Мимср методичка №48 Фармация. Бапд. Диетология Биоэлементы. Ферменты. Лекарственные травы
| Вид материала | Методичка |
- Мимср методичка №49 Фармация Диетология. Раздельное питание. Бапд. Белки. Диетология., 18892.81kb.
- Методы лечения: лекарственные травы, масcаж, вытяжение, иглотерапия, скобление, глинолечение, 482.64kb.
- Фитотерапия лекарственные травы и лечение травами, 63.64kb.
- Методические указания по подготовке к практическим занятиям по фармакогнозии специальности, 293.95kb.
- Программа элективный курс «Лекарственные растения в народной и научной медицине», 310.12kb.
- Методичка №47 : Фармация Физиология «жкт», 18017.42kb.
- Рабочая программа дисциплины дс. Ф. 03 Фармакогнозия Для специальности 060108 «Фармация», 663.79kb.
- Тематический план лекций модуль 1 по фармакогнозии для студентов ІІІ курса фармацевтического, 23.12kb.
- Травы Гекаты в роли целителей, 2705.54kb.
- План лекций по дисциплине «Токсикологическая химия» для студентов IV курса специальности, 18.73kb.
Влияние поливитаминного препарата Алвитил на иммунный статус у часто болеющих детей 3-8 лет
Проблема реабилитации длительно и часто болеющих детей, несмотря на большое число исследований, остается до конца не решенной. Патогенетической основой частых и длительных респираторных заболеваний является изменение иммунологической реактивности организма. В связи с этим, целью настоящего исследования явилась оценка влияния препарата Алвитил на основные параметры иммунного статуса часто болеющих детей. Обследовано 30 детей 3-8 лет, из которых 15 детей относились к группе длительно и часто болеющих и 15 детей имели первую группу здоровья (контроль). Иммунологическое обследование детей осуществлялось стандартными методами до начала и по окончании курса Алвитила в дозе 5 мл 1 раз в день в течение 3-х недель. Назначение Алвитила приводило к выраженному улучшению показателей функции вегетативной нервной системы. Алвитил нормализовал сниженные показатели содержания Т-лимфоцитов и Т-хелперов, усиливал экспрессию ранних активационных маркеров на поверхности Т-лимфоцитов и Т-хелперов, нормализовал уровень HLA-DR+ Т-лимфоцитов, а также модулировал и нормализовал продукцию МИФ. Препарат стимулировал выработку IgM, экспрессию Fc RIII на поверхности нейтрофилов и нормализовал измененную выработку IgG. Проведенные исследования показали, что прием Алвитила эффективен в реабилитации часто болеющих детей, поскольку позволяет скомпенсировать витаминную недостаточность, отмечаемую на фоне частых ОРВИ и достичь нормализации ряда иммунологических параметров.
^ Ключевые слова: часто болеющие дети, алвитил, иммунный статус.
Эпидемиологические исследования свидетельствуют о том, что острые респираторные инфекции относятся к наиболее распространенной патологии у детей, причем заболеваемость значительно выше в возрастном диапазоне 3-8 лет [10]. Частые заболевания респираторного тракта объясняются многообразием возбудителей, легкостью передачи и высокой восприимчивостью к вирусам. Повторные грипп и ОРВИ способствуют формированию у детей хронической бронхолегочной и аллергической патологии, предрасполагают к появлению гайморитов, тонзиллитов, отитов, могут быть причиной задержки психомоторного и физического развития, формируя группу так называемых "часто болеющих детей".
Патогенетической основой частых и длительных респираторных заболеваний является изменение иммунологической реактивности организма [10]. Эти изменения могут затрагивать все звенья иммунитета. В основе снижения противоинфекционной резистентности у длительно и часто болеющих детей, в отличие от иммунодефицитных состояний, лежат транзиторные, а не стабильные нарушения функции, что необходимо учитывать при назначении лечения. В связи с этим, в терапии и реабилитации "часто болеющих детей" на всех этапах требуется применение средств необходимых для обеспечения нормальной функции всех систем и, в первую очередь иммунной системы.
Для лечения часто болеющих детей нередко предлагают препараты из группы адаптогенов, биостимуляторов и т.д. К сожалению, достоверных данных об их благоприятном эффекте не опубликовано [10, 18]. Более того, ряд этих препаратов имеют противопоказания к применению, или не могут быть использованы у детей. Наиболее оправданным представляется использование иммунотропных средств, селективно действующих на различные уровни повреждения в иммунной системе. Однако, их назначение возможно лишь после выявления конкретных иммунных нарушений. Необоснованное использование иммунотропных препаратов может быть опасно для развивающейся иммунной системы ребенка. Помимо этого, существующие препараты не всегда относятся к препаратам направленного действия и могут давать разнонаправленный и зачастую неожиданный эффект.
Известно, что витамины, макро- и микроэлементы необходимы для реализации большинства жизненно важных функций организма, в том числе и для обеспечения нормального функционирования иммунной системы [1, 8, 12, 14, 15б 19]. Витаминам принадлежит значимая роль в обеспечении адекватного иммунного ответа, функционировании систем метаболизма ксенобиотиков, а также в формировании антиоксидантного потенциала организма, что имеет важное значение в поддержании устойчивости человека к различным инфекциям и другим неблагоприятным внешним факторам [5, 6, 7]. К сожалению, работ, посвященных изучению влияния витаминов на функции иммунной системы, не так уж много. Большая часть их касается влияния витаминов на показатели врожденного иммунитета [4]. В то же время, витаминные препараты относительно безопасны и при рациональном использовании могут дать хороший лечебный эффект. Одним из новых перспективных препаратов является Алвитил, выпускаемый фирмой Solvay Pharma (France) в виде сиропа и в виде драже. Сироп Алвитил имеет приятный вкус сливы Мирабель, созданный натуральный и содержит в своем составе необходимые для детского организма водорастворимые (С, B1, B2, B5, B6, B12, РР, фолиевую кислоту, биотин) и жирорастворимые витамины А, D, Е (ретинол, кальциферол и токоферол). Препарат разрешен к применению с 2-х летнего возраста.
Цель
Целью настоящего исследования явилась оценка влияния препарата Алвитил на основные параметры иммунного статуса часто болеющих детей.
^ Матералы и методы
Под наблюдением находилось 30 детей в возрасте от 3 до 8 лет. Из них 15 детей составили первую группу (с применением Алвитила в комплексном лечении) и 15 - контрольную группу, включающую детей 1 группы здоровья, не принимавших витамины. В основной группе частота ОРВИ была 5 и более случаев в год (в среднем 6,6±1,2). В первой группе 7 часто болеющих ОРВИ детей перенесли острый бронхит, у 3 детей был обструктивный бронхит. 9 из 15 детей болели ОРВИ в течение года более чем 7 раз. Во время наблюдения аллергические реакции у детей отсутствовали. В период обследования дети не болели и находились на диспансерном наблюдении в консультативно-диагностической поликлинике ГУ Ивановского НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова МЗ РФ. Реабилитационные мероприятия заключались в назначении рационального питания и режима дня с исключением переутомления и перевозбуждения ребенка.
Поливитаминный препарат Алвитил назначался детям в лечебной дозе по 5 мл. 1 раз в сутки курсом 21 день. Всем детям было проведено общее клиническое и иммунологическое исследование. Иммунологическое обследование проводилось до начала и по окончании приема Алвитила.
Состояние иммунного статуса оценивали по показателям клеточного, гуморального и врожденного иммунитета. Забор периферической крови осуществлялся из локтевой вены в количестве 5 мл. Выделение мононуклеарных клеток и полиморфноядерных лейкоцитов из периферической крови осуществлялось стандартным методом скоростного центрифугирования в градиентах плотности фиколла-верографина (d-1,078 и d-1,114 соответственно) [17].
Изучение популяционного состава и экспрессии активационных маркеров на поверхности лимфоцитов осуществлялось стандартным методом проточной цитофлюорометрии на цитометре FACScan ("Becton Dickinson", USA) c использованием моноклональных антител той же фирмы [9]. Для учета неспецифического окрашивания использовали Simultest Control (мышиные IgG1-FITC + IgG2a-PE, "Becton Dickinson", USA). Клетки метили анти-Hle-1 и анти-Leu-M3-антителами с целью наложения оптимального окна дискриминации (гейта) на точечном графике прямого и бокового светорассеяния, которое включало более 95% клеток с фенотипом CD45+CD14-, то есть относилось к лимфоцитам, или CD45+CD14+, то есть относилось к нейтрофилам. На поверхности нейтрофилов оценивали экспрессию CD16 (низкоаффинный Fc рецептор III типа). Анализ результатов проводили в программе Lysys II.
Продукцию фактора, угнетающего миграцию лейкоцитов (MIF), оценивали по миграционному индексу (МИ) в прямом капиллярном тесте в ответ на стимуляцию ФГА [3].
Оценку бактерицидной активности нейтрофилов проводили в реакции спонтанного и стимулированного зимозаном восстановления нейтрофилами нитросинего тетразолиевого (НСТ) [2]
Основные классы иммуноглобулинов (IgG, IgА, IgM) определяли методом радиальной иммунодиффузии по Manchini [20].
Уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови оценивали методом осаждения ЦИК 4% раствором полиэтиленгликоля [9].
Статистическая обработка материала проводилась с помощью программы "Статистика".
^ Результаты и обсуждение
Поливитаминный препарат Алвитил хорошо переносился всеми детьми, не вызывая побочных и аллергических реакций, поэтому все 15 детей прошли полный курс лечения алвитилом в течение 21 дня. Как видно из данных, приведенных в таблице №1, назначение Алвитила приводило к выраженному улучшению показателей функции вегетативной нервной системы у детей 1 группы. После приема Алвитила отмечалась отчетливая положительная динамика всех показателей. Однако в большей степени, восстанавливались показатели двигательной активности, аппетита и окраски кожных покровов.
Таблица 1. Оценка клинической эффективности применения Алвитила у часто и длительно болеющих детей.
|
х - различия статистически достоверны с показателями контрольной группы; х - р<0.05, хх - p<0.02, ххх - p<0.01, хххх - p<0.001
Данные по влиянию Алвитила на иммунологические параметры приведены в таблице №2. Проведенный анализ результатов обследования ДЧБ детей показал, что наиболее значимые изменения в иммунологических параметрах отмечались в показателях, характеризующих популяционный состав и функциональную активность лимфоцитов, и в меньшей степени затрагивали нейтрофилы. Так, в периферической крови ДЧБ детей достоверно снижался уровень Т-лимфоцитов и Th по сравнению с показателями здоровых детей (p<0.001, в обоих случаях). Параллельно у ДЧБ детей отмечалось угнетение функциональной активности Т-лимфоцитов по данным продукции МИФ в ответ на стимуляцию клеток ФГА по сравнению с таковой у здоровых детей (p<0.01). В то же время, в периферической крови ДЧБ детей достоверно повышался уровень CD16+ NK (p<0.02) и отмечалась выраженная тенденция к повышению содержания CD56+ лимфоцитов по сравнению с показателями детей контрольной группы (p>0.05).
Таблица 2. Влияние Алвитила на показатели иммунного статуса длительно и часто болеющих детей в возрасте 3-8 лет.
|
х - различия статистически достоверны с показателями контрольной группы; х - р<0.05, хх - p<0.02, ххх - p<0.01, хххх - p<0.001
у - различия статистически достоверны с показателями до назначения "Алвитила"; y - р<0.05, yy - p<0.02, yyy - p<0.01, yyyy - p<0.001.
СD16+ и CD56+ лимфоциты являются различными популяциями естественных киллеров и осуществляют разные функции. К-киллеры (CD16+) принимают участие, в основном, в реакции антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ). Молекула CD16 является Fc -рецептором третьего типа, которые распознают Fc-фрагменты иммуноглобулина G и обеспечивают распознавание клеток, покрытых антителами. Основной функцией К-киллеров является осуществление противоинфекционной защиты, причем ЕК лизируют инфицированные вирусом клетки без предварительной сенсибилизации, непосредственно связываясь с мишенями за счет лектиновых рецепторов, а также за счет Fc-фрагментов IgG антител [16]. Наиболее существенный вклад NK клетки вносят в предупреждение ранней прогрессирующей вирусной инфекции [11, 13, 14]. CD56+ ЕК не проявляют выраженной цитотоксической активности, но их функциональная активность может усиливаться под влиянием цитокинов Th1 типа. Цитотоксическая активность этого типа ЕК зависит от перфоринового механизма. Кроме того, они продуцируют ТФР , обладающего иммуносупрессивным и иммунорегулирующим действием [16].
У часто болеющих детей отмечалось также увеличение содержания В-лимфоцитов (p<0.02).
Важную информацию о состоянии иммунной системы дает анализ экспрессии активационных маркеров на поверхности ИКК. Следует отметить, что у ДЧБ детей показатели ранней активации лимфоцитов (CD25+, CD4+CD25+) практически не отличались от таковых в контрольной группе (p>0.05, в обоих случаях). В то же время, общее количество лимфоцитов, экспрессирующих HLA-DR АГ, у ДЧБ детей было достоверно выше, чем в контроле (p<0.02). Однако содержание Т-лимфоцитов, экспрессирующих молекулы главного комплекса гистосовместимости 2 класса (CD3+HLA-DR+), у этих детей было существенно сниженным по сравнению с показателями здоровых детей (p<0.001). Эти данные соответствовали описанному выше снижению показателей клеточного иммунитета у ДЧБ детей. Известно, что HLA-DR АГ экспрессируются лимфоцитами на более поздних стадиях активации, и их экспрессия тесно связана с процессами презентации антигена [16]. Можно предположить, что изменения экспрессии HLA-DR АГ на поверхности лимфоцитов периферической крови ДЧБ детей происходят, в основном за счет популяции В-лимфоцитов. Полученные данные, вероятнее всего, свидетельствуют об активации В-лимфоцитов. Это предположение подтверждается результатами оценки их функциональной активности. Для группы ДЧБ детей было характерно повышение уровня сывороточного IgG (p<0.01) и ЦИК (p<0.01).
Функциональные параметры нейтрофилов, в отличие от показателей лимфоцитов, у ДЧБ детей мало отличались от параметров здоровых детей. Так, спонтанная и индуцированная зимозаном НСТ-активность нейтрофилов была сравнима с показателями контрольной группы (p>0.05, в обоих случаях). Изменение НСТ-активности нейтрофилов тесно связано с активацией так называемого респираторного взрыва и синтезом активных форм кислорода, которые обеспечивают кислородозависимые механизмы противоинфекционной защиты [14]. Однако у ДЧБ детей наблюдалось нерезкое, но достоверное снижение экспрессии Fc рецептора III типа (CD16), что, возможно, отражает нарушение кислородонезависимых механизмов защиты, например, АЗКЦ или поглотительной активности клеток.
Таким образом, часто болеющие дети характеризовались определенными иммунными нарушениями, которые могут служить основой формирования у них пониженной резистентности к инфекционным агентам. Стимуляция гуморального иммунитета с одной стороны может быть отражением компенсаторных механизмов, а с другой свидетельствовать о наличии очагов хронической инфекции.
По литературным данным многие витамины оказывают выраженное влияние на функции различных звеньев иммунной системы. Так показано, что бета-каротин и аскорбиновая кислота обладают иммунотропным действием, стимулируя цитотоксическую активность макрофагов, а также спонтанную и индуцированную активность фагоцитов [4]. Кроме того, бета-каротин способен усиливать образование АОК на Т-зависимый антиген и регулировать синтез антител [8]. Витамин А нормализует дифференцировку клеток, изменяя экспрессию генов, тормозит пролиферацию клеток и повышенный синтез ДНК [15]. В последние годы установлено, что витамин А и его аналоги (ретиноиды) ингибируют продукцию IL-6, индуцированную IL-1, действуя на уровне трансдукции сигнала активации, снижают экспрессию IL-6R, но повышают экспрессю IL-2R и EGFR [13]. Дефицит витамина А ведет к развитию преимущественно Th1 пула [18]. Витамин Е, являясь активным антиоксидантом, угнетает реакции образования радикалов, улучшает дыхание тканей, активизирует синтез белка, в том числе иммуноглобулинов и факторов неспецифической защиты [15]. Витамин Е обладает интерфероногенным действием, стимулирует NK-клетки [11]. Он повышает количество T-хелперов [13]. Комплекс антиоксидантных витаминов, таких как А, Е и С, благодаря активации факторов транскрипции АР-1, NF-АТ и усилению продукции IL-1, IL-2 и GM-CSF, способствует стабилизации мембран клеток, защищая их от воздействия агрессивных стресс-индуцированных молекул. Кроме того, за счет блокирования активации фактора NFkB они ингибируют продукцию IL-6 TNF . Введение в диету рыбего жира с высоким содержанием линолевой кислоты и витамина Е угнетает пролиферативную активность Т-лимфоцитов, NK, продукциюIL-1, IL-2, IL-6, TNF и IFN мононуклеарами периферической крови [13]. Некоторые авторы [11] отмечали, что витамин С улучшает хемотаксис фагоцитов, повышает цитолитическую активность сыворотки крови, нормализует литическую активность комплемента, обладает интерфероногенным действием. Витамины Р и РР стимулируют фагоцитоз [11, 16].
Приведенные данные позволили предположить, что использование поливитаминного препарата Алвитил, включающего все выше названные витамины, может способствовать нормализации функционирования иммунной системы у ДЧБ детей.
Анализ результатов показал, что Алвитил оказывал благоприятное воздействие на популяционный состав Т-лимфоцитов. Так, у детей, принимавших Алвитил наблюдалось повышение содержания CD3+ и CD4+ (p<0.02 и p<0.01, соответственно) лимфоцитов до нормативных значений (p>0.05, в обоих случаях). Алвитил нормализовал и функциональную активность Т-лимфоцитов, усиливая синтез МИФ (p<0.02). Возможно, что этот эффект препарата обусловлен действием витаминов А и Е, которые по литературным данным способны повышать резистентность иммуноцитов к действию супрессорных цитокинов [1].
Назначение Алвитила не влияло на показатели ранней клеточной активации (p>0.05, во всех случаях), но снижал изначально повышенное содержание HLA-DR-позитивных лимфоцитов (p<0.05). В то же время, под влиянием препарата нормализовался изначально сниженный уровень CD3+HLA-DR+ лимфоцитов (p<0.001). Эти данные хорошо согласуются с описанным выше восстановлением функции Т-клеток.
Прием Алвитила не оказывал существенного влияния на изначально повышенный уровень NK. Показатели содержания CD16+ лимфоцитов оставались выше, чем в контрольной группе (p<0.05), и сохранялась тенденция к повышению количества CD56+ клеток (p>0.05). Однако мы не отмечали и стимулирующего эффекта препарата, описанного рядом авторов [11]. Этот феномен, вероятно, в данном случае надо рассматривать как позитивный, поскольку уровень NK у ДЧБ детей был изначально повышен, а чрезмерная стимуляция NK может способствовать развитию аутоиммунного компонента.
Назначение Алвитила оказывало выраженное действие на показатели гуморального иммунитета. У ДЧБ детей, принимавших препарат достоверно возрастало содержание В-лимфоцитов как по сравнению с исходным уровнем (p<0.01), так и по сравнению с показателями здоровых детей (p<0.001). У всех детей, принимавших Алвитил, отмечалась стимуляция синтеза IgM (p<0.001). Особо интересный эффект Алвитил оказывал на концентрацию сывороточных иммуноглобулинов. Следует отметить, что уровень IgG у ДЧБ детей был гетерогенным. В 57% случаев этот показатель у них соответствовал таковым у здоровых детей (7,68±0,23 г/л, p>0.05), в 25% - в 3 раза превышал нормативные значения (17,21± 1,80 г/л, p<0.001) и в 18% случаев отмечались низкие значения параметра (5,02 ±0,42 г/л, p<0.05). В тех случаях, когда уровень IgG был снижен или не изменен, Алвитил повышал содержание иммуноглобулина (11,01 ±0,14 г/л, p<0.001 и 12,45 ±0,39 г/л, p<0.001, соответственно). Полученные результаты согласуются с литературными данными о стимуляции некоторыми витаминами гуморального иммунитета [8, 15]. В то же время, у ДЧБ детей с изначально повышенными показателями сывороточного IgG, прием "Алвитила" приводил к значительному снижению показателя (12,18 ±0,27г/л, p<0.001). Эти результаты свидетельствуют об иммуномодулирующем эффекте Алвитила, что может быть обусловлено сбалансированным составом витаминов в препарате.
Алвитил не оказывал заметного влияния на показатели спонтанной и индуцированной бактерицидной активности нейтрофилов (p>0.05, в обоих случаях), но стимулировал экспрессию Fc RIII как по сравнению с исходным, так и контрольным уровнем (p<0.01, в обоих случаях). По-видимому, Алвитил влияет, в основном на кислород-независимые механизмы фагоцитарной защиты и его иммуномодулирующее действие, возможно, в основном связано с витаминами А, С и РР [4, 11].
Вывод
Таким образом, проведенные исследования показали, что прием Алвитила высоко эффективен в реабилитации часто болеющих детей, поскольку позволяет не только скомпенсировать витаминную недостаточность, отмечаемую на фоне частых ОРВИ, но и достичь нормализации ряда иммунологических параметров. В основном Алвитил оказывает влияние на измененные показатели клеточного и гуморального иммунитета.