«комплексное использование иммунологических методов у больных раком легкого»

Вид материала

Содержание

Ведущее научное учреждение
Апробация работы.
Материал и методы исследования
Таблица 5. Биопрепараты, использованные для иммунореабилитации больных
Методы иммунологического обследования
Результаты исследований и их обсуждение
Список работ, опубликованных по теме диссертации

Подобный материал:

Диссертация БАХЛАЕВА ИВАНА ЕГОРОВИЧА

на соискание ученой степени доктора медицинских наук «КОМПЛЕКСНОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ

У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЛЕГКОГО».

Специальность: 14.00.14 – онкология.

Работа выполнена в Петрозаводском государственном университете.

НАУЧНЫЕ КОНСУЛЬТАНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор А.С. Барчук,

доктор медицинских наук, профессор, академик РАЕН А.И. Агеенко

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор В.В. Мартынюк

доктор медицинских наук, профессор Н.В. Шабашова

доктор биологических наук А.С. Монахов

ВЕДУЩЕЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ:

Санкт-Петербургская Государственная Медицинская Академия им. И.И. Мечникова.

Защита диссертации состоялась 21 ноября 2006 г. на заседании специализированного Ученого Совета Д 208.052.01 НИИ онкологии им. проф. Н.Н. Петрова МЗ РФ (197758, г. Санкт-Петербург, Песочный-2, ул. Ленинградская, 68).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ онкологии

им. проф. Н.Н. Петрова.

Ученый секретарь специализированного совета:

доктор медицинских наук Р.В. Орлова

Выдержки из автореферата диссертации Бахлаева И.Е.

на соискание ученой степени доктора медицинских наук:

Внедрение результатов работы

Результаты исследования внедрены в практическую деятельность ГУЗ «Республиканский онкологический диспансер» МЗ Республики Карелия (Петрозаводск, Лососинское шоссе, 11). Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре госпитальной хирургии и курсе онкологии медицинского факультета Петрозаводского государственного университета (Петрозаводск, пр. Ленина, 33). Издано учебное пособие “Рак легкого” (Петрозаводск, 2000) и практическое руководство для врачей “Омелотерапия: комплексное клиническое применение” (Москва, 2005).

В рамках выполнения данной работы получен патент на изобретение: Способ дифференциальной диагностики новообразований легких (Патент Российской Федерации № 2051385 от 27.12.95 г.).

Работа поддержана Российским Фондом фундаментальных исследований (грант 98-04-03521).

Данные проведенного исследования используются при реализации Республиканской целевой программы “Развитие онкологической помощи в Республике Карелия на 2003-2006 годы” (утверждена Правительством Республики Карелия 17 октября 2002 года).

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

Национальных конгрессах по болезням органов дыхания (Москва, 1994, 1995; Новосибирск, 1996; Москва, 1997, 1998, 1999, 2001, 2002, 2005).
Научно-практических конференциях хирургов Республики Карелия (Петрозаводск, 1994, 1995, 1996, 2005).
Научно-практических конференциях хирургов Республики Карелия совместно с Санкт-Петербургским НИИ скорой помощи им. проф. И. И. Джанелидзе (Петрозаводск, 1997, 1998, 1999).
I съезде онкологов стран СНГ (Москва, 1996).
II Международном конгрессе Северных стран и регионов “Хирургия от младенчества до старости” (Кондопога, 1998).
Республиканской научно-практической конференции терапевтов “Актуальные проблемы иммунопатологии” (Петрозаводск, 1999).
Международной конференции и выездной научной сессии отделения общей биологии РАН (Петрозаводск, 1999).
Республиканской научно-практической конференции терапевтов, посвященной 60-летию Петрозаводского государственного университета “Новое в диагностике и лечении внутренних болезней” (Петрозаводск, 2000).
II съезде онкологов стран СНГ (Киев, 2000).
III научно-практической конференции хирургов Северо-Запада России (Петрозаводск, 2001)
Международной конференции, посвященной 50-летию Института биологии Карельского Научного Центра РАН (Петрозаводск, 2003).
1-ом Российском конгрессе “Реабилитационная помощь населению в Российской Федерации” (Москва, 2003).
Научно-практической конференции “Актуальные вопросы клинической онкологии” в Главном военном клиническом госпитале им. Н.Н. Бурденко (Москва, 2005).
Симпозиуме “Омелотерапия: актуальные вопросы иммунореабилитации” (Москва, 2006).

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для решения поставленных задач были использованы клинические, лучевые, эндоскопические, морфологические и иммунологические методы исследования (специфический РО-тест). В настоящей работе проводилось сравнительное системное и всестороннее изучение эффективности применения иммунологических методов на этапах скрининга, диагностики, мониторинга лечения и реабилитации у больных раком лёгкого.

В основу работы легли результаты обследования 627 больных с различными заболеваниями легких, проходивших обследование, лечение и наблюдение в ГУЗ «Республиканский онкологический диспансер» МЗ Республики Карелия за период с 1994 по 2004 годы. Все больные поступали в хирургическое отделение с подозрением на РЛ. В процессе комплексного обследования у 460 больных установлен первичный РЛ, у 27 – доброкачественная опухоль легкого (ДОЛ), у 105 – неопухолевые заболевания легких (НЗЛ) и у 35 – туберкулез легких. Возраст пациентов от 30 до 80 лет. Контрольную группу составили 40 практически здоровых доноров (мужчин – 28, женщин – 12) в возрасте от 30 до 55 лет.

Из 460 больных РЛ подавляющее большинство были мужчины – 418, что составляет 90,9%. РЛ у женщин диагностирован в 42 случаях (9,1%). Соотношение заболевших мужчин и женщин составило 10:1, средний возраст – 58,5 лет. Центральный рак диагностирован у 254 (55,2%), периферический – у 206 (44,8%) больных. Диагноз РЛ I стадии был установлен у 92 (20,0%), II стадии – у 132 (28,7%), III – у 191 (41,5%) и IV стадия – у 45 (9,8%) больных (согласно TNM классификации злокачественных опухолей, 1997 г.). Морфологическую структуру опухоли определяли в соответствии с Международной гистологической классификацией опухолей легких (1981) и гистологической классификацией РЛ, предложенную Н.А. Краевским (1976) и И.Г. Ольховской (1982).

Основной гистологической структурой опухоли был плоскоклеточный рак (61,1%), аденокарцинома диагностирована в 22,4% и мелкоклеточный рак – в 16,5% наблюдений.

Примерное соответствие по морфологической структуре отмечено у больных I-III стадий РЛ. Относительное увеличение числа больных плоскоклеточным раком и увеличение доли мелкоклеточного рака наблюдалось при IV стадии заболевания.

Среди 460 больных РЛ 266 (57,8%) страдали хроническим бронхитом, 57 – (12,4%) – пневмосклерозом и 41 (8,9%) – эмфиземой легких. Сочетание рака и туберкулеза легких было у 33 (7,2%) больных. Вторая группа сопутствующих заболеваний – ИБС и гипертоническая болезнь – наблюдалась у 197 (42,8%) и у 126 (27,4%) больных соответственно. Сочетание РЛ и язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки отмечено в 38 (8,3%) наблюдениях. Сахарный диабет установлен в 32 (7,0%) случаях. Не было сопутствующих заболеваний лишь у 35 (7,6%) больных.

Большинство больных с ДОЛ мужчин составили мужчины – 21, женщин в этой группе было 6, средний возраст – 46,3 года. Группу внебронхиальных опухолей составили 25 пациентов, внутрибронхиальные опухоли выявлены у 2 больных. Среди больных первой группы у 21 имела место гамартома, у 2 – доброкачественная мезотелиома плевры и по 1 наблюдению – липома и фиброма легкого. В 2 случаях диагностирована папиллома бронха.

В группе пациентов НЗЛ мужчин было 80, женщин – 25, средний возраст – 49,3. Из 105 человек с НЗЛ у 36 диагностировали острую пневмонию, у 19 – хроническую, у 28 – хронический бронхит, в 7 наблюдениях – инородное тело бронха, в 5 – саркоидоз Бека, в 4 – ретенционную кисту, в 3 – актиномикоз и по 1 случаю – эхинококк, фиброзирующий альвеолит (синдром Хаммена-Рича) и гранулематоз Вегенера. Среди 35 больных туберкулезом легких мужчин было 31 и 4 женщины, средний возраст составил 46,6 лет.

Подавляющее большинство больных РЛ – 419 человек (91,1%) – курили на момент обследования по 10 и более сигарет в день. В группе больных НЗЛ курящие лица составили 78 (74,3%), с туберкулезом легких – 29 (82,9%) и с ДОЛ – 18 (51,4%).

С целью определения эффективности противорецидивной реабилитации у 86 оперированных больных НМКРЛ нами были использованы препараты, оказывающие иммунокорригирующее действие: органопрепараты тимуса (тактивин, тималин), рекомбинантный интерлейкин-2 (ронколейкин) и фитопрепарат Хеликсор из омелы белой (табл. 5). Лечение проводилось в течение первых пяти лет после радикальной операции. Препараты тимуса и ронколейкин назначались по стандартным схемам. Курс омелотерапии состоял из подкожных иньекций фитопрепарата Хеликсор по классической схеме путем ступенчатого увеличения концентрации с 0,01 мг до 50 мг экстракта омелы (Ролик И.С. и соавт., 2005).

Таблица 5.

Биопрепараты, использованные для иммунореабилитации больных

раком легкого в позднем послеоперационном периоде.

Стадия рака легкого	Хеликсор	Ронколейкин	Тактивин, тималин	Контроль (только хирургическое лечение)
Стадия рака легкого	Число больных
I II IIIA	26 28 32	– – 16	– – 18	71 33 47

Наблюдение за больными раком легкого, выписанными из стационара по окончанию лечения, осуществляли путем контрольных обследований в онкологическом диспансере: через месяц, а затем в течение первого года через 3 месяца, второго-четвертого – 1 раз в 6 месяцев и ежегодно в последующие годы. При диспансерном обследовании больных выполняли клинический анализ крови, рентгенографию легких, фибробронхоскопию; по показаниям – УЗИ печени, КТ головного мозга, сцинтиграфию скелета и другие специальные методы исследования.

Методы иммунологического обследования

Иммунный статус пациентов, маркеры опухолевого роста определяли при поступлении в стационар, далее – через 7, 14 дней и 1 месяц после операции; затем очередность иммунологических обследований совпадала со сроками диспансерного осмотра.

Иммунологические исследования проводились в Карельском республиканском онкологическом диспансере г. Петрозаводска и в лаборатории иммунологии (зав. – докт. биол. наук Е.К. Олейник) Карельского научного центра РАН.

Иммунологические исследования выполняли по следующим параметрам. Определяли абсолютное и относительное содержание Т-лимфоцитов (Jondal M et al., 1972) и В-лимфоцитов (Gupta S. et al., 1975). Пролиферативный ответ активность лимфоцитов периферической крови оценивали в реакции бласттрансформации (РБТЛ) на фитогемагглютинин (ФГА), конканавалин А (Кон А), митоген лаконоса (МЛ) (Serva, Germany). Метод воспроизводился общепринятым способом, основанным на включении ³Н-тимидина (Фримель Г., 1987).

Уровень иммуноглобулинов G, M, A в сыворотке крови исследовали с использованием моноспецифических антисывороток (Mancini G. et al., 1965).

Иммунофенотипирование лимфоцитов крови проводили с помощью панели моноклональных антител (МКАТ) серии ИКО «Биоскрин» (НИИ клинической онкологии ОНЦ РАМН, Москва) в реакции непрямой иммунофлуоресценции. Набор МКАТ включал ИКО-90 (CD3), ИКО-86 (CD4), ИКО-31 (CD8), ИКО-116 (CD16), ИКО-91 (CD22), ИКО-105 (CD25), ИКО-92 (CD71), ИКО-160 (CD95) и ИКО-1 (HLA-DR). Субпопуляционный состав лимфоцитов исследовали также с использованием моноклональных антител серии ЛТ «Сорбент» (Институт иммунологии МЗ РФ): ЛТ3 (CD3), ЛТ4 (CD4), ЛТ8 (CD8), ЛНК16 (CD16), ЛТ19 (CD19), ЛТ25 (CD25), ЛТ71 (CD71), ЛТ95 (CD95), HLA-DR. Исследования выполняли в соответствии с методическими рекомендациями рабочей группы СПб РО РААКИ “Стандартизация методов иммунофенотипирования клеток крови и костного мозга” (1999).

В качестве маркеров опухолевого роста использованы определение уровня раково-эмбрионального антигена (РЭА), кожную реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) с аутологичными модифицированными лимфоцитами и новый диагностический тест на опухолевый рост (РО-тест).

Концентрацию РЭА в сыворотке крови определяли с помощью метода радиоиммунологического анализа с использованием набора РИО-РЭА-¹²⁵I-М (ИБОХ, Минск).

Новый универсальный диагностический специфический тест на опухолевый рост (РО-тест) использовался в модифицированном тесте гемагглютинации эритроцитов – иммуномодификация СОЭ (Агеенко А.И., 1994, 2004).

Для оценки достоверности полученных результатов исследований проведена компьютерная статистическая обработка материала с вычислением M и m, достоверность различий оценивали по критерию t Стьюдента. Статистический показатель считали достоверным при p < 0,05. Оформление текста, построение таблиц, графиков и диаграмм проводилось с помощью прикладных программ: редактора: “Microsoft Word” (версия 7,0), пакета электронных таблиц “Microsoft Exell” (версия 7,0) для “ Windows-98”.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Противорецидивная иммунотерапия у больных раком легкого

Для иммунореабилитации были использованы препараты, оказывающие иммунокорригирующее действие: препараты тимуса (тактивин, тималин), рекомбинантный интерлейкин-2 человека (ронколейкин) и фитопрепарат Хеликсор из омелы белой.

Анализ эффективности иммунореабилитации с помощью Хеликсора проведен у 26 больных с I стадией, у 28 больных – со II стадией и у 32 больных с IIIА стадией НМКРЛ, получавших противорецидивную терапию в течение первых пяти лет после радикальной операции. Иммунотерапия препаратами тимуса и ронколейкином проводилась дважды в год только больным IIIA стадии. Тактивин и тималин назначался по стандартным схемам. Курс лечения ронколейкином составлял 5 внутривенных инфузий по 1 млн МЕ с перерывами в 2 дня. Схема противорецидивной омелотерапии состояла из подкожных иньекций Хеликсора по классической схеме путем ступенчатого увеличения концентрации с 0,01 мг до 50 мг экстракта омелы.

Исследования параметров РО-теста проводилось до и после курса биотерапии. Критерием назначения противорецидивного лечения являлись высокие (более 1,5) показатели α-коэффициента злокачественности РО-теста у больных РЛ, выявленные после радикальной операции.

Нами было установлено, что 5-летняя выживаемость радикально оперированных больных РЛ с I и II стадией заболевания получавших омелотерапию выше, чем в контрольной группе, соответственно, в 1,21 и 1,36 раза (табл. 12).

Таблица 12.

Эффективность противорецидивной омелотерапии после радикальной операции у больных раком легкого с I и II стадией.

Стадия	Метод лечения	Число больных	Число больных, проживших более
			1 года	3 лет	5 лет
I II	Операция + омелотерапия Операция (контроль) Операция + омелотерапия Операция (контроль)	26 71 28 33	24 (96,2) 67 (94,3) 21 (75,0) 22 (66,7)	22 (84,6) 59 (69,0) 18 (64,3) 17 (51,5)	19 (73,1) 43 (60,6) 15 (53,6) 13 (39,4)
В скобках – показатель в процентах.

Применение препаратов тимуса у больных с IIIA стадией РЛ не привело к повышению уровня выживаемости (табл. 13). У больных получавших ронколейкин 3-5-летняя выживаемость оказалось соответственно в 1,23 и 1,1 раза выше, чем в контрольной группе. Пятилетняя выживаемость у радикально оперированных больных с IIIA стадией использовавших омелотерапию составила 28,1 %, что достоверно выше (p<0,05) по сравнению c аналогичным показателем (17,0%) в группе больных прошедших только хирургическое лечение.

Среди пациентов с благоприятным течением болезни во всех случаях отмечено снижение α-коэффициента злокачественности РО-теста до уровня 0,65-1,43. Напротив, если при повторных исследованиях после проведения адъювантной биотерапии, значения онкотеста оставались выше 1,5, это соответствовало, как правило, неблагоприятному прогнозу заболевания.

Таблица 13.

Эффективность противорецидивной терапии больных раком легкого IIIA стадии после радикальной операции с помощью биопрепаратов.

Препараты для адьювантной терапии	Число больных, получавших биопрепараты	Число больных, проживших более
Препараты для адьювантной терапии	Число больных, получавших биопрепараты	1 года	3 лет	5 лет
Тактивин, тималин Ронколейкин Хеликсор	18 16 32	8 (44,4) 10 (62,5) 22 (68,8)	5 (27,8) 5 (31,3) 14 (43,8)	3 (16,7) 3 (18,8) 9 (28,1)
Контроль (только хирургическое лечение) n = 47	-	20 (42,6)	12 (25,5)	8 (17,0)
В скобках ─ показатель в процентах.

Проведение омелотерапии больным РЛ IIIA стадии привело к восстановлению основных субпопуляций лимфоцитов CD3⁺, CD4⁺и CD8⁺(табл. 14).

Показатели относительного содержания В-лимфоцитов (CD19⁺) не отличались от исходных параметров. В периферической крови больных, получавших Хеликсор, отмечено достоверное повышение цитотоксичности NK-клеток (CD16⁺) и усиление экспрессии маркера апоптоза (CD95⁺), p < 0,05. В меньшей степени влияние омелотерапии отразилось на содержании клеток, несущих рецептор к ИЛ-2 (CD25⁺), p > 0,05. Достоверных изменений в экспрессии рецептора трансферрина (CD71) и HLA-DR⁺ не выявлено.

Сравнительный анализ иммунологических и клинических исследований показал, что если при проведении омелотерапии Хеликсором у больных РЛ констатировался высокий уровень экспрессии CD16⁺- и CD95⁺-клеток по сравнению с исходным уровнем, то это имело, как правило, благоприятное прогностическое значение.

Таблица 14.

Уровни (в %) экспрессии маркеров лимфоцитов периферической крови больных

раком легкого IIIA стадии до и после омелотерапии.

Поверхностный маркер	Больные раком легкого (n = 24)		Здоровые лица (n = 38)
	до лечения	после лечения
CD3⁺ CD4⁺ CD8⁺ CD16⁺ CD19⁺ CD25⁺ CD71⁺ CD95⁺ HLA-DR⁺	52,45 ± 4,12 24,36 ± 3,55 24,78 ± 3,62 14,45 ± 2,17 14,58 ± 2,46 11,27 ± 4,85 14,24 ± 3,23 10,17 ± 2,12 16,38 ± 2,24	58,14 ± 5,37 30,74 ± 3,27 27,53 ± 3,84 23,34 ± 3,14* 14,65 ± 2,35 14,67 ± 2,23 14,73 ± 3,17 15,96 ± 1,84* 16,80 ± 2,33	57,55 ± 3,77 29,78 ± 3,23 28,83 ± 4,37 16,05 ± 3,72 12,14 ± 3,83 9,85 ± 0,90 8,55 ± 4,06 8,00 ± 4,60 15,83 ± 2,71

* – различия достоверны по сравнению с исходным уровнем.

Выводы

8. С целью снижения риска рецидива опухоли на этапе реабилитации больных РЛ после радикальной операции целесообразно использовать фитопрепарат Хеликсор из омелы белой с учетом α-коэффициента злокачественности РО-теста.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ,

где отражены материалы по омелотерапии

Ролик И.С., Агеенко А.И., Авясов Р.М., Бахлаев И.Е. Противорецидивные возможности биопрепаратов при онкопатологии // Натуротерапия и гомеопатия. – 2003. – № 1. – С. 43-48.
Бахлаев И.Е., Агеенко А.И., Ролик И С. Противорецидивная омелотерапия у оперированных больных раком легкого // Натуротерапия и гомеопатия. – 2006. - № 1. – С. 33-38.

Статьи, опубликованные в зарубежных изданиях:

Ageenko A.I., Erkhov V.S., Bachlaev I.E., Oleinik E.K., Trakhtenberg A.H. Delayed-type hypersensitivity reaction in the skin with autologous modified lymphocytes in lung cancer patients // Exp. Oncol. – 1994. – Vol. 16, № 4-6. – P. 367-370.
Bachlaev I.E., Oleinik E.K., Oleinik V.M., Ageenko A.I. Comparative analysis of immunological methods of investigation in screening, diagnostics and monitoring of lung cancer // Oncology. – 2000. – Vol. 2, № 1-2. – P. 60-63.

Главы в монографиях, патенты, пособия для врачей

Бахлаев И.Е. Глава в кн.: Агеенко А.И. Новая диагностика рака: теория, диагностика, лечение, реабилитация. – М.: Медицина XXI, 2004. – С. 296-338.
Ролик И.С., Бахлаев И.Е., Симонишвили М.О. и др. Омелотерапия: комплексное клиническое применение. Руководство для практикующих врачей / Под общ. ред. И.С. Ролика. – М.: НОЦ НАТУРВИТА, 2005. – 448 с.

Тезисы докладов на конференциях, симпозиумах, конгрессах, съездах

Бахлаев И.Е., Агеенко А.И., Ролик И.С. Исследование эффективности противорецидивной иммунотерапии у больных раком легкого после оперативного лечения // Актуальные проблемы клинической онкологии: Тез. докл. научно-практ. конф. – М.: ГВКГ им. Н.Н. Бурденко, 2005. – С. 166-167.

Blog

«комплексное использование иммунологических методов у больных раком легкого»

Содержание