Geum.ru

Тезисы докладов

Вид материалаТезисы

Содержание


Влияние лекарственного средства ксимедон на активационные процессы клеток крови
НОВЫЕ АГЕНТЫ ПРОТИВОРАКОВОЙ ГЕННОЙ ТЕРАПИИ С.В.Костров, А.В.Шубин, Н.А.Лунина, А.А.Комиссаров, И.В.Демидюк
Подобный материал:
1   ...   46   47   48   49   50   51   52   53   ...   96

ВЛИЯНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА КСИМЕДОН

НА АКТИВАЦИОННЫЕ ПРОЦЕССЫ КЛЕТОК КРОВИ

А.И.Коновалов1), И.Г.Мустафин2), Г.В.Черепнев3), В.С.Резник1)



1)Институт органической и физической химии им. А.Е.Арбузова КНЦ РАН, Казань; 2)Казанский государственный медицинский университет, Казань;

3)Республиканская клиническая больница № 2 МЗ РТ, Казань


Отечественное лекарственное средство, негликозидный аналог пиримидин-нуклеозидов, ксимедон обладает регенерирующей, сис-темной иммуномодулирующей, m-зависимой антиапоптогенной и нейрорегенерирующей активностью.

Раннее нами было установлено, что ксимедон регулирует m/BCL-2/BAG-1-зависимый механизм митохондриального пути индукции апоптоза. Был получен положительный эффект применения ксимедона у части больных ВИЧ-инфекцией, проявившийся в стабилизации основных показателей иммунной системы, «вирусной нагрузки», улучшении клинического статуса. Ксимедон в составе комплексной терапии больных ВИЧ-инфекцией обеспечивал выраженный иммунореабилитирующий эффект, заключающийся в стимуляции лейкопоэза и лимфопоэза с повышением содержания CD4+ лимфоцитов и снижением активации субпопуляций Т лимфоцитов (CD4+DR+, CD8+DR+, CD8+CD38+). Препарат повышал устойчивость лимфоцитов к спонтанному апоптозу (цитопротекторный эффект) и достоверно редуцировал частоту побочных эффектов ВААРТ (анемия, дислипопротеинемия, нейропатия).

Учитывая полученный нами эффект снижения активации лимфоцитов лишь у части больных ВИЧ-инфекцией, находившихся на комплексной терапии с ксимедоном, мы провели исследование влияния препарата на активационные процессы клеток крови in vitro. Инкубация лимфоцитов, нейтрофилов, моноцитов и тромбо-цитов с ксимедоном в концентрации 10-4 и 10-6 M не вызывает in vitro активацию клеток и не изменяет экспрессию рецепторов. При моделировании in vitro ситуации, аналогичной in vivo, а именно, повышенное содержание клеток с признаками активации, было проведено активирование лимфоцитов (Лф) цитокинами (IL-2, IL-7, TNF-). В опыте, параллельно с добавлением в культуру Лф цитокинов, вносили ксимедон в концентрации 10-4 и 10-6 M. Активацию субпопуляций лимфоцитов определяли методом проточной цитометрии по экспрессии маркеров CD38 и HLA-DR. Результаты исследования показали, что в ряде экспериментов ксимедон ингибировал активацию Лф, вызванную цитокинами, а в других опытах увеличивал активацию клеток.

Было проведено моделирование продуктивного инфицирования лимфоцитов человека ВИЧ-1 in vitro. Для активации лимфоцитов клетки будут преинкубированы цитокинами (IL-2, IL-7, TNF-). В опыте, параллельно с добавлением в культуру клеток цитокинов, вносили ксимедон в конечной концентрации 10-4 и 10-6 M. Методом проточной цитофлуориметрии изучали активационный статус CD4+- и CD8+-лимфоцитов и процент продуктивно инфициро-ванных клеток по определению внутриклеточного белка ВИЧ р24.

Результаты исследования показали, что ксимедон в ряде экспериментов ингибировал активацию лимфоцитов. При этом снижалось индуцированная цитокинами репликация ВИЧ-1, тогда как при повышении активации лимфоцитов и их субпопуляций было отмечено усиление вирусной продукции.

Таким образом, были получены данные о разнонаправленном действии препарата ксимедон на цитокининдуцированную актива-цию лимфоцитов. Ксимедон, обладая способностью стабилизи-ровать клеточные мембраны, снижает активацию и образование микровезикул лимфоцитами in vitro в условиях активации клеток цитокинами только в ряде случаев, что полностью согласуется с раннее полученными клиническими данными о разном типе ответа больных ВИЧ-инфекцией на комплексную терапию.

НОВЫЕ АГЕНТЫ ПРОТИВОРАКОВОЙ ГЕННОЙ ТЕРАПИИ

С.В.Костров, А.В.Шубин, Н.А.Лунина, А.А.Комиссаров, И.В.Демидюк



Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной генетики РАН, Москва


Развитие противораковой генной терапии даёт надежду на раз-работку новых эффективных методов лечения рака. Лекарственные средства, созданные в рамках этой стратегии, в настоящее время находятся на разных стадиях испытаний, однако несколько препа-ратов уже допущены к применению в клинике. В то же время ра-ковые опухоли многообразны, и не представляется возможным най-ти одно универсальное средство для лечения всех онкологических заболеваний. Задачей проекта является изучение возможности использования в качестве агентов противораковой терапии генов ряда протеолитических ферментов, которые могут стать основой для создания новых средств лечения онкологических заболеваний.

На предыдущих этапах работы на модели двух клеточных линий рака легкого человека A549 и Calu-1 было протестировано цитотоксическое действие набора генов протеолитических ферментов и показано, что ген протеазы 3С вируса гепатита А человека (3Cpro) эффективно вызывает клеточную гибель.

На данном этапе работы была проведена оценка динамики гибели опухолевых клеток, экспрессирующих 3Cpro. После введения гена в течение всего времени эксперимента (8 суток) наблюдалось снижение количества живых клеток. Было обнаружено, что часть экспрессирующих 3Cpro клеток гибнет с проявлением морфологических признаков, характерных для апоптоза (приобретение округлой формы и «блеббинг» цитоплазматической мембраны), в то время как другая часть демонстрирует интенсивную цитоплазматическую вакуолизацию. Оценка индуцируемых 3Cpro путей клеточной гибели показала, что невакуолизированные клетки проявляют характерные для апоптоза конденсацию хроматина, кариорексис, активацию каспаз и изменение локализации фосфатидилсерина. Вакуолизированные клетки, напротив, демонстрируют незначительную конденсацию хроматина без признаков кариорексиса, при этом не наблюдалось активации каспаз и изменения локализации фосфатидилсерина. Полученные результаты указывают на каспазонезависимый характер гибели вакуолизированных клеток.

Характеристика типа гибели вакуолизированных клеток была проведена путем оценки состояния субклеточных структур – эндоплазматического ретикулума, эндосомально-лизосомального компартмента, а также митохондриальной сети и аутофагосом. Обнаружено, что наблюдаемые вакуоли представляют собой увеличенные в размерах аутолизосомы, внутри которых находятся многократно секвестированные аутофагосомы. Полученные резуль-таты позволяют предположить, что гибель вакуолизированных клеток происходит в результате нарушений аутофагии. Для дальнейшей характеристики цитотоксического эффекта 3Cpro нами был сконструирован экспрессионный вектор, в составе которого находится ген белка слияния 3Cpro с жёлтым флуоресцентным белком. Такая система позволит проводить оценку цитоток-сического действия 3Cpro на широкий спектр опухолевых клеток.

Таким образом, полученные результаты позволяют рассматривать ген 3Cpro в качестве перспективного агента противораковой генной терапии, способного индуцировать каспазонезависимую гибель клеток.