Вакцинное производство при лептоспирозе
Курсовой проект - Сельское хозяйство
Другие курсовые по предмету Сельское хозяйство
ирки с производственной питательной средой.
При наличии хорошего роста культуры пересевают из пробирок во флаконы с питательной средой, содержащей 80-100 см3 среды во флаконах вместимостью 200 см3 и по 200-250 см3 среды во флаконы вместимостью 500 см3 соответственно по 8-10 и 20-25 см3 культуры. Одновременно для контроля чистоты высевают по 0,5 см3 культуры в пробирки с МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и средой Сабуро.
Посевы для контроля на чистоту инкубируют в течение 10 суток при температуре 37-380С, а со средой Сабуро - при температуре 20-250С.
Питательные среды
Лептоспиры были выделены в чистой культуре значительно позже, чем многие другие патогенные микроорганизмы. Это связано с их повышенной требовательностью к составу питательной среды. Первые культуры были выращены на сыворотке крови кролика, в последующих работах использовали разведенную сыворотку. Простейшая сывороточная среда представляет собой смесь простерилизованной воды с асептически полученной сывороткой крови кролика или овцы в разных количествах.
Известно значительное количество сывороточных сред различного состава. Простейшей средой является среда Уленгута. Наиболее известные среды - это среда Фервоорт-Вольфа в модификации Тарассова (1937), среда Кортгофа (1932), полужидкая среда Флетчера (1928). Каждая из этих сред содержит 5-10% сыворотки крови кролика или барана, фосфатный буфер или дистиллированную воду, витамины группы В и некоторые другие добавки.
Сывороточные среды используют для поддержания производственных штаммов лептоспир и получения матровых и производственных расплодок.
Работать с сывороточными средами в производственных условиях весьма сложно. Для этого необходимо содержать стадо овец-доноров, не имеющих антител к лептоспирам, получать в асептических условиях и стерилизовать сыворотку крови фильтрованием. При соблюдении всех необходимых условий производственные штаммы в этих средах через 4-7 суток вырастают до концентрации 80-100 млн/см3 лептоспир.
Наряду с сывороточными широкое применение в биологической промышленности получили полусинтетические и синтетические белковые и безбелковые питательные среды.
лептоспироз вакцина сельскохозяйственное животное
Накопление лептоспир на этих средах значительно выше, чем на сывороточных средах и составляет от 1 до 5 млрд/см3 микробных тел.
Наиболее широко используются следующие среды: синтетическая безбелковая среда Шенберга, синтетическая безбелковая среда Торнея (1974), твин (полисорбат) - альбуминовая среда Элленгаузена в модификации Джонсона (1967), твин (полисорбат) - альбуминовая среда Рассела (1986), среда Элленгаузена (1976) и др.
Полусинтетические среды, так же как и сывороточные, имеют сходный состав. Они содержат фосфатный буфер, растворы неорганических солей, витамины В1 и В12, жирные кислоты и бычий альбумин. Мы попытались воспроизвести среды по известным прописям, используя отечественные компоненты, и сделать их пригодными для промышленного культивирования лептоспир. Наиболее доступным источником жирных кислот для лептоспир, на наш взгляд, служат водорастворимые липиды, из которых полисорбаты являются предпочтительными. К таким полисорбатам относятся твины: 20, 40, 60 и 80.
Глицерин в концентрации от 100 до 400 мг/дм3 не заменял жирные кислоты, но повышал выход бактериальной массы.
В качестве источника азота оказалось возможным использовать пептон 0,15-0,20 г/дм3, гидролизат казеина 0,5-1,5 г/дм3, аспарагин 0,25-0,5 г/дм3. В присутствии аспарагина растут все штаммы лептоспир.
Лептоспиры, несмотря на свою требовательность к питательным средам, метаболизируют также в качестве источника азота хлорид аммония или нитрит аммония (0,2-0,3 г/дм3).
Твин-альбуминовая среда, применяемая для производственных целей в биологической промышленности, имеет следующий состав:
. Готовят исходные растворы каждого компонента (из расчета г/100 см3 дистиллированной воды): NH4Cl - 25,0; ZnO4 x 7H2O - 0,4; Mg Cl2 x 8 H2O - 1,5; CaCl2 x H2O - 1,5; FeSO4 x 7 H2O - 0,5; молочнокислый натрий - 10,0; твин-80 - 10,0; В1 - 0,5 и В12 - 0,02.
. Раствор бычьего сывороточного альбумина (БСА): БСА фракция У - 10,0; дистиллированная вода - 50,0; CaCl2 - 1,0; VgCl2 и ZnSO4 по 1 см3 исходного раствора; FeSO4 - 10,0 см3 свежеприготовленного исходного раствора; В12 - 12 см3; твин-80 - 1,25 см3. Дистиллированную воду добавляют до 100 см3, доводят рН до 7,4 и стерилизуют фильтрованием.
. Основная среда (на 996 см3 дистиллированной воды): NaHPO4 - 1,0; KH2PO4 - 0,3; NaCl - 1,0; NH4Cl - 1,0; тиамин - 1,0; молочнокислый натрий - 1,0; глицерин - 1,0. Доводят рН до 7,4, стерилизуют при 1210С в течение 20 минут
. Полная твин-80-альбуминовая среда: основная среда - 9 объемов и раствор БСА - 1 объем. Среду стерилизуют фильтрацией.
Твин-альбуминовая среда Расселя при использовании чистых и нетоксичных ингредиентов обеспечивает накопление лептоспир от 300 до 500 млн/см3 микробных клеток. Однако, при культивировании на этой среде в течение длительного времени лептоспиры утрачивают антигенную и иммуногенную активность, хотя и сохраняют способность к активному размножению. Данная среда пригодна только для первичной расплодки при условии введения в ее состав до 0,05% сыворотки барана. Для вторичной расплодки эта среда уже непригодна из-за резкого снижения антигенной активности выращенных на ней лептоспир.
Бытует мнение, что сывороточная среда, используемая в производстве вакцины, не отвечает требованиям современного индустриального производства, так как не обеспечивает стабильного роста всех производственных штаммов и высокого накопления бактериальных