Вакцинное производство при лептоспирозе
Курсовой проект - Сельское хозяйство
Другие курсовые по предмету Сельское хозяйство
температуре продукта от минус 40 до минус 200 С. Затем осуществляют быстрое поднятие температуры продукта до +240 С за 10-12 часов.
Далее досушивают биопрепарат при его конечной температуре 24-260 С в течение 22-24 часов.
На стадии десорбции происходит понижение температуры конденсата до начальной (минус 60-650 С) и давления в сублиматоре до 4-6 Па. Установление указанных параметров указывает на окончание процесса сушки. После этого камеру установки заполняют сухим очищенным азотом. Вакцину переносят в бокс, флаконы укупоривают стерильными пробками УЛ-1 и обкатывают алюминиевыми колпачками.
Контроль поливалентной вакцины ВГНКИ против лептоспироза животных
Контроль биопрепарата проводят путем определения следующих показателей:
внешнего вида, наличия механических включений;
стерильности;
безвредности;
активности;
концентрации водородных ионов (рН).
Определение внешнего вида, наличия механических включений. Для определения внешнего вида, наличия механических включений, плесени, неразбивающихся конгломератов все флаконы с вакциной встряхивают, просматривают в проходящем свете. Одновременно проверяют правильность маркировки.
Флаконы с вакциной должны быть без трещин, плотно укупорены, содержать прозрачную жидкость с серо-белым обильным осадком, без посторонних механических включений.
Определение стерильности. Для проведения испытания на стерильность используют 5 флаконов с вакциной. Посев проводят из каждого флакона в объеме 0,2 см3 в пробирки с МПА, МПБ, средой Китта-Тароцци и Сабуро и по 2 см3 во флаконы с МПА, МПБ и средой Китта-Тароцци. Посевы производят в 2 пробирки и 2 флакона с каждой средой из каждого флакона вакцины. Через 2 суток из жидких питательных сред проводят пересев в указанном объеме в 2 пробирки с МПА, МПБ и средой Китта-Тароцци. Посевы на среде Сабуро выдерживают при 20-220 С, а на остальных средах при температуре 370 С. Первичные посевы выдерживают в течение 10, а вторичные - 8 суток.
В посевах на питательных средах рост микрофлоры должен отсутствовать.
Определение безвредности. Для проведения испытания используют 5 флаконов выборки с вакциной. Из каждого флакона отбирается стерильной пипеткой по 10 см3 вакцины в стерильный флакон. Смесь вакцины встряхивают м полученную общую пробу применяют для испытания.
Для проверки на безвредность вакцину вводят внутрибрюшинно 5 белым мышам массой 16-18 г в дозе 0,3 см3 и подкожно 3 морским свинкам массой 300-400 г в дозе 3,0 см3.
Вакцину считают безвредной, если все иммунизированные животные остаются клинически здоровыми и живыми в течение 10 суток наблюдения.
Определение активности. Активность вакцины проверяют на 5 кроликах массой 3-3,5 кг. Каждому кролику вакцину вводят с соблюдением правил асептики в ушную вену однократно в дозе 0,6-0,75 см3. Через 25 суток после введения вакцины у кроликов из ушной вены берут по 5 см3 крови, получают сыворотку и исследуют ее в реакции микроагглютинации (РМА) со всеми штаммами лептоспир, входящих в состав биопрепарата.
Каждую пробу сыворотки разводят физиологическим раствором от 1: 25 до 1: 1600. К каждому разведению сыворотки добавляют равный объем антигена (культуру лептоспир). Культуры должны быть 5-10 суточного роста с накоплением 60-100 подвижных лептоспир в поле зрения микроскопа.
Контролем реакции служит смесь антигенов с физиологическим раствором по 0,1 см3, в которой лептоспиры должны оставаться подвижными, без видимых изменений морфологии, признаков агглютинации и лизиса.
Пластины, содержащие смесь сывороток с антигеном, помещают в термостат и выдерживают в течение одного часа при температуре 30-370С.
Реакцию учитывают под микроскопом с конденсором темного поля при увеличении 20 х 10-15 и оценивают в крестах по четырехбальной системе.
Вакцину считают активной, если не менее, чем у четырех из пяти иммунизированных кроликов титр антител в сыворотке крови к лептоспирам серогрупп Гриппотифоза, Помана, Тарассови будет не ниже 1: 400, к лептоспирам серогруппы Харджи - не ниже 1: 100. Титром считают наибольшее разведение сыворотки, в котором реакция оценена не менее чем на два креста.
Определение концентрации водородных ионов (рН). Концентрацию водородных ионов в вакцине определяют потенциометрическим методом согласно инструкции приложенной к прибору.
рН вакцины должно быть в пределах 6,8-7,6.
Контроль сухой вакцины против лептоспироза животных
Контроль сухой вакцины против лептоспироза осуществляют аналогично поливалентной вакцине ВГНКИ против лептоспироза. Оба биопрепарата вводят животным в равном количестве микробных клеток. Для этого сухую вакцину растворяют специальным растворителем и инъецируют лабораторным животным в дозах равным 1/10 объема поливалентной вакцины.
Список использованной литературы
1. Вакцина поливалентная ВГНКИ против лептоспироза животных // ТУ РБ 00028493.134 - 99. - Витебск, 1999. - 14 с.
. Вакцина против лептоспироза животных концентрированная // ТУ РБ 9384 - 046 - 00494185 - 94. - Витебск, 1994. - 11 с.
. Вакцина против лептоспироза животных лиофилизированная // ТУ РБ 9384 - 108 - 0049 4185 - 96. - Витебск, 1996. - 12 с.
. Промышленный регламент производства поливалентной ВГНКИ вакцины против лептоспироза животных. - Витебск, 1999. - 43 с.
. Ситьков В.И. Совершенствование культивирования лептоспир реакторным методом // Тезисы докладов науч. - произв. конф. - Курск, 1996. - С.281-282.
. Ситьков В.И. Технология промышленного производства биопрепаратов // Ветеринар