Вакцинное производство при лептоспирозе
Курсовой проект - Сельское хозяйство
Другие курсовые по предмету Сельское хозяйство
лоры, выбраковывают.
Все бутыли с чистой культурой и накоплением в поле зрения микроскопа не менее 60 лептоспир (75 млн. м. к. /см3) используют для составления серии вакцины.
Процесс культивирования лептоспир в стеклянных бутылях непроизводителен и трудоемок. Поэтому предлагается выращивание лептоспир в ферментере объемом от 0,05 до 0,4 м3.
Установлено, что для культивирования лептоспир в ферментере необходимо использовать посевные культуры лептоспир в экспоненцальной фазе роста.
Управляемое периодическое культивирование лептоспир в ферментере обеспечивает физиологически более активное выращивание культур, увеличение максимальной скорости роста, сокращение лаг-фазы и времени генерации по сравнению с традиционной технологией производства, интенсификацию процесса за счет уменьшения продолжительности выращивания лептоспир почти в 2 раза (с 6-8 до 4 суток). При этом наблюдается более высокое накопление живых клеток.
Концентрирование бактериальной массы
Концентрирование культур лептоспир успешно проводят на установках УПВ-6 и других подобных ультрафильтрационных установках, принцип работы которых основан на отделении микробных клеток и высокомолекулярных веществ от водной фазы.
Культуру концентрируют до 1,5-2 млрд. м. к. /см3. Концентрацию лептоспир определяют путем подсчета в камере Петрова-Хауссера.
Смешивание производственных культур лептоспир
Вакцину изготавливают в двух вариантах:
вакцина первого варианта состоит из штаммов лептоспир серогрупп Помона, Тарассови, Иктерогеморрагия и предназначена для профилактики лептоспироза у свиней, собак и лошадей;
вакцина второго варианта состоит из штаммов лептоспир серогрупп Помона, Тарассови, Гриппотифоза и Харджио и предназначена для профилактики заболевания у крупного и мелкого рогатого скота, лошадей.
Концентрированные культуры разводят фосфатным буфером до концентрации лептоспир 100-120 млн. м. к. /см3.
Культуры производственных штаммов отбирают в равных соотношениях и смешивают.
Смешивание культур осуществляют в стерильном реакторе.
Консервация культур
Для консервации культур лептоспир используют формалин, с содержанием не менее 36% формальдегида. Формалин предварительно разводят дистиллированной водой в соотношении 1: 1 и добавляют при постоянно работающей мешалке до конечной концентрации в среде 0,25%.
Консервированную культуру выдерживают при температуре 27-280С в течение 18 часов.
Составление серии вакцины
К инактивированной смеси культур лептоспир, помещенной в реактор, добавляют простерилизованный 6% -ный гель гидрата окиси алюминия в количестве 30% к объему вакцины, т.е. на 700 см3 культуры берут 300 см3 геля.
В течение 15 минут смесь перемешивают мешалкой, берут пробу вакцины из реактора и проверяют на стерильность путем посева на питательные среды.
Расфасовка и маркировка вакцины
Вакцину, признанную при цеховом контроле стерильной и содержащей достаточную концентрацию лептоспир, расфасовывают при постоянной работе механической мешалки в стерильные флаконы по 100 или 200 см3.
Флаконы плотно закрывают резиновыми пробками, обкатывают алюминиевыми колпачками и этикетируют.
На этикетке флакона с вакциной должны быть следующие обозначения:
наименование предприятия-изготовителя и его товарный знак;
название биопрепарата;
количество вакцины во флакане (см3);
перечень серогрупп лептоспир, входящих в вакцину;
номера серии и контроля;
дата изготовления (месяц и год);
дозы для животных;
срок годности;
условия хранения;
обозначение технических условий.
Приготовление сухой вакцины
Процессы приготовления питательных сред, культивирования, концентрирования, консервации аналогичны как и при изготовлении поливалентной вакцины ВГНКИ против лептоспироза животных.
Культуру лептоспир, сгущенную до получения концентрации биомассы 1,8-2 млрд. м. к. / см3 и инактивированную в реакторе, смешивают с защитной средой в соотношении 1:
. Защитную среду используют следующего состава (об. %):
сахароза - 20;
желатин - 4;
пептон - 1;
фосфатный буфер - 75.
К смеси культуры и защитной среды добавляют простерилизованный 6% -ный гидрат окиси алюминия в количестве 20-25% к объему вакцины.
После добавления к сгущенной бактериальной массе среды высушивания и гидрата окиси алюминия получают концентрацию лептоспир в среднем 750 мл. м. к. / см3. Такое их количество содержится в 10 см3 поливалентной вакцины ВГНКИ против лептоспироза животных.
Приготовленную вакцину расфасовывают по 10 см3 во флаконы емкостью 20 см3. Кассеты с вакциной помещают на предварительно охлажденную этажерку и замораживают в морозильном столе НС 700/50 до конечной температуре в продукте минус 45-500 С в течение 12-14 часов. Далее вакцину перегружают в сублиматор установки LZ-45 или другие модели с предварительно охлажденным до минус 60-650 С конденсером (испарителем). После подключения системы контроля за параметрами полок и продукта, сублиматор герметизируют и камеру вакуумируют до предельного остаточного давления 4-6 Па.
Через 2-3 часа после вакуумирования включают подогрев полок (минимальный режим подогрева). В течение первых 3 часов сублимации температура понижается на 3-50 С за счет самоохлаждения при низком давлении.
В течение 30-35 часов проводят сублимацию влаги при