Совершенствование ранней диагностики туберкулеза животных

Вид материала

Содержание

3.2.2. Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови свиней
3.2.3. Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови собак
3.2.4. Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови кроликов
3.3. Исследование возможности использования РСЛЛ для дифференциации неспецифических реакций у коров, положительно реагировавших
3.3.1. Исследование РСЛЛ крови у коров, положительно реагировавших
3.3.2. Исследование реакцией специфического лизиса лейкоцитов крови

Подобный материал:

1 2 3

^ 3.2.2. Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови свиней

при введении живых микобактерий вакцины БЦЖ

Для опыта были отобраны 30 голов поросят трехмесячного возраста, принадлежащих гражданам города Новочеркасска.

Поросят разделили на пять групп по 5 голов в каждой, которым подкожно инъецировали по одной, две, три, четыре и пять прививочных доз вакцины БЦЖ.

Количество лейкоцитов (в среднем по группе) у свиней в день введения микобактерий вакцины БЦЖ во всех пробах колебалось от 10,7 до 10,9·10 ⁹ /л, т.е. было в физиологических пределах.

Через 24 часа после введения вакцины в пробах крови с физиологическим раствором, ППД–туберкулином для птиц и КАМ количество лейкоцитов было примерно одинаковым. При введении одной иммунной дозы 11,8 - 11,9·10 ⁹, двух доз 13,2·10 ⁹, трех доз 14,8 - 14,9·10 ⁹, четыре доз 15,4 - 15,5·10 ⁹, пяти доз 15,8 - 15,9·10⁹, т.к. сенсибилизированные лейкоциты в реакцию с физиологическим раствором и неродственными аллергенами не вступают, и лизис лейкоцитов отсутствует.

В пробах крови от вакцинированных БЦЖ поросят, несмотря на лейкоцитоз в организме, in vitro в пробах крови при взаимодействии с ППД–туберкулином для млекопитающих количество лейкоцитов стало уменьшаться через 24 часа в результате лизиса сенсибилизированных клеток при встрече с родственным аллергеном. При введении поросятам одной иммунной дозы вакцины БЦЖ, количество лейкоцитов in vitro (в среднем по группе) равнялось 10,5·10 ⁹ /л, двух, трех, четырех доз – 10,0 ·10 ⁹ /л, пяти доз - 9,9 ·10 ⁹ /л (Р<0,01). Процент лизиса лейкоцитов составил при вакцинации одной дозой 12%, двумя – 14%, тремя - 33%, четырьмя - 36%, пятью дозами - 38%, то есть с увеличением дозы микобактерий БЦЖ сенсибилизированных лейкоцитов становилось больше, и потому возрастал процент лизиса лейкоцитов.

Через 48 часов количество лейкоцитов в пробах крови с ППД–туберкулином для млекопитающих in vitro достигло минимального значения. Затем количество лейкоцитов увеличивалось. Лизис лейкоцитов составил соответственно введенным дозам 33%, 41%, 47%, 52%, 55%. Через 48 часов отмечался наибольший процент лизиса лейкоцитов в опытных пробах.

В пробах крови, содержащих физиологический раствор, ППД-туберкулин для птиц и КАМ, количество лейкоцитов повышалось и достигло своего максимального значения через 48 часов с момента введения поросятам вакцины БЦЖ. С увеличением дозы введенной вакцины БЦЖ увеличивалось количество лейкоцитов в пробах крови, содержащих физиологический раствор, ППД–туберкулин для птиц и КАМ, то есть возрастание дозы микобактерий БЦЖ сопровождалось увеличением лейкоцитоза в организме, следовательно, повышалось количество лейкоцитов в пробах крови с неспецифическими аллергенами (опытные пробы) и с физиологическим раствором (контрольная проба). Затем (через 72 часа) наблюдали снижение числа лейкоцитов, в этих пробах крови.

У вакцинированных свиней положительные показатели РСЛЛ в пробах крови с ППД–туберкулином для млекопитающих обнаруживали через 24 – 120 часов после введения одной, двух, трех, четырех доз и через 24-144 часа при пяти прививочных дозах вакцины БЦЖ.

В опытах, проведенных на поросятах, количество лейкоцитов в пробах крови, содержащих ППД–туберкулин для птиц и КАМ, было аналогичным, как в пробах с физиологическим раствором. РСЛЛ в пробах крови с ППД–туберкулином для птиц и КАМ была отрицательной, что подтверждает специфичность РСЛЛ с ППД–туберкулином для млекопитающих.

У свиней, вакцинированных вакциной против бруцеллеза шт. 82, количество лейкоцитов в пробах крови с туберкулином и физиологическим раствором было практически одинаковым, следовательно, РСЛЛ с ППД – туберкулином для млекопитающих, ППД – туберкулином для птиц и КАМ была отрицательной, т.к. лейкоциты, сенсибилизированные другим аллергеном в реакцию с физиологическим раствором и неродственными аллергенами не вступают и лизис лейкоцитов отсутствует. Это свидетельствует о специфичности реакции.

^ 3.2.3. Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови собак

при введении живых микобактерий вакцины БЦЖ

Опыты проводили на собаках, принадлежащих гражданам города Новочеркасска Ростовской области.

Сформировали пять опытных и одну контрольную группу животных. В каждой группе находилось по 5 собак.

Для проведения исследований собакам подкожно инъецировали одну (0,05мл), две (0,1мл), три (0,15мл), четыре (0,2мл) и пять (0,25мл) прививочных доз вакцины БЦЖ. Животным контрольной группы вводили одну дозу вакцины против бруцеллеза шт. 82.

В день введения вакцины БЦЖ количество лейкоцитов во всех пробах крови по группам in vitro было практически одинаковым.

Через 24 часа после введения животным микобактерий БЦЖ при взаимодействии крови с физиологическим раствором вне организма количество лейкоцитов (в среднем по группе) составило при введении одной прививочной дозы вакцины БЦЖ - 6,1·10⁹/л, двух доз - 6,9·10⁹/л, трех доз - 7,4·10⁹/л, четырех доз - 7,7·10⁹/л, пяти доз - 8,3·10⁹/л. В пробах крови с ППД–туберкулином для птиц и КАМ были получены данные, близкие к таковым в пробах крови с физиологическим раствором. Обнаруживали лейкоцитоз, так как организм реагирует на введение вакцины БЦЖ, и сенсибилизированные лейкоциты не вступают во взаимодействие с неродственными антигенами.

При дальнейшем исследовании обнаружили, что через 48 часов количество лейкоцитов (в среднем по группе) в пробах крови in vitro, содержащих физиологический раствор, достигло максимального уровня, при введении одной иммунной дозы вакцины - 6,2·10⁹/л; двух доз - 7,4·10⁹/л; трех доз - 8,5·10⁹/л; четырех доз - 9,5·10⁹/л; пяти доз - 10,8·10⁹/л. Количество лейкоцитов в пробах крови, содержащих физиологический раствор, было большим в два и более раза по сравнению с количеством лейкоцитов в день введения вакцины. Затем количество лейкоцитов начинало повышаться. Угасание реакции связано с вырабатыванием иммунной системой нормальных антител.

В среднем по группе число лейкоцитов в пробах крови с ППД–туберкулином для млекопитающих уменьшается и достигает минимума через 48 часов при введении одной дозы БЦЖ - 4,6·10⁹/л; двух доз - 3,8·10⁹/л; трех доз - 3,4·10⁹/л; четырех доз - 3,3·10⁹/л; пяти доз - 3,1·10⁹/л. Лизис лейкоцитов в пробах крови с ППД–туберкулином для млекопитающих был наибольшим и составил при введении одной дозы БЦЖ - 26%, двух доз - 49%, трех доз - 60%, четырех доз - 65%, пяти доз - 71%. Чем выше доза введенной вакцины БЦЖ, тем больший процент лизиса лейкоцитов. При введении больших доз возбудителя в организме наступает сильная аллергия и больше сенсибилизированных лейкоцитов разрушается при встрече с родственным (специфическим) антигеном, что видно из опытов в РСЛЛ вне организма.

Установлено, что через 72 часа количество лейкоцитов (в среднем по группе) в пробах крови с ППД–туберкулином для млекопитающих увеличивалось, а в пробах с физиологическим раствором с ППД–туберкулином для птиц и КАМ уменьшалось. Процент лизиса лейкоцитов через 72часа в пробах крови с ППД–туберкулином для млекопитающих равен при введении одной иммунной дозы 23%, двух доз - 39%,трех доз - 50 %, четырех доз - 60%, пяти доз - 64%.

Положительные показатели реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) в пробах крови, содержащих ППД-туберкулин для млекопитающих, отмечали при введении одной дозы вакцины БЦЖ через 24 – 96 часов, двух доз - через 24 -120 часов, трех доз - 24 – 120 часов, четырех доз 24 – 168 часов, пяти доз 24 – 240 часов.

Активность реакции специфического лизиса лейкоцитов характеризуется тем, что с повышением введенной дозы живых микобактерий вакцинного шт. БЦЖ животному возрастает показатель РСЛЛ и продолжительность сенсибилизации лейкоцитов.

Реакция специфического лизиса лейкоцитов в пробах крови опытных групп, содержащих ППД-туберкулин для птиц и КАМ, была отрицательной и колебалась до 3%.

У вакцинированных собак одной дозой противобруцеллезной вакцины реакция специфического лизиса лейкоцитов в пробах крови с ППД–туберкулином для млекопитающих, ППД–туберкулином для птиц и КАМ была отрицательной. Количество лейкоцитов в опытных и контрольных пробах крови с туберкулинами, КАМ и физиологическим раствором было практически одинаковым, что указывает на специфичность реакции лизиса лейкоцитов, так как в пробах крови сенсибилизированные лейкоциты не вступают во взаимодействие с неродственными антигенами.

^ 3.2.4. Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови кроликов

при введении живых микобактерий вакцины БЦЖ

Для поведения опытов отобрали 15 кроликов и разделили их на три группы.

После введения пяти, десяти доз микобактерий вакцины БЦЖ кроликам опытных групп и одной дозы вакцины противобруцеллезной шт. 82 животным контрольной группы, была взята кровь и разделена на пробы.

При исследовании установлено, что в день введения вакцины количество лейкоцитов во всех группах составило 7,9– 8,8·10⁹/л.

В пробах крови от кроликов, вакцинированных пятью дозами живых микобактерий вакцины БЦЖ, с физиологическим раствором в момент введения вакцины, количество лейкоцитов в среднем по группе было 8,8·10⁹/л. Затем количество лейкоцитов увеличивается и через 24 часа составило 11,3·10⁹/л, а через 48 часов достигает максимального уровня - 16,1·10⁹/л. Это связано с усилением функциональной деятельности кроветворных органов, вызванной поступающими в организм антигенами - микобактериями БЦЖ.

При взаимодействии крови вне организма с ППД–туберкулином для млекопитающих через 24 часа наблюдали самое низкое содержание лейкоцитов. Реакция специфического лизиса лейкоцитов через 24 часа равна 58%, через 48 часов - 71,4%, 72 часа - 70,5%. Максимальный процент лизиса лейкоцитов был зарегистрирован через 48 часов, затем процент лизиса лейкоцитов уменьшался. Положительная РСЛЛ с ППД–туберкулином для млекопитающих наблюдалась через 24 - 96 часов.

Количество лейкоцитов в пробах крови с ППД–туберкулином для птиц и КАМ было аналогичным, как и в пробах крови с физиологическим раствором. Реакция специфического лизиса лейкоцитов с ППД–туберкулином для птиц и КАМ была отрицательна (от -1% до 1%), что свидетельствует о специфичности реакции, так как сенсибилизированные лейкоциты не вступают во взаимодействие с чужеродными аллергенами.

Исследованиями установлено, что при введении десяти доз живых микобактерий вакцины БЦЖ, через 24 и 48 часов наименьшее количество лейкоцитов in vitro было в пробах крови с ППД–туберкулином для млекопитающих. Уменьшение количества лейкоцитов в пробах крови с однородным антигеном ППД–туберкулином для млекопитающих нельзя отнести к лейкопении, так как по существу лизис лейкоцитов произошел вне организма и лейколиз вызван усиленным разрушением сенсибилизированных лейкоцитов при воздействии специфического аллергена.

Определено, что при взаимодействии крови с ППД–туберкулином для млекопитающих процент лизиса лейкоцитов через 24 часа составлял 56%, через 48 часов - 72%, через 72 часа - 41%.

Затем количество лейкоцитов начинало повышаться и соответствовало норме через 672 часа.

В пробах крови с физиологическим раствором при введении десяти доз вакцины БЦЖ количество лейкоцитов стало повышаться через 24 часа. Наибольшее количество лейкоцитов in vitro зафиксировали через 96 часов после введения вакцины БЦЖ. Затем количество лейкоцитов медленно снижалось и соответствовало норме (число лейкоцитов в день введения вакцины) через 672 часа.

При повышении дозы живых микобактерий вакцинного шт. БЦЖ, увеличивается количество сенсибилизированных лейкоцитов, возрастает процент лизиса лейкоцитов и продолжительность реакции, этим характеризуется активность реакции специфического лизиса лейкоцитов.

Результаты в пробах крови с ППД–туберкулином для птиц и КАМ были практически одинаковыми с пробами крови, содержащими физиологический раствор, следовательно, РСЛЛ отсутствовала, что свидетельствует о специфичности реакции, так как лейкоциты не вступают в реакцию с чужеродными аллергенами.

У вакцинированных одной дозой противобруцеллезной вакцины шт. 82 кроликов РСЛЛ с ППД–туберкулином для млекопитающих, ППД–туберкулином для птиц, КАМ была отрицательной, так как в крови отсутствовали сенсибилизированные лейкоциты к этим аллергенам – диагностикумам. Количество лейкоцитов в пробах крови, содержащих туберкулин и физиологический раствор, у животных было практически одинаковым.

Отсутствие реакции лизиса лейкоцитов в пробах крови у вакцинированных животных вакциной противобруцеллезной шт. 82 , содержащих ППД–туберкулин для млекопитающих указывает на специфичность реакции, так как диагностикумы – аллергены не вступают в реакцию с сенсибилизированными лейкоцитами иного аллергена.

^ 3.3. Исследование возможности использования РСЛЛ для дифференциации неспецифических реакций у коров, положительно реагировавших

на туберкулин

^ 3.3.1. Исследование РСЛЛ крови у коров, положительно реагировавших

на туберкулин в Матвеево-Курганском районе

Диагностику туберкулеза реакцией специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) в производственных условиях выполняли в СПК «Рассвет» Матвеево-Курганского района, Ростовской области.

27 ноября 2006 г. на бойне СПК «Рассвет» был произведен комиссионный контрольно–диагностический убой семи коров, реагирующих на туберкулин, с последующим проведением послеубойной ветеринарно-санитарной экспертизы.

Перед убоем у коров взяли кровь для исследования реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ).

При исследовании установлено, что у трех (43%) коров реакция специфического лизиса лейкоцитов с ППД–туберкулином для млекопитающих, ППД–туберкулином для птиц и КАМ была отрицательной, т.е. процент лизиса лейкоцитов был равен 1% - 4%.

У четырех коров (57%) лизис лейкоцитов в пробах крови с ППД–туберкулином для млекопитающих составил 27%, 29%, 36%, 71%, тогда как РСЛЛ с ППД-туберкулином для птиц и с КАМ была отрицательной.

При проведении послеубойной ветеринарно-санитарной экспертизы семи реагирующих на туберкулин коров только у четырех (57%) были положительными показателями РСЛЛ в пробах крови с ППД–туберкулином для млекопитающих. У двух (29%) из них обнаружены изменения в лимфатических узлах, характерные для туберкулеза: у одной в подчелюстном, у второй в надартериальном лимфатических узлах. В тушах двух убитых коров (29%) с положительной реакцией на туберкулиновую пробу и положительными показателями РСЛЛ, патологоанатомических изменений, характерных для туберкулеза, во внутренних органах и лимфатических узлах визуально не обнаружено. Это, связано с недавним инфицированием животных возбудителем туберкулеза, поэтому патологоанатомические изменения еще не успели сформироваться. Кроме этого установлено, что положительные реакции на внутрикожное введение туберкулина с отрицательными показателями РСЛЛ в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих были у двух (29%) глубокостельных (7 – 8,5 мес. беременности) коров и у одной (14%) - с острым эндометритом.

У семи коров (100%) с положительной туберкулиновой пробой, РСЛЛ в пробах с ППД–туберкулином для птиц и КАМ отрицательна, т.к. сенсибилизация не вызвана птичьими и атипичными микобактериями.

^ 3.3.2. Исследование реакцией специфического лизиса лейкоцитов крови

у коров в Сальском районе, положительно реагировавших на туберкулин

В производственных условиях диагностику туберкулеза РСЛЛ выполняли в ОАО «Южное», Сальского района, Ростовской области.

24 августа 2009 г. на мясокомбинате Песчанокопского района был произведен комиссионный контрольно–диагностический убой 32 коров, реагировавших на туберкулин, с последующей ветеринарно-санитарной экспертизой.

Перед убоем у коров была взята кровь для исследования в реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ). Результаты исследований по количеству лейкоцитов и показателям РСЛЛ у коров, с выраженной реакцией на туберкулин представлены в таблице №3.

Из 32 коров, реагировавших на внутрикожное введение туберкулина, только у восьми (25%) РСЛЛ была положительна при взаимодействии проб крови с ППД – туберкулином для млекопитающих. Процент лизиса составил у коров 19%, 20%, 23,1%, 23,8%, 24,5%, 30,2%, 31%, 32,7%.

Исследованиями установлено, что в пробах с ППД–туберкулином для птиц у восьми (25%) животных лизис лейкоцитов составил 14,3%, 15,8%, 20,1%, 21%, 23,1%, 23,8%, 27,3%, 34,5%.

У семи (22%) коров положительная РСЛЛ была с КАМ. РСЛЛ составила 19%, 20%, 23,2%, 23,8%, 24,6%, 28,6%, 33,3%.

Из них у шести (19%) коров положительная РСЛЛ наблюдалась как с ППД–туберкулином для млекопитающих, так и с ППД–туберкулином для птиц. У двух коров (6,3%) положительная реакция была на ППД–туберкулин для млекопитающих, ППД–туберкулин для птиц и КАМ. У восемнадцати (56%) животных, реагировавших на внутрикожное введение туберкулина, реакция специфического лизиса лейкоцитов была отрицательна во всех пробах крови.

Послеубойный осмотр туш и внутренних органов 32 коров, реагирующих на туберкулин, показал, что из восьми (25%) коров с положительными показателями РСЛЛ в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих, только у одной (3%) обнаружены в заглоточных лимфатических узлах изменения, характерные для туберкулеза, у двух (6%) – эхинококк в печени, у трех (9%) - стельность, у двух (6%) - стельность и эхинококк в печени.

Из 32 коров, реагирующих на внутрикожное введение туберкулина, у 14 (44%) были обнаружены эхинококковые пузыри в печени и у одной (3%) - в легких. В одном случае (3%) был обнаружен гнойный абсцесс в печени. Двадцать голов (63%) были стельные, из них четыре (13%) коровы были больны эхинококкозом, а у одной (3%) обнаружены туберкулезные изменения в заглоточных лимфатических узлах.

Таблица 3.

Количество лейкоцитов, показатели РСЛЛ и патологоанатомические изменения у коров в Сальском районе, положительно прореагировавших на туберкулин.

№ п.п.	Инвентарный №	Количество лейкоцитов при взаимодействии крови с	РСЛЛ, %	Патологоанатомические изменения, стельность
Физ р-ром	ППД – Т для мл.	ППД – Т для пт.	К А М	ППД – Т для мл.	ППД – Т для пт.	К А М
1	5948	5,2	3,5	5,2	5,2	32,7	0	0	Ст.7мес., изменения, характерные для туберкулеза в заглоточных лимф. узлах
2	5070	5,8	4,0	3,8	5,8	31,0	34,5	0	Ст.3мес.
3	5625	6,3	4,4	5,0	6,3	30,2	20,1	0	Эхинококкоз печени.
4	4533	4,9	3,7	4,9	4,9	24,5	0	0	Эхинококкоз печени.
5	5926	10,5	8,0	8,0	8,0	23,8	23,8	23,8	Ст.3мес., эхинококкоз печени.
6	5602	6,5	5,0	5,0	6,5	23,1	23,1	0	Ст.8мес.
7	5631	9,5	7,6	8,0	9,5	20	15,8	0	Ст.3мес.
8	5563	10,5	8,5	8,3	7,5	19	21	28,6	Ст.3мес., эхинококкоз печени.
9	5916	5,5	5,0	4,0	4,4	9,1	27,3	20	Эхинококкоз печени.
10	5567	5,6	5,6	5,6	4,3	0	0	23,2	Ст.6мес., эхинококкоз печени.
11	5632	6,6	6,6	6,6	4,8	0	0	24,6	Эхинококкоз печени.
12	3016	4,2	4,2	3,6	4,2	0	14,3	0	Эхинококкоз печени.
13	5077	4,5	4,5	4,5	3,0	0	0	33,3	Ст.6мес.
14	5923	5,8	5,8	5,8	4,7	0	0	19	Ст.8мес.
15	5578	6,2	6,0	6,2	6,2	3,2	0	0	Эхинококкоз печени.
16	6626	5,1	5,1	5,1	5,1	0	0	0	Эхинококкоз печени.
17	5573	5,3	5,0	5,3	5,3	7	0	0	Ст.7мес., эхинококкоз печени.
18	5599	6,5	5,9	6,5	6,5	9,2	0	0	Эхинококкоз печени.
19	5660	4,8	4,8	4,8	4,5	0	0	6,3	Эхинококкоз легких.
20	5664	6,2	6,2	6,2	6,0	0	0	3,2	Эхинококкоз печени.
21	5538	5,4	4,9	5,3	5,4	9,3	1,8	0	Эхинококкоз печени.
22	7406	5,5	5,5	5,5	5,5	0	1,8	0	Ст.7мес.
23	5137	6,4	5,9	6,4	6,4	7,8	0	0	Ст.7мес.
24	5241	15,5	15,5	15,5	15,0	0	0	3,2	Ст.5мес.
25	5946	10,0	10,0	10,0	9,8	0	0	2	Гнойный процесс в печени.
26	5176	5,0	5,0	4,9	4,8	0	2	4	Ст.8мес.
27	5668	5,0	5,0	4,8	5,0	0	4	0	Ст.8мес.
28	4506	5,3	5,3	5,3	5,3	0	0	0	Ст.4мес.
29	6514	7,1	7,1	7,1	7,1	0	0	0	Ст.3мес.
30	5027	6,5	6,5	6,5	6,5	0	0	0	Ст.6мес.
31	6063	5,5	5,5	5,5	5,5	0	0	0	Ст.6мес
32	4922	6,8	6,8	6,8	6,8	0	0	0	Ст.7мес.

Blog

Совершенствование ранней диагностики туберкулеза животных

Содержание