Состояние естественной резистентности и иммунологической реактивности у новорожденных телят при колибактериозе
Информация - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие материалы по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
?устка и сыворотку отделяли в течение 6 ч. Пробы сыворотки крови, молозива и молока хранили при -20 С.
2.2.8.1. Серологический тест. Для разрушения комплементной активности сыворотку инактивировали при 56 С в течение 30 мин. Все сыворотки в том числе молозивные и молочные, абсорбировали с эритроцитами барана, исключая какие-либо антитела к эритроцитам. Агглютинирующие антитела определяли по методу Е. Neter (1957), за исключением того, что эритроциты барана были утилизированы и был приготовлен антиген высушенный ацетоном.
Антиглобулиновый тест применяли для определения неагглютинирующих антител [E. Neter, 1957], применяя антиглобулиновую (бычью) сыворотку. Все титрации проводили в двукратном разведении ранг серии от 2-2 до 2-11, применяя 0,1 мл разведенной сыворотки и 0,1 мл 2 % суспензии антигена с эритроцитами барана, которые были промыты 3 раза после антигенной абсорбции.
Агглютинационный тест учитывали после 90-120 минутной инкубации при комнатной температуре.
Антиглобулиновый тест определяли после 1 ч инкубации в термостате при 37 С и 12 ч экспозиции в холодильнике при 4 С.
Предельное сывороточное разведение, которое имело хорошо выраженную агглютинацию, учитывали как титр этой сыворотки. Чувствительность антител к 2-меркаптоэтанолу определяли инкубацией сыворотки в 0,1М растворе CH2SH-CH2OH при 37 С в течение 30 мин. Резистентность к этой обработке была взята как показание, что антитела не являются макроглобулинами.
2.2.8.2. Абсорбционный тест. Определение специфичности антител абсорбционным методом было проведено с сывороткой молозива и крови телят. Сывороточные образцы получали от телят через 12-24 ч после кормления молозивом и были разделены по уровню антител против трех антигенов. Сыворотку молозива и сыворотку крови телят абсорбировали с каждым из трех серотипов у Е. coli . Три серотипа Е. coli инкубировали в колбе-матраце на МПА.
Микроорганизмы смывали из агара барбиталовым (вероналовым) буфером и центрифугировали при 12000 об/мин в течение 30 мин.
Затем бактерии прибавляли к сыворотке крови телят и молозивной сыворотке из расчета 21011 бактерий на 1 мл. Абсорбцию проводили при 37 С в течение 60 мин и суспензию центрифугировали при 12000 об/мин 30 мин. Супернатант сыворотки телят и молозивной сыворотки удаляли из массы клеток, а осадок хранили при -20 С до тестирования.
2.2.8.3. Уровень антител против К-антигенов в сыворотках молозива и молока. Средний титр антител в молозивной сыворотке против К антигенов из 3 штаммов Е. coli представлен в табл. 2.19. Агглютинирующиеся антитела выявляются менее часто, чем антиглобулиновые антитела в тестированных образцах молозива. Положительный тест результат установлен соответственно в 53,83 % (антиген О78:К80) и 88,24 % (антиген О137:К79) случаев. Средний титр антител в аналогичных условиях равнялся 4,630,73 и 6,870,56.
Таблица 2.19.
Уровень колостральных антител против К-антигенов Е. coli в сыворотке молозива коров
АнтигенТестКоличество пробОбразцы с положительным результатом, %Средний титрО78:К80Агглютинационный1553,334,630,73Антиглобулиновый1580,005,920,67О119:К69Агглютинационный1471,435,60,70Антиглобулиновый1392,316,420,67О137:К79Агглютинационный1675,006,250,69Антиглобулиновый1788,246,870,56
Из 69 исследованных проб сывороток молозива агглютининовым и антиглобулиновым тестами 9 проб имели антитела, обнаруживаемые только антиглобулиновым методом. Средний титр антител был существенно выше при тестировании антиглобулиновым методом по сравнению с агглютинационным, тем не менее, в 4 образцах получены совпадающие результаты, а в одном случае титр агглютининов был выше на одно разведение. Средний титр был вычислен только из тест положительных образцов. Высокий титр антител был установлен агглютинационным и антиглобулиновым методами против К антигена серотипа О137:К79 (6,250,69 и 6,870,56).
Результаты исследования образцов молока, полученного от коров на различных стадиях лактации, показаны в табл. 2.20. Антитела против Е. coli К-антигена были обнаружены в молоке агглютинационным и антиглобулиновым методами, но частота и уровень активности антител были намного меньшими, чем в молозиве.
Таблица 2.20
Уровень антител против К-антигенов Е. coli в сыворотке молока коров
АнтигенТестКоличество пробОбразцы с положительным результатом, %Средний титрО78:К80Агглютинационный1521,433,330,58Антиглобулиновый1542,873,170,41О119:К69Агглютинационный14(3) 23,082,670,58Антиглобулиновый13(8) 66,673,630,75О137:К79Агглютинационный16(6) 46,153,170,41Антиглобулиновый17(11) 84,624,360,92
Двенадцать из 37 проб (тест положительных) сывороток молока имели антитела против 3 тестированных антигенов. Причем 12 проб были тест положительными при исследовании как агглютинационным, так и антиглобулиновым тестами, 27 тест положительных проб выявляли только антиглобулиновым методом. Из 14 проб сывороток молока выявляли антитела против К антигена Е. coli штамм О78:К80 в трех совпадающих пробах агглютинационным и антиглобулиновым методом. Антитела к К антигену Е. coli штамм О119:К69 выявлены тестированными методами из 13 проб в 3 случаях и дополнительно в 5 случаях только антиглобулиновым методом. Антитела к К антигену Е. coli штамм О137:К79 выявляли в 6 совпадающих случаях обеими методами и дополнительно в 5 пробах только антиглобулиновым методом.
2.2.8.4. Уровень антител против К антигена в сыворотке новорожденных телят. Результаты исследования сывороточных проб те