Санiтарна мiкробiологiя як наука
Информация - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие материалы по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
днакове, важко пiдрахувати дрiбнi мiкроорганiзми.
Метод кiлькiсного посiву дослiджуваного матерiалу на щiльнi поживнi середовища дозволяСФ пiдраховувати живi мiкроорганiзми. При визначеннi мiкробного числа виявляють, в основному, колонiСЧ мезофiльних аеробних i факультативно-анаеробних бактерiй, здатних розмножуватися на МПА, тобто використовувати бiлок i продукти його розщеплення як джерело азотного живлення. Цi мiкроорганiзми СФ основними споживачами органiчних речовин, якi вносяться до грунту та води з рiзними вiдходами промислових пiдприСФмств, видiленнями людей.
Посiв за методом Коха використовуСФться для визначення загальноСЧ кiлькостi бактерiй. У порожню стерильну чашку Петрi наливають 1 мл дослiджуваного матерiалу з вiдповiдного розведення i заливають 10-15 мл розплавленого, охолодженого до 45 С МПА, змiшують з рiдиною, обертаючи чашку на поверхнi стола. Пiсля застигання агару чашку перевертають кришкою вниз, культивують при 37 С протягом 24-48 годин чи при 22 - 72 години.
КолонiСЧ пiдраховують як на поверхнi, так i в товщi агару, для чого чашку кладуть догори дном на чорний фон. Кожну колонiю вiдмiчають чорнилами. Оцiнюють тiльки тi чашки, на яких виросло вiд ЗО до 300 колонiй. Якщо на чашцi з найбiльшим розведенням виросло понад 300 колонiй i аналiз не можна повторити, то допускаСФться пiдрахування колонiй при сильному боковому освiтленнi за допомогою спецiальноСЧ пластинки з сiткою та лупи. ПiдраховуСФться кiлькiсть не менше нiж у 20 квадратах площею 1 см2 у рiзних мiiях чашки. РозраховуСФться середня кiлькiсть колонiй у 1 см2, яку помножують на площу чашки.
У результатi пiдрахунку колонiй у кожнiй чашцi визначають кiлькiсть бактерiй на 1 мл (1 г) дослiджуваного матерiалу з урахуванням розведення. За кiлькiсть бактерiй приймають середнСФ арифметичне результатiв пiдрахунку колонiй на чашках з посiвом двох сусiднiх розведень.
Наприклад: розведення 101310 колонiй, розведення 10~2-35 колонiй.
Загальна кiлькiсть бактерiй - 310*10+35x100
Результат дослiдження можна округлити до 2-3 значущих цифр (наприклад, 7989 до 8000).
Титрацiйний метод використовуСФться для визначення кiлькостi санiтарно-показових мiкроорганiзмiв. Суть його полягаСФ в наступному:
- дослiджуваний матерiал гомогенiзують, при дослiдженнi твердих речовин готують суспензiю;
- готують серiСЧ розведень;
- роблять посiв визначених обСФмiв i СЧхнiх розведень (по 1 мл) до рiдкого поживного середовища. Кожен обСФм потрiбно засiвати в декiлька пробiрок (2-х, 3-х, 4-х, 5-ти i т. д. ряднi посiви). Оптимальним СФ 3-х рядний посiв (трикратне повторення);
- вiдмiчають наявнiсть росту на рiдкому поживному середовищi та висiвають iз пробiрок, в яких вiдмiчено рiст, на щiльне поживне середовище;
- проводять iдентифiкацiю мiкроорганiзмiв, якi виросли на щiльному середовищi. Враховуються морфологiчнi, тинкторiальнi, культуральнi, фiзiолого-бiохiмiчнi властивостi.
Якщо застосовувався однорядний метод, результат виражаСФться у виглядi титру - найменшого обСФму, в якому знайдено дослiджуваний органiзм (найбiльше розведення) .
Якщо застосовувався багаторядний метод, результати пiдраховують за допомогою спецiальних таблиць, котрi дозволяють за комбiнацiСФю позитивних обСФмiв визначити титр та iндекс.
Метод мембранних фiльтрiв використовуСФться для визначення кiлькостi санiтарно-показових мiкроорганiзмiв у матерiалах, що мiстять мало дисперсноСЧ фази.
Для його застосування необхiдне спецiальне обладнання, фiльтри та фiльтрацiйнi установки. Для санiтарно-бактерiологiчних дослiджень використовуються фiльтри, непроникнi для бактерiй. Фiльтрацiйна установка складаСФться iз фiльтрацiйного апарата (наприклад, фiльтра Зейтца) та джерела вакууму. Для стерилiзацiСЧ фiльтри занурюють у воду, нагрiту до 80 С, потiм нiтроцелюлознi фiльтри тричi кипятять по 10 хв, замiнюючи воду, а мембраннi - "адипор - 1 раз протягом 10-15 хв.
Фiльтрацiйний апарат стерилiзують за допомогою змоченого у спиртi ватного тампона. Стерильний мембранний фiльтр стерильним пiнцетом кладуть на сiтку фiльтрацiйного апарата та закрiплюють вiдповiдно до iнструкцiСЧ приладу. До стакана фiльтрацiйного приладу наливають необхiдний обСФм дослiджуваного матерiалу чи його розведення. При фiльтруваннi невеликих обСФмiв рiдини (1 мл) у стакан спочатку наливають 10 мл стерильноСЧ води. Загальний обСФм рiдини, яку фiльтрують, не повинен перевищувати i 100 мл. Для великих обСФмiв беруть декiлька фiльтрiв. Створюють вакуум у приймальнiй СФмностi. Пiсля закiнчення фiльтрацiСЧ витримують деякий час для видалення надлишку вологи. При збереженнi вакууму апарат розбирають i стерильним пiнцетом, не перевертаючи, переносять фiльтр на поверхню щiльного поживного середовища, не допускаючи утворення бульбашок повiтря мiж фiльтром i середовищем.
При наявностi в рiдинi великоСЧ кiлькостi завислих часток на поверхнi робочого фiльтра розмiщують планктонний фiльтр. У цьому випадку на поживне середовище переносять обидва фiльтри, iнкубують посiви 24 год при 37 С. Пiсля цього пiдраховують колонiСЧ, типовi для визначаСФмого мiкроорганiзму. ОбСФм рiдини для фiльтровання пiдбираСФться таким чином, щоб на фiльтрi виростало не бiльше ЗО колонiй. З фiльтра вибираСФться декiлька типових колонiй для проведення iдентифiкацiСЧ за допомогою визначення морфологiчних, тинкторiальних, культуральних та фiзiолого-бiохiмiчних ознак.
Результати виражають у виглядi iндекса за формулою
де N - к