Методологические основы определения солей тяжелых металлов в кормах и биологических жидкостях организма и профилактика их токсического влияния на животных
Автореферат докторской диссертации по ветеринарии
|
Страницы: | 1 | 2 | 3 | |
Таблица 2
Определение мышьяка в гидролизных дрожжах
и в биологических объектах
№ пп. |
Исследуемый препарат |
Развеска |
Содержание мышьяка |
||||
I |
II |
III |
|||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
||
1. |
Дрожжи гидролизные |
10 г |
Доставлены с Кировского БХЗ |
0,750?2 |
0,765?2 |
0,770?2 |
|
2. |
БХЗ №78 от 16.04.86 г. |
10 г |
0,730?2 |
0,840?2 |
0,750?2 |
||
3. |
Дрожжи гидролизные |
10 г |
0,840?2 |
0,850?2 |
0,880?2 |
||
4. |
БХЗ №64 от 16.04.86 г. |
10 г |
0,850?2 |
0,860?2 |
0,855?2 |
||
5. |
Дрожжи гидролизные |
10 г |
0,790?2 |
0,860?2 |
0,810?2 |
||
6. |
БХЗ №48 от 16.04.86 г. |
10 г |
0,820?2 |
0,800?2 |
0,815?2 |
||
7. |
Дрожжи гидролизные |
10 г |
0,830?2 |
0,835?2 |
0,840?2 |
||
8. |
БХЗ №98 от 16.04.86 г. |
10 г |
0,840?2 |
0,837?2 |
0,845?2 |
||
9/6 |
Почка от коровы 14 лет |
20 г |
Животные в комбикорме получали 6% гидролизных дрожжей от рациона |
0,450 |
0,460 |
0,465 |
|
10/7 |
Почка от ММК |
10 г |
0,470 |
0,480 |
0,485 |
||
11/8 |
Печень от коровы 14 лет |
10 г |
0,900 |
0,890 |
0,850 |
||
12/9 |
Печень |
10 г |
0,870 |
0,860 |
0,856 |
||
13/10 |
Мясо от коровы 14 лет |
10 г |
0,890 |
0,895 |
0,900 |
||
14/11 |
Мясо |
10 г |
0,910 |
0,920 |
0,895 |
||
15/13 |
егкое от коровы 14 лет |
10 г |
0,425 |
0,430 |
0,435 |
||
16/14 |
егкое |
10 г |
0,430 |
0,440 |
0,445 |
||
17/15 |
Сердце от коровы 14 лет |
10 г |
0,245 |
0,250 |
0,260 |
||
18/16 |
Сердце |
10 г |
0,250 |
0,260 |
0,265 |
||
19/17 |
Печень от старой коровы |
10 г |
0,790 |
0,795 |
0,785 |
||
20/18 |
Почка от старой коровы |
10 г |
0,225 |
0,230 |
0,235 |
||
21/19 |
Почка |
10 г |
0,230 |
0,235 |
0,240 |
||
22/20 |
Печень |
10 г |
0,445 |
0,450 |
0,445 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
||
23/21 |
Мясо |
10 г |
0,420 |
0,425 |
0,430 |
||
24/22 |
Мясо |
10 г |
0,415 |
0,425 |
0,440 |
||
25/23 |
Кожа |
10 г |
0,206 |
0,215 |
0,220 |
||
26/24 |
Кожа |
10 г |
0,210 |
0,217 |
0,225 |
||
27 |
Кожа от старой коровы |
10 г |
0,270 |
0,275 |
0,260 |
||
28 |
Кожа |
10 г |
0,265 |
0,260 |
0,267 |
||
29 |
Кость |
23 г |
Колба разбилась |
||||
30/31 |
Кость |
20 г |
0,220 |
0,225 |
0,230 |
||
31/32 |
Кость |
21 г |
0,190 |
0,210 |
0,215 |
||
32/33 |
Кость |
21 г |
0,230 |
0,235 |
0,245 |
||
33/12 |
Шерсть овцы |
0,5 г |
0,180 |
0,190 |
0,200 |
3. собственные исследования и их обсуждение
Острая и подострая токсичность белково-минеральной
добавки на основе паприна и клиноптилолита
Проведенные исследования на белых мышах показали, что БМД, введенная в желудок натощак в количестве по 1 мл в 25%-ной концентрации однократно, не вызывала побочных явлений со стороны общего состояния белых мышей. Белые мыши удовлетворительно перенесли эту дозу, и в течение 14 дней не отмечали каких-либо клинических изменений в поведении животных. Поэтому нами при определенной острой токсичности БМД на белых мышах был использован метод многократного введения гомогената БМД белым мышам в течение одного дня. 25%-ный гомогенат БМД вводили белым мышам натощак в течение дня по 1,0 см3 каждые 1,5 часа 3Ц4 раза. При обработке результатов исследования было установлено, что ЛД50 БМД составила 49,8 г/кг массы тела белых мышей при абсолютно смертельной дозеа БМД 97,3 г/кг массы тела.
Белые крысы по токсичности к БМД были более резистентны белых мышей. Введение в желудок также натощак 25%-ного гомогената БМД в дозе от 2 до 5 см3 каждые 1,5 часа в течение 6Ц9 часов не вызывало летальных исходов у животных в течение 14 дней. Белые крысы весьма хорошо переносили БМД в различных дозировках. Нам так и не удалось определить ЛД50 БМД у белых крыс, т.к. большое количество введенного в желудок гомогената БМД не вызывало падежа белых крыс, а при вынужденном убое белых крыс на 2-й, 6-й и 14-й день было отмечено переполнение всего желудочно-кишечного тракта. По-видимому, переполнение желудочно-кишечного тракта БМД вызывало лишь замедление, а, возможно, и торможение перистальтики кишечника, однако остальные белые крысы после 14-го дня приходили в нормальное состояние и чувствовали себя вполне удовлетворительно. Максимально переносимой дозой БМД явилась доза от 16 до 93,9 г/кг массы животного, при которой у животных в течение 14 дней было угнетенное общее состояние из-за переполнения желудочно-кишечного тракта.
Изучение острой и подострой токсичности БМД проводили также и на цыплятах 30-дневного возраста. Цыплята в сутки получали БМД от 48,9 до 58,8 г/кг массы тела. В течение 14 дней нами не было отмечено падежа, за исключением угнетенного состояния на второй и третий дни после введения гомогената БМД, в последующем цыплята удовлетворительно переносили БМД.
Хроническая и субхроническая токсичность БМД
на основе паприна и клиноптилолита
Белым мышам и крысам в течение трех дней подряд мы вводили 25%-ный гомогенат БМД по 1,0 и 5,0 см3 соответственно. В течениеаа 14 дней наблюдения над животными мы не отметили заметных изменений клинического состояния животных.
Поэтому вторым этапом определения хронической токсичности БМД являлась дача с комбикормом цыплятам, начиная с 5-суточного возраста и до 30 дней их жизни. Цыплятам, начиная с 30-суточного возраста, в течение месяца мы задавали с комбикормом различные дозы БМД из расчета на 1 кг массы цыплят.
Целью хронического токсикологического исследования на цыплятах являлось выяснение степени задержки роста и развития цыплят в различные периоды их жизнедеятельности. В этих условиях в качестве показателя токсичности препарата являлась задержка роста и развития цыплят, которую определяли путем их взвешивания.
Как видно из табл. 3Ц5 и рис. 2, повышение среднего веса цыплятаа 5-суточного возраста происходило за весь промежуток времени дачи БМД с комбикормом. Из представленных результатов видим, что нижняя доверительная граница разности между опытными и контрольной группами цыплят каждые 5 дней являлась величиной отрицательной, за некоторыми исключениями. Так, например, в первой группе - через 15 дней, в пятой группе - через 20, 25 и 30 дней; во второй группе - через 30 дней нижняя доверительная граница разности сравниваемых средних данных массы тела являлась величиной положительной.
Таблица 3
Динамика роста и развития суточных цыплят-бройлеров, получавших различные дозы БМД
на основе паприна и клиноптилолитов
(n - кол-во цыплят в группе)
Группы |
Кол-во БМД (г/кг массы тела) |
До начала |
Через 10 дн. |
Через 15 дн. |
Через 20 дн. |
Через 25 дн. |
Через 30 дн. |
||||||
n |
Ср. вес, г |
n |
Ср. вес, г |
n |
Ср. вес, г |
n |
Ср. вес, г |
n |
Ср. вес, г |
n |
Ср. вес, г |
||
1-я |
5,0 |
6 |
46,3 |
6 |
55,5 |
6 |
66,0 |
6 |
74,8 |
6 |
82,2 |
6 |
91,5 |
2-я |
10,0 |
6 |
46,8 |
6 |
56,2 |
6 |
71,2 |
5 |
92,8 |
5 |
109,0 |
4 |
132,8 |
3-я |
20,0 |
6 |
47,2 |
5 |
53,2 |
5 |
75,0 |
4 |
72,8 |
4 |
96,5 |
3 |
118,6 |
4-я |
40,0 |
6 |
46,8 |
6 |
58,0 |
6 |
68,2 |
6 |
78,6 |
6 |
94,6 |
3 |
114,7 |
5-я |
60,0 |
6 |
45,5 |
6 |
54,5 |
6 |
75,3 |
6 |
97,5 |
5 |
118,4 |
3 |
135,3 |
6-я |
контроль |
6 |
48,1 |
6 |
52,5 |
6 |
63,8 |
6 |
79,0 |
6 |
94,3 |
6 |
96,5 |
Таблица 4
Доверительные границы разности между сравниваемыми
массами тела цыплят опытных и контрольных групп,
получавших различные дозы БМД
Группы цыплят |
Кол-во БМД (г/кг массы тела) |
n |
Разность между средними массами опытных и контр. |
Стандартная ошибка разности |
Доверительные границы |
|
нижняя |
верхняя |
|||||
Через 10 дней |
||||||
1-я |
5,0 |
6 |
3,0 |
5,53 |
-7,1 |
|
2-я |
10,0 |
6 |
3,7 |
6,35 |
-10,5 |
17,9 |
3-я |
20,0 |
6 |
1,1 |
3,88 |
-7,6 |
9,8 |
4-я |
40,0 |
6 |
5,5 |
4,63 |
-4,8 |
15,8 |
5-я |
60,0 |
6 |
2,0 |
4,40 |
-7,8 |
11,8 |
Через 15 дней |
||||||
1-я |
5,0 |
6 |
2,2 |
6,70 |
1,8 |
11,6 |
2-я |
10,0 |
6 |
7,4 |
8,44 |
-8,1 |
24,9 |
3-я |
20,0 |
6 |
11,2 |
4,71 |
-2,3 |
24,7 |
4-я |
40,0 |
6 |
4,4 |
7,58 |
-2,2 |
17,4 |
5-я |
60,0 |
6 |
11,5 |
6,36 |
-2,6 |
25,6 |
Через 20 дней |
1-я |
5,0 |
6 |
4,2 |
7,66 |
-12,8 |
24,0 |
2-я |
10,0 |
5 |
13,8 |
10,0 |
-8,8 |
39,4 |
3-я |
20,0 |
4 |
6,2 |
11,10 |
-19,4 |
31,8 |
4-я |
40,0 |
6 |
0,4 |
9,97 |
-19,8 |
20,6 |
5-я |
60,0 |
6 |
18,5 |
7,55 |
1,7 |
35,3 |
Через 25 дней |
||||||
1-я |
5,0 |
6 |
2,1 |
8,27 |
-6,3 |
30,5 |
2-я |
10,0 |
5 |
14,7 |
10,67 |
-9,4 |
38,8 |
3-я |
20,0 |
4 |
2,2 |
9,38 |
-17,2 |
21,6 |
4-я |
40,0 |
6 |
0,3 |
12,13 |
-26,7 |
30,0 |
5-я |
60,0 |
5 |
24,1 |
8,50 |
4,9 |
43,3 |
Через 30 дней |
||||||
1-я |
5,0 |
6 |
5,0 |
8,48 |
-13,9 |
23,9 |
2-я |
10,0 |
4 |
36,3 |
13,40 |
4,4 |
67,3 |
3-я |
20,0 |
3 |
22,1 |
13,76 |
-10,4 |
54,6 |
4-я |
40,0 |
3 |
18,2 |
18,45 |
-25,3 |
61,7 |
5-я |
60,0 |
3 |
38,5 |
10,97 |
12,6 |
64,5 |
Таблица 5
Рост и развитие суточных цыплят-бройлеров,
получавших в течение месяца различные дозы БМД
Группы |
Кол-во БМД (г/кг массы тела) |
Средний вес цыплят |
Доверительные границы |
Прирост массы тела за 30 дней |
||
До начала опыта |
Через 30 дней |
Mm |
Доверительные границы |
|||
Mm |
Mm |
|||||
1-я |
5,0 |
46,3 1,84 |
91,5 6,81 |
74,0- 109 |
45,1 5,67 |
30,5-59,7 |
2-я |
10,0 |
46,8 2,36 |
132,8 12,44 |
93,2- 172,4 |
82,8 9,71 |
51,9-113,7 |
3-я |
20,0 |
47,2 2,02 |
118,6 12,79 |
63,6- 173,9 |
69,0 14,3 |
7,5-130,5 |
4-я |
40,0 |
46,8 0,87 |
114,7 25,09 |
6,8- 222,6 |
68,3 23,7 |
-33,9-168,9 |
5-я |
60,0 |
45,5 1,66 |
135,3 9,73 |
93,5- 177,1 |
93,0 9,0 |
54,3-131,7 |
6-я |
(контроль) |
48,1 2,06 |
96,5 5,36 |
82,7- 110,3 |
48,3 6,24 |
32,3-64,3 |
Таким образом, при избранном нами уровне вероятности (P=0,05) не исключается, что, вопреки непосредственным полученным данным эксперимента, средний вес цыплят первой группы даже выше среднего веса контрольной группы цыплят. Поэтому отставание в весе первой группы цыплят можно считать статистически несущественным. В остальных группах отмечалось значительное повышение среднего веса цыплят каждые пять дней.
Цыплята, получавшие в течение первых дней жизни и до 30-суточного возраста БМД с комбикормом в количестве от 5,0 до 60,0 г/кг массы тела цыплят хорошо переносили препарат, что видно по увеличению среднего веса опытных групп цыплят по сравнению с контрольной группой цыплят.
Рис. 2. Динамика роста и развития суточных цыплят,
получавших различные дозы БМД (средние данные по группе)
Однако, несмотря на это, во всех опытных группах за исключением первой (см. табл. 3Ц5) нами были отмечены случаи падежа. Так, в третьей, четвертой и пятой группах за весь период опыта падеж составил 50%, а во второй группе - 33,3% по сравнению с началом проведения опыта. При вскрытии павших цыплят нами не было отмечено видимых патологоанатомических изменений со стороны желудочно-кишечного тракта. Паренхиматозные органы были также без видимых заметных отклонений. Остальные цыплята до окончания опыта удовлетворительно переносили различные дозы БМД, и не отмечалось признаков отравления от БМД, т.к. за 30 дней увеличивался средний вес цыплят (табл. 5).
Оценка значимости различия между средними данными массы тела цыплят опытных и контрольной групп может быть представлена путем вычисления для каждой из средних ее доверительных границ и последующего построения столбиковой диаграммы, представляющей сравниваемые средние и их доверительные границы.
При уровне вероятности P=0,05 различие между средними данными массы тела цыплят являются статистически значимыми, если отрезок, изображающий разность между большей из сравниваемых средних и ее нижней доверительной границей, и отрезок, представляющий разность между меньшей из сравниваемых средних и ее верхней доверительной границей, перекрывают друг друга менее чем наполовину.
Таблица 6
Оценка различия между средними данными
с помощью нулевой гипотезы
Группы |
Кол-во БМД (г/кг массы тела) |
Кол-во цыплят в группе |
Средний вес по группе |
Прирост по группе |
||
Т |
Р |
Т |
Р |
|||
1-я |
5,0 |
6 |
0,57 |
<0,5 |
0,37 |
<0,5 |
2-я |
10,0 |
4 |
3,04 |
<0,01 |
2,90 |
<0,02 |
3-я |
20,0 |
3 |
1,92 |
<0,05 |
1,57 |
<0,1 |
4-я |
40,0 |
3 |
1,00 |
<0,25 |
1,12 |
<0,25 |
5-я |
60,0 |
3 |
3,23 |
<0,01 |
4,11 |
<0,002 |
Из табл. 6 и рис 3, отображающего результаты этих вычислений средних опытных и контрольной групп, видно, что различие между сравниваемыми средними результатами несущественно, поскольку их доверительные интервалы перекрывают друг друга более чем наполовину, чем это допустимо.
Если, предположим, об отсутствии фактического различия между средней массой тела подопытных и контрольной групп цыплят, а также тем уровнем вероятности нулевой гипотезы, при котором она не должна быть отвергнута (в фармакологических исследованиях этим уровнем обычно является P=0,05).
Найдя тест t для цыплят опытных групп, можно отметить, что вероятность нулевой гипотезы у цыплят первой, третьей и пятой групп превышают 0,05. Этот очень высокий уровень вероятности не позволяет отвергнуть нулевую гипотезу и, следовательно, не дает нам возможности признать различие между сравниваемыми средними прироста массы тела достоверными. Однако при обработке результатов средней массы тела опытных и контрольной групп различие массы тела первой и четвертой групп цыплят нельзя считать достоверными.
Анализируя данные табл. 6, мы нашли, что вычисленная величина значительно больше 0,05 по среднему приросту массы тела у цыплят второй, пятой групп. Это значит, что вероятность нулевой гипотезы значительно меньше, чем 0,02 и 0,002 соответственно. Эта вероятность столь велика, что нулевая гипотеза может быть нами отвергнута, и, следовательно, мы вправе признать различие между сравниваемыми средними прироста массы тела статистически значимыми.
Однако при анализе средних весов тела цыплят второй, третьей и пятой групп можем отметить, что различие между этими средними статистическими допустимы и соответствуют той нулевой гипотезе, при которой можно заключить об отсутствии токсичности испытуемых доз БМД. Отсутствие достоверности полученных данных у цыплят первой и четвертой групп также не может являться признаком токсичности БМД, т.к. эти дозы находятся между от 10,0 до 60,0 г/кг массы тела, где была доказана их достоверность.
Вторым этапом определения хронической токсичности белково-минеральной добавки (БМД) на основе паприна и клиноптилолита являлось введение в комбикорм аналогических доз добавки цыплятам 30-суточного возраста и кормление их в течение месяца. Из табл. 7Ц8 и рис. 2 видно, что средний вес цыплят опытных групп, каждые 10 дней, превышал средний вес цыплят контрольной группы и это увеличение происходило на протяжении всего 30-дневного промежутка.
Рис. 3. Средний вес цыплят опытных
и контрольной групп с доверительными границами
Таблица 7
Динамика роста и развития 30-дневных цыплят,
получавших различные дозы БМД
Группы |
Кол-во БМД (г/кг) |
До начала опыта |
Через 10 дней |
Через 20 дней |
Через 30 дней |
||||
n |
Mm |
n |
Mm |
n |
Mm |
n |
Mm |
||
1-я |
5,0 |
6 |
177,1 5,1 |
6 |
288,1 15,3 |
6 |
519,0 16,6 |
6 |
519,0 15,5 |
2-я |
10,0 |
6 |
184,5 10,5 |
6 |
290,0 15,4 |
6 |
412,3 19,5 |
6 |
566,3 24,3 |
3-я |
20,0 |
6 |
157,3 9,9 |
6 |
291,6 9,7 |
5 |
426,0 26,1 |
5 |
572,8 41,8 |
4-я |
40,0 |
6 |
173,3 0,9 |
6 |
322,8 12,4 |
6 |
459,6 14,6 |
6 |
596,1 99,3 |
5-я |
60,0 |
6 |
177,5 4,5 |
6 |
297,1 15,6 |
6 |
465,3 33,6 |
6 |
576,0 36,1 |
6-я |
(контроль) |
6 |
172,3 12,8 |
6 |
240,3 28,0 |
6 |
343,6 35,3 |
6 |
458,0 35,1 |
Из табл. 8 также видно, что нижняя доверительная граница всех опытных групп цыплят подекадно преимущественно величина отрицательная.
|
Страницы: | 1 | 2 | 3 | |