Определение примесей в таблетированной форме фармацевтических препаратов
Статья - Химия
Другие статьи по предмету Химия
Определение примесей в таблетках диазепама и феназепама методом двухступенчатой капиллярной газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
Определение примесей в фармацевтических препаратах является важной и актуальной задачей, так как состав примесей определяет качество продукта и позволяет судить о производителе продукции и ее фальсификации, которая принимает все большие масштабы во всех странах мира. Необходимо также отметить, что в ряде случаев примеси, присутствующие в препарате в следовых концентрациях, по своей токсичности намного превосходят токсичность основного компонента.
Одно из ведущих мест в анализе фармацевтических препаратов на содержание органических примесей (как правило, заданных) занимает высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). При обнаружении и определении неизвестных примесей возможности этого метода весьма ограничены. УФ-детектор с диодной матрицей, как наиболее селективный, часто используется при определении заданных примесей в фармацевтических препаратах, однако для идентификации неизвестных примесей в фармацевтических препаратах данный детектор использован не был. Принципиально диодно-матричный детектор может быть использован для этой цели путем сравнения спектра со спектром библиотеки, однако УФ-спектры не так характеристичны, как масс-спектры, и после идентификации соединения по УФ-спектру ее необходимо подкрепить применением таких методов как ГХ/МС или ВЭЖХ/МС. Сочетание ВЭЖХ с масс- спектрометрией (МС) используют в большинстве случаев для подтверждения известных (заданных) примесей, присутствующих в фармацевтической продукции. Возможности такого сочетания для идентификации неизвестных примесей весьма ограничены; это обусловлено возможностью потери информации о ряде компонентов смеси из-за различных ион-молекулярных реакций примесей в элюенте, а также регистрацией только молекулярных масс компонентов смесей (когда это возможно). В ряде случаев для идентификации примесей используют выделение соответствующих фракций, их концентрирование с заменой растворителя и последующую регистрацию спектров ядерного магнитного резонанса (ЯМР) (если это возможно - в связи с низкой чувствительностью метода ЯМР). Помимо ВЭЖХ, для контроля содержания заданных примесей в фармацевтической продукции используют высокоэффективную тонкослойную хроматографию и реже газовую (ГХ), сверхкритическую флюидную хроматографию и капиллярный электрофорез. Каждый из этих методов имеет определенные преимущества перед ВЭЖХ, однако их ограничениями являются селективность, эффективность, емкость колонки и чувствительность детектора.
Для большинства термостабильных летучих и среднелетучих соединений идентификация примесей наиболее легко и эффективно обеспечивается использованием сочетания капиллярной газовой хроматографии с масс-спектрометрией (ГХ/МС). Одним из возможных методов, позволяющих одновременно снизить предел обнаружения примесей и улучшить чувствительность, эффективность и селективность анализа, является метод двухступенчатой off-line капиллярной газовой хроматографии (КГХ) в сочетании с масс-спектрометрией.
Известно, что бензодиазепины, в том числе диазепам и феназепам, удовлетворяют требованиям метода ГХ/МС по своей летучести и термостабильности. В частности, их метаболизм и фармакокинетика были успешно изучены методами ГХ и ГХ/МС.
В связи с этим целью настоящей работы являлось изучение возможности определения примесей в таблетированной форме рассматриваемых фармацевтических препаратов с использованием двухступенчатой КГХ в сочетании с масс-спектрометрическим детектированием в режиме off-line.
Экспериментальная часть
В качестве объектов исследования были выбраны два фармацевтических препарата в таблетированной форме, активными веществами которых являлись диазепам (7-хлор-2,3-дигидро-1-метил-5-фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он) и феназепам (7-бром-5-(орто- хлорфенил)-2,3-дигидро-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он).
Для приготовления рабочего раствора диазепама одну таблетку (с содержанием активного компонента 5 мг) растирали в порошок в ступке. Порошок растворяли в 6 мл ацетонитрила, при растворении использовали активацию ультразвуковым полем в течение 30 мин. Затем раствор центрифугировали 15 мин со скоростью 5000 об/мин. Жидкость над осадком сливали и для получения более концентрированного раствора 2,0 мл полученного раствора упаривали в токе азота при комнатной температуре до 200 мкл.
Для приготовления рабочего раствора феназепама пять таблеток (с содержанием активного компонента 0,5 мг) растирали в порошок в ступке. Далее феназепам извлекали 6 мл ацетонитрила по той же методике, которая описана для извлечения диазепама. Для холостых опытов 2,0 мл растворителя - ацетонитрила - упаривали до 200 мкл.
Первую ступень двухступенчатой КГХ в режиме off-line с концентрированием примесей осуществляли с использованием газового хроматографа "DANI 6500" с пламенно-ионизационным детектором (ПИД). Разделение проводили на капиллярной кварцевой колонке 0,5 м х 0,32 мм х 1 мкм с неподвижной фазой RTX-5 фирмы Restec (США). Режим программирования температуры колонки: 50 С (3 мин) > 30/мин > 250 С (6 мин). Температура испарителя хроматографа составляла 250 С, температура ПИД - 250 С. Колонку к детектору и инжектору присоединяли без поддува и сброса потока. В качестве газа-носителя использовали водород со скоростью потока 5 мл/мин. Для сбора и обработки хроматографических