7,4±0,5 г/л до 11,2±3,2 г/л и 18,2±0,1 г/л (Р<0,001), соответственно. В сроки от 9 до 18 месяцев мониторинга нормализуется содержание IgA (с 3,6±0,4 г/л в исходе до 4,0±0,1 г/л и 7,5±0,9 г/л; Р<0,001), соответственно. Статистически значимое снижение концентрации IgM с 2,4±0,4 г/л в исходе до нижней границы нормы (0,5±0,1 г/л) отражает отсутствие у обследованных лиц инфекционного процесса.
Таким образом, проведенные клинико-экспериментальные исследования позволили установить высокую эффективность применения метода квантовой гемотерапии для лечения ряда заболеваний гнойно-воспалительной этиологии и профилактики их развития в послеоперационном периоде, патогенетические основы которого базируются на восстановлении иммунологической реактивности и биохимической адаптации организма.
^ Закономерности воздействия УФО крови на системном уровне в эксперименте. Лечение заболеваний методом УФО крови известно давно, однако в литературе к моменту нашего исследования имелись лишь отдельные сообщения о механизмах данного способа квантовой терапии. В связи с этим нами на 40 половозрелых крысах-самцах линии Вистар исследовали морфо-функциональные показатели после 30 сек УФО крови из расчета 1 мл/кг массы тела в экспериментальной установке, создающей световой поток ультрафиолетового спектра с преимущественной длиной волны λ=254 нм. Гистологические исследования, выполненные спустя 40 мин и 3 сут после облучения крови выявили морфологические изменения эритроцитов (анизо- и сфероцитоз), атонию сосудистых стенок легких с повышением их проницаемости, а также структуры некоторых паренхиматозных органов (печени, почек) и миокарда. Характер метаболических изменений в ранние сроки после УФО также указывает на проявление деструктивных процессов при данной мощности облучения (статистически достоверное снижение активности ферментов пентозофосфатного пути окисления глюкозы, снижение количества РНК и ДНК в плазме крови и возрастание содержания общих сульфгидрильных групп за счет SH-белковых групп. Спустя 7 сут после УФО регистрируются разнонаправленные изменения со стороны некоторых факторов клеточной иммунологической резистентности: статистически значимое подавление фагоцитоза и возрастание на 50% количества антителообразующих клеток в селезенке (Р<0,05). В отдаленные сроки наблюдения: спустя 30 и 45 сут после УФО депрессия фагоцитоза сменяется на выраженную стимуляцию (рис 2) как % фагов (с 17% до 67%; Р<0,05), так и их поглотительной способности (с 1,6 до 2,9 кокка на фагоцит; Р<0,05) с последующей нормализацией данного теста к 45 сут наблюдения. В целом, результаты морфо-функциональных исследований указывают на необходимость соблюдения физиологически адекватных режимов в
оздействия энергии света в ультрафиолетовом спектре излучения.
^ Применение УФО донорской плазмы крови у больных с механической желтухой. Плазму крови выбирали для УФО, исходя из высокой степени поляризации альбумина, являющегося основным белковым компонентом крови и обеспечивающего при этом дипольный эффект. Облучение крови осуществляли в аппарате собственной конструкции при мощности 1,2 Вт/м2 и λ=253,7 нм. Поглощение энергии при данном режиме равняется 108-216 Дж/м2. Объем облучаемой и переливаемой плазмы крови составляет 80-100 мл из расчета 1-2 мл на кг массы тела. Саногенетический эффект данного воздействия оценивали по следующим лабораторно-клиническим показателям: содержанию холестерина, билирубина, триглицеридов, липопротеидов, активности трансаминаз, щелочной фосфатазы, интенсивности ПОЛ, клиренсу J131-бромсульфана и гуморальному звену иммунитета до и спустя 7 суток после трансфузии. Динамика сывороточных иммуноглобулинов представлена в таблице 4. Исходно увеличенная в 2,3 раза концентрация IgG после переливания облученной плазмы спускается до верхней границы нормы, что косвенно отражает
Таблица 4
Влияние трансфузии УФО плазмы крови на содержание сывороточных
иммуноглобулинов у больных с печеночной недостаточностью (n=11)
| | Класс иммуноглобулина (г/л) | ||
| | IgG | IgA | IgM |
| Норма (доноры, n=30) | 13,6 0,5 | 3,4 0,1 | 2,8 0,1 |
| До трансфузии | 31,9 9,3*** | 5,3 1,5 | 0,8 0,1*** |
| 7 суток после УФО плазмы | 19,8 7,2 | 3,5 1,4 | 0,7 0,1*** |
обратную зависимость синтеза альбумина и γ-глобулинов при печеночной недостаточности или выраженной эндогенной интоксикации. Концентрация других иммуноглобулинов в результате трансфузии не меняется, хотя низкий уровень IgM может быть связан со снижением риска инфекционных осложнений. Параклинические тесты в целом отражают восстановление функциональной активности печени, в особенности возрастание клиренса меченного бромсульфана.
^ Применение УФО донорской плазмы крови у больных хроническим пиелонефритом. Под влиянием трансфузии УФО плазмы 30 пациентам на 30-40% снижается исходно повышенное содержание лизоцима и комплемента, а подавленная на 20-25% активность β-лизинов возвращается к уровню нормы. Спустя сутки после трансфузии облученной плазмы у всех больных снижается до нормы исходно повышенное содержание IgG (на 65%), IgA (на 60%) и IgM (в 2,4 раза), что, наряду со значительным снижением концентрации средних молекул крови свидетельствует о прекращении инфекционно-метаболической интоксикации организма. Клиническая эффективность данного метода лечения выражается в положительном фармакоэкономическом эффекте, сокращении сроков реабилитации и снижении частоты случаев рецидивирования хронической почечной недостаточности у этих больных.
^ Применение УФО донорской крови в комплексном лечении больных хроническим остеомиелитом. Использовали аппарат для УФО крови «Изольда» в восстановительной терапии 184 больных хроническим остеомиелитом различной локализации. После 3-5 лечебных процедур содержание IgG и IgM снижается с верхней до нижней границы нормы, а содержание IgА остается на прежнем уровне. Респираторная активность полинуклеаров в НСТ-тесте до начала терапии была в 6 раз выше нормы, значительно снижается к 10-14 суткам, но имеет тенденцию к повторному подъему к концу срока наблюдения. Напряженность фагоцитарной активности остается в динамике лечения на исходно увеличенном уровне, но с некоторым (на 30%) возрастанием исходно сниженного индекса завершенности фагоцитоза. Повышенное до начала терапии относительное содержание В-РОК и Т-лимфоцитов нормализуется уже после 3-5 сеансов УФО. Одновременно оптимизируется соотношение субпопуляций Т-РОК в сторону увеличения содержания Т-хелперов с 32±3% до 44±3% к 21-30 суткам и снижение Т-супрессоров с 23±3% до 17±2% в эти же сроки. Следовательно, курсовое применение УФО аутокрови способствует нормализации иммунологической реактивности у больных с выраженной хронизацией воспалительного процесса. В целом, при соблюдении физиологических режимов использования энергии УФО возможно управление саногенетическим эффектом иммуномодуляции при комплексной терапии острых и хронических нозокомиальных инфекциях.
Дальнейшим развитием теории и практики квантовых методов терапии является внедрение монохроматического низкоинтенсивного лазерного облучения биосубстрата при патологических состояниях.
^ Влияние чрескожного лазерного облучения на заживление кожной раны у крыс. Опыты проведены на 135 крысах-самцах массой около 200 г. Моделирование раны осуществляли путем иссечения на спине кожного лоскута площадью 300 мм2. Однократное лазерное воздействие на раневую поверхность выполнялось низкоэнергетическим ИК-лазером «Скаляр 1/40» в непрерывном режиме (15 сек) спустя 2 суток. Средняя мощность излучения составила 2,5 мВт (3,75х102 Дж), что является, как это было показано в предварительных опытах на интактных животных, физиологически оптимальной дозой воздействия на состояние адаптивных систем организма. Более интенсивное облучение кожи мощностью 20 и 40 мВт оказывало временное подавление активности изученных факторов гуморальной и клеточной антимикробной неспецифической резистентности. Из данных следует, что лазеротерапия раневой поверхности модифицирует защитно-приспособительные реакции организма. У животных опытной групп не только отсутствует депрессия фагоцитоза, но, наоборот, происходит нарастание содержания фагоцитов с 60% до 72% в первые сутки, а их поглотительная способность – с 2,0 до 6,5 кокков на фаг (Р<0,05). После лазероактивации раны существенно снижается количество НСТ-положительных полинуклеаров, вплоть до их отсутствия в крови к 15 суткам эксперимента, в то время как у контрольных крыс их количество составляло 30%. Аналогичные закономерности повышения адаптационных реакций проявляются со стороны факторов гуморальной неспецифической защиты: лизоцима и R-белков.
^ Применение ИК-лазера для лечения различных форм перитонита у людей. Облучение передней стенки живота и сосудисто-нервного пучка на шее проводили ИК-лазером у 16 больных перитонитом (7 человек с местной формой заболевания и 9 пациентов – с разлитым воспалением брюшины). Забор крови осуществляли до лазероактивации и в динамике лечения (на 3, 7 и 14 сутки).
Из полученных данных следует, что в начале развития как местного, так и разлитого перитонита количество (%) фагоцитирующих нейтрофилов находится в пределах физиологической нормы, хотя при более тяжелой форме перитонита количество фагоцитов было выше и приближалось к верхней границе нормы (61,7 7,5% и 78,2 25,0% соответственно). У больных с разлитой формой заболевания почти в 2 раза снижается поглотительная функция в отношении тест-микробов (8,6 5,0 и 4,4 1,0 соответственно), а переваривающая активность несколько возрастает (до 0,83 0,11).
В динамике развития местного перитонита на фоне лазеротерапии % фагов не меняется, оставаясь в пределах физиологической нормы, а поглотительная способность к 7-м суткам и индекс переваривания к 10-14 суткам несколько снижается. Подобная динамика может отражать положительное противовоспалительное действие местного ИК лазерного облучения при данной патологии у людей.
У больных с формированием разлитого перитонита и последующей квантовой терапии при помощи ИК лазеротерапии исходно повышенное процентное содержание фагоцитов (78,2 25%) начинает нормализоваться в период с 3 по 7 сутки наблюдения и несколько возрастает (до 72 12%) к 14 суткам заболевания. Поглотительная функция фагов у больных этой группы на протяжении всего периода наблюдения остается на исходном уровне, а индекс завершенности фагоцитоза нарастает с 0,83 0,11 в исходе до 0,96 0,19 к 7-м суткам наблюдения.
Таким образом, можно заключить, что при минимальной мощности ИК-лазерного излучения в организме экспериментальных животных и людей с гнойно-воспалительной патологией развиваются саногенные процессы, базирующиеся на активации ряда факторов гуморальной и клеточной неспецифической резистентности, способствующих повышению клинической эффективности проводимой комплексной терапии.
^ Иммунокорригирующая терапия с использованием медицинского озона. В эксперименте на 45 белых беспородных крысах массой 200-250 г. исследовали влияние различных доз (4 мг/л и 6 мг/л) озонированного физ. р-ра в течение 2 суток после его внутрибрюшинного введения. Показано статистически значимое усиление фагоцитарной активности спустя 2, 24 и 48 часов после инъекций 4 и 6 мг/л газа. Аналогичным образом в течение первых 2 суток опыта в 1,5-2,5 раза повышается активность лизоцима, комплемента и в меньшей степени (на 66%) БАС, что в целом отражает усиление активности неспецифических факторов антимикробной защиты. Также установлено усиление индуктивной фазы продукции гетерогемагглютининов при иммунизации крыс эритроцитами барана и одновременном введении в организм озона в концентрации 2 мг/л. Более высокие концентрации О3 в физ. растворе оказывают нейтральное или подавляющее действие на количественное выражение исследованных показателей неспецифической защиты. Лечебное применение газа в количестве 2 мг/л при экспериментальном протейном сепсисе (108-10 КОЕ/мл) у крыс позволило установить иммунокорригирующее влияние, выраженное в снижении степени депрессии показателей фагоцитоза и гуморальных факторов неспецифической резистентности организма (лизоцима и комплемента) в динамике развития острого инфекционного процесса, а также прекращения инфицированности паренхиматозных органов к 24 часу после заражения по сравнению с 48 часами в контроле. Следовательно, озонотерапия и УФО крови, имея общие триггерные биофизические механизмы активизации адаптационных процессов реализуют саногенетический эффект в условиях пиогенной инфекции благодаря повышению функциональной активности специфических и неспецифических реакций резистентности и иммунитета.
^ Иммунокоррекция при лимфотропной антибиотикотерапии. Одним из перспективных направлений в стратегии восстановительной терапии тяжело протекающих нозокомиальных инфекций является эндоэкологическая лимфо-направленная антибактериальная терапия низкими дозами антибиотиков, обеспечивающая пролонгированный терапевтический эффект, механизмы которого во многом не ясны. С этой целью нами было обращено внимание на способность периферической крови к рециркуляции из кровеносного русла в лимфатическую систему и обратно. Изучено распределение одного из представителей класса аминогликозидов - бруламицина в крови и лимфоцитах 10 больных хроническим пиелонефритом, пяти из которых антибиотик вводили внутримышечно, а другим пяти пациентам – эндолимфатически в дозе 80 мг/мл. Биологическую активность препарата определяли в сыворотке крови и лимфоцитах, выделенных путем центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографин, d=1,077 и затем лизированных, методом диффузии в агар, используя в качестве тест-микроба Bac. subtilis. Установлено, что более высокие (в 1,5 – 2,0 раза) концентрации гентамицина в крови и лимфоцитах регистрируются при эндолимфатическом варианте его введения, что подтверждает предположение об участии лимфоцитов в транспорте антибиотиков в организме. Исследование иммунитета проводили у 18 больных перитонитом, из которых 9 человек получали антибиотикотерапию в виде эндолимфатического введения ампициллина, а другие 9 человек – внутримышечного. Динамику содержания иммуноглобулинов изучали ежедневно в первые 5 сут с начала антибактериальной терапии. При э/л введении ампициллина отмечается увеличение содержания IgG с 7,0 г/л в исходе до значения 13,5 г/л (Р<0,05) на 3-и сутки с сохранением концентрации этого иммуноглобулина в пределах 9,4 г/л к 4-м суткам лечения (Р<0,05). Внутримышечное введение антибиотика не влияет на содержание данного класса антител. Динамика колебаний концентраций двух других классов иммуноглобулинов (IgA и IgM) при сравнении двух способов введения ампициллина не позволяет установить существенного преимущества выбранных способов антибиотикотерапии. Учитывая, что основная масса (до 85%) антител крови представлена IgG, можно предполагать, что преимущество квантовой эндолимфатической терапии низкими концентрациями антибиотика заключается в более выраженном антитоксическом эффекте, связанный с гиперпродукцией данного класса антител.
^ Возможности иммуномодулирующей терапии при экспериментальном сепсисе. Одним из эффективных способов регуляции иммунологической реактивности в процессе восстановительной терапии ГВЗ является применение различных химических иммуномодуляторов, одним из которых является ХП (химическая формула: Form-Met-Ley-Fhen-Gly-OH). Учитывая все возрастающую роль стафилококков (Васина Т.А. и соавт, 2006) в этиологии внутрибольничной инфекции, нами было изучено протективное действие ХП в свободном состоянии и в составе липосом на модели стафилококкового сепсиса у мышей-самок линии СВА, массой 18-20 г. Из данных, представленных в таблице 5, следует, что ХП уже в минимальной из использован-
Таблица 5
Зависимость протективного эффекта ХП и СА от их концентрации и связывания с липосомальным носителем
(введение препаратов за сутки до инфицирования стафилококком).
| Препарат | Число павших животных за 10 суток наблюдения | % выживания | |||||||
| | 1с | 2с | 3с | 6с | 7с | 8с | 9с | 10с | |
| ХП (1 мкг) | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 100 |
| ХП (10 мкг) | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 90 |
| ХП (100 мкг) | 0 | 1 | 0 | 2 | 0 | 0 | 0 | 0 | 70 |
| ХП (1 мкг) в липосомах | 0 | 2 | 1 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 60 |
| ^ ХП (10 мкг) в липосомах | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 100 |
| СА (0,0014 ЕД) | 1 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 80 |
| СА в липосомах | 2 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 60 |
| ^ СА + ХП (10 мкг) в липосомах | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 100 |
| Контроль (физ. раствор) | 3 | 0 | 2 | 1 | 1 | 0 | 0 | 0 | 30 |
ных доз (1 мкг на животное), введенный за сутки до заражения мышей штаммом золотистого стафилококка, выделенного от хирургических больных с ГВЗ и вызывающего 70% летальность в течение 10 суток наблюдения, оказывает 100% протективный эффект. Примечательно, что увеличение дозовой нагрузки препарата до 10 мкг и 100 мкг сопровождается снижением резистентности животных к инфицированию, увеличивая их смертность до 30%. Данный факт также подтверждает высказываемое положение о более высокой терапевтической активности низких доз и мощностей физико-химических факторов, используемых в восстановительной медицине и физиотерапии. При проведении терапии липосомами, в состав которых включены ХП и стафилококковый анатоксин (СА), следует учитывать их «экранирующую» способность, приводящую к снижению эффективности низких доз как ХП, так и СА.
^ Значение сверхнизких концентраций лекарственных средств в комплексной терапии ГВЗ. В результате проведенных исследований ряда физических (ЭКОК, ИОК, УФО, ИК-лазер) и химических (озон, антибиотики, ХП) способов коррекции резистентности организма при различных инфекционных осложнениях складывается представление о более качественной и физиологически полноценной реакции гомеостатических систем организма на максимально низкие концентрации и минимальные мощности используемых факторов в целях осуществления саногенных мероприятий. Подтверждением этому является исследование функциональных резервов у 48 больных, экстренно поступивших на стационарное лечение с диагнозом «острый холецистит», верифицированный в дальнейшем как «острый калькулезный холецистит» и пролеченных в дополнение к комплексной терапии данного заболевания гомеопатическим препаратом Chelidonium C6 («Чистотел» в 6-м сотенном разведении) Больные были распределены на 4 группы (рис 3):
I - контрольная (обычная консервативная терапия)
II - основная (комплексная консервативная терапия с применением микродоз чистотела);
III - контрольная (общепринятая постоперационная терапия);
IV - основная (комплексная постоперационная терапия с применением микродоз чистотела).
Таким образом, больные I и II групп лечились консервативно, без хирургического пособия, а больные, составившие III и IV группы - оперированные пациенты.
Консервативное лечение
