«Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К. И. Скрябина»
| Вид материала | Автореферат |
- Отчет оработе 84-й студенческой научной конференции факультета ветеринарной медицны, 147.52kb.
- Улица Академика Скрябина. График работы конференции Открытие конференции, регистрация, 799.7kb.
- Тезисы докладов высылать по электронной почте на адрес, 16.7kb.
- Отчет о научно-исследовательской работе, 2141.38kb.
- Научно-образовательные рекомендации и указания егэ по общеобразовательным предметам, 3092.38kb.
- Влияние природных и синтетических полимеров на биохимические свойства липаз из различных, 236.09kb.
- «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени, 300.76kb.
- Диагностика, клинико-морфологическая характеристика и лечение сухого кератоконъюнктивита, 456.73kb.
- Грудопоясничного отдела позвоночника собак, 393.53kb.
- Совершенствование способов повышения воспроизводительных качеств свиней и овец 06., 707.37kb.
На правах рукописи
ХУРАНОВ
Алан Мухадинович
ЦИТОЛОГИЧЕСКАЯ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА СОСТОЯНИЯ ОРГАНОВ РАЗМНОЖЕНИЯ У КОРОВ ДО- И ПОСЛЕ ОПЛОДОТВОРЕНИЯ
06.02.06. – ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук
Москва – 2010
Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМ и Б).
^ Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор
Панков Борис Григорьевич
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор
Порфирьев Иван Арсентьевич
доктор ветеринарных наук
^ Дюльгер Георгий Петрович
Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Самарская государственная сельскохозяйственная академия».
Защита состоится «___»____2011 г. в «___» часов на заседании диссертационного совета Д. 220.042.05 в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, д. 23, тел. (495) 377-93-83.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»
Автореферат разослан «___» декабря 2010 года и размещен на сайте
Ученый секретарь
диссертационного совета Волчкова Л.А.
^ 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования. Для интенсивного развития животноводства необходимо базироваться не только на использовании экономических законов, но и на современных знаниях биологических закономерностей, составляющих основы развития живых организмов, их физиологических функций (Шкис П.Л., 1987; Чернюс Ю.Л., Петров В.А., Костенко В.Ф., 1991; Кузьмин Р.Г., 2000).
Успешному воспроизводству крупного рогатого скота и снижению его продуктивности в значительной степени способствуют акушерско-гинекологические заболевания, яловость коров и телок, наносящие большой экономический ущерб хозяйству из-за недополучения приплода, снижения продуктивности, дополнительных затрат на лечение и преждевременной выбраковки животных. Предпосылки к послеродовым осложнениям возникают у животных во время стельности, но чаще всего при родах и в послеродовой период (Гончаров В.П., 1990).
Повышения процента плодотворно осемененных коров в первые две половые охоты, можно добиться только регулярным проведением ранней диагностики состояния органов размножения начиная с отела до плодотворного осеменения. Своевременное выявление коров, больных субинволюцией матки, клиническими и скрытыми формами эндометрита и эффективное их лечение в стадию уравновешивания полового цикла позволяет увеличивать количество плодотворно осемененных коров в первые две после отела половые охоты и снизить процент эмбриональной смертности.
При проведении цитологических исследований маточных выделений ученые не придавали значения токсическому фактору и не выводился процент гнойных телец. Не были разработаны цитологические критерии прогнозирования течения беременности, диагностики эмбриональной смертности, скрытых и неполных абортов у многоплодных животных, ранней дифференциальной диагностики токсических и скрыто протекающих процессов в матке коров. Не были разработаны четкие критерии диагностики патологических процессов по их локализации. В связи с этим наше внимание было обращено именно к данным проблемам.
^ Цель и задачи исследований. Основными целями исследований являлись: разработка метода цитологической диагностики беременности с учетом количества гнойных телец в мазке маточной слизи и выведение двух критериев: тканевого индекса и токсического фактора, повышение процента оплодотворяемости коров в первые две послеродовые половые охоты, а также экспресс-диагностика состояния органов размножения акушерской ложкой Б.Г. Панкова (АЛП) в послеродовой период, фармакопрофилактика и лечение послеродовых заболеваний у коров суспензией ФЛЭКС-2, для повышения процента плодотворно осемененных коров в первые два после отела половых цикла.
Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить цитограммы в пробах, взятых АЛП из влагалища стельных коров.
2. Провести оценку диагностической точности (значимости) цитоморфологического и гормонального (ИФА) методов, с целью определения стельности.
3. Изучить значение экспресс-диагностики акушерской ложкой Панкова Б.Г. и влияние фармакопрофилактики послеродовых осложнений у коров, внутриматочным введением суспензии ФЛЭКС-2 в сочетании с миотропным препаратом «Гетеротон», на снижение послеродовых заболеваний, снижения эмбриональной смертности у коров в послеродовой период.
4. Изучить цитоморфологические изменения в половых органах коров на 6-й, 9-й, 12-й, 15-й и 19…21-й дни после отела, а также в стадию уравновешивания полового цикла между второй и третьей половыми охотами при проведении фармакопрофилактики послеродовых осложнений.
5. Определить показатели тканевого индекса и токсического фактора по мазкам из проб маточных выделений у коров в послеродовой период при патологических процессах.
6. Определить ассоциацию условно-патогенной микрофлоры в маточных выделениях (экссудате) коров, больных эндометритами.
7. Определить спектр антимикробной активности лекарственного средства – суспензии «ФЛЭКС-2», используемого для фармакопрофилактики и лечения эндометритов у коров подопытной группы.
^ Научная новизна. Впервые реализована идея Б.Г. Панкова проводить цитологическую диагностику стельности по мазкам проб, взятых АЛП, по наличию только клеток влагалищного эпителия и слизистых клеток пробки беременности, при отсутствии эпителиальных клеток других отделов гениталий;
Установлен факт начального процесса эмбриональной смертности по появлению в мазках эпителиальных клеток шейки и рогов матки повторными цитологическими исследованиями, проводимыми через 21…35 дней после установления беременности цитологическим, гормональным и ректальным методами. Появление эпителиальных клеток тела и рогов матки свидетельствует о гибели зародыша, эмбриона, которые будут рассасываться или изгоняться;
Многократные цитологические исследования мазков из проб маточных и влагалищных выделений от коров, находящихся в послеродовом периоде, взятых АЛП, позволили, составить цитограммы, свойственные конкретным физиологическим и патологическим процессам в гениталиях;
Установлено, что при наличии в мазках из маточных выделений фагоцитоза, отсутствии нейтрофилов и гнойных телец, и если акушерская ложка входит во влагалище только на половину длины стержня, значит коровы клинически здоровые, инволюция матки завершена. Такие животные плодотворно осеменяются в первые две после отела половые охоты;
Установлено, что отсутствие фагоцитоза, гнойных телец при наличии нейтрофилов свидетельствует о наличии токсического состояния в среде эндометрия. Таких животных осеменять нельзя, т.к. уже созданы условия для эмбриональной смертности, многократных неплодотворных осеменений.
^ Практическая значимость результатов исследований заключается в повышении оплодотворяемости коров в первые две послеродовые половые охоты, а также быстрота и высокая достоверность цитоморфологического метода диагностики состояния органов размножения и проведения фармакопрофилактики задержания последа, послеродовых заболеваний.
Результаты наших исследований показывают, что в опытной группе был снижен процент коров с послеродовыми осложнениями по сравнению с контрольной: в опытной группе коров, было выявлено больных субинволюцией матки - 20 %, с клиническим и скрытым эндометритами - 30 % и 20 %, а в контрольной группе данные показатели были - у 90 %, 80 %, 70 % коров соответственно.
Материалы исследований используются в учебном процессе в Кабардино-Балкарской государственной сельскохозяйственной академии им. В.М. Кокова, Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина студентами ветеринарных факультетов при изучении дисциплины «Ветеринарное акушерство, гинекология и биотехника репродукции животных».
^ Апробация результатов исследований. Основные результаты диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов ФГОУ ВПО МГАВМ и Б (2008…2010 гг.); на всероссийском семинаре «Опыт создания и работы сервисных центров по воспроизводству сельскохозяйственных животных в рамках реализации Государственной программы развития сельского хозяйства», 2009 г., Дубровицы.
^ Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы, в т.ч. 2 статьи – в материалах Всероссийских, региональных и республиканских научных конференций и 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.
^ Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 155 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждений полученных результатов, выводов, данных о практических использованиях научных результатов, рекомендаций по использованию научных выводов, списка использованной литературы (210 источников, в т.ч. 39 иностранных авторов) и приложений. Работа иллюстрирована 43 таблицами и схемами, и 36 рисунками и фотографиями.
^ Основные положения, выносимые на защиту:
1. Разработка цитоморфологического метода для диагностики стельности, как более достоверного, по сравнению с гормональным;
2. Определение диагностической значимости процентного соотношения эпителиальных клеток, нейтрофилов и гнойных телец в мазках из маточных выделений при заболевании коров клиническими и скрытыми эндометритами, субинволюции матки, при стельности и эмбриональной смертности, при стельности в сочетании с вагинитом.
3. Определение эффективности цитоморфологической диагностики состояния половых органов коров в послеродовой период, стельности и эмбриональной смертности;
4. Определение значения тканевого индекса и токсического фактора в цитограммах мазков из маточных выделений для оценки «норма – патология» в гениталиях коров в послеродовой период.
^ СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2. Материалы и методы исследования
Исследования по теме диссертации проводились с 2007 по 2010 гг. на кафедрах акушерства, гинекологии и биотехники репродукции животных, в лабораториях кафедр радиобиологии и микробиологии Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина и в МТФ «Бессоново» Воскресенского района Московской области, учебном хозяйстве МГАВМ и Б им. К.И. Скрябина.
Под наблюдением в период научных исследований находились коровы черно-пестрой породы с удоем 3200 кг молока за лактацию. Доение, кормление, снабжение водой и уборка навоза механизированы. Животные регулярно подвергались ветеринарно-санитарному осмотру и профилактическим ветеринарным исследованиям и вакцинациям.
Объектом исследования служили 20 коров. Из них были сформированы две группы: подопытная и контрольная, по 10 голов в каждой. Животных подбирали по принципу аналогов. Предметом исследования были пробы маточных выделений.
Для разработки экспресс-метода морфологической дифференциальной диагностики состояния органов размножения после отела, а также фармакопрофилактики послеродовых заболеваний (субинволюции матки, клинических и скрытых эндометритов) у коров, нами были использованы несколько методов исследования.
В основу экспресс-метода морфологической дифференциальной диагностики нормально протекающей беременности и эмбриональной смертности (ЭС) нами был взят анализ мазка, полученный из пробы маточных выделений.
Для получения мазка образец маточно-влагалищных выделений помещался на предметное стекло, смешивался стеклянной палочкой с несколькими каплями физиологического раствора. При смешивании сгусток слизи отмывался от включений и примесей, а из жидкой части брали каплю смыва для приготовления мазка. Мазок высушивали, фиксировали и окрашивали по методу Романовского. Приготовленный мазок изучали под микроскопом. Проводился подсчет в каждом мазке 100 клеток (эпителиальные клетки влагалища, шейки, тела и рогов матки, яйцепроводов, лимфоциты, нейтрофилы, гнойные тельца, фагоцитоз). Затем выводилось 2 критерия – ТИ и ТФ, характеризующих норму или патологию в половых органах по цитограммам. ТИ – тканевой индекс – это частное от деления числа соматических клеток (эпителиальных, покровных, секреторных) на число клеток белой крови; ТФ – токсический фактор – это число от деления процента гнойных телец на суммарный процент остальных клеток в мазке. Для каждого физиологического состояния и воспалительного процесса характерны конкретные ТИ и ТФ.
Мазки маточных выделений приготавливали на 6, 9, 12, 15, 19 – 21, на 60-ый дни после отела, у коров опытной и контрольной группы. Всего приготовлено и изучено 150 мазков.
С целью снижения случаев возникновения послеродовых заболеваний в подопытной группе была применена схема ранней диагностики, фармакопрофилактики и лечения послеродовых осложнений у коров.
С целью профилактики и лечения клинических и скрытых эндометритов применялась суспензия «ФЛЭКС-2».
Определение уровня гормона прогестерона в молоке проводилось в лаборатории кафедры радиобиологии МГАВМ и Б им. К.И. Скрябина. Пробы молока были взяты у коров подопытной и контрольной групп на 19-ый и 24-ый дни после осеменения. Определение прогестерона было основано на использовании конкурентного иммуноферментного анализа.
Бактериологическое исследование проводилось на кафедре микробиологии ФГОУ ВПО МГАВМ и Б. Патологический материал поступил из учебного хозяйства ФГОУ ВПО МГАВМ и Б МТФ «Бессоново».
У больных эндометритом коров АЛП брали маточную слизь-экссудат для определения контаминации пробы микроорганизмами.
В опытной и контрольной группах применялся метод ректальной диагностики состояния органов размножения у коров в норме и при патологических состояниях, а также диагностика стельности на 90-ый день после отела.
Биометрическая обработка полученных результатов по определению стельности через уровень концентрации прогестерона в молоке, и количественный показатель эпителиальных клеток влагалища в приготовленных из маточной слизи мазков проводилась на кафедре математики и информатики ФГОУ ВПО МГАВМ и Б, с помощью однофакторного дисперсионного анализа (критерий Фишера) и двух выборочного t-теста с одинаковыми дисперсиями (критерий Стьюдента). Обработка проводилась с помощью анализа данных табличного процессора MS Excel.
^ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Цитограммы маточных выделений у коров в послеродовой период
Для изучения мониторинга цитограмм, брали пробы маточных выделений и приготавливали мазки на 6, 9, 12, 15, 19-21 дни после отела и в стадию уравновешивания полового цикла между второй и третьей половыми охотами. Подсчитывали 100 соматических клеток и клеток белой крови. Были составлены таблицы для каждого мазка (всего 150 таблиц). В таблицах было отражено 9 видов клеток: эпителиальные влагалищные (Влаг); шейки (ШМ), тела (ТМ) и рогов матки (РМ); яйцепроводов (Япр); лимфоциты (ЛФЦ); нейтрофилы (Неф); гнойные тельца (ГТ); фагоцитирующиеся эпителиальные клетки (ФКл), затем выводили тканевой индекс (Тк. И.) и токсический фактор (Т.Ф.).
Результаты цитологических исследований мазков от коров подопытной группы приведены в таблицах № 3…12, а контрольной группы в таблицах № 13…22.
Таблица 1.^ Клеточный состав маточной слизи, взятой из влагалища акушерской ложкой Панкова, у коровы опытной группы № 1
| вид кл | Влаг | ШМ | ТМ | РМ | Япр | ЛФЦ | Неф | ГТ | ФКл | ТкИ | ТФ |
| дни | |||||||||||
| 6 | 20 | 11 | 23 | 3 | 0 | 3 | 30 | 9 | 1 | 1,73 | 0,1 |
| 9 | 16 | 10 | 7 | 2 | 0 | 1 | 46 | 12 | 6 | 0,75 | 0,14 |
| 12 | 11 | 7 | 4 | 1 | 0 | 0 | 53 | 21 | 3 | 0,43 | 0,27 |
| 15 | 10 | 2 | 4 | 0 | 0 | 0 | 65 | 17 | 2 | 0,25 | 0,2 |
| 19-21 | 19 | 16 | 13 | 5 | 1 | 2 | 38 | 4 | 2 | 1,35 | 0,04 |
| м\у 2-3 ох | 89 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 2 | 3 | 3 | 46 | 0,03 |
Таблица 2.^ Клеточный состав маточной слизи, взятой из влагалища
акушерской ложкой Панкова, у коровы контрольной группы № 1
| вид кл | Влаг. | ШМ | ТМ | РМ | Япр | ЛФЦ | Неф | ГТ | ФКл | ТкИ | ТФ |
| дни | |||||||||||
| 6 | 9 | 4 | 7 | 2 | 0 | 5 | 39 | 32 | 2 | 0,5 | 0,47 |
| 9 | 5 | 2 | 8 | 1 | 0 | 0 | 54 | 28 | 2 | 0,3 | 0,39 |
| 12 | 3 | 6 | 4 | 2 | 0 | 0 | 61 | 23 | 1 | 0,25 | 0,3 |
| 15 | 2 | 5 | 5 | 0 | 0 | 3 | 66 | 18 | 1 | 0,17 | 0,22 |
| 19-21 | 9 | 5 | 14 | 3 | 1 | 2 | 59 | 7 | 0 | 0,53 | 0,08 |
| м\у 2-3 ох | 35 | 12 | 11 | 4 | 1 | 5 | 15 | 17 | 0 | 3,1 | 0,21 |
У здоровых стельных коров в мазках повышается число нейтрофилов с четкой структурой ядер в стадию, по времени совпадающую со стадией полового возбуждения у нестельных. Но при этом в мазках отсутствуют эпителиальные клетки эндометрия.
Появление в мазках стельных животных эпителиальных клеток эндометрия является признаком развития скрытого аборта.
Цитологические исследования позволяют четко дифференцировать физиологические, воспалительные, а также токсико-дистрофические (инфицирование полости матки УПМ) процессы в половых органах коров и телок.
При сравнении средних показателей по подопытной и контрольной группам, было отмечено, что в подопытной группе процесс инволюции матки завершился к 24-му дню новотельности у 80 %, а в контрольной группе у 10 % коров. На 6-ой день после отела в мазках подопытной группы количество клеток влагалища, матки и яицепроводов больше чем у коров контрольной группы. Количество нейтрофилов и гнойных телец в контрольной группе значительно выше чем в подопытной. Количество фагоцитоза на всем протяжении исследований в подопытной группе было значительно больше чем в контрольной. На 19 – 21 дни после родов количество клеток влагалища, матки и яицепроводов в опытной группе превышает процент таких же клеток в контрольной группе в два раза. У стельных коров в мазках обнаруживали только эпителиальные клетки влагалища и слизистые клетки шейки матки, а у нестельных коров в мазках присутствуют, помимо вышеуказанных клеток, клетки тела, рогов матки и яицепроводов.
^ Диагностика беременности коров цитоморфологическим методом и исследованием проб молока методом иммунно-ферментного анализа (ИФА)
После проведенных исследований по диагностике беременности были получены следующие результаты: в опытной группе у 70 % коров прогестерон в молоке соответствует уровню содержания у стельных животных (7,0 нг/мл и более), а у 30% коров по уровню содержания прогестерона в молоке, можно судить о сомнительности стельности (4,0 нг/мл – 7,0 нг/мл).
В контрольной группе у 50% коров уровень содержащегося прогестерона в молоке предполагает их стельность (7,0 нг/мл и более), у 30% коров стельность является сомнительной (4,0 нг/мл – 7,0 нг/мл), а у 20% коров уровень содержания прогестерона ниже 4,0 нг/мл, что говорит о том, что коровы не стельные.
В день взятия проб молока (19…24 дни после осеменения), для определения уровня прогестерона, АЛП были взяты пробы маточной слизи под шейкой матки, и приготовлены мазки, для определения клеточного состава маточных выделений, дальнейшего их подсчета и сравнения полученных результатов с результатами иммуноферментного анализа.
У коров подопытной группы под № 1, 4, 5, 6, 8, 9, 10 – уровень прогестерона в молоке свидетельствует о том, что они стельные, результаты по приготовленным мазкам также соответствуют показателям мазков стельных коров, так как преобладают клетки влагалища, присутствует небольшое количество клеток влагалищной части шейки матки. Тканевые индексы выведенные по мазкам этих коров, также подтверждает их стельность, токсический фактор у них близок к нулю, что также имеет немаловажное значение как для плодотворного осеменения, так и для сохранения здорового плода на весь срок стельности и недопущения его гибели в критические периоды развития. По данным цитоморфологической диагностики стельности в подопытной группе стельными являются коровы под № 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9, 10.
Таблица 3^ . Результаты подсчета клеток, в мазках приготовленных через 24 дня после осеменения в подопытной группе
| № п/п | Влаг | ШМ | ТМ | РМ | Япр | ЛФЦ | Неф | ГТ | ФКл | ТИ | ТФ |
| 1 | 89 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 2 | 3 | 3 | 46 | 0,03 |
| 2 | 62 | 9 | 0 | 0 | 0 | 0 | 12 | 15 | 2 | 5,92 | 0,18 |
| 3 | 33 | 4 | 7 | 0 | 0 | 2 | 33 | 5 | 16 | 1,26 | 0,05 |
| 4 | 24 | 3 | 3 | 0 | 0 | 0 | 42 | 19 | 9 | 0,71 | 0,24 |
| 5 | 88 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 5 | 2 | 2 | 18,2 | 0,02 |
| 6 | 87 | 4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 4 | 2 | 3 | 22,75 | 0,02 |
| 7 | 78 | 7 | 1 | 0 | 0 | 1 | 8 | 2 | 3 | 9,6 | 0,02 |
| 8 | 90 | 2 | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 | 2 | 3 | 30,7 | 0,02 |
| 9 | 87 | 4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 4 | 2 | 3 | 22,75 | 0,02 |
| 10 | 84 | 5 | 1 | 0 | 0 | 1 | 7 | 2 | 0 | 11,25 | 0,02 |
| ср. знач. | 72,2 | 4,4 | 1,2 | 0 | 0 | 0,4 | 12 | 5,4 | 4,4 | 16,91 | 0,06 |
| ст. откл. | ±24,6 | ±2,12 | ±2,25 | 0 | 0 | ±0,7 | ±13,9 | ±6,26 | ±4,67 | ±14,22 | ±0,08 |
| дисперс | 542,36 | 4,04 | 4,56 | 0 | 0 | 0,44 | 174 | 35,24 | 19,64 | 181,988 | 0,00574 |
При сравнении результатов полученных при проведении иммуноферментного анализа и изучении клеточного состава влагалищной слизи, можно выявить закономерность, заключающуюся в том, что у стельных коров (7,0 нг/мл и более), в мазках отсутствуют клетки эндометрия, и преобладают эпителиальные клетки влагалища, но может присутствовать небольшое количество эпителиальных клеток влагалищной части шейки матки. В ранний период стельности могут присутствовать в мазке «старые» эпителиальные клетки тела матки, которые уже разрушаются и находятся на последних стадиях лизирования (распада).
Полученные, в ходе исследований данные показывают, что результаты цитоморфологической диагностики стельности совпадают с ректальной диагностикой в 100 % случаев, а ИФА – в 60 % случаев.
^ Цитологическая диагностика и фармакопрофилактика клинических эндометритов у коров
С целью снижения процента заболеваемости коров в период после отела в опытной группе применялась схема ранней экспресс-диагностики, фармакопрофилактики и лечения послеродовых осложнений.
Диагностику клинических эндометритов мы проводили на шестой день после отела в подопытной и контрольной группах при помощи АЛП. Характерными признаками данной формы эндометритов являлось то, что АЛП введенной во влагалище больной коровы, всегда извлекается воспалительный экссудат. Так, в контрольной группе у восьми коров в пробах маточной слизи взятой из влагалища на 6-ой день после отела, в лохиальных выделениях содержалась примесь гноя, и это свидетельствовало о заболевании коров клиническим острым гнойно-катаральным эндометритом. На 6-ой день после отела были приготовлены мазки, по которым видно, что у всех десяти коров контрольной группы в мазках (из 100 % клеток) преобладают нейтрофилы и гнойные тельца, что говорит о воспалительных процессах, развивающихся в половых органах данных коров.
У коровы под № 7 в мазке присутствует 37 % эпителиальных клеток шейки матки, что говорит о цервиците, при ректальной диагностике шейка матки действительно была увеличена в размерах и имела плотную консистенцию. Также в мазках присутствовали эпителиальные клетки влагалища; шейки, тела и рогов матки; яйцепроводов; лимфоциты; и что особенно важно у пяти коров фагоцитоз присутствовал в количестве 1 – 2 % у каждой, а у других пяти коров фагоцитоз отсутствовал.
В подопытной группе, по результатам данной акушерской диспансеризации на шестой день выявлена одна корова (№ 7) больная клиническим эндометритом. Такое малое количество коров, больных клиническими формами эндометритов, объясняется тем, что в опытной группе нами проведена работа по фармакопрофилактике клинических форм эндометрита.
Для профилактики и лечения гипотонии и атонии матки, а следовательно и исключения развития субинволюции матки, коровам подопытной группы через 3 – 4 часа после отела, внутримышечно вводили утеротропный препарат «Гетеротон». Затем, через 48 часов, т. е. на третьи сутки после отела с целью профилактики и лечения клинических форм эндометрита, внутриматочно вводили 100 мл. суспензии ФЛЭКС-2 (20 гр. порошка в 80 мл. разбавителя).
Суспензия ФЛЭКС-2 обладает широким спектром антимикробного действия, в его состав входят: раствор ихтиола, йодоформ, норсульфазол, и перекись водорода. Суспензия «ФЛЭКС-2» смешивается в шприце Жанэ непосредственно перед введением в полость матки. Происходит санация матки от условнопатогенной микрофлоры, а карункулы, подвергаясь протеолитическому аутолизу, выходят в виде бесструктурной массы вместе с лохиями.
^ Фармакопрофилактика и лечение субинволюции матки
За показатель состояния инволюции и субинволюции матки был принят процент (от 27 см. длины стержня АЛП), на который стержень АЛП входит во влагалище до шейки матки. Но если масса матки не снизилась от 8…10 кг. при родах до 0,35…0,4 кг., то шейка матки будет находиться в брюшной полости. При этом, в яичниках задерживается желтое тело и в пробе АЛП содержится клейкая густая слизь. У клинически здоровых коров при полном завершении инволюции матки этот показатель составляет 50-55%. При помощи АЛП определяется степень снижения массы рогов матки, что позволяет надежно дифференцировать, с учетом даты отела, инволюцию от субинволюции матки.
АЛП позволяет диагностировать субинволюцию матки с 5…6 дня по изменению цвета выделяемых лохий от красного до коричнево-шоколадного цвета. Но, так как, субинволюция матки диагностировалась у большинства коров в стаде, мы проводили фармакопрофилактику этой патологии инъекцией препарата «Гетеротон», по 5 мл. на 6, 9, и 12 дни после отела.
Рис 1. Процесс инволюции матки до 24 дня и через 45 дней после отела в опытной группе
Рис 2. Процесс инволюции матки до 24 дня и через 45 дней после отела в контрольной группе
Где слева: процент выхода АЛП из влагалища коровы, снизу нумерация коров в группе, а количество рядов соответствует дням, в которые проводился контроль инволюции матки. Ряд 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 соответствуют дням после отела: 6, 9, 12, 15, 19-21, м/у 2-3 ох.
В опытной группе к 24-му дню после отела у 80% коров инволюция матки была завершена. У 20% коров на 15-ый день после отела был поставлен диагноз на скрытый эндометрит, после чего проводились лечебные мероприятия по схеме из таблицы по профилактике и лечению клинических и скрытых эндометритов у коров (по Панкову Б.Г.). К 24-му дню после отела процесс инволюции находился на заключительных стадиях завершения.
В контрольной группе к 24-му дню после отела 90%-ам коров поставлен диагноз на субинволюцию матки. У 70% коров на 15-ый день после отела был поставлен диагноз на скрытый эндометрит, который в дальнейшем значительно осложнил процесс инволюции матки и удлинил сервис-период.
Из полученых данных видно, что проведение фармакопрофилактики клинических и скрытых эндометритов внутриматочным введением суспензии ФЛЭКС-2 и субинволюции матки трехкратными инъекциями гетеротона, способствовали своевременной инволюции половых органов. Данные мероприятия значительно сокращают сервис-период, и увеличивают процент плодотворных осеменений.
^ Цитологическая диагностика состояния (статуса) половых органов коров при проведении фармакопрофилактики скрытых эндометритов
Диагностику скрытых эндометритов мы проводили на 12-ый и 15-ый дни после отела. Характерным признаком скрытого эндометрита является то, что АЛП вводится во влагалище без сопротивления на половину своей длины (до шейки матки). В стадию уравновешивания полового цикла образец содержит (0,2 – 0,5 мл.) густоватой прозрачной или мутноватой маточной слизи с незначительной примесью гноя в виде зернышек.
В контрольной группе на 15-й день после отела у 60 %-ов коров был выявлен скрытый эндометрит, у 90 %-ов субинволюция матки. Для мазков маточной слизи, взятой из влагалища при скрытом эндометрите характерно присутствие большого количества нейтрофилов и гнойных телец и отсутствие фагоцитоза. Руководствуясь схемой ранней диагностики, фармакопрофилактики и лечения послеродовых осложнений у коров, на 15-ый день после отела проводили диагностику скрытых эндометритов. Коровам подопытной группы, больным скрытым эндометритом, внутриматочно вводили суспензию ФЛЭКС-2 в количестве 50 мл. На 19-21 дни после отела проводили повторную диагностику с АЛП. У обеих коров в пробах маточной слизи, взятой из влагалища, слизь была прозрачной без примеси гноя. Так в мазке коровы № 3, приготовленной на 19 – 21 дни после отела присутствовали: соматические клетки – 63 %; нейтрофилы – 20 %; гнойные тельца – 9 %; фагоцитоз – 4 %; тканевой индекс – 2,63; токсический фактор – 0,38. У коровы № 4, в те же дни, в мазке содержалось: соматических клеток – 93 %; нейтрофилов – 7 %; гнойных телец и фагоцитоза нет; тканевой индекс – 13,29; токсический фактор – 0.
Во влагалище клетки поверхностных слоев эпителия имеют кубическую и призматическую формы. Нами установлено, что при скрытом эндометрите ядра клеток несколько увеличены, а при отсутствии своевременного лечения эндометрита, форма эпителиальных клеток деформируется со смещением ядер в клетке ближе к периферии клеточной оболочки. В пораженных участках выявлены десквамированные очаги, обнаруживаются эпителиальные клетки на различных стадиях лизирования, которые окружены нейтрофилами. После применения суспензии ФЛЭКС-2 для терапии эндометритов нами отмечено, что во влагалище происходит нормализация эпителиального покрова, характерного для здоровых животных и восстанавливается нормальное соотношение эпителиальных клеток и нейтрофилов.
^ Мониторинг цитограмм в пробах маточных выделений после внутриматочного введения суспензии ФЛЭКС-2
Через 48 часов после лечения скрытых эндометритов внутриматочным введением 50 мл суспензии ФЛЭКС-2 в мазках находили изреженный клеточный состав, так как очаг воспаления мал по площади и клетки разведены суспензией. Только через трое суток стало возможным определять цитограммы в мазках. В мазках преобладают соматические клетки и значительно снижается количество нейтрофилов и гнойных телец и увеличивается количество фагоцитоза. Это показатель положительного влияния на процесс инволюции матки, и в целом на состояние органов размножения, в том числе на плодотворное осеменение в ближайшую половую охоту.
Мы провели сравнения изменений в цитограммах мазков у коров опытной группы, на 15 день после отела, т.е. в день внутриматочного введения суспензии ФЛЭКС – 2, с целью фармакопрофилактики и лечения скрытых эндометритов в количестве 50 мл.) и через 19 – 21 день после отела.
В мазках подопытной группы, после введения суспензии ФЛЭКС – 2 произошли резкие изменения. Таким образом, у всех коров подопытной группы, к 19-21 дням процент соматических клеток был достаточно высоким, а соответственно снизился процент нейтрофилов и гнойных телец. Больших изменений не претерпело только количество фагоцитоза. В связи с увеличением количества соматических клеток (у отдельных животных в 2 – 3 раза), и снижением количества нейтрофилов и гнойных телец произошло увеличение показателей тканевого индекса и снижение показателей токсического фактора.
Клеточный состав мазков коров контрольной группы за 5…6 дней значительных изменений не претерпел. Количество нейтрофилов и гнойных телец с 15-го по 19-21 дни, также как и в предыдущие дни после отела, оставался на высоком уровне, фагоцитоза, как на 15-ый день, так и на 19-21 дни крайне мало. На 15-ый день у четырех коров имеется фагоцитоз в количестве 1…3 %, у 6-и коров их нет. На 19-21 день у двух коров есть фагоцитоз в количестве 1… 2 %, у 8-и их нет. Тканевые индексы также имеют низкие показатели, а токсические факторы высокие, что свидетельствует о неблагоприятном состоянии в половых органах.
^ Количественный и качественный состав влагалищной слизи, взятой у коров, больных клиническим эндометритом
Важную роль в развитии воспалительных процессов в органах размножения играет условно-патогенная микрофлора, которая обладает полирезистентностью к антимикробным препаратам.
У больных скрытым эндометритом коров, в пробах маточных выделений часто наблюдаются смешанные культуры, в ассоциациях которых, доминируют патогенная кишечная палочка, гемолитические стрептококки и стафилококки.
Целью исследования было изучение количественного и качественного состава микрофлоры в маточных выделениях, взятых акушерской ложкой Б.Г. Панкова под шейкой матки. Материал был взят согласно правилам отбора патологических материалов для микробиологических исследований. Об этом говорит тот факт, что при несоблюдении правил асептики, пробы могут быть загрязнены, может отмечаться рост спорообразующих бактерий – бацилл и других сапрофитных микроорганизмов. На приготовленных нами посевах рост спорообразующих микроорганизмов отсутствует.
Рис. 3. Микробиологический состав влагалищной слизи, взятой у коров, больных скрытым эндометритом
Задачами наших исследований являлось определение интенсивности контаминации маточных выделений патогенной микрофлорой по числу КОЕ/мл. Для посевов и выращивания микрофлоры использовались среды Эндо, Сабуро и кровяной МПА. Провели выделение чистых культур бактерий и проведение идентификации по биологическим свойствам.
В результате проведенных исследований установлено, что в 1 мл. пробы содержатся такие микроорганизмы, как: бактерии рода Staphylococcus – 2,08х102 КОЕ/мл (13,7%), бактерии рода Citrobacter – 2,88х102 КОЕ/мл (19%), и β-гемолитические E. сoli – 1,02х103 КОЕ/мл (67,3%).
^ Определение бактерицидной активности суспензии ФЛЭКС-2
Испытанная суспензия проявила выраженную бактерицидную активность против таких штаммов микроорганизмов, как: E. coli, Salm. enteritidis, Ps. aeruginosa, Staph. aureus, Bac. сereus.
В результате проведенных исследований пришли к заключению, что испытанное лечебное средство ФЛЭКС-2 вполне может быть использовано для внутриматочного введения животным для фармакопрофилактики и лечения эндометритов, осложненных патогенной микрофлорой.
ВЫВОДЫ
1. При изучении мазков, приготовленных из влагалищной слизи, взятой в переднем отделе влагалища у стельных коров, ярко выражен высокий процент эпителиальных клеток влагалища. Установлено, что во влагалищной слизи стельных коров отсутствуют эпителиальные клетки других отделов органов размножения, в первый месяц стельности могут присутствовать клетки белой крови в небольшом количестве. Тканевой индекс у стельных коров равен 14,6±9,4, а токсический фактор равен 0,04±0,05.
2. Цитоморфологический контроль стельности показал, что в подопытной группе 80,0 % коров являются стельными. В мазках стельных животных обнаруживаются только эпителиальные клетки влагалища, а у не стельных коров - эпителиальные клетки всех отделов половых органов. Иммуноферментным методом стельность подтвердилась у 70,0 % коров. По точности диагностики стельности цитоморфологический метод совпадает с ректальным в 100,0 %, а с методом ИФА – в 60,0 % случаев.
3. Применение экспресс-диагностики акушерской ложкой Панкова Б.Г. и схемы фармакопрофилактики послеродовых осложнений, внутриматочным введением суспензии ФЛЭКС-2 в сочетании с инъекциями маточного средства «Гетеротон», позволяет снизить заболеваемость коров: субинволюцией матки с 90 % до 20 %, клиническим эндометритом – с 80 % до 10 %, скрытым эндометритом – с 60 % до 20 %.
4. Цитоморфологическим методом, по мазкам из маточных выделений, установлено завершение инволюции матки в опытной группе к 24-му дню новотельности у 80,0%, а в контрольной – у 10,0% коров.
5. У коров больных клиническим эндометритом, тканевой индекс максимально снижался на фоне высоких показателей токсического фактора. При скрытом эндометрите тканевой индекс равен 1,2±0,24, токсический фактор составляет 0,63±0,26; при эмбриональной гибели плода, который мы устанавливали по выявлению в мазках, приготовленных из влагалищной слизи ранее стельных коров, эпителиальных клеток матки, а также нейтрофилов, тканевой индекс равен 2,9±2,08, а токсический фактор - 1,25±0,63.
6. В результате проведенных бактериологических исследований экссудата из маточной слизи, взятой у коров больных эндометритом было установлено, что маточные выделения были контаминированы ассоциацией микроорганизмов: Staphylococcus - 13,7 %, Citrobacter – 19 %, β-гемолитические E. Coli - 67,3 %.
7. Проведенные нами бактериологические исследования показывают, что суспензия ФЛЭКС-2 проявила высокую бактерицидную активность в отношении таких штаммов микроорганизмов, как: E. coli, Salm. enteritidis, Ps. aeruginosa, Staph. aureus, Bac. сereus. Поэтому данная суспензия может быть рекомендована для внутриматочного введения при фармакопрофилактике и лечении эндометритов у коров.
^ СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Цитологическая диагностика беременности, по наличию в мазке влагалищной слизи только эпителиальных клеток влагалища и отсутствия эпителиальных клеток матки, высоко достоверна, по сравнению с другими методами. Данный метод можно рекомендовать для ранней диагностики стельности коров в производственных условиях;
2. На современных молочных комплексах, где эмбриональная смертность достигает 70 %, следует диагностировать ее цитологическим методом после установления стельности. Эмбриональная смертность устанавливается, если при повторных исследованиях через 19…21 сутки в мазке появляются эпителиальные клетки матки и нейтрофилы;
3. Внедрение фармакопрофилактики, экспресс-диагностики послеродовых заболеваний, цитологической диагностики нормы-патологии, беременности, эмбриональной смертности позволяет повысить процент плодотворных осеменений в молочных стадах на 60 % (в 4 раза), если осеменять коров в первые две половые охоты.
^ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ И ПРАКТИЧЕСКИХ ВЫВОДОВ
1. Применение цитоморфологической диагностики нормы-патологии в половых органах, стельности и эмбриональной смертности по мазкам из проб маточных выделений позволит своевременно провести экономически эффективные лечебно-профилактические мероприятия по борьбе с бесплодием коров;
2. Для интенсификации воспроизводительной способности коров, снижения послеродовых осложнений, эмбриональной смертности необходимо шире внедрять схему ранней акушерской диспансеризации;
3. Ранняя акушерская диспансеризация по Панкову Б.Г. базируется на фармакопрофилактике внутриматочным введением суспензии ФЛЭКС-2, экспресс-диагностике послеродовых заболеваний акушерской ложкой Панкова Б.Г., позволяющей значительно снизить частоту субинволюции матки, заболеваний клиническими и скрытыми эндометритами.
4. Материалы диссертационной работы используются при чтении курса лекций по акушерству, гинекологии и биотехнике репродукции студентам очного и заочного отделений факультета ветеринарной медицины и слушателям ФПК МГАВМ и Б. им. К.И. Скрябина.
^ СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Панков Б.Г., Соколова Н.А., Хуранов А.М. Проблемы воспроизводства на молочных фермах. /Б.Г. Панков, Н.А. Соколова, А.М. Хуранов // Матер. Всероссийского семинара «Опыт создания и работы сервисных центров по воспроизводству сельскохозяйственных животных в рамках реализации Государственной программы развития сельского хозяйства». – Дубровицы. 22 – 24 сентября. – 2009. – С. 73-77.
2. Хуранов А.М. Диагностика и профилактика хронических эндометритов. /А.М. Хуранов // Матер. Всероссийского семинара «Опыт создания и работы сервисных центров по воспроизводству сельскохозяйственных животных в рамках реализации Государственной программы развития сельского хозяйства». – Дубровицы. 22 – 24 сентября. – 2009. – С. 103-105.
3. Хуранов А.М. Эмбриональная смертность у коров. /А.М. Хуранов // Научно-практический журнал «Ветеринарная медицина». – 2009. - № 3. – С. 5-8.
4. Хуранов А.М., Панков Б.Г. Фармакопрофилактика и лечение субинволюции матки у коров. /А.М. Хуранов // Научно-практический журнал «Ветеринарная медицина». – 2010. - № 3. – С. 6-8.