Отчет представлен на 51 с., состоит из 5 ч., 12 рис., 2 табл. Ключевые слова

Вид материалаОтчет

Содержание


P. aurelia
Paramecium bursaria/
Paramecium bursaria/Chlorella/вирус
Подобный материал:
РЕФЕРАТ

Отчет представлен на 51 с., состоит из 5 ч., 12 рис., 2 табл.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: цианобактерии, прохлорофиты, инфузории, тройственный симбиоз, PBCV-вирус, выделение, очистка, культивирование, ЛСКМ, микроэволюция, сингены.

Исследованы объекты из коллекции микроорганизмов CALU (цианобактерии-прохлорофиты, инфузории, вирусы в тройственной симбиотической системе Paramecium bursaria/Chlorella/вирус PBCV), хранящейся в СПбГУ.

В рамках задачи «Прохлорофиты» обследованы образцы воды водоемов С.-Петербурга и Ленинградской области новым методом, основанным на сочетании метода накопительных культур и микроспектрометрии с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа; использован модифицированный метод идентификации прохлорофитов с применением PCR-реакции с праймерами к Hip1-последовательностям. Обнаружено, что коллекционные штаммы имеют низкую степень ДНК–ДНК гибридизации (17,9%), различаются наборами ITS и амплификонов Hip1/ДНК, а также содержанием GC-пар. Наряду с фенотипическими различиями это служит дополнительным аргументом в пользу придания штамму Prochlorothrix sp. NIVA-8/90 статуса нового вида (пятого по счету для прохлорофитов).

В рамках задачи «Инфузории» на основе филогенетического исследования 79 клонов всех видов комплекса P. aurelia выявлено 13 клонов, которые по молекулярным маркерам отличаются от прочих представителей «своих» видов и группируются с «чужими» видами; обнаружено противоречие между классическим (на основе скрещиваний) критерием вида у парамеций, с одной стороны, и результатами электрофоретического кариотипирования совокупно с молекулярными данными, с другой стороны. Причинами этого могут быть изменения в сайтах фрагментации, которые используются при постконъюгационном созревании генома макронуклеуса и влияют на формирование макронуклеарных генов, отвечающих за определение типа спаривания.

В рамках задачи «Вирусы зоохлорелл» показано, что в препаратах ДНК, выделенных из тройственной симбиотической системы Paramecium bursaria/хлорелла/вирус PBCV присутствуют не интегрированные копии вирусного генома. С помощью комплекса цитологических методов доказано, что вирионы прикрепляются к поверхности инфузории в области соматической цилиатуры. Оригинальный метод стереологического анализа позволил установить, что вирусные частицы аккумулируются преимущественно в средней правой зоне на брюшной стороне, а также в буккальной полости. Предложена схема жизненного цикла вируса в тройственной симбиотической системе, включающая в себя этап латентного существования вирионов на поверхности инфузории, этап мультипликации/литической инфекции зоохлорелл при случайном лизисе парамеции и этап реадсорбции с переходом к латентному существованию.

В рамках общих задач проекта выделено 39 новых штаммов цианобактерий и 41 изолят тройственного симбиоза Paramecium bursaria/Chlorella/вирус PBCV. На основании морфологических и геномных характеристик, а также совместимости конъюгации идентифицированы 32 клона инфузорий р. Paramecium.

В рамках учебно-квалификационной цели проекта с использованием объектов коллекции и инфраструктуры музея CALU выполняются квалификационные выпускные работы бакалавров (5), подготавливаются магистерские (1) и кандидатские (2) диссертации; материалы проекта входят в план докторантуры (1).

Материалы проекта отражены в 2 статьях в рейтинговых отечественных и зарубежных изданиях; представлены в 8 докладах на российских и международных научных мероприятиях; вошли в 1 учебник и в 9 курсов на Биолого-почвенном факультете СПбГУ.