Биотехнологические основы конструирования и использования иммунобиологических препаратов для молодняка крупного рогатого скота 03. 00. 23 биотехнология

Вид материала

Автореферат диссертации

Содержание Иммуностимулирующие препараты в терапии и профилактике вирусных респираторных инфекций телят. Специфическая профилактика вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят Подбор, селекционирование, отработка режимов культивирования и антигенная активность вакцинных штаммов вирусов крупного рогатого Рекомбинантная вакцина против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота с использованием генетически А. Обработка сухостойных коров и нетелей Б. Обработка новорожденных телят В. Выращивание телят старше 20

Подобный материал:

•  современного фермерского хозяйства, на базе существующего крестьянского хозяйства,, 72.62kb.
• Биотехнология в воспроизводстве и селекции крупного рогатого скота имеет особое значение., 299.72kb.
• Программа развития сельского хозяйства и регулирования рынков сельскохозяйственной, 16.63kb.
• Примерная тематика курсовых работ и историй болезни, 23.51kb.
• Откорм крупного рогатого скота, 305.74kb.
• Комплексная Программа нпо нарвак по диагностике, профилактике и лечению инфекционных, 72.94kb.
• Доклад на коллегии Управления ветеринарии по теме: «Эпизоотическое состояние Ульяновской, 67.74kb.
• Использования ежегодно, в течение всего года, проводится бонитировка племенного крупного, 79.65kb.
• Ветеринарно-санитарные правила по профилактике и ликвидации хламидиоза крупного рогатого, 202.68kb.
• 2. 2 Использование пектинсодержащего сырья при откорме молодняка крупного рогатого, 158.15kb.

^ Иммуностимулирующие препараты в терапии и профилактике вирусных респираторных инфекций телят.


Стимуляция иммунной системы телят при вирусных респираторных инфекциях с помощью бактериальных липополисахаридов.

Известно, что для стимуляции иммунной системы организма животных используются бактериальные липоплисахариды (ЛПС), являющиеся поликлональными активаторами В-системы лимфоцитов. Обладая высокой иммунологической активностью, данный вид иммуностимуляторов, особенно полученных из грамотрицательных бактерий нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта организма животных и человека, обладает высокой реактогенностью. Поэтому, путем экспериментальных исследований, из 22 различных штаммов микроорганизмов с использованием таких иммунологических тестов, как реакция бласттрансформации лимфоцитов, нагрузочные тесты с лейкоцитами, взятыми от животных с иммунодефицитами, был отобран ЛПС из спорообразующей аэробной бактерии - Bac.alvei КМИЭВ-11 - возбудителя европейского гнильца пчел. Данный микроорганизм не имеет контакта с теплокровными животными и поэтому его применили в диагностических целях для оценки функционального состояния В-системы лимфоцитов, а также для повышения резистентности организма сельскохозяйственных животных. В целях диагностики бактериальный ЛПС из Bac.alvei КМИЭВ-11 использован для постановки реакции бласттрансформации в концентрации 20-50 мкг/мл. При сравнении результатов РБТЛ, поставленной с ЛПС из Bac.alvei и Bact.prodigiosum и E.coli, фитогемагглютинином, конканавалином-А установено, что он по своей активности не уступает общепринятым митогенам и его можно с успехом использовать в комплексных исследованиях при оценке функционального состояния Т- и В-лимфоцитов.

При использовании вышеуказанного ЛПС для телят наиболее оптимальной явилась доза 5-10 мкг/кг живой массы. После однократной обработки телят ЛПС в этих дозах к 5 дню отмечено увеличение Т-лимфоцитов на 47%, В-лимфоцитов на 37%, фагоцитарного числа на 15% по сравнению с исходными данными. К 14 дню указанные показатели снизились и пришли к уровню исходных данных. После трехкратной обработки телят ЛПС из Bac.alvei с интервалом в 7 дней отмечена значительная стимуляция клеточного и гуморального иммунитета, продолжающаяся до 18 дня наблюдения. Так, к 4 дню отмечено возрастание фагоцитарного числа на 22%, фагоцитарного индекса на 108%, к 8-му дню - соответственно на 25 и 52%, к 18-му дню – на 5 и 27%, Т-лимфоцитов - соответственно на 37%, 45%, 33%; В-лимфоцитов на 62%, 87%, 55%, лизоцима на 94% (5-й день), 215% (8-й день). Другие показатели гуморального иммунитета у обработанных телят не отлачилсь от уровня контрольных животных. Обработка телят бактериальным ЛПС оказывает активизирует белковый, углеводный, липидный, азотистый, пигментный, минеральный обмены. Производственные испытания бактериального ЛПС на телятах с целью повышения резистентности организма показали высокую его эффективность. Заболеваемость телят ОРЗ снизилась в 2,3 раза, прирост живой массы увеличился на 80 г, окупаемость ветмероприятий составила 10,86 рублей на 1 рубль затрат.


Иммунологическая эффективность препарата, полученного на основе пчелиной перги.

Нами разработана технология изготовления инъекционной формы иммуностимулирующего препарата “Апистимулина-А” на основе пчелиной перги с низкой себестоимостью и высокой эффективностью. Проведенные токсикологические исследования показали его низкую токсичность и отсутствие аллергенных свойств, стимулирущее воздействие на обмен веществ организма лабораторных животных. В результате проведенных исследований на животных установлена терапевтическая доза, которая составила 1 мг/кг живой масы при 3-4-х кратном введении с интервалом в 3-4 дня. При обработке больных пневмоэнтеритами телят отмечалось восстановление угнетенных звеньев иммунитета до уровня клинически здоровых животных. При изучении влияния на клеточный и гуморальный иммунитет препарата “Апистимулин-А” в оптимальной терапевтической дозе (1 мг/кг массы) у клинически здоровых (подопытная группа № 1) и больных пневмоэнтеритами (подопытная группа № 2) телят установлено, что введение препарата способствует увеличении Т- и В-лимфоцитов, активизации фагоцитарной активности нейтрофилов, повышении активность интерферона и лизоцима. Проведенные производственные испытания препарата “Апистимулин-А” показали, что его применение способствует снижению заболеваемости телят респираторными инфекциями с 66,7-95% до 20-32,5%, отхода с 17,3-23,35 до 4,8-7%. Окупаемость ветмероприятий при его использовании составляет 40,39 рублей на 1 рубль затрат.


Иммунологическая перестройка организма телят и лечебно-профилактическая эффективность Т-активина при респираторных заболеваниях.

В ряду известных иммуностимулирующих препаратов, нашедших применение в профилактике и терапии респираторных заболеваний телят особое место принадлежит Т-активину, представляющему собой комплекс полипептидов из тимуса крупного рогатого скота. Проведенные исследования по изучению лечебно-профилактической эффективности и влияния на клеточный иммунитет больных ОРЗ телят показали его высокую активность. В частности, отмечено стимулирующее влияние на лимфоциты периферической крови (на общее их количество, на Т-и В-систему лимфоцитов). Установлено, что в результате заболевания у телят отмечается значительное угнетение Т- и В-звеньев лимфоцитов - до 10,0+0,95 и 10,2+0,84%. Но через 7 дней после обработки Т-активином отмечается значительное увеличение их количества - соответсвенно до 19,4+1,29% и 13.0+0,9%. К 28 дню наблюдения количество Т-лимфоцитов возросло до 24,8+0,9% и В-лимфоцитов до 15,4+1,72%. У контрольных животных значительных колебаний в содержании Т- и В-лимфоцитов не обнаружено. Обработка телят Т-активином восстанавливала угнетенные звенья клеточного иммунитета у телят, больных ОРЗ, что способствовало быстрейшему их выздоровлению.

Лечебно-профилактическая эффективность Т-активина была проверена на 2-х группах телят, заболеваемость в которых составляла 50%. После обработки Т-активином, число больных телят через 4 дня снизилось до 25%, а через 20 дней - до 4,5%, тогда как среди телят контрольной группы к 10 дню больных было 63,6%. К 20 дню число заболевших было 36,4%, а к 40 дню - 9,1%. Полное выздоровление телят контрольной группы произошло к 45 дню наблюдения. Экономическая эффективность от применения Т-активина составляет 2,54 рубля на 1 рубль затрат.


Иммунологическая и лечебно-профилактическая эффективность протаргола при вирусных респираторных инфекциях.

Из имеющихся антибактериальных химиотерапевтических препаратов известны препараты серебра - протаргол и колларгол, которые обладают противовирусными и иммуностимулирующими свойствами. В результате проверки раствора протаргола в различных концентрациях на культуре клеток отмечено угнетение репродукции вирусов ИРТ и ВД при 0,25-0,5%-ной его концентрации. Проведенные исследования влияния 0,5%-ного раствора протаргола на иммунную систему позволили установить его иммуностимулирующий эффект. Так, через 14 дней после обработки у телят отмечено увеличение Т-лимфоцитов на 49%, В-лимфоцитов на 55%, фагоцитарного числа на 15%, фагоцитарного индекса на 58%, бактерицидной активности сыворотки крови в 2 раза, общего белка сыворотки крови на 34%. Это позволило применить его для лечения вирусных респираторных инфекций животных. Протаргол для лечения телят использовали в 0,5%-ной концентрации, растворенный на неспецифическом иммуноглобулине. Применялось интратрахеальное и аэрозольное введение препарата. Интратрахеально раствор протаргола вводили 3-4-х кратно с интервалом в 3-5 дней, аэрозольно- в дозе 2 мл на 1 кубический метр помещения 1 раз в 3-5 дней с экспозицией не менее 60 минут. В результате проведенных исследований коэффициент заболеваемости интратрахеально обработанных телят снижается с 0,24 до 0,08, аэрозольно обработанных - с 0,42 до 0,24. Окупаемость ветеринарных мероприятий соответственно составляла 12,01 и 8,81 рублей на 1 рубль затрат.


^ Специфическая профилактика вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят

Общие подходы к конструированию вакцин для профилактики вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят.

В комплексе лечебно-профилактических мероприятий при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях крупного рогатого скота специфическая профилактика занимает одно из ведущих мест.

Специфическая профилактика этих инфекций в современных условиях осуществляется по следующим направлениям:

1. Активная специфическая профилактика живыми и инактииврованными моно- и ассоциированными вакцинами;
   
2. Активная специфическая профилактика с использованием рекомбинантных штаммов бактерий, имеющих в своем геноме геном вирусов;
   
3. Активная специфическая профилактика с использованием маркерных штаммов вирусов;
   

Вакцинация телят позволяет создать напряженный специфический иммунитет (как местный, так и общий), а также неспецифический противовирусный иммунитет из-за высокой интерфероногенной активности некоторых вакцинных штаммов вирусов, обусловленный созданием невосприимчивости к ряду возбудителей, не входящих в вакцину. Такое положение характерно для иммунизации живыми вирус-вакцинами. Постоянная иммунизация как молодняка крупного рогатого скота, так и взрослых животных способствует вытеснению из стада эпизоотических штаммов вирусов вакцинными и тем самым снижению степени инфицированности возбудителями респираторных инфекций. Это относится к таким вирусным инфекциям, как инфекционный ринотрахеит, вирусная диарея, парагрипп-3, респираторно-синцитиальная инфекция.

Но механизм действия инактивированных вакцин несколько иной. В основном инактивированные вакцины при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях используют:

-для иммунизации племенных животных, которым нежелательно применять живые вакцины;

- для иммунизации глубоко стельных коров с целью создания напряженного колострального иммунитета у телят;

- на заключительных стадиях оздоровления хозяйств от вирусных инфекций.

Современное ведение животноводства, связанное с нарушениями в кормлении, содержании животных, постоянными стрессами приводит к значительному угнетению иммунной системы. В идеальных условиях профилактическая эффективность вакцин должна быть 90-100%, однако при современных условиях содержания животных, иммунизация крупного рогатого скота, у которого отмечены нарушения обменных процессов и угнетение иммунной системы сопровождается значительным снижением эффективности вакцин. Для решения вопроса повышения эффективности иммунизации наряду с улучшением технологии содержания и кормления животных, важным моментом является стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью иммуностимулирующих препаратов.

В связи с вышеизложенным, нами проведен комплекс исследований по разработке технологии изготовления живых и инактивированных моно- и ассоциированных вирус-вакцин для иммунизации крупного рогатого скота различного возраста и физиологического состояния, а также принципа стимуляции иммунной системы при иммунизации вирус-вакцинами.

Исследования по разработке живых и инактивированных моно- и ассоциированных вирус-вакцин против ИРТ, ВД, ПГ-3, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота проводились в несколько этапов:

- Подбор и отработка режимов культивирования вакцинных штаммов вирусов;

- Отработка оптимальных методов инактивации вирусов для конструирования инактивированных вакцин;

- Изучение антигенной активности живых и инактивированных штаммов вирусов на лабораторных и сельскохозяйственных животных;

- Подбор оптимальных адъювантов для конструирования инактивированных вакцин;

- Отработка оптимальных доз и соотношений компонентов при конструировании ассоциированных живых и инактивированных вирус-вакцин;

- Изучение иммунологической перестройки организма коров и телят после иммунизации живыми и инактивированными вирус-вакцинами;

- Определение иммуногенности живых и инактивированных культуральных вирус-вакцин против вирусных инфекций крупного рогатого скота на лабораторных животных.

- Изучение профилактической эффективности живых и инактивированных культуральных вирус-вакцин против вирусных инфекций при респираторных и желудочно-кишечных болезнях телят, заболеваниях репродуктивных органов коров.


^ Подбор, селекционирование, отработка режимов культивирования и антигенная активность вакцинных штаммов вирусов крупного рогатого скота для конструирования вакцин

Как правило, для изготовления вирус-вакцин накопление вирусной массы осуществляется на первично трипсинизированных культурах клеток почки эмбриона теленка или тестикул бычка, а в последние годы - перевиваемых культурах клеток (ПТ-линия "Таурус", МДБК, ПТ-80). В качестве питательных культуральных сред применяли среду 199, 0,5% лактальбумина гидролизат, среду Игла, ферментный гидролизат мышечных тканей (ФГМС). Для повышения эффективности культивирования и удешевления вакцин нами для накопления вирусной массы использованы перевиваемые культуры клеток ПТ-линия "Таурус", МДБК, ПТ-80, которые адаптированы к 5%-ному гемогидролизату, изготавливаемому на предприятии «Диалек» (Белбиофарм Республики Беларусь). Данная питательная среда в 3-4 раза дешевле вышеуказанных и по своим ростовым свойствам им не уступает.

Для конструирования живых вакцин против ИРТ крупного рогатого скота в Республике Беларусь и странах СНГ с 70-х годов используются аттенуированные штаммы ТК-А и МВА 2/81, а инактивированных – «4016», «Оренбург» и «Молдавский», диареи - крупного рогатого скота в Республике Беларусь и странах СНГ используются аттенуированный штамм ВК-№ 28, а инактивированных – «Орегон С-24», парагриппа-3 крупного рогатого скота в Республике Беларусь и странах СНГ используются аттенуированные штаммы ПТК-45, SF-4, «Белорусский-9», ротавирусной инфекции - эпизоотические штаммы ротавирусов 243, «Белорусский-7», коронавирусной инфекции - эпизоотические штаммы коронавирусов «Линкольн», F-17 и «Белорусский-11».

При этом проведена работа по адаптации референтных штаммов вирусов ИРТ, ВД, ПГ-3, коронавируса, в основном культивируемых на первичных клетках почки эмбриона коровы (ПЭК) к перевиваемым клеткам - почки теленка (ПТ, линия “Таурус”), (ПТ-80) и МДБК, адаптированных к 5%-му гемогидролизату. Ротавирус адаптировали к перевиваемыем линиям клеток почек зеленой мартышки – Vero, почки теленка – МДВК, перевиваемые клетки почки поросенка – СПЭВ. Проведение 12 пассажей каждого вируса на новых клеточных линиях показали, что вышеуказанные перевиваемые культуры можно с успехом использовать для накопления вирусной массы при конструировании вакцины.

Особенно высокий инфекционный титр установлен при культивировании вирусов на перевиваемых клетках МДБК (до 6,5 -8,0 lg ТЦД 50/мл).

Для идентификации ДНК и РНК вирусов и подтверждения их специфичности нами проведено типирование нуклеиновых кислот в полимеразной цепной реакции в условиях отдела биотехнологии Института Сибири и Дальнего Востока РАСХН, диагностической лаборатории Белорусского государственного ветеринарного центра.

На рис. 1 - 4 представлены результаты постановки ПЦР с штаммами вирусов ИРТ, ВД, рота- и коронавируса

Рисунок 1. Постановка ПЦР с различными штаммами вируса ИРТ	Рисунок 2. Постановка ПЦР с различными штаммами вируса диареи
1 2 3 Маркеры - стандартные олигонуклеотидные праймеры ротавируса. 2 - отрицательный контроль; 1 – РНК из ротавируса КМИЭВ 3, 3 – положительный контроль	1 2 3 Маркеры - стандартные олигонуклеотидные праймеры коронавируса. 2 - отрицательный контроль; 1 – РНК из коронавируса КМИЭВ 1, 3 – положительный контроль
Рисунок 3. Постановка ПЦР с ротавирусом крупного рогатого скота	Рисунок 4. Постановка ПЦР с коронавирусом крупного рогатого скота

В дальнейшей работе нами использованы адаптированные и аттенуированные штаммы вирусов, которые депонированы в Республиканской коллекции микроорганизмов и им присвоены номера: инфекционного ринотрахеита - КМИЭВ – 6, диареи - КМИЭВ – 7, парагриппа-3 – КМИЭВ- 8, ротавирус – КМИЭВ – 3, коронавирус - КМИЭВ – 1.

Следующим этапом работы при разработке культуральных вирус-вакцин против ИРТ, ВД, ПГ-3 рота- и кронавирусной инфекций крупного рогатого было изучение возможности отдельного и совместного культивирования аттенуированных и адаптированных к перевиваемым культурам клеток вакцинных штаммов вирусов.

Первоначально была проведена работа по изучению возможности одновременного культивирования аттенуированных штаммов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3 при раздельном и совместном инфицировании культуры клеток МДБК. Заражение культуры проводили вирусами ИРТ — штамм «КМИЭВ-6», ВД — «КМИЭВ-7», ПГ-3 – «КМИЭВ-8» в разных дозах и соотношениях. О репродукции вирусов судили по их титру. Так, при совместном культивировании на культуре клеток штаммов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3 они репродуцируются не в одинаковой степени. Так, вирус диареи способствовал угнетению накопления вирусов ИРТ и ПГ-3 вследствие его быстрой репродукции. Это не позволяет использовать метод одновременного культивирования вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3 на культуре клеток, т.к. получаемый низкий титр вирусов снижает экономическую эффективность промышленного производства вакцины.

Также была проведена работа по изучению возможности одновременного культивирования аттенуированных штаммов рота- и коронавирусов при раздельном и совместном инфицировании культуры клеток МДБК. Заражение культуры проводили ротавирусом – штамм «КМИЭВ-3» и коронавируса – штамм «КМИЭВ-1» в разных дозах и соотношениях. При совместном культивировании на культуре клеток штаммы рота- и коронавирусов также репродуцируются не в одинаковой степени. Ротавирус, репродукция которого проходила за 24 часа, способствовал угнетению накопления коронавируса. Это не позволяет применять метод одновременного культивирования рота- и коронавирусов на культуре клеток, т.к. получаемый низкий титр коронавируса снижает экономическую эффективность промышленного производства вакцины.

При накоплении монокомпонентов вакцин на матрасах и на роллерах ЦПД, характерное для вируса ИРТ наступало через 36-48 часов, вируса диареи - 24-36 часов, вируса парагриппа-3 - 60-72 часов, ротавируса – через 24 часа, кронавируса - через 72-96 часов. К этому сроку отмечалась полная деструкция клеточного монослоя, его сползание со стекла и наличие в вируссодержащей жидкости взвеси клеток. Титрация вируссодержащей жидкости по Риду и Менчу показала, что после культивирования на матрасах титр вируса ИРТ составлял 5,5-6,0 lg ТЦД 50/ 1,0 мл, вируса диареи - 6,0-6,5 lg ТЦД 50/ 1,0 мл, вируса парагриппа-3 - 5,0-5,5 ТЦД lg 50/1,0 мл, ротавируса – 7,5-8,0 ТЦД lg 50/ 1,0 мл, коронавиурса – lg 5,0 ТЦД 50/ 1,0 мл. Но при культивировании на роллерах - титр вируса был выше на 1,5-2.0 lg ТЦД 50/ 1,0 для каждого вируса.

Изучение антигенной активности адаптированных нами штаммов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3, рота- и коронавирусов на кроликах и телятах в сравнении с исходными проводилось путем двукратного внутримышечного введения кроликам по 2 мл вируссодержащей жидкости каждого из вирусов при инфекционном титре 6,0 lg ТЦД _50/мл и телятам - интратрахеального или внутримышечного по 2 мл вирусов при этом же титре. Кровь у животных брали до введения вирусов и через 14 дней после введения. В сыворотках крови титр антител определяли в реакции нейтрализации на культуре клеток.

Результаты исследований показали, что адаптация вирусов ИРТ, ВД, ПГ-3, рота- и коронавирусов на клеточных линиях МДБК и СПЭВ не влияет на их антигенную активность в сравнении с исходными штаммами. Штаммы не реактогенны, вызывают активную выработку противовирусных антител сельскохозяйственными (крупный рогатый скот) и лабораторными (кролики) животными в достаточно высоких титрах.

Конструирование, иммунологическая и профилактическая эффективность живых и инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против респираторных и желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота.

Вирусвакцина живая культуральная против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. При разработке моновакцины против ИРТ была отработана оптимальная доза вируса и кратность его введения. Доза вируса составляла 1-2 мл при инфекционном титре от 5,5 до 6,0 lg ТЦД 50/мл, кратность - 21-28 дней, что вызвало максимальную выработку противовирусных антител. При изучении иммунологической перестройки организма животных после иммунимзации моновакциной против ИРТ установлено, что титр антител к 4 дню возрос в 3,25 раза, к 11 дню — в 4 раза, а к 42 дню — в 6,75 раза по сравнению с исходными данными. У контрольных животных также отмечалось увеличение титра антител, однако их уровень был значительно ниже, чем у иммунизированных животных. При этом наиболее активно происходит биосинтез иммуноглобулинов M-класса. Так, после вакцинации увеличение количества иммуноглобулинов этого класса происходило до 11 дня с 5,680,13 до 6,80,13 г/л, после чего отмечено их некоторое уменьшение. Биосинтез иммуноглобулинов G-класса начинался несколько позднее — с 11 дня и его увеличение отмечалось до 42-65 дня - количество иммуноглобулинов G-класса возросло к 11 дню с 14,60,25 до 16,40,2 г/л, а к 65 дню достигло 17,00,24 г/л. У контрольных телят в биосинтезе иммуноглобулинов Ig G и Ig M значительных колебаний не отмечалось.

У иммунизированных телят количество Т-лимфоцитов к 11 дню возросло с 29,21,7% до 44,41,7%. Затем произошло снижение их количества к 21 дню до 40,41,29%, к 42 до 29,41,5%. Аналогично изменялось количество и В-лимфоцитов у телят этой же подопытной группы. К 11 дню наблюдения их количество возросло с 15,21,3% до 23,20,8%, а к 21 дню снизилось до 20,61,07%, к 42 дню до 18,61,5 г/л.

Установлено, что вакцина против ИРТ обладает высокой интерфероногенной активностью - титр интерферона у вакцинированных телят возрос к 11 дню с 29,15,96 до 59,75,6%, после чего отмечалось его снижение, к 65 дню титр составил 43,39,6%.

Вакцина против ИРТ обладает высокой профилактической эффективностью, котрая составляет 88,2-91% и широко используется в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Вирусвакцина живая культуральная против вирусной диареи крупного рогатого скота. В результате проведения исследований по разработке моновакцины против ВД отработана оптимальная доза вируса и кратность его введения, что составляло 1-2 мл при инфекционном титре от 5,5 до 6,0 lg ТЦД 50/мл, кратность - 21-28 дней. При изучении иммуногенеза у телят после иммунизации моновакциной против ВД установлено, что титр антител к 4 дню возрос с 0,8 log₂ до 4,20,4 log₂ к 21 дню и до 5.20.4 log₂ к 42 дню. У контрольных животных отмечалось увеличение титров антител, но их уровень был значительно ниже, чем у иммунизированных животных. При этом активно происходит биосинтез антител I_g M и Ig G -классов. Так, количество антител I_g M класса возросло по сравнению с исходными данными в 1,27 раза, к 11 — в 1,34 раза, а к 42 — в 1,59 раза.

При иммунизации телят вакциной против ВД отмечено увеличение Т-лимфоцитов их количество возросло к 11 дню с 25,61,7 до 37,62,6%, к 21 до 39,01,1% и к 42 дню снизилось до 27,81,72%. Количество В-лимфоцитов к 11 дню возросло с 16,41,3 до 26,00,86%, к 21 до 22,41,7% и к 42 дню снизилось до 18,40,6%.

Установлено, что вакцина против ВД обладает высокой интерфероногенной активностью - титр интерферона у вакцинированных телят возрос к 21 дню с 32,68,37 до 70,16,29%. К 42 дню его титр снизился до 50,83,52%.

Вакцина против ВД обладает высокой профилактической эффективностью, котрая составляет 91-96,9% и широко используется в неблагополучных по данной инфекции животноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Вирусвакцина живая культуральная против парагриппа-3 крупного рогатого скота.

Разработка моновакцины против ПГ-3 включала отработку оптимальной дозы вируса и кратности его введения, что составляло 1-2 мл при инфекционном титре вируса от 5,5 до 6,5 lg ТЦД 50/мл, двукратно с интервалом 21-28 дней. При изучении иммунного ответа у телят после иммунизации моновакциной против ПГ-3 установлено, что титр антител к 4 дню возрос в 3,0 раза, к 11 дню — в 3,2 раза, а к 42 дню — в 5,2 раза по сравнению с исходными данными. После вакцинации активно происходит биосинтез антител I_g M -класса. На 4 день после иммунизации их количество возросло по сравнению с исходными данными в 1,19 раза, к 11 — 1,35 раза, к 42 дню — в 1,45 раза. У телят этой группы уровень антител I_g G-класса был несколько ниже, чем уровень антител I_g M-класса. К 14 дню отмечено увеличение уровня I_g G-антител в 1,1 раза, к 21 дню - в 1,18 раза,к 42 дню - в 1,39 раза.

При иммунизации телят вакциной против ПГ-3 отмечено увеличение количества Т-лимфоцитов - их количество возросло к 11 дню с 26,41,7 до 42,40,9%, к 21 до 38,81,5%, но к 42 дню снизилось до 28,80,9%. Количество В-лимфоцитов к 11 дню возросло с 17,13% до 22,600,86%, к 21 дню - до 20,81,7%, а к 42 дню снизилось до 19,81,3%. Вакцина также обладает интерфероногенной активностью. При иммунизации телят возрастание интерферона продолжалось до 21 дня с 22,79,9% до 42,13,0%. К 42 дню его титр снизился до 32,92,47%.

Вакцина обладает высокой профилактической эффективностью, которая составляет 88,2-91%% и широко используется в неблагополучных по парагриппу-3 животноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Вирусвакцина бивалентная живая культуральная против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота Инфекционный ринотрахеит и вирусная диарея имеют широкое распространение среди крупного рогатого скота в различных странах мира - инфицированность стад крупного рогатого скота этими вирусами составляет от 25 до 70%. Животные в основном переболевают ассоциациированной ринотрахеитно-диарейной инфекцией, удельный вес которой составляет 32,8-61,3%, тогда как моноинфекции выявляются значительно реже: ИРТ - 1,6-4,3%, ВД - 10,0 - 30,2%.

При отработке соотношения монокомпонентов вакцины оптимальным соотношением монокомпонентов бивалентной вирус-вакцины против ИРТ и ВД крупного рогатого скота является 1:1 при инфекционном титре вирусов 5,0 lg ТЦД 50/мл. При этом, уже начиная с 10-го дня наблюдения титры антител к вирусу ИРТ возрастали в с 0,2 до 2,5 log₂ , а ВД - с 0,4 до 4,8 log₂. Титр поствакцинальных антител продолждал увеличиваться до 60-го дня наблюдения и составил соответсвенно 7,6 и 7,9 log₂.

У телят, иммунизированных бивалентной и моновакцинами против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота, наиболее активно шел биосинтез антител, относящихся к I_g M-классу. На 10-й день после иммунизации их количество было максимальным. После этого отмечается снижение биосинтеза антител Ig M-класса, но увеличение биосинтеза антител Ig G-класса.

Изучение динамики Т- и В-лимфоцитов у телят, иммунизированных бивалентной вакциной против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота отмечено увеличение Т-лимфоцитов к 11 дню с 26,41,7 до 42,40,9%, В-лимфоцитов – с 17,01,3 до 23,60,9%, после чего происходило их снижение к 42 дню соответственно до 28,00,9 и 19,81,3. У телят контрольной группы соджержание Т- и В-лимфоцитов было практически на одном уровне на протяжение всего срока наблюдения. При иммунизации телят бивалентной вакциной против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи возрастание интерферона продолжалось до 11 дня с 32,32,8 до 62,31,7%, а затем к 28 дню его титр снизижался до 23,11,24%. У телят контрольной группы титр интерферона был на уровне 25,76,9 – 35,54,14%.Бивалентная вакцина против ИРТ и ВД обладает высокой профилактической эффективностью, которая составляет 88,0-90,8% широко используется в неблагополучных животноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Вирусвакцина трехвалентная живая культуральная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота. На основании проведения анализа результатов серологических исследований было установлено, что в хозяйствах Республики Беларусь животные в основном переболевают ассоциацией вирусов ИРТ+ВД+ПГ-3, удельный вес которой составляет 32,8-61,3%, тогда как моноинфекции выявляются значительно реже: ИРТ - 1,6-4,3%, ВД - 10,0 - 30,2%, ПГ-3 - 5,5-11,2%. Это послужило основанием для разработки трехвалентной живой культуральной вирус-вакцины против данных инфекций. При определении различных соотношений монокомпонентов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3 нами установлены оптимальные соотношения монокомпонентов 1:1:1 при инфекционном их титре каждого вируса 5,0-5,5 lg ТЦД 50/мл. При этом биосинтез антител ко всем трем вирусам начинается уже после первого ведения вакцины и на 10-й день его уровень в 3-5 раз выше исходного – титр возрастал с 1:2-1:4 до 1:8-1:16. Дальнейшее возрастание титров антител продолжалось до 45 дня наблюдения и достигало 1:32-1:128. Отмечается также и увеличение количества Т-и В-лимфоцитов. Так, количество Т-лимфоцитов к 21 дню увеличилось с 28,43,05 до 41,25,3%, но к 45 дню снизилось до 38.14.91%. Количество В-лимфоцитов увеличилось к 21 дню с 16,41,76 до 25,43,33%, а к 45 дню снизилось до 22,32,87%. Биосинтез имуноглобулинов начался уже с первых дней после вакцинации. Их концентрация к 10-му дню у имунизированных телят возросла с 14,8 до 16,5 г/л, а к 45 дню - до 17,1 г/л. К 65 дню произошло некоторое их снижение до 16,2 г/л. У контрольных животных титры антител, концентрация глобулинов оставались практически на одном уровне. При изучении бактерицидной активности сыворотки крови у иммунизированных телят отмечено ее увеличение с 55,6+7,0 до 78,7+14,2% к 30 дню, после чего отмечено ее снижение к 45 дню до 50,8+8,3%; концентрация лизоцима возросла к 10 дню с 1,99+0,3 до 2,88+0,5 мкг/мл, после чего произошло его снижение к 45 дню до 1,05+0,4 мкг/мл; титр интерферона возростал к 21 дню с 35,6+8,3 до 70,1+6,1%, после чего отмечалось снижение до 56,9+9,1%. У контрольных животных эти показатели имели недостоверные колебания по сравнению с исходными данными.

Производственные испытания трехвалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота показали, что после иммунизации телят в условиях животноводческих комплексов заболеваемость с признаками пневмоэнтеритов составляла от 4,3% до 11,4%, тогда как в группе неиммунизированных телят заболеваемость была 95,5%- 97,1%. В опытных группах телят падежа и вынужденного убоя не было, а в контрольной - отход составлял от 7,1% до 14,5%.

У телят, полученных от иммунизированных коров, с признаками пневмоэнтеритов заболевало от 5,9% до 7,1% животных, отход составлял от 0,88% до 2,1%. Среди телят, полученных от неиммунизированных коров заболеваемость составляла от 77,9 до 90,8%, отход от 8,3% до 11,4%. Профилактическая эффективность вакцины на телятах составляла 95,7%, на коровах - 92,9%.

Ассоциированная вакцина против рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота. При исследовании материала от больных энтеритами новорожденных телят в биологическом материале обнаруживаются антигены рота- и коронавирусов у 42 - 64% обследованных животных, у переболевших пневмоэнтеритами телят количество положительных проб было на 24-33,5% больше, чем у больных, что указывает на этиологическую роль вышеуказанных вирусов в возникновении заболевания.

При отработке режимов инактивации рота- и коронавирусов было установлено, что инактиванты формалин, теотропин в небольших концентрациях (0,125% - 0,3%) вызывают их полную инактивацию.

При изучении эффективности инактивации вакцинных штаммов, установлено, что наиболее эффективным явился способ инактивации с помощью 0,2% раствора теотропина.

На основании проведенного изучения иммунного ответа после введения кроликам и крысам инактивированных рота- и коронавирусов крупного рогатого с различными адъювантами установлено, что оптимальными адъювантами являются: для ротавирусов – 1 и 2% суспензия целлюлозы (титр антител 3,5 и 4,5 log₂ у кроликов и 3,5 log₂ у крыс) и 10%-ный эмульсиген (3,5 log₂ у кроликов и 4,0 log₂ у крыс); для коронавирусов - 2% суспензия целлюлозы (титр антител 4,38 log₂ для кроликов и 3,38 log₂ для крыс) и 10% эмульсиген (титр антител 4,50 log₂ для кроликов и 4,80 log ₂ для крыс). Оптимальной дозой монокомпонентов при инфекционном титре 6,5 lg ТЦД 50/мл является 2,5 мл на голову, что дает максимальное возрастание титров антител после введения монокомпонентов вакцины. Оптимальное соотношение монокомпонентов 1:1 при титре каждого вируса 6,5 lg ТЦД 50/мл в дозе 2,5 мл. При этом отмечается максимальная выработка антител ко всем изучаемым вирусам. При изучении иммуногенеза установлена активизация биосинтеза иммуноглобулинов: их количество возросло с 42,31+2,1 до 56,08+3,95 г/л на 60 день после вакцинации. Вакцинация коров ассоциированной инактивированной вакциной против рота- и коронавирусной инфекции способствует существенному биосинтезу противовирусных антител к вышеуказанным вирусам: так к 45 дню титр антител к ротавирусу возрос с 5,2 до 7,8, коронавирусу – с 2,2 до 5,9 log₂.

У новорожденных телят, родившихся от коров, иммунизированных инактивированной вакциной против рота- и коронавирусов и получавших молозиво в течение первых 2 часов, формируется напряженный колостральный иммунитет, способствующий защите организма теленка от вышеуказанных инфекций – так титр антител через 12 часов после рождения составлял 1:512-1:1024 и оставался на этом уровне на протяжении всего срока наблюдения.

Профилактическая эффективность ассоциированной вакцины против рота- и коронавирусной инфекции новорожденных телят в животноводческих хозяйствах Беларуси составила от 85,0 до 95,6 %.

Поливалентная инактивированная культуральная вирус-вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота «Тетравак»

Конструирование поливалентной инактивированной культуральной вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота «Тетравак» проводилось по описанной выше последовательности:

При конструировании вакцины «Тетравак» вирусы ИРТ, ВД и коронавирусы культивировали на перевиваемых клетках почки теленка (МДБК); ротавирусы – на перевиваемиых клетках почки свиней (СПЭВ). Преимущественное культивирвоание - роллерное, при котором титр вируса возраста на 1,0-2,0 lg ТЦД 50/мл по сравнению со стационарным методом. При отработке инактивации вакцинных штаммов установлено, что оптимальным инактивантом является теотропин. В ходе подбора адъюванта установлено, что оптимальными являются 2% суспензия активированной целлюлозы (производства БГУ, Республика Беларусь) и 10% эмульсиген (производство США). На основании результатов отработки технологии изготовления вакцины установлено, что инфекционный титр монокомпонентов должен быть не менее 6,5 lg ТЦД 50/мл, оптимальное соотношение монокомпонентов – 1:1:1:1, вирусы подвергают инактивации теотропином в концентрации 0,2% в течение 24 часов при 37 С и добавляют адъювант – 2% суспензию активированной целлюлозы с 4 – 5% СООН-групп или эмульсиген до 10% концентрации. При исследовании сывороток крови коров, которым вводили вакцину, выявлен высокий уровень биосинтеза иммуноглобулинов – их уровень повывсился на 60-й день после вакцинации на 7,8%, титры антител к каждому из вирусов увеличились на 4-6 log₂.

При условии выпойки в течение первых 2 часов молозива от матерей, иммунизированных поливалентной инактивированной вакциной против инфекционного ринотрахеита, диареи, рота- и коронавирусов у телят формируется напряженный колостральный иммунитет, способствующий защите организма теленка от вышеуказанных инфекций. При исследовании уровня антител с помощью РНГА, их титр через 12 часов после рождения составлял 9 – 10 log₂ и оставался на этом уровне на протяжении всего срока наблюдения.

При проведении производственных испытаний поливалентная инактивированная вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, коронавирусной инфекций крупного рогатого скота имеет 93,3 – 95,1%-ю профилактическую эффективность.

^ Рекомбинантная вакцина против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота с использованием генетически модифицированных штаммов бактерий

На первом этапе конструирования вакцины установлено норвое явление в биологической науке - спонтанная персистенция генома вирусов ИРТ и ВД в бактериальных клетках. Наличие общих антигенов бактерий и вирусов было установлено при изучении антигенного родства Bacillus alvei с вирусом инфекционного ринотрахеита крупного рогатого и Bacillus subtilis с вирусом диареи крупного рогатого скота с использованеим иммунологических реакций – РА, РТНГА, ИФА. Подтверждение наличия генома вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в бактериальной клетке установлено с помощью точечной гибридизации с радиоактивной меткой, с использованием ДНК-зонда, постановкой полимеразной цепной реакции (ПЦР) при установлении комплементарности участков ДНК вируса инфекционного ринотрахеита в Bac. аlvei и участков РНК вируса диареи в Bacillus subtilis.

Исследования, проведенные с использованием ПЦР показали, что в этом же штамме Bac.alvei (КМИЭВ-11) имеются участки ДНК, идентичные вирусу ИРТ (рисунок 5). Для сравнения использовали ДНК, выделенную из вируса ИРТ (штамм 4016) и ДНК из Bac.alvei (КМИЭВ-11). Маркеры – участки ДНК – стандартные олигонуклеотидные праймеры вируса ИРТ. Аналогично в Bac. Subtilis (КМИЭВ-39) установлены участки РНК, комплементарные вирусу диареи крупного рогатого скота. На рис. 6 представлены результаты ПЦР при выявлении комплементарных участков РНК вируса диареи в Bac. Subtilis (КМИЭВ-39).Для сравнения использованы различные штаммы бацилл из коллекции микроорганизмов РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского»

Примечание: Маркеры - стандартные олигонуклеотидные праймеры вируса ИРТ; « - » - отрицательный контроль; I – ДНК из Bac.alvei (КМИЭВ-11), II – ДНК из вируса инфекционного ринотрахеита (штамм 4016). Рисунок 5. Результаты постановки ПЦР при выявлении комплементаных участков ДНК вируса ИРТ в Bac.alvei (КМИЭВ-11).	Примечание: №1 - Bacillus 100b(НИИП), №2 - Bacillus 200а (НИИП), №3 - Bacillus Бел НИИЭВ-2, №4 - Bacillus Subtilis Бел НИИЭВ, №5 - Bacillus Subtilis ВВИ-1, 6 - Bacillus alvei ВВИ – 1, K+VD – положительный контроль вируса диареи Рисунок 6. Результаты постановки ПЦР при выявлении комплементаных участков РНК вируса диареи в Bacillus Subtilis (КМИЭВ-39).

В результате проведенных исследований доказано, что инфекционные вирусы животных способны проникать в бактериальную клетку и участки их генома интегрироваться в геном бактерий, что в дальнейшем приводит к биосинтезу вирусспецифических белков в бактериальной клетке, а введение бактерий животным позволяет вырабатывать вирусспецифические антитела у животных, иммунизированных данными бактериями. Так, у мышей, которых иммунизировали Bac.alvei (КМИЭВ-11) титр антител к вирусу ИРТ составлял 3,5+0,3 log ₂, а у животных, получавших вирус ИРТ - 4,25+0,5 log₂. При иммунизации мышей Bac.Subtilis (КМИЭВ-39), титр противодиарейных антител был 3,0+0,2 log₂, а вирусом диареи - 4,5+0,6 log₂. Полученные данные свидетельствуют о выработке противовирусных вируснейтрализующих антител у животных, иммунизированных бактериями с геномом вирусов и экспрессированными вирусспецифическими белками.

На основании доказательства наличия бактерий, несущих на своей поверхности вирус-специфические белки для специфической профилактики вирусных инфекций животных нами разработан бактериальный препарат, названный нами "Бактерин-3". Его готовили из 48-часовой агаровой культуры бактерий Bac.alvei (КМИЭВ-11) и Bac.Subtilis (КМИЭВ-39) при концентрации бактерий 1,0 млрд. микробных тел в мл, которые инактивировали формальдегидом. Телятам вводили препарат в дозе 5,0 мл двукратно с интервалом в 14 дней .

При определении уровня γ -глобулинов у подопытных телят, по­лучавших "Бактерин-3", были получены довольно существенные результаты, свидетельствующие об активном образовании антител-иммуноглобулинов у телят подопытной группы - к концу 3-го месяца их количество составляло 16,26+1,3-17,84+1,35% (Р<0,01), тогда как в контроле не превышало 13,59+0,64% (Р< 0,001). При изучении иммуноглобулинов различных классов установлено довольно значительное увеличение количества Ig G у телят, полу­чавших "Бактерин-3". Так, если в контроле максимальное их количество не превышало 18,59+1,48 г/л, то у иммунизированных телят их количество на 14 сутки после введения препарата со­ставило 24,17+2,31 г/л (Р<0,01) - 3 группа и 21,00+2,38 г/л (Р< 0,01) – контрольная группа. Количество Ig A и Ig М у подопытных животных не отличалось от контрольной группы. Результаты постановки РНГА, поставленной с целью выявления противовирусных антител свидетельствовали, что через 35-40 дней после иммунизации «Бактерина-З» титры антител к вирусам ИРТ и ВД у животных были в наиболее высоких титрах 7,8-6 (ИРТ) и 7-7,5 log₂ (ВД). Результаты исследования форменных элементов крови - количе­ства лейкоцитов, а такажее анализ лейкоформулы показал, что у всех привитых "Бактерином-З" телят отмечен лейкоцитоз. В первые 14 дней - нейтрофилия, а к концу опыта (35-30 дни) - лимфоцитоз. Профилактическая эффективность «Бактерина-З» составила в среднем 70%; за­болеваемость не превышала 30%, тогда как в контрольной группе заболеваемость составила 62%


Стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью иммуностимулирующих препаратов природного происхождения.

Для решения вопроса повышения эффективности иммунизации наряду с улучшением технологии содержания и кормления животных, важным моментом является стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью иммуностимулирующих препаратов. Для этого нами были проведены исследования по изучению стимуляции поствакцинального иммунитета с помощью «Апистимулина-А» при вакцинации крупного рогатого скота против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи бивалентной вакциной. Нами изучен иммунный ответ организма телят на введение бивалентной вакцины против ИРТ и ВД на фоне стимуляции поствакцинального иммунитета с помощью препарата “Апистимулин-А”.

При изучении динамики антител Ig M и Ig G-классов в ИФА после вакцинации против ИРТ и ВД на фоне обработок “Апистимулином-А” установлено, что биосинтез антител Ig M-класса активно происходит у как телят, иммунизированных одной вакциной, так и на фоне активизации иммунитета. Показатель E (отношение показателя оптической плотности исследуемой сыворотки к показателю оптической плотности отрицательной сыворотки) у телят, иммунизированных одной вакциной начал постепенно возрастать уже с 4 дня с 1,68 до 1,71. К 21 дню этот показатель достиг 1,91, к 28 — 1,94; к 65 дню — 2,01. У телят, получавших вакцину на фоне обработки “Апистимулином-А”, биосинтез антител Ig M-класса был несколько выше, чем у телят, получавших чистый вирусный антиген. При этом показатель E до иммунизации составил 1,63, к 4 дню — 1,93, к 21 — 1,93, к 28 — 1,98, к 65 — 2,03. Биосинтез антител Ig G-класса был значительно слабее, чем Ig M. Так, до иммунизации показатель E составил 1,45, к 4 дню снизился до 1,31, к 21 дню несколько повысился до 1,39, к 42 дню он составил 1,74, к 65 — 1,64. После иммунизации телят вакциной на фоне обработки “Апистимулином-А” наблюдалось некоторое увеличение количества антител к вирусу ИРТ, относящихся к иммуноглобулинам G-класса. Так, к 4 дню их количество увеличилось в 1,14 раза, к 11 — в 1,26 раза, к 42-му - в 1,53 раза по сравнению с исходными данными.

У телят после иммунизации одной вирус-вакциной отмечается активизация биосинтеза иммуноглобулинов M-класса. После вакцинации увеличение количества иммуноглобулинов этого класса происходило с 5,680,13 до 6,80,13 г/л к 11 дню, после чего отмечено их некоторое уменьшение.

Иммунизация телят вирус-вакциной на фоне активизации иммунитета “Апистимулином-А” наряду с биосинтезом противовирусных антител активизирует и биосинтез всех иммуноглобулинов. Так, при иммунизации телят вакциной на этом фоне количество иммуноглобулинов M-класса было значительно выше, чем у телят, привитых одной вакциной. Их концентрация к 4 дню возросла с 5,560,09 до 7,80,1 г/л, а к 11 дню — до 8,00,21 г/л, тогда как у телят, получавших моновакцину, к 11 дню концентрация I_g M была 6,80,13 г/л. После 11 дня биосинтез Ig M снижался. Однако биосинтез иммуноглобулинов G класса был значительно активнее и их концентрация продолжала возрастать до 65 дня наблюдения. Количество Ig G начало возрастать уже начиная с 4 дня с 14,40,09 до 15,20,3 г/л, к 11 дню — до 17,40,15 г/л, а к 42 дню — до 18,40,37 г/л.

У телят, иммунизированных вакциной без иммуностимулятора, количество Т-лимфоцитов к 11 дню возросло с 29,21,7% до 44,41,7%. Затем произошло снижение их количества к 21 дню до 40,41,29%, к 42 до 29,41,5%. Аналогично изменялось количество и В-лимфоцитов у телят этой же подопытной группы. К 11 дню наблюдения их количество возросло с 15,21,3% до 23,20,8%, а к 21 дню снизилось до 20,61,07%, к 42 дню - до 18,61,5 г/л. У телят, иммунизированных вакциной против ИРТ и ВД на фоне обработки “Апистимулином-А”, также происходило увеличение как Т-, так и В-лимфоцитов. Количество Т-лимфоцитов у телят, получавших вакцину на фоне активизации иммунной системы, возросло с 28,83,9 до 48,81,7% к 11 дню, но к 21 дню снизилось до 42,21,7%, и к 42 дню до 29,21,5%. Аналогично изменялось и количество В-лимфоцитов. К 11 дню оно возросло с 16,81,3 до 30,01,7%, к 21 дню снизилось до 21,81,0 и к 42 дню — до 20,21,93%.

Установлено, что на фоне активизации иммунитета титр интерферона возрастал также до 11 дня с 40,07,29 до 65,65,3%. К 65 дню его титр снизился до 44,32,85%. Иммунизация телят на фоне активизации иммунитета способствовала усилению активизации специфических клеточных и гуморальных звеньев иммунитета — Т- и В-лимфоцитов, концентрации антител и иммуноглобулинов, антигенсвязывающих клеток. Это свидетельствует о формировании более напряженного иммунного ответа на введение вакцин после активизации иммунитета.


Комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий по применению иммунобиологических препаратов для профилактики и терапии инфекционных пневмоэнтеритов у телят

Проведенные исследования по разработке иммунобиологических препаратов для профилактики и терапии пневмоэнтеритов телят позволили обобщить и составить схему их использования для выращивания здоровых животных и получения от них экологически безвредной животноводческой продукции.

^ А. Обработка сухостойных коров и нетелей:

1а. Контроль качества кормов, нормализация и балансирование рационов премиксами в соответствии с потребностями;

2а. Вакцинация коров по схеме:

- поголовная двукратная иммунизация коров во второй половине стельности живыми моно- и ассоциированными вакцинами против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3 (в зависимости от эпизоотической ситуации хозяйств);

-иммунизация сухостойных коров ассоциированной инактивированной вакциной против рота- и коронавирусной инфекции новорожденных телят или поливалентной инактивированной вакциной против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции (в зависимости от эпизоотической ситуации хозяйств);

3а. Содержание глубокостельных коров изолированно в родильных отделениях;

4а. Обработка разработанными иммуностимулирующими препаратми глубокостельных коров и нетелей за 10-15 дней до отела для достижения у новорожденных телят высокого уровня иммуноглобулинов.

^ Б. Обработка новорожденных телят:

1б. Обработка телят с лечебной и профилактической целью иммуностимулирующими препаратами - бактериальным липополисахаридом из Bacillus alvei или «Апистимулином-А»;

2б. Содержание телят в изолированных пластмассовых домиках для разрыва эпизоотической цепи;

^ В. Выращивание телят старше 20–25 дней:

1в. Антистрессовые обработки телят иммуностимулирующими препаратами - бактериальным липоплисахаридом из Bacillus alvei или «Апистимулином-А»;

2в. Двукратная иммунизация телят живыми моно- и ассоциированными вакцинами против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3 (в зависимости от эпизоотической ситуации хозяйств).

Применение данного комплекса в хозяйствах Республики Беларусь позволило в 2–3 раза снизить заболеваемость и в 1,5–2 раза – отход телят по причине заболевания их инфекционными пневмоэнтеритами.