Автореферат разослан 2008 года
| Вид материала | Автореферат |
СодержаниеВо второй серии эксперимента Список работ, опубликованных по теме диссертации |
- Автореферат разослан 21 мая 2008 года, 603.72kb.
- Автореферат разослан 2008, 441.97kb.
- Автореферат разослан 2008, 287.64kb.
- Автореферат разослан 2008, 369.45kb.
- Автореферат разослан 15 июля 2008, 318.27kb.
- Автореферат разослан февраля 2008, 524.47kb.
- Автореферат разослан 25 сентября 2008, 237.94kb.
- Автореферат разослан марта 2008, 380.31kb.
- Автореферат разослан 18 декабря 2008, 250.07kb.
- Автореферат разослан " " 1996, 264.76kb.
1 2
Во второй серии эксперимента животным вводили альфа-токоферол на фоне нитритной интоксикации.
Для подтверждения специфичности эффектов альфа-токоферола в исследовании была использована группа сравнения, в которой нитритная интоксикация вызывалась на фоне введения растительного масла.
При нитритной интоксикации на фоне введения стерильного растительного масла со стороны эритроцитарной системы наблюдаются трехфазные изменения, сходные с изменениями при изолированном поступлении нитрита натрия в организм.
На третьи сутки эксперимента содержание эритроцитов и концентрация гемоглобина снижаются. Во вторую фазу наблюдается восстановление показателей эритроцитарной системы до исходных значений и к 14-му дню развивается эритроцитоз. На 21-й день опыта содержание эритроцитов и концентрация гемоглобина возвращаются к исходному значению. До 14-го дня наблюдения средний объем эритроцита повышен, а средняя концентрация гемоглобина в эритроците снижена, что можно объяснить усиленным выходом ретикулоцитов, имеющих увеличенный объем, в циркуляцию.
У животных, получающих нитрит натрия и инъекции растительного масла, отмечаются те же изменения кислотной и осмотической резистентности эритроцитов, что и на первом этапе эксперимента.
У крыс при введении нитрита натрия и растительного масла наблюдаются существенные изменения поверхностной цитоархитектоники эритроцитов. С 3-го по 14-й день опыта количества дискоцитов снижается за счет увеличения количества как обратимо деформированных клеток, так и необратимо деформированных форм эритроцитов. На 21-й день показатели поверхностной цитоархитектоники эритроцитов возвращаются к исходным значениям.
У животных, получающих нитрит натрия и растительное масло, наблюдается компенсаторное усиление эритропоэза во все сроки наблюдения. Уже на 3-и сутки эксперимента возрастает количество ретикулоцитов, достигая максимальных значений к 14-му дню.
При введении альфа-токоферола как в дозе 15 мг/кг, так и в дозе 150 мг/кг интактным крысам содержание эритроцитов, гемоглобина, показатель гематокрита достоверно не изменяются весь период наблюдения (табл. 4). Существенных изменений морфометрических индексов не отмечается.
Таблица 4
Изменение показателей эритроцитарного состава крови у крыс
при хронической нитритной интоксикации и введении альфа-токоферола
| Показатели | Группа | Исходное | 3 дня | 7 дней | 14 дней | 21 день |
| Концентрация эритроцитов, Т/л | ТФ 15 | 7,42 ±0,14 | 7,43 ±0,18 | 7,58 ±0,13 | 7,74 ± 0,17 | 7,51 ± 0,18 |
| ТФ 150 | 7,45 ± 0,17 | 7,65 ±0,16 | 7,80 ± 0,14 | 7,65 ± 0,08 | 7,81 ± 0,13 | |
| К | 7,80 ±0,12 | 7,29 ± 0,15* | 7,75 ±0,12# | 8,40 ±0,08*# | 7,77 ±0,16# | |
| НН+ ТФ15 | 7,90 ± 0,16 | 7,60 ±0,11 | 7,73 ±0,09 | 7,57 ±0,13 | 7,98 ±0,12# | |
| НН+ ТФ 150 | 7,55 ± 0,13 | 8,19 ± 0,14* | 7,87 ± 0,14 | 7,66 ± 0,15 | 7,87 ± 0,10 | |
| Концентрация гемоглобина, г/л | ТФ 15 | 137,80 ±2,11 | 133,30 ±2,78 | 136,20 ±2,97 | 137,6 ± 2,55 | 135,90 ±3,03 |
| ТФ 150 | 143,30 ± 3,54 | 136,00 ±3,57 | 141,00 ±3,73 | 140,40 ±3,01 | 140,80 ±3,84 | |
| К | 141,30 ± 2,18 | 135,10 ±1,45* | 141,00 ±1,65# | 149,50 ±1,63*# | 143,30 ±2,32# | |
| НН+ ТФ15 | 144,50 ±1,58 | 142,70 ±1,56 | 141,20 ±1,73 | 142,56 ±1,86 | 143,00 ±3,58 | |
| НН + ТФ 150 | 140,20 ±2,42 | 144,00 ±2,93 | 140,30 ±4,18 | 133,90 ±1,74 | 139,20 ±1,78 |
Условные обозначения здесь и далее:
1-я группа - 0,2% раствор нитрита натрия и внутримышечные инъекции стерилизованного растительного масла 2 раза в неделю – контроль (К).
2-я группа – раствор нитрита натрия (НН) и внутримышечные инъекции альфа-токоферола в дозе 15 мг/кг (ТФ 15) два раза в неделю.
3-я группа – раствор нитрита натрия (НН) и альфа-токоферол 150 мг/кг (ТФ 150) два раза в неделю.
4-я группа – альфа-токоферол в дозе 15 мг/кг (ТФ 15) два раза в неделю.
5-я группа – альфа-токоферол в дозе 150 мг/кг (ТФ 15) два раза в неделю.
Альфа-токоферол в дозе 15 мг/кг при введении на фоне нитритной интоксикации, предотвращает развитие эритропении, содержание эритроцитов, концентрация гемоглобина достоверно не изменяются, морфометрические индексы эритроцитов на уровне исходных цифр (см. табл. 4). В дозе 150 мг/кг альфа-токоферол способствует развитию эритроцитоза на 3-й день, далее количество эритроцитов и гемоглобина возвращается к уровню интактных животных.
Полученные результаты можно объяснить тем, что альфа-токоферол улучшает деформируемость и нормализует активность антиоксидантных ферментов эритроцитов после NO-индуцированного окислительного стресса [Yerer M.B., Avdogan S., 2004], препятствует аккумуляции нитритов и снижает активность NO-синтазы макрофагов [Jiang Q. et al., 2000]. Кроме того, альфа-токоферол тормозит процесс окисления липидов и тем самым противодействует токсическому влиянию гидроперекисей [Shimojo T., Otsuki K., 1981], стабилизирует мембраны путем взаимодействия с фосфолипидами мембран с образованием устойчивых комплексов [Архипенко Ю.В., 1977], вследствие чего этот витамин способен защищать эритроциты, как от спонтанного, так и от индуцированного гемолиза [Gultekin F. et al., 2001; Jaja S.I. et al., 2005].
Альфа-токоферол в дозе 15 мг/кг не вызывает существенных изменений кислотной резистентности, а в дозе 150 мг/кг приводит к повышению этого показателя и смещению кислотной эритрограммы вправо.
При поступлении альфа-токоферола в дозе 15 мг/кг вместе с нитритом натрия кривая кислотного гемолиза во все сроки эксперимента смещается влево, вероятно, в связи со снижением гемолиза старых клеток и уменьшением активности эритропоэза. На 3-й день дифференциальная кривая имеет 1 пик. С 7-го дня на кривых кислотного гемолиза определяется 2 пика. При введении альфа-токоферола в дозе 150 мг/кг с нитритом натрия кривая кислотного гемолиза на 3-и сутки эксперимента мало отличается от исходной, на 7-е сутки имеет два пика. Эти изменения сохраняются и на 14-й день. К 21-му дню кривая кислотного гемолиза не имеет острой вершины, смещена влево. Эти изменения можно также объяснить снижением гемолиза старых эритроцитов.
Альфа-токоферол при введении в дозе 15 мг/кг приводит к повышению времени начала гемолиза со 2-й недели эксперимента, а в дозе 150 мг/кг не вызывает достоверных изменений глицериновой резистентности. Дифференциальные кривые глицеринового гемолиза мало отличаются от исходных данных.
При введении альфа-токоферола в дозе 15 мг/кг при введении на фоне нитритной интоксикации на 21-й день увеличивается время начала гемолиза и время 50%-го гемолиза. Другие показатели глицериновой резистентности достоверно не меняются. Альфа-токоферол в дозе 150 мг/кг при введении с нитритом натрия способствует увеличению времени полного гемолиза.
При введении альфа-токоферола в дозе 15 и 150 мг/кг интактным крысам осмотическая резистентность эритроцитов достоверно не изменяется.
При поступлении альфа-токоферола в дозе 15 мг/кг с нитритом натрия изменения осмотической резистентности имеет те же тенденции, что и при нитритной интоксикации. При введении альфа-токоферола в дозе 150 мг/кг с нитритом натрия показатели резистентности достоверно не изменяются.
При введении альфа-токоферола интактным животным изменений формы эритроцитов не отмечается.
При его поступлении в дозе 15 мг/кг с нитритом натрия выраженность изменений формы эритроцитов меньше, преимущественно за счет обратимо деформированных клеток, в дозе 150 мг/кг поверхностная цитоархитектоника не отличается от исходной во все сроки наблюдения.
При введении нитрита натрия с альфа-токоферолом в дозе 15 мг/кг ретикулоцитоз отмечается во все сроки наблюдения, в дозе 150 мг/кг на 7-й и 21-й день, его выраженность меньше (табл. 5). Содержание эритроидных клеток в красном костном мозге и в селезенке не увеличивается. Введение альфа-токоферола интактным животным способствует увеличению содержания ретикулоцитов без эритроидной гиперплазии кроветворных органов, вероятно, за счет замедления скорости их созревания.
Таблица 5
Изменение эритропоэза у крыс
при хронической нитритной интоксикации и введении альфа-токоферола
| Показатели | Группа | Исходное | 3 дня | 7 дней | 14 дней | 21 день |
| Концентрация ретикулоцитов, ‰ | ТФ 15 | 22,20 ±2,37 | 29,5 ±3,86 | 32,5 ±2,65* | 23,8 ±1,76# | 29,9 ±2,17* |
| ТФ 150 | 16,60 ±0,74 | 22,70 ±2,43* | 29,10 ±2,19* | 22,30 ±2,42 | 25,20 ±1,53* | |
| К | 22,30 ±3,05 | 36,20 ±1,90* | 39,40 ±2,98* | 43,00 ±1,63* | 37,60 ±1,85* | |
| НН+ ТФ15 | 22,30 ±1,46 | 36,80 ±2,06* | 37,60 ±5,08* | 28,89 ±1,56* | 30,33 ±1,89* | |
| НН+ ТФ 150 | 18,50 ±2,14 | 24,50 ±3,04 | 30,50 ±4,31* | 22,00 ±1,62 | 31,40 ±3,38* | |
| Содержание эритроидных клеток в костном мозге, % | ТФ 150 | 17,27 ±1,49 | | 16,70 ±1,13 | | 11,70 ±0,89* |
| Нитрит натрия | 17,27 ±1,49 | 13,07 ±1,36 | 27,79 ±0,83*# | 34,07 ±1,91*# | 27,4±1,07 | |
| НН+ ТФ 150 | 17,27 ±1,49 | | 21,60±1,95 | | 16,70±0,95 | |
| Содержание эритроидных клеток в селезенке, % | ТФ 150 | 15,18 ±0,83 | | 9,20±1,73* | | 11,00±1,22* |
| Нитрит натрия | 15,18 ±0,83 | 16,07 ±1,36 | 27,43± 0,96*# | 44,40 ±2,16*# | 26,9±0,88 | |
| НН+ ТФ 150 | 15,18 ±0,83 | | 13,60±1,17 | | 12,10±0,96* |
Эти изменения могут быть связаны со снижением уровня гемолиза и степени гемической гипоксии. Поступление нитрата натрия и токоферола снижает содержание нитритов и метгемоглобина [Hirneth H., Classen H.G., 1984].
При введении альфа-токоферола с нитритом натрия, а также интактным животным, значительно снижается адгезионная активность макрофагов и показатели завершенного фагоцитоза (табл. 6).
Таблица 6
Изменение показателей клеточных механизмов эритродиереза у крыс
при хронической нитритной интоксикации и введении альфа-токоферола
| Показатели | Группа | Исходное | 3 дня | 7 дней | 14 дней | 21 день |
| Макрофаги, не образующие розетки, % | ТФ 150 | 73,64 ±1,63 | | 81,00±4,06 | | 84,30 ±2,66* |
| Нитрит натрия | 73,64 ±1,63 | 49,73 ±3,62* | 60,92 ±4,07* | 53,00 ±2,50* | 44,13 ±4,15* | |
| НН +ТФ 150 | 73,64 ±1,63 | | 72,50 ±1,98 | | 79,70 ±1,50* | |
| Макрофаги, образующие розетки 1 типа, % | ТФ 150 | 24,54 ±1,75 | | 16,80 ±2,50* | | 14,30 ±2,03* |
| Нитрит натрия | 24,54 ±1,75 | 41,71 ±2,93* | 31,62 ±3,30# | 34,93 ±2,05* | 46,80 ±3,29* | |
| НН +ТФ 150 | 24,54 ±1,75 | | 26,50 ±1,81 | | 19,00 ±1,26* | |
| Макрофаги, образующие розетки 2 типа, % | ТФ 150 | 2,00±0,75 | | 2,20±1,88 | | 1,40±0,89 |
| Нитрит натрия | 2,00±0,75 | 5,07 ±1,51* | 6,23 ±1,17* | 2,29 ±0,61# | 8,07 ±1,42* | |
| НН +ТФ 150 | 2,00±0,75 | | 1,00±0,57 | | 1,30±0,51 | |
| Макрофаги без гемоглобиновых включений, % | ТФ 150 | 74,45 ±1,41 | | 78,50 ±1,94 | | 79,00 ±2,16 |
| Нитрит натрия | 74,45 ±1,41 | 53,47 ±2,96* | 66,46 ±1,64*# | 65,00 ±1,48* | 53,47 ±1,47* | |
| НН +ТФ 150 | 74,45 ±1,41 | | 76,00 ±2,52 | | 78,10 ±1,57 | |
| Макрофаги с фагосомами, % | ТФ 150 | 17,55 ±1,09 | | 12,50 ±1,23 | | 13,30 ±1,53 |
| Нитрит натрия | 17,55 ±1,09 | 26,07 ±2,11* | 20,88 ±1,03*# | 21,00 ±1,04* | 31,53 ±1,05* | |
| НН +ТФ 150 | 17,55 ±1,09 | | 14,40 ±1,64 | | 12,90 ±1,04* | |
| Макрофаги с диффузными гемоглобиновыми включениями, % | ТФ 150 | 8,00±0,60 | | 9,00±1,03 | | 7,70±1,12 |
| Нитрит натрия | 8,00±0,60 | 19,67 ±1,51* | 12,54 ±1,55*# | 14,00 ±1,20* | 14,33 ±0,57* | |
| НН +ТФ 150 | 8,00±0,60 | | 9,60±1,09 | | 9,00±0,95 |
Количество макрофагов, адгезирующих эритроциты к 21-му дню меньше исходного уровня. Одновременно снижается количество макрофагов с фагосомами и гемоглобиновыми включениями. Витамин Е снижает выделение фосфотидилсерина, важного для эритродиереза маркера стареющих эритроцитов, на поверхность эритроцита [Klein А. et al., 2006]. Альфа-токоферол уменьшает цитотоксичность мононуклеаров за счет снижения высвобождения перекиси водорода [Leb L. et al., 1985]. Адгезия макрофагов к эритроцитам значительно снижается, так как процессы перекисного окисления липидов ответственны за образование сайтов на эритроцитарных мембранах для адгезии [Beppu M. et al., 2001]. Для активации этих рецепторов необходимы окислительные процессы.
Таким образом, альфа-токоферол при поступлении на фоне интоксикации нитритом натрия предотвращает фазу анемизации, в больших дозах вызывает эритроцитоз, уменьшает степень нарушений поверхностной цитоархитектоники эритроцитов, качественно меняя направленность ее сдвигов в сторону обратимых изменений формы, снижает активность клеточных механизмов эритродиереза.
Выводы:
- При хронической нитритной интоксикации, вызванной потреблением 0,2% раствора нитрита натрия, отмечаются фазные изменения содержания эритроцитов и концентрации гемоглобина, которые характеризуются снижением этих показателей по равнению с контролем в начале нитритной интоксикации, эритроцитозом на 14-й день эксперимента и возвращением к исходному уровню на 21-ые сутки. Изменяется поверхностная цитоархитектоника и резистентность эритроцитов к действию гемолитических факторов.
- С первой недели нитритной интоксикации проявляется компенсаторная активация эритропоэза, которая в последующие сроки осуществляется за счет расширения плацдарма кроветворения в красном костном мозге и селезенке.
- При хронической нитритной интоксикации активируются клеточные механизмы эритродиереза. Увеличивается количество макрофагов, адгезирующих эритроциты, преимущественно за счет розеток 1-го типа. Одновременно повышается процент макрофагов с фагосомами и диффузными гемоглобиновыми включениями. Индекс адгезионно-фагоцитарной активности макрофагов повышен на 14-й и 21-й день эксперимента, индекс завершенного эритрофагоцитоза увеличен во все сроки наблюдения, максимально на 21-й день.
- Альфа-токоферол, при поступлении на фоне интоксикации нитритом натрия, оказывает защитное действие, предотвращая фазу анемизации; в больших дозах вызывает эритроцитоз, уменьшает степень нарушений поверхностной цитоархитектоники эритроцитов, качественно меняя направленность ее сдвигов в сторону обратимых изменений формы. В кроветворных органах содержание эритроидных клеток достоверно не отличается от контрольных значений.
- Введение альфа-токоферола снижает активность клеточных механизмов эритродиереза. При его введении на фоне нитритной интоксикации, а также интактным животным, значительно снижается адгезионная активность макрофагов. Количество макрофагов, адгезирующих эритроциты, к 21-му дню было меньше контрольного уровня. Одновременно снижается количество макрофагов с фагосомами и гемоглобиновыми включениями.
Список работ, опубликованных по теме диссертации:
- Иванова А.С. Влияние нитрита натрия на эритроцитарную систему крыс // Молодая наука в классическом университете: Тезисы докладов научных конференций. – Иваново, 2002. – С. 38.
- Иванова А.С. Влияние длительной нитритной интоксикации на эритроцитарную систему крыс // Вопросы теоретической и практической медицины: Материалы 68-й республиканской итоговой научно-практической конференции. – Уфа, 2003. – С. 38.
- Иванова А.С. Изменение показателей периферической крови крыс при длительной нитритной интоксикации // Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Межвузовская научная конференция молодых ученых и студентов. – Екатеринбург, 2003. – С. 244 – 245.
- Иванова А.С. Изменение кислотной резистентности эритроцитов крыс при воздействии нитрита натрия // Студенческая медицинская наука - 2003: Материалы межрегиональной студенческой научной конференции. – Воронеж, 2003. – С. 237 – 238.
- Иванова А.С., Пахрова О.А., Назаров С.Б. Состояние эритроцитарной системы белых крыс при длительной нитритной интоксикации // Гигиена и санитария. – 2004. - №1. – С. 58 – 60.
- Иванова А.С., Назаров С.Б. Новый подход к оценке состояния клеточных механизмов эритродиереза: Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии // Томск, 2004. - №3. – С. 136.
- Иванова А.С., Пахрова О.А., Назаров С.Б. Эритродиерез у крыс при нитритной интоксикации различной длительности // Патофизиология и экспериментальная терапия. – 2004. - №4. – С. 25 – 26.
- Иванова А.С., Назаров С.Б. Влияние альфа-токоферола на показатели периферической крови крыс при длительной нитритной интоксикации // Актуальные проблемы адаптации организма в норме и патологии: Материалы международной научной конференции. – Ярославль, 2005. – С. 157 – 159.
- Иванова А.С., Назаров С.Б. Характеристика защитного действия альфа-токоферола по показателям эритроцитарной системы при длительной нитритной интоксикации у крыс // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2004. - №4. – С. 38 – 40.
- Мясоедова Е.Е., Иванова А.С., Назаров С.Б. Функциональное состояние эритрона крыс при острой и хронической нитритной интоксикации // Российский физиологич. журнал им. Сеченова. – 2004. - №8. – С. 141 – 142.
- Назаров С.Б., Голубева Е.К., Мясоедова Е.Е., Иванова А.С., Пророкова М.В. Оксид азота как один из факторов регуляции клеточного эритродиереза // Научные труды I съезда физиологов СНГ. – Сочи, 2005. – С. 92.
- Иванова А.С., Пахрова О.А, Назаров С.Б. Изменение функционального состояния эритрона взрослых крыс при воздействии нитрита натрия и альфа-токоферола // Природа и человек. Антропогенное воздействие на окружающую среду: Материалы IV научно-практической конференции. - Иваново, 2005. – С. 92 – 93.
- Иванова А.С., Пахрова О.А, Назаров С.Б. Состояние эритрофагоцитоза у крыс при длительном поступлении в организм нитрита натрия и альфа-токоферола // Гигиена и санитария. – 2006. - №6. – С. 70 – 72.
- Голубева Е.К., Иванова А.С., Мясоедова Е.Е., Пахрова О.А., Назаров С.Б. Влияние оксида азота на активность клеточного эритродиереза // Тезисы докладов XX Съезда физиологического общества им. И.П. Павлова. – Москва, 2007. – С. 296.