Определение примесей в таблетированной форме фармацевтических препаратов
Статья - Химия
Другие статьи по предмету Химия
данных использовали программное обеспечение "Chrom - Card" для Windows 3.1 Server Ver. 1.1.
Концентрирование примесей осуществляли на сорбционном картридже, подключенном к выходу капиллярной колонки (см. рисунок).
Картридж представлял собой металлическую трубку длиной 4 см и внутренним диаметром 3 мм, наполненную тенаксом (длина слоя 1,6 см) и хромосорбом W с 15 % SE-30 (длина слоя 1,6 см). Зоны сорбентов внутри трубки отделялись друг от друга кварцевой ватой. Улавливание веществ проводили при потоке газа-носителя, направленном от слоя хромосорба W с 15 % SE-30 к слою тенакса.
Для концентрирования примесей на первой ступени двухступенчатой КГХ в режиме off-line использовали систему, представленную на рисунке.
Схема установки для двухступенчатой off-line КГХ: ( 1, 10 - вентиль открыт/закрыт; 2 - кран тонкой регулировки; 3 - манометр; 4 -инжектор хроматографа; 5 - ГХ колонка; 6 - термостат ГХ; 7 - тройник; 8 - ПИД; 9 - сорбционный катридж).
На конце разделительной колонки был установлен тройник (7), позволяющий направлять поток газа-носителя на сорбционный картридж (9) и частично ПИД (при открытом вентиле 10) или полностью через ПИД (8) (при закрытом вентиле 10). Примеси на сорбционном картридже концентрировали по следующей схеме. Отбирали 5 мкл рабочего раствора и вводили его непосредственно в инжектор ГХ, при этом вентиль 10 был открыт. Для сброса основной части активного компонента (диазепама или феназепама) вентиль 10 закрывали после начала выхода пика основного компонента, а после окончания его выхода открывали (с 7,5 по 12,4 мин при анализе раствора диазепама и с 8,4 по 12,4 мин при анализе раствора феназепама). Эту операцию повторяли два раза. Начало и конец выхода пика основного компонента определяли в предварительном опыте.
Для определения сконцентрированных примесей на второй ступени использовали систему ГХ/МС (газовый хроматограф фирмы "Varian" (США) модели 3400 с масс-спектрометрическим детектором "Incos 50" фирмы "Finnigan МАТ" (США) в режиме ионизации электронным ударом). Для перевода адсорбированных соединений в капиллярную колонку ГХ картридж с помощью иглы соединяли с испарителем хроматографа и осуществляли термодесорбцию, нагревая картридж потоком горячего воздуха (250 С), при этом поток газа-носителя пропускали через картридж в направлении, обратном направлению потока при улавливании.
Термодесорбированные примеси разделяли на капиллярной кварцевой колонке 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм с неподвижной фазой CPSil 24 СВ. Режим программирования температуры колонки: 50 С (10 мин) > 10/мин > 290 С (20 мин). Температура испарителя хроматографа составляла 270 С. Пробу вводили в режиме без деления потока. В качестве газа-носителя использовали гелий со скоростью потока 1,5 мл/мин. Температура переходной линии составляла 260 С, температура источника ионов - 180 С, энергия электронов - 70 эВ, диапазон сканируемых масс от 50 до 500 а.е.м., скорость сканирования - 2 скан/с.
До определения примесей в исследуемых образцах методом двухступенчатой off-line КГХ/МС сначала регистрировали примеси без концентрирования, вводя пробу (1 мкл) рабочего раствора непосредственно в инжектор хроматомасс-спектрометра. Примеси определяли в условиях, описанных для второй ступени. Предварительно провели холостой опыт, проанализировав 1 мкл ацетонитрила, упаренного в 10 раз, в тех же условиях. При обработке хроматомасс-спектрометрических данных учитывали результаты холостого опыта. Холостым опытом при определении примесей методом двухступенчатой off-line КГХ/МС являлся предварительно проведенный анализ ацетонитрила, упаренного в 10 раз, в условиях двухступенчатой offline КГХ/МС.
Для обработки хроматомасс-спектрометрических данных использовали программное обеспечение GCQ версии 2.2. Неизвестные примеси идентифицировали сравнением масс-спектра неизвестного соединения с базой данных NIST (National Institute of Standards and Technology, USA). Отнесение спектра к определенной структуре считали достоверным, если значения коэффициентов сходимости при прямом и обратном библиотечном поиске были больше 700.
Содержание примесей оценивали с использованием метода внешнего стандарта - раствора нафталина-d8 с концентрацией 1 10 -8 г/мкл. Проводили 6 параллельных опытов, относительное стандартное отклонение при определении примесей составило не более 0,25.
Результаты и их обсуждение
Данные по определению примесей в диазепаме и феназепаме методом хроматомасс-спектрометрии представлены, соответственно, в табл. 1 и 2.
Таблица - Примеси, определенные в препарате диазепама при прямом вводе 1 мкл раствора препарата в хроматомасс-спектрометр, и оценка их содержания в таблетке (n = 6; Р = 0,95; Sr ?0,25)
tRМасс-спектр m/z (lотн)*НазваниеФормулаМолекулярная масса, г/моль (Mr)Оценка содержания, ,11154(100), 153(39), 152(28), 151(10), 76(30), 63(12)бифенилС12Н101540,00321,25206(58), 205(100), 151(11), 121(20), 76(30), 57(9)1-фенил-фталазинС14H10N22060,00422,47241(40), 239(93), 205(100), 110(28), 75(53)неизвестная примесь--0,06
* - здесь и далее масс-спектры приведены в следующей форме: молекулярный ион (если он наблюдается), пять наиболее интенсивных ионов в спектре в порядке убывания значений массовых чисел ионов (для изотопных галогенсодержащих ионов приведены пики только 35Cl и 79Br-содержащих ионов)
Таблица - Примеси, определенные в препарате феназепама при прямом вводе 1 мкл раствора препарата в хроматомасс-спектрометр, и оценка их содержания в таблетке (n = 6; Р = 0,95; Sr ?0,25)
tRМасс-спектр m/z (lотн)НазваниеФормулаМолекулярная масса, г/моль (Mr)Оценка содержания, ,13208(31), 192(24), 104(22), 92(100), 91(62)неи