Патология печени у норок в условиях клеточного звероводства и ее коррекция природным сорбентом 16. 00. 02 патология, онкология и морфология животных

Вид материала

Автореферат диссертации

Содержание Официальные оппоненты Авзалов Фоат Зиятдинович Общая характеристика работы Цель и задачи исследований Научная новизна. Теоретическая и практическая ценность работы. Основные положения выносимые на защиту Апробация материалов диссертации. Реализация результатов исследований. Публикации результатов исследований. Структура и объем диссертации. 2. Материал и методики исследований 3. Результаты собственных исследований 3.2. Клинико-морфологическая характеристика 3.3. Коррекция метаболизма у норок применением кормовых 5. Практические предложения Список публикаций по теме диссертации

Подобный материал:

• Дизрегуляционная патология при хронической почечной недостаточности у собак и кошек, 308.03kb.
• Сравнительная оценка полихимиотерапевтического метода лечения неоплазий молочных желёз, 489.14kb.
• Влияние стрессовых ситуаций на организм спортивных лошадей и разработка методов, 404.72kb.
• Программа вступительного экзамена в аспирантуру по специальной дисциплине 06. 02., 152.65kb.
• Морфофункциональная характеристика печени и поджелудочной железы крыс при низкой обтурационной, 277.65kb.
• Клинико-морфологические особенности нарушения метаболизма усельскохозяйственных и экзотических, 425.77kb.
• Возрастная морфология мускулатуры тазовой конечности у маралов 06. 02. 01 диагностика, 342.39kb.
• Темы рефератов для поступления в аспирантуру по научной специальности 06. 02. 01 -диагностика, 17.74kb.
• Клинико-морфологические изменения при хронической почечной недостаточности кошек, 349.92kb.
• Изменения секреторно-моторной функции желудка лошади при остром расширении 06. 02., 474kb.

На правах рукописи


КОВАЛЬЧУК ВЛАДИМИР АНАТОЛЬЕВИЧ


ПАТОЛОГИЯ ПЕЧЕНИ У НОРОК В УСЛОВИЯХ

КЛЕТОЧНОГО ЗВЕРОВОДСТВА И ЕЕ КОРРЕКЦИЯ

ПРИРОДНЫМ СОРБЕНТОМ


16.00.02 – патология, онкология и морфология животных


АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата

ветеринарных наук


Саранск – 2009

Работа выполнена в отделе животноводства ГУ «Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения РАСХН»


Научный руководитель: доктор ветеринарных наук

Ежков Владимир Олегович


Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Здоровинин Владимир Александрович

(Мордовский государственный университет

им. Н.П. Огарева, г. Саранск)


доктор ветеринарных наук, профессор

Авзалов Фоат Зиятдинович

(Казанская государственная академия

ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана)


Ведущая организация: ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (ВНИВИ г. Казань)


Защита диссертации состоится « 19 »_июня___ 2009 г. в 10 часов на заседании объединенного диссертационного совета ДМ 212.117.15 при ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» (430045, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68)


С диссертационной работой можно ознакомиться в Научной библиотеке ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева».

Автореферат диссертации опубликован на сайте Мордовского государственного университета www. mrsu. ru

E-mail: dsovet@mrsu. ru


Автореферат разослан «13» мая 2009 г.


Ученый секретарь

диссертационного совета Т.А. Романова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ


Актуальность темы. Морфо-функциональные особенности печени у разных видов животных обусловлены воздействием факторов эволюционного развития, типа кормления, условий содержания и др. В условиях доместикации пушные звери часто страдают нарушениями обмена веществ в результате погрешностей кормления и гиподинамии при клеточном содержании. В звероводстве постоянно ведется работа по оптимизации питания зверей для реализации их генетического потенциала по получению высококачественной пушнины (Е.Г. Квартникова 1999; В.А. Берестов, 2002, Н.А. Балакирев, 1997, 2003; Д.Н. Перельдик, 2008 и др.).

В технологии пушного звероводства неизбежно применение нетрадиционных кормов, заменителей белка и пищевого жира, биостимуляторов и биологически активных веществ. С этой точки зрения большой интерес вызывают природные минералы, которые являются источниками биогенных минеральных веществ и обладают уникальными ионообменными и сорбционными свойствами. Они оптимизируют питание, корригируют обмен веществ, обладают лечебным эффектом при патологии органов пищеварения (А.В. Якимов, 2003; К.Х. Папуниди и др. 2005; В.Е. Улитько с соавт. 2003; Z. Pacajova, 1997; K. Suvegova et al., 2001 и др.).

Проведение комплексных исследований по изучению патологии печени и влияния природных минералов на различные органы и ткани пушных зверей для выяснения их действия на обмен веществ, обеспечения детоксикации и восполнения минеральной недостаточности является актуальным для ветеринарной науки и практики.

Цель и задачи исследований. Цель работы – изучить структурно-функциональные изменения печени при патологии у норок в условиях доместикации при общепринятом рационе и применении кормовых добавок природного сорбента.

Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:

- провести анализ состояния звероводства в Республике Татарстан по производственным показателям, заболеваемости и падежу зверей, проявлению гепатопатологии;

- выявить особенности макро- и микроморфологии печени у здоровых норок и при гепатопатологии;

- определить изменения паренхиматозных и стромальных клеток печени норок при алиментарном и инфекционном гепатозе;

- выяснить влияние бентонитовой кормовой добавки на структурно-функциональное состояние печени и других органов у норок;

- изучить особенности морфологии печени у норок при применении различных доз природного минерала.

Научная новизна. При анализе показателей звероводства в Республике Татарстан установлено широкое распространение патологии печени. Впервые изучены макро- и микроморфологические особенности органа при алиментарном и инфекционном гепатозе у пушных зверей с наиболее частым проявлением заболевания у норок. Применение Тарн-Варского бентонита в рационах норок оказало положительное воздействие на организм зверей, обусловило снижение проявления гепатопатологии и плазмоцитоза, улучшило показатели печеночно-соматического индекса. Установлена зависимость массы тела зверей и печени от особенностей кормления. Получены новые данные при проведении световой и электронной микроскопии о морфологии печени норок в условиях клеточного ведения звероводства.

Теоретическая и практическая ценность работы. Полученные результаты исследований по структурно-функциональным особенностям печени норок имеют большое значение для эволюционной, сравнительной и видовой морфологии. Они расширяют представления об этиологии и патогенезе гепатопатологии у пушных зверей, позволяют раскрыть некоторые механизмы адаптационных и компенсаторных процессов в организме при доместикации в условиях клеточного звероводства. Данные о цитологии гепатоцитов и синусоидных клеток печени норок, в рационы которых включили природный сорбент, позволяют использовать эти показатели в качестве критериев морфологической оценки применения нетрадиционных кормовых добавок для зверей, а также в сравнительном плане и для других видов животных. Показано положительное влияние оптимальных доз природного сорбента на морфологию печени.

Результаты исследований диссертации, ее основные положения и выводы используются в учебном процессе профильных высших профессиональных образований.

Основные положения выносимые на защиту:

– особенности сравнительной макро- и микроморфологии печени у здоровых норок и при гепатозах свидетельствуют о структурно-функциональных изменениях органа, являющихся в определенной мере показателями состояния здоровья, прогнозирования возможности развития гепатопатологии и разработки мер ее профилактики;

– морфо-функциональное состояние печени норок, получавших кормовую добавку бентонита, характеризует благотворное воздействие природного сорбента на цитологию гепатоцитов и синусоидных клеток органа.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях и получили положительную оценку на 4-ой Всероссийской научно-практической конференции «Влияние антропогенных факторов на структурное состояние органов, тканей и клеток организма человека и животных» (Казань, 1997); Международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию образования зооинженерного факультета КГВАМ (Казань, 2005); Всероссийской научно-практической конференции КГАВМ (Казань, 2006); Научно-практической конференции молодых ученых и специалистов КГАВМ им. Н.Э. Баумана (Казань, 2005); Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарии» (Екатеринбург, 2007); ежегодных научных отчетных сессиях НИИ АХП РАСХН (2006-2008 г.г.).

Реализация результатов исследований. Основные положения диссертационной работы внедрены в зверохозяйствах Республики Татарстан.

Теоретические и практические аспекты диссертационной работы используются в учебном процессе в ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» и научно-исследовательской работе отдела животноводства ГУ «Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения РАСХН».

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации оубликовано 8 статей и тезисов, в том числе две публикации в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 147 страницах компьютерного набора и включает введение, обзор литературы, материал и методики исследований, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, предложения производству, список литературы и приложение, иллюстрирована 61 рисунком и 21 таблицей. Библиографический список представлен 203 источниками, в том числе 77 работ иностранных авторов.


2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЙ


Работа выполнена в отделе животноводства Татарского научно-исследовательского института агрохимии и почвоведения РАСХН (ТатНИИ АХП) по программе «Фундаментальных и прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации на 2006-2010 г.г.», № ГР 0120070477. Она является самостоятельным разделом комплексных исследований по изучению клинико-морфологических особенностей нарушения метаболизма у млекопитающих животных и птиц и коррекции его кормовыми добавками.

Материалом исследований были статистические данные ветеринарных отчетов о заболеваемости, падеже и проявлении гепатопатологии у пушных зверей клеточном ведении звероводства, результаты патологоанатомического вскрытия трупов и тушек убойного молодняка звероводческих хозяйств Республики Татарстан, органы и ткани норок, получивших в эксперименте природный сорбент.

В экспериментах использовали технологические пробы бентонита Тарн-Варского месторождения Республики Татарстан. Сорбент вводили в корм норкам в сухом, измельченном виде с 45-суточного возраста до убоя в 180 суток. Для этого по принципу аналогов были сформированы 4 группы по 50 норок в каждой: 1-ая – контрольная, получала общий рацион (ОР); 2-ая – ОР+0,5 % бентонита; 3-ая – ОР+1,0 % бентонита; 4-ая – ОР + 1,5 % бентонита к массе комбикорма. Содержание и кормление норок соответствовали зоотехническим нормам и направлению продуктивности.

Опытные группы формировали из клинически здоровых норок с учетом происхождения, пола, возраста и живой массы.

В работе применяли статистические, клинические, патологоанатомические, гистологические, гистохимические, электронномикроскопические, биохимические, морфометрические методики исследований. Всего в экспериментах использовано 200 стандартных темно-коричневых (СТК) норок (рис. 1).

Клиническое исследование норок проводили по общепринятой методике (В.А. Берестов, 2003). Особое внимание уделяли исследованию печени и выявлению признаков ее функционального расстройства. Учитывали общее состояние, пищевую возбудимость, прирост массы норок, изучали морфологические и биохимические показатели крови. Содержание гемоглобина в крови определяли гематиновым методом с применением гемометра ГС-3 (метод Сали). Подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов проводили с использованием счетной камеры с сеткой Горяева. При проведении биохимических исследований взятых проб крови определяли содержание: общего белка в сыворотке крови рефрактометрическим методом на ИРФ-22; общего кальция в крови - по А. Вичеву и В. Каракошеву; неорганического фосфора - по Дозе в модификации М.М. Алимовой (В.С. Постников, 1977); каротина в сыворотке крови – по В.Ф. Коромыслову и Л.А. Кудрявцевой; билирубина по Ендрашеку, Клеггорну, Грофу; аспартатааминотрансферазы (АСАТ) и аланинаминотрансферазы (АЛАТ) по Т.С. Пасхиной. Биохимические исследования проводили в Республиканской ветеринарной лаборатории г. Казани, используя стандартные наборы реактивов фирмы ЛАХЕМА из г.Брно.

После убоя норок выполняли патологоанатомический осмотр органов и тканей. Для морфологических, гистологических, гистохимических, электронномикроскопических исследований у здоровых норок, спонтанно больных гепатозом и плазмоцитозом, подопытных с включением в рационы бентонита брали кусочки печени, почек, селезенки. Материал фиксировали в 10 %-ном водном растворе нейтрального формалина, этанол-формалина (9:1) в зависимости от методики дальнейшей окраски. Уплотнение взятого материала проводили путем заливки в парафин по общепринятой методике, а также замораживанием в микротом-криостате. Гистосрезы окрашивали гематоксиним и эозином, азур П-эозином, по ван-Гизону.

РНК выявляли по Браше, гликоген и нейтральные мукополисахариды – ШИК-реакцией по Мак-Манусу, липиды – суданом черным Б, активность кислой фосфатазы – по Гомори и азосочетанием, активность щелочной фосфатазы – по Гомори.



Рис. 1. Направление и объем исследований

Для электронномикроскопических исследований клеток печени кусочки органа вырезали бритвенным лезвием в виде пластинки толщиной 0,1 мм³ и фиксировали в другой порции этого раствора в течении 4-6 часов при температуре 4 ºС.

В качестве заливочных сред использовали аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получали на ультратоме LKB-III, контрастировали 2 %-ным спиртовым раствором уранилацетата в течение 15 минут и цитратом свинца по Рейнольдсу; просматривали в электронном микроскопе ЭПМ-100БР при ускоряющем напряжении 75 К.

Питательность компонентов, входяших в состав рационов, рассчитывали по табличным данным (Н.Ш. Перельдик с соавт., 1981).

Все цифровые данные были обработаны при помощи ПК с использованием электронных таблиц Exel, выведением М, m, коэффициента достоверности Р с учетом критерия Стьюдента.


3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ


3.1. Анализ состояния звероводства в хозяйствах Республики Татарстан (производственные показатели, заболеваемость и падеж зверей, проявление гепатопатологии)


Звероводство Республики Татарстан культивируется в четырех звероводческих хозяйствах: ЗАО «Бирюли» Высокогорского района, ЗАО «Матюшино» Лаишевского района, ОАО СХП «Кощаковский» Пестречинского района и ООО АФ «Берсутский» Мамадышского района.

ЗАО «Бирюли» является племенным звероводческим заводом, а ЗАО «Матюшино» и ОАО СХП «Кощаковский» – племенные репродукторы федерального подчинения, получившие лицензии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации по состоянию на 01.01.2000 года.

В специализированных звероводческих хозяйствах республики производят норку, песца, лисицу и соболя. В 1990-1991 годы в самый плодотворный период развития звероводства в девяти зверосовхозах РТ производилось свыше 1 млн. штук шкурок всех видов зверей.

Период конца девяностых – начала 2000гг. - реформирование сельского хозяйства - характеризовался для звероводства республики спадом производства, уменьшением поголовья зверей и ликвидацией пяти зверохозяйств. Основными причинами сокращения поголовья зверей стали диспропорция цен на корма и конечную звероводческую продукцию. В структуре производства пушнины доля, приходящаяся на норководство, самая большая и составила по республике 91,3%.

В 2008 гг. поголовье основного стада норок четырех зверохозяйств по республике увеличилось до 58175 голов (против 30525 голов от девяти зверосовхозов в 2000), а денежный объем от реализации шкурок, соответственно, увеличился до 400 млн. рублей, в сравнении со 183,5 млн. рублей в 2000 году. Следует отметить, что в период реформирования сельского хозяйства поголовье норок основного стада в ЗАО «Бирюли» оставалось постоянным и составляло 14175 голов.

В структуре звероводства норководство составляет в ЗАО «Бирюли» 78,6 %, в ООО АФ «Берсутский» - 95,4, ОАО СХП «Кощаковский» - 100,0, ЗАО «Матюшино» - 94,3%.

Нами в условиях хозяйств были проведены исследования и анализ заболеваемости и падежа норок от незаразных болезней по хозяйствам Республики Татарстан за 2007 год. При рассмотрении структуры незаразной патологии основными нозологическими формами были болезни печени, составлявшие 28,7 – 35,7%, органов пищеварения 12,1 – 21,5%, мочекаменная болезнь 10,1 – 20,1%, лактационное истощение – 7,9 – 14,9%. Следует отметить, что наибольший процент заболеваемости печени в структуре незаразной патологии регистрировали в зверохозяйстве ООО АФ «Берсутский», наименьшее в ЗАО «Бирюли». Болезни органов пищеварительного тракта регистрировали с большими показателями у норок ОАО СХП «Кощаковский» (рис. 2).



Рис. 2. Структура падежа норок основного стада по РТ

Большая заболеваемость и падеж норок по причине патологии печени обусловили настоятельную необходимость в установлении этиологии, изучении патогенеза и изыскания способов и средств по снижению заболеваемости и падежа норок от гепатопатологии.


3.2. Клинико-морфологическая характеристика

патологии печени у норок


При изучении макроморфологии печени у 6-месячных здоровых норок отмечали сохранение формы органа с подразделением на соответствующие доли, объём не менялся, консистенция была упругой, окраска – красно-коричневая, на разрезе рисунок дольчатого строения слабо выражен, орган был умеренно полнокровен. При микроскопии печени дольки ее на поперечном срезе имели многогранную форму. Печёночные балки, состоящие из гепатоцитов, радиально расходились от центральной вены, анастомозируя между собой. В некоторых центролобулярных гепатоцитах выявлялись мелкокапельные жировые включения. Гепатоциты имели полигональную форму, содержали крупное ядро округлой формы. В перипортальной части долек выявляли полиплоидию паренхиматозных клеток, свойственную физиологической регенерации. Междольковые желчные протоки печени имели различный диаметр. В зависимости от диаметра они были выстланы однослойным кубическим или призматическим эпителием, формирующим бухтообразные выросты слизистой с хорошо выраженной центральной частью протока. В кубическом эпителии ядра были округлые и располагались в центре клетки, а в призматическом они имели овальную форму и находились ближе к базальному полюсу клетки. В ядрах выявляли одно или два ядрышка и мелкодисперсный хроматин, концентрирующийся в большей степени около кариолеммы. Перипортальные гепатоциты при окраске гематоксилином и эозином содержали в цитоплазме небольшие липидные вакуоли. свидетельствующие о мелкокапельном липидозе, свойственном инфильтративному ожирению.

Ультраструктура гепатоцитов характеризовалась гексагональной формой клеток с центрально расположенным ядром. Значительную часть цитоплазмы занимали мембранные структуры гранулярной ЭПС, цистерны которой в центролобулярных клетках более или менее равномерно были распределены среди других клеточных органелл и лишь изредка организовывались в крупные пакеты. В перипортальных гепатоцитах структуры гранулярной эндоплазматической сети более или менее равномерно распределялись среди других клеточных органелл. Везикулярные структуры агранулярной ЭПС чаще выявлялись в синусоидальных зонах гепатоцитов. Локализация их обычно совпадала с таковой у гранул гликогена. В отношении резервов гликогена гепатоциты значительно различались между собой. В большинстве из них количество гранул диффузно распределялось по цитоплазме с некоторым преобладанием в синусоидальной зоне.

Митохондрии сравнительно равномерно были распределены в гиалоплазме. Они имели электронно-прозрачный матрикс, чётко выраженный рисунок крист, формируемый внутренней мембраной. В перипортальных гепатоцитах иногда выявляли вакуолизацию матрикса. В гепатоцитах хорошо развит лизосомальный аппарат. Первичные лизосомы локализовались преимущественно в околоядерной зоне.

Структура синусоидальной и билиарной поверхностей гепатоцитов, так же, как и синусоидов и желчных капилляров, характеризовалась трехслойностью мембраны. Билиарные полюсы клеток формировали желчные капилляры с наличием экзоцитоза капель желчи в просветы. На полутонких срезах среди синусоидных клеток можно было дифференцировать эндотелиоциты, макрофаги-ретикулоэндотелиоциты, липоциты и единичные зернистые pit-клетки. Следует отметить значительное содержание среди них липоцитов. Эндотелиоциты выстилали просвет синусоид, имели удлиненно-овальное ядро, выбухающее в его просвет. Липоциты локализовались в перисинусоидальном пространстве (пространство Диссе), имели звёздчатую форму за счёт длинных цитоплазматических отростков, тянущихся от тела клетки на значительные расстояния. Овальное светлое ядро содержало одно или два ядрышка. В цитоплазме имелись многочисленные осьмиофильные вакуоли, свидетельствующие о липидных включениях.

Частота поражения печени, большой процент гибели животных от этих заболеваний, скудность данных литературы по патологии печени пушных зверей при клеточном разведении привели к необходимости проведения клинических и патоморфологических исследований у норок с признаками гепатопатологии.

Самой распространённой нозологической формой гепатопатологии являлась алиментарная гепатодистрофия проявлявшаяся жировым гепатозом. При клиническом осмотре основными симптомами служили увеличение объема брюшной полости, а само животное теряло в весе и истощалось. Видимые слизистые оболочки были анемичными или слабожелтушные. Однако клинические признаки в своём классическом проявлении звероводы и ветеринарные врачи выявляли не всегда, и диагноз ставился на основании результатов патологоанатомического вскрытия.

При патологоанатомическом вскрытии трупов подсосных щенков с прижизненными симптомами гепатопатологии, которая протекала остро, в силу высоких обменных процессов у них, устанавливали гипотрофию, вздутие живота. Волосяной покров перепачкан каловыми массами жёлто-грязного до дегтярного цвета, видимые слизистые оболочки и естественные отверстия бледные или желтоватые. При внутреннем осмотре в брюшной полости наблюдали увеличенную в 2-3 раза печень. Цвет её варьировал от светло-коричневого до бледно-серого, консистенция дряблая, при разрезе орган полнокровный, рисунок дольчатого строения сглажен. Желчный пузырь увеличен, наполнен желчью тёмно-зелёного цвета. Желудок и кишечник вздуты, их слизистая катарально воспалена, с множественными мелко- и крупноточечными кровоизлияниями, содержимое тёмного цвета и имело специфический запах. Селезёнка увеличена в размере, окрашена от тёмно-вишневого до светло-красного цвета. Сердце округло-овальной формы, все полости его переполнены кровью, миокард дряблый, цвета варёного мяса. Лёгкие спавшиеся бледно-розового цвета, при нажатии из бронхов выделялась пенистая жидкость.

При патологоанатомическом вскрытии трупов молодняка с острой формой гепатоза отмечали вздутие живота при общем истощении трупа, видимые слизистые оболочки и естественные отверстия бледные или бледно-желтые, подкожная соединительная ткань в области живота отёчна. При внутреннем осмотре в брюшной полости наблюдали скопление желтоватой прозрачной жидкости. Слизистая оболочка желудка и кишечника набухшая, гиперемирована, с мелкоточечными и полосчатыми кровоизлияниями. Печень увеличена в объёме, дряблой консистенции, неравномерно окрашена от светло-коричневого до охряно-жёлтого цвета с признаками токсической гепатодистрофии и жирового гепатоза. Желчный пузырь переполнен желчью тёмно-зеленого цвета. Селезёнка увеличена в объёме, тёмно-вишнёвого цвета, полнокровна. Почки увеличены в объёме, упругой консистенции, капсула легко снимается, на разрезе граница коркового и мозгового вещества сглажена, мозговой слой тёмно-красного цвета. Легкие маловоздушные, розового цвета иногда с тёмно-красными очагами, тестообразной консистенции, при разрезе из бронхов выделялась пенистая жидкость.

При патологоанатомическом вскрытии взрослых норок, при наружном осмотре отмечали общее истощение (труп выглядел как плётка). Волосяной покров, на брюшке, в области ануса и тазовых конечностей свалявшийся и загрязнён каловыми массами. При съёмке шкурки подкожная соединительная ткань суховата, подкожная жировая прослойка отсутствовала. Лёгкие спавшиеся, тестообразной консистенции, из крупных бронхов выделяется небольшое количество пенистой жидкости. Сердце округло-овальной формы, все полости его переполнены кровью, миокард дряблый, цвета варёного мяса. В желудке кормовые массы отсутствовали, содержимое тёмного дегтярного цвета, слизистая желудка и кишечника истончённая с наличием на поверхности густой слизи. Печень несколько увеличена в объёме, дряблой консистенции. Окраска её от тёмно-вишнёвой до светло-коричневой, поверхность не ровная. На разрезе полнокровна, рисунок дольчатого строения сглажен. Желчный пузырь переполнен тягучей желчью, тёмно-зелёного цвета. Селезёнка незначительно увеличена, ржаво-коричневого цвета, свойственного гемосидерозу, почки с признаками нефроза.

При гистологическом исследовании отмечали жировую дистрофию печёночных клеток, дискомплексацию гепатоцитов в балках, с наличием мелкокапельного липидоза центролобулярных гепатоцитов. Крупнокапельный липидоз перипортальных гепатоцитов свидетельствовал о выраженной жировой дистрофии. Иногда в этих участках отчётливо была заметна дистония синусоидальных капилляров с явлением агрегации эритроцитов. При токсической гепатодистрофии выявляли центролобулярно микронекрозы. В перипортальных гепатоцитах наблюдали выраженную жировую дистрофию.

Для уточнения некоторых вопросов патогенеза гепатопатологии мы провели сравнительный анализ гематологических показателей у норок. Проведенные морфологические исследования крови позволили выявить, что все показатели у клинически здоровых зверей были в пределах физиологических границ. Было установлено, что у клинически здорового молодняка норок количество эритроцитов (7,74±1,52 10¹²/л) и содержание гемоглобина (153,3±6,24 г/л) находилось на уровне нижних границ физиологических показателей (7,7 – 13,1), в то время как у самок основного стада показатель количества эритроцитов имел средне нормативные значения – 8,91±1,67 10¹²/л. Количество лейкоцитов у клинически здоровых зверей обеих исследованных групп было в пределах физиологической нормы. В лейкоформуле выявляли умеренную эозинофилию с повышением количества эозинофилов до 5,3–5,8%, лимфоцитоз с увеличением лимфоцитов у взрослых норок до показателей верхних границ нормы – 40,7% и незначительное уменьшение числа нейтрофилов до нижних физиологических границ. Количественные показатели морфологии крови свидетельствовали об ослаблении защитных свойств организма взрослых норок в сравнении с молодняком. Сравнение показателей клинически здоровых норок с таковыми у норок с проявлением гепатопатологии выявило, что у больных норок было уменьшено количество эритроцитов у молодняка на 2,3 и у взрослых на 11,1%.

Следует отметить, что у молодняка с клиническим проявлением гепатопатологии количество эритроцитов (7,56±1,41 10¹²/л) было ниже физиологических границ, а у взрослых норок (7,92±1,56 10¹²/л) – на уровне нижних значений. Аналогичная тенденция выявлялась в содержании гемоглобина. У больного молодняка показатель гемоглобина был ниже, а у взрослых на нижнем уровне физиологической границы. Сравнение показателей гемоглобина у клинически здоровых (153,3±6,24 и 157,3±7,74 г/л) и больных (149,3±4,92 и 151,2±7,30 г/л) норок выявило, что содержание гемоглобина у больного молодняка на 2,6 и у взрослых самок на 3,9 % ниже значений здоровых зверей. Содержание лейкоцитов у больных зверей имело повышенное значение у молодняка на 26,5%, у взрослых самок на 28,7 %, в сравнении с показателями здоровых.

При биохимическом исследовании крови норок, с клиническим проявлением гепатоза, выявляли нарушение кальций-фосфорного соотношения, которое характеризовалось у самок основного стада показателем 1,1:1,0 - /10,20±0,18/:/8,90±0,18/ и у молодняка 1,2:1,0 - /10,42±0,22/:/8,40±1,13/мг/% . Резервная щёлочность у больного молодняка снижалась с 50,80±1,13 до 30,20±0,13 об%/СО₂, а у самок с 52,90±1,25 до 32,63±0,95 об%/СО₂, тоже самое происходило и с сахаром в крови, показатели которого у здорового молодняка были 93,40±1,10, а у больных 73,30±2,10 мг% и у взрослых самок 89,30±1,71 и 79,40±4,71, соответственно. Активность трансаминаз у больных норок повышались значительно. АсАТ с 66,0±6,2 у здоровых возрастала до 69,0±3,20 усл. ед. у больного молодняка, и с 84,0±1,64 до 91,0±2,24 усл. ед. у самок. АлАТ увеличивалась с 31,20±1,60 у здоровых самок до 45,20±2,60 усл. ед. у больных и с 29,60±0,48 до 34,20±2,28 усл. ед. у молодняка. Содержание общего билирубина также повышалось с 0,16±0,02 и 0,17±0,01 мг/% у здоровых до 0,18±0,02 и 0,20±0,03 мг/% у больных зверей.

В связи с широким распространением Алеутской болезни норок (вирусного плазмоцитоза) с проявлением поражения печени у больных мы изучили особенности патоморфологии печени при этом заболевании.

Основным методом прижизненной диагностики является реакция иммуноэлектроосмофореза (РИЭОФ), которую проводят не менее 3-х раз в год.1-й раз осенью при формировании основного стада, 2-й в декабре и 3-й раз перед гоном в конце февраля. Выборочно проверяются самки, не давшие приплода при беременности. Клинические признаки не отличались специфичностью: отмечали угнетение, снижение пищевой возбудимости, диарею, резкое истощение, иногда внезапную смерть. При наружном осмотре трупы животных сильно истощены. При внутреннем обследовании особенно ярко реагировали селезёнка, которая была увеличена в 3-5 раз с мелкоточечными и крупноточечными кровоизлияниями, орган имел дряблую консистенцию, на разрезе рисунок трабекулярного строения сглажен. Почки также имели специфические изменения – они имели дряблую консистенцию, цвет их варьировал от бледно-коричневого до бело-серого, по всей поверхности выявляли крупноточечные и мелкоточечные кровоизлияния, на разрезе граница коркового и мозгового вещества сглажена. Иногда наблюдали почку бледную, поверхность её была бугристая, а сам орган уменьшен в размере (сморщенная, «крапчатая» почка). Другие органы при макроскопической картине плазмоцитоза не имели каких-либо специфических признаков этого заболевания, хотя всегда были патологически изменены в зависимости от степени протекания плазмоцитоза, особенно в органах пищеварения. Печень несколько увеличена в объёме, неоднородной консистенции, поверхность ее не ровная. Окраска органа от тёмно-вишнёвой до светло-коричневой. Деформация органа, изменение консистенции и окраски свидетельствовали о продуктивном гепатозе при Алеутской болезни, который сопровождался цирротическими изменениями органа. Желчный пузырь переполнен тягучей желчью, тёмно-зелёного цвета.

При дифференциальной диагностике алиментарного и вторичного гепатоза при Алеутской болезни норок основную роль играет гистологическое исследование. У большинства положительно реагирующих на плазмоцитоз норок наблюдалась гепатодистрофия, выраженная в разной степени. В цитоплазме гепатоцитов выявляли мелкоглыбчатую эозинофильную зернистость с наличием жировых вакуолей разной величины. Но самым характерным признаком вторичного гепатоза при алеутской болезни была пролиферативная реакция клеток лимфоидногистиоцитарного характера. В зависимости от стадии болезни клеточный состав инфильтратов был различен. В начальной стадии преобладали В-лимфоциты и гистиоциты, как внутри дольки, так и в междольковой соединительной ткани. Плазматические клетки среди них были единичны. При большей выраженности клинико-анатомической картины болезни в печени выявляли крупнокапельный липидоз с единичными перстневидными клетками. Цитоплазма большинства центролобулярных гепатоцитов содержала эозинофильную зернистость. Эти изменения паренхиматозных клеток свидетельствовали о белково-жировом гепатозе, в какой то степени напоминающий алиментарный первичный гепатоз. Но в отличие от него внутри долек и, особенно, в междольковой соединительной ткани выявляли инфильтраты плазматических клеток. Для дифференциации первичного (алиментарного) гепатоза от вторичного, (при плазмоцитозе) эффективны гистологические методы исследования. Самым характерным признаком вторичного гепатоза при Алеутской болезни является пролиферация и инфильтрация интерстиция печени и почек плазматическими клетками.


3.3. Коррекция метаболизма у норок применением кормовых

добавок бентонита Тарн-Варского месторождения Республики Татарстан


Многими авторами сообщаются положительные результаты по применению кормовых добавок природных минералов для улучшения метаболизма и повышения продуктивности сельскохозяйственных животных и птицы. В последние годы активно используются в качестве кормовых добавок цеолиты, бентониты, глаукониты, фосфориты, сапропели и др. Высокие ионообменные, сорбентные свойства агроминералов позволяют применять их в основном в двух направлениях: как источник микро- и макроэлементов, и как сорбент токсинов в организме животных. Республика Татарстан имеет большие запасы бентонитовых (голубых) глин (более 35 млн.т.), которые расположены в 18 месторождениях, из них в 3 месторождениях ведется добыча, а остальные исследуются и разрабатываются.

Уникальные свойства бентонитов явились основанием к применению их в качестве кормовых добавок для мехового молодняка с целью коррекции обмена веществ в целом и профилактики гепатоза в частности. В динамике опытного периода изучили показатели крови. Кровь, являясь самой подвижной тканью организма, очень четко реагирует на воздействия внешних факторов. При оценке воздействия кормовых добавок на метаболизм молодняка норок необходимо учитывать возрастные изменения крови. Действие бентонита на организм зверей накладывается на физиологические процессы роста и развития молодняка. Нами было установлено, что количество эритроцитов и содержание гемоглобина с возрастом у щенков норок имеет тенденцию к увеличению. Применение бентонита в качестве кормовой добавки в дозах 0,5, 1,0 и 1,5 % к массе корма обусловило повышение количества эритроцитов на 13,6, 11,3 и 6,9 %, в сравнении с контролем. Бентонит в дозах 0,5 и 1,0 % способствовал повышению содержания гемоглобина на 6,1 и 4,7 %. Исследование биохимического состава крови выявило увеличение содержания общего кальция в организме опытных групп норок (табл. 17). У молодняка II опытной группы за период применения бентонита повышение общего кальция составило 12,0 %, у норок III группы – 12,5 %, у аналогов из IV группы 8,0%. Всего к концу опытного периода содержание кальция в сыворотке крови было выше на 12,0 % у зверей II группы и на 8,0 % у зверей III и IV опытных групп (Р≤0,05), в сравнении с контролем. Уровень сывороточных трансаминаз отражает состояние белкового обмена, производство защитных белков организма, является маркером структурно-функциональной характеристики печени. В динамике опыта выявляли, что у контрольных щенков АсАТ увеличился на 12,4 %, у норок II, III и IVопытных групп на 8,6, 11,1 и 1,8 %, соответственно. На конец опыта активность АсАТ опытных норок была ниже контрольных значений у зверей II опытной группы на 4,4, у щенков III - на 3,9 и у молодняка IV опытной группы на 7,9 % (Р≤0,05), что свидетельствовало об улучшении структурно-функционального состояния печени у опытных зверей.

Активность АлАТ имела аналогичную тенденцию. В возрастной динамике происходило нарастание активности у контрольных и опытных щенков на 1,6 – 18,6 %, с наибольшим значением у контрольных зверей (35,1±4,59 усл. ед.), при этом все показатели находились в пределах физиологических границ норм. К концу опытного периода активность АлАТ у контрольных зверей была выше опытных аналогов II, III и IV групп на 11,1 (Р≤0,05), 2,3 и 4,5 % соответственно. В динамике опыта на 1-ые, 30, 60, 90 и 120-ые сутки скармливания бентонита были проведены исследования живой массы и ее прироста у молодняка норок. Было установлено, что наибольшую живую массу к концу опыта имели самцы норок II (2239,83±48,72 г), III (2175,43±49,61 г) и IV (2068,78±53,25 г) опытных групп, в сравнении с показателями контрольных зверей (2012,43±56,28 г), что было выше на 11,3, 8,1 и 2,8 %, соответственно. Было установлено, что в период первой фазы роста молодняка самцов (до августа текущего года) живая масса у щенков была выше на 54,0 - 212,0 г, с наибольшим значением у самцов II опытной группы - 1922,04±28,93 г. Таким образом, применение бентонита в качестве кормовой добавки обусловило увеличение живой массы у самцов мехового молодняка норок к убою на 11,3, 8,1 и 2,8 % у зверей II, III и IV опытных групп в сравнении с контрольными и увеличение живой массы у самок мехового молодняка на 9,8, 7,3 и 3,5 %, в сравнении с контрольными.

Серологические исследования на выявление алеутской болезни норок проводятся четырежды в год. Первое массовое исследование поголовья норок начинается в сентябре-октябре месяце. Проведенные исследования опытных и контрольных норок позволили выявить больных плазмоцитозом зверей. По результатам исследований было установлено, что в группе контрольных норок было положительно реагирующих 17 голов, что составило 34 % к общему поголовью группы. Во II и III опытных группах положительно реагирующих зверей было по 15 голов, или 30 % от общего поголовья опытных зверей этих групп. В IV опытной группе, получавшей к общепринятому рациону 1,5 % кормовой добавки бентонита, больных плазмоцитозом зарегистрировано 14 голов, что составило 28 %.

Патологоанатомическое вскрытие норок контрольной и опытных групп в период убоя зверей для получения шкурок позволило провести учет распространения гепатоза и степени его выраженности (умеренной или значительной). Сравнение показателей таблицы 21 выявило, что поражение печени регистрировали в большей степени у норок контрольной группы. В этой группе было 16 норок с гепатозом, что составило 32 %. Наименьшее количество проявления больных было у норок II опытной группы – 13 голов, что составило 26,0 %. В III опытной группе выявили 14 больных норок, что составило 28,0 % и у норок IV опытной группы зарегистрировано поражение печени у 15 зверей, что составило 30,0 %. В структуре патологии печени опытных норок по макрокартине органа отмечали снижение проявления значительной степени патологии с 30,8 до 26,7 % при увеличении дозы бентонита. Наилучшие результаты достигнуты в группе зверей, получавших 1,0 и 1,5 % бентонита, однако в группе получавшей 0,5 % бентонита так же имелась положительная тенденция в сравнении с показателями норок контрольной группы. При гистологическом исследовании печени установлена меньшая степень изменения структур органа у норок опытных групп, не имеющая дозозависимой характеристики. У норок опытных групп отмечали мелкокапельный липидоз перипортальных гепатоцитов, свойственный инфильтративному ожирению. Таким образом, применение бентонита обусловило уменьшение количества больных гепатозом и одновременно профилактировало развитие поражения печени с более тяжелым проявлением болезни. Наилучшие результаты были получены во II и III опытных группах, где заболевших было 26,0 и 28,0 %, а структура по тяжести проявления была представлена – умеренная/значительная – 69,2/30,8 % у норок II и 71,4/28,6 % у норок III опытных групп.


4. ВЫВОДЫ

1. Анализ состояния звероводства в Республике Татарстан показал, что в структуре производства пушнины доля, приходящаяся на норководство, составила 91,30 % от производимой, заболеваемость норок с проявлением незаразной патологии регистрировали у 8,69%, падеж по этой причине у 6,43 % поголовья, с поражениями печени у больных – 33,27 %, что обусловило необходимость проведения исследований по выяснению этиологии, изучению патогенеза и изысканию методов профилактики гепатопатологии.
   
2. Морфология, цитология, ультраструктура клеток печени здоровых норок «мехового» молодняка характеризовалась слабой выраженностью дольчатого рисунка строения органа из-за незначительного содержания междольковой соединительной ткани, мелкокапельным липидозом перипортальных гепатоцитов в связи с физиологической жировой инфильтрацией клеток, бухтообразными ветвлениями междольковых желчных протоков, значительным содержанием липоцитов (клеток Ито) среди стромальных элементов, что предрасполагает к возникновению жирового гепатоза алиментарного характера.
   
3. Клиническими, гематологическими и патологоанатомическими исследованиями больных норок установлено, что самыми распространенными нозологическими формами гепатопатологии были жировой гепатоз алиментарного характера, токсическая гепатодистрофия, очаговый продуктивный гепатит при заболевании плазмоцитозом:
   

- основные симптомы гепатоза проявлялись нарушениями поведенческих реакций, снижением пищевой возбудимости вплоть до анорексии, усилением жажды, диспепсическими и копростатическими расстройствами органов пищеварения;

- гематологические изменения у больных алиментарным гепатозом норок характеризовались снижением содержания эритроцитов и гемоглобина, увеличением количества лейкоцитов с нейтрофильным сдвигом в лейкоформуле, изменением кальцие-фосфорного отношения до значений 1:1, увеличением показателей АсАТ, АлАТ, общего билирубина;

- патологоанатомически у павших норок отмечали метеоризм кишечника и асцит, жировую и токсическую гепатодистрофию, дискомплексацию гепатоцитов в дольках печени, мелкокапельный липидоз центролобулярных и крупнокапельный перипортальных паренхиматозных клеток с пролиферацией стромальных и возрастанием среди них числа липоцитов.

4. Особенности патоморфологии органов при плазмоцитозе норок характеризовались:

- в печени белково-жировой дистрофией, очаговым продуктивным гепатитом, плазматической инфильтрацией стромы органа;

- в почках плазматизация интерстиция проявлялась очаговой пролиферацией клеток, свойственной очаговому продуктивному нефриту, макроскопически проявляющемуся сморщенной («крапчатой») почкой;

- в селезенке – гиперплазией лимфоидной ткани белой и плазматизацией красной пульпы органа.

5. Включение в рационы норок бентонита Тарн-Варского месторождения Республики Татарстан в количестве 0,5; 1,0; 1,5 % к массе корма обусловило улучшение морфологических и биохимических показателей крови, повышение прироста живой массы норок опытных групп сравнительно с таковой у контрольных, снижение интенсивности проявления гепатоза и плазмоцитоза с лучшими результатами у животных, получавших природный минерал в количестве 0,5 %:

- гематологическими исследованиями установлено увеличение количества эритроцитов у зверей опытных групп соответственно на 13,6; 11,3; 6,9 % в сравнении с показателями норок контрольной группы; повышение содержания гемоглобина на 12,5; 12,3; 5,4 %; возрастание количества лейкоцитов на 11,1; 10,7; 4,5 %; увеличение содержания кальция на 12,0; 12,5; 8,0; снижение активности трансаминаз – АсАТ на 4,4; 3,9; 7,9 %; АлАТ – на 11,1; 2,3; 4,5 %; снижение общего билирубина на 10,0; 15,0; 20,0 %;

- прирост живой массы в опытных группах был выше на 11,3; 8,1; 2,8 % сравнительно с таковым у зверей контрольной группы, что является положительным фактором, так как это приводит к увеличению размеров шкурок – основной продукции норководства;

- в опытных группах происходило снижение заболеваемости гепатозом и плазмоцитозом сравнительно с показателями у контрольных.


5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ


1. Результаты исследований морфологии печени у норок следует использовать в качестве показателей структурно-функционального состояния органа при изучении гепатопатологии у млекопитающих животных.

2. Морфо-функциональные особенности печени у норок при применении природного сорбента являются критериями морфологической оценки воздействия на организм животных этого минерала и могут использоваться в качестве базовых данных при изучении других нетрадиционных кормовых добавок.

3. Основные положения и выводы диссертации рекомендуем использовать в учебном процессе при чтении лекций, проведении лабораторно-практических занятий, оформлении учебно-методических указаний для студентов при изучении патологии печени и ее коррекции.


СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ковальчук, В.А. Ультраструктура гепатоцитов и синусоидных клеток печени у половозрелых норок / В.О. Ежков, И.С. Константинова, В.А. Ковальчук // Материалы 4-ой Всероссийской науч. конф. «Влияние антропогенных факторов на структурное состояние органов, тканей и клеток организма человека и животных. – Казань: Медицина, 1997. - С. 38.
   
2. Ковальчук, В.А. Влияние разных доз кормовых добавок бентонита на структурно-функциональное состояние некоторых органов зверей / М.С. Ежкова, А.А. Шилов, Ю.Б. Василевская, В.А. Ковальчук // Материалы Международной науч.-практ. конф., посвященной 75-летию образования зооинженерного факультета КГВАМ. – Казань, 2005. - С.326-327.
   
3. Ковальчук, В.А. Фунциональная морфология печени норок и песцов в условиях гиподинамии при доместикации / В.А. Ковальчук // Материалы Международной науч.-практ. конф., посвященной 75-летию образования зооинженерного факультета. - Казань, 2005. - С. 307-308.
   
4. Ковальчук, В.А. Структурно-функциональные особенности печени пушных зверей в постнатальном онтогенезе / В.А. Ковальчук // Материалы НПК молодых ученых и специалистов КГВАМ. - Казань, 2005. - С.41-42.
   
5. Ковальчук, В.А. Особенности структурно-функционального состояния некоторых органов пушных зверей при включении в рацион агроминерала «Шатрашанит» / М.С. Ежкова, А.А. Шилов, Ю.Б. Василевская, В.А. Ковальчук // Материалы Всероссийской науч.-практ. конф. - Казань, 2006. - С. 200-202.
   
6. Ковальчук, В.А. Структурно-функциональное состояние некоторых органов пищеварения и иммуногенеза у норок при применении кормовых добавок природных минералов/ А.А. Шилов, В.А. Ковальчук, Ю.Б. Василевская // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. – 2006, Т.185. - С. 367-372.
   
7. Ковальчук, В.А. Особенности метаболизма, прдуктивности и морфологии некоторых органов у норок при применении бентонита Республики Татарстан / А.М. Ежкова, Ю.Б. Василевская, В.А. Ковальчук // Материалы международной науч.-практ. конф. «Актуальные вопросы ветеринарной медицины». - Екатеринбург, 2007, Т.1, Морфология. - С.75-78.
   
8. Ковальчук, В.А. Дифференциальная диагностика гепатоза при плазмоцитозе норок от алиментарного / В.А. Ковальчук, В.О. Ежков, А.М. Ежкова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2008, Т. 195. - С. 135-139.