Влияние бишофитсодержащей рапы соленого озера «Малое Лиманское» Астраханской области на функциональное состояние и свободнорадикальный гомеостаз самцов крыс 03. 00. 13 физиология

Вид материала

Содержание

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Астраханского государственного университета по адресу: 414000, Астрахань, пл. Шау
Актуальность работы
Цель исследования
Задачи исследования
Научная новизна
Практическая значимость
Основные положения, выносимые на защиту
Апробация работы
Структура и объем диссертации
Материалы и методы исследования
Схема эксперимента.
Приготовление растворов.
Ориентировочно-исследовательская активность.
Определение активности щелочной фосфатазы
Определение активности церулоплазмина в сыворотке крови
Интенсивность свободнорадикального окисления
Результаты исследования и их обсуждение
Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

Подобный материал:

На правах рукописи

Мухамедова Наталья Анатольевна

Влияние бишофитсодержащей рапы

соленого озера «Малое Лиманское» Астраханской области на функциональное состояние

и свободнорадикальный гомеостаз самцов крыс

03.00.13 - физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Астрахань-2009

Работа выполнена на кафедре молекулярной биологии, генетики и биохимии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Астраханский государственный университет»

Научный руководитель - доктор биологических наук, профессор

Кондратенко Елена Игоревна

Официальные оппоненты - доктор биологических наук, доцент

Лазько Марина Владимировна

доктор биологических наук, доцент

Котельников Андрей Вячеславович

Ведущая организация – Ставропольский государственный университет

Защита состоится 26 июня 2009 года в 14 часов на заседании диссертационного совета ДМ 212.009.01 при Астраханском государственном университете по адресу: 414000, Астрахань, пл. Шаумяна, д.1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Астраханского государственного университета по адресу: 414000, Астрахань, пл. Шаумяна, д.1

Автореферат разослан 25 мая 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор биологических наук Нестеров Ю.В.

АКТУАЛЬНОСТЬ РАБОТЫ

Неблагоприятная экологическая обстановка, а также стресс-обусловленная нагрузка на живой организм являются причиной развития макро- и микрополиэлементозов. Все это приводит к биохимическим и функциональным изменениям, которые негативно отражаются на состоянии здоровья, работоспособности и качестве жизни человека. Поэтому исследование зависимости физиологических процессов от обеспеченности их макроэлементами стало предметом изучения многих известных ученых (Carl, G, 1994; А.П. Авцин, 1991; Н.А. Агаджанян, Н.В. Ермакова, 1997; А.В.Скальный, А.Т.Быков, 2003)

Одним из основных макроэлементов в организме человека является магний. Существующие средства восполнения недостатка магния в организме представляют собой лекарственные препараты и пищевые добавки, которые принимаются перорально (Tsuji H. Et. Fl., 1994; Компанцева Е.В., и соавт., 2002; Забелина В.Д., 2003; Скальный А.В., 2004). Отличительной особенностью магнийсодержащих препаратов при их наружном применении является их способность снимать воспалительные реакции и болевой синдром при различны заболеваниях ОДС, оказывать мощный седативный эффект и улучшать физико-химические показатели кожи при его наружном применении (Стрельцов Д.А., 2001, 2002; Мотов А.А., 2003, 2004, 2005).

Магнийсодержащие минералы эффективно применяются в бальнеологии и косметологии ( Dyckner, Webster, 1984; Nigam S. с соавт., 1986; Смирнова, Л.А., 1994; Спасов, А.А., 2003; Щава С.Н., 2001). В этой связи особое внимание привлекает минерал бишофит, содержащий максимальное количество магния хлорида (до 95-96 % в сухом остатке). Условия существования бишофитсодержащей рапы при непосредственном контакте с окружающей средой формируют сложную органоминеральную композицию, физиологические особенности, действия которой не исследованы. В зарубежной практике данный минерал, а также содержащая его рапа Поморийского озера (Болгария) и Мертвого моря (Израиль, Иордания), используется как основа для противовоспалительных средств наружного применения. Подземные залежи бишофита имеются в Прикаспийской впадине. В Астраханской области также имеются запасы магнийсодержащих веществ в многочисленных соленых озерах, одним из которых является озеро «Малое Лиманское». Физиологические особенности действия Астраханского озерного бишофита не исследованы. Биологическая активность озерной рапы «Малое Лиманское» должна иметь ряд определенных особенностей по сравнению с подземным минеральным бишофитом. В связи с этим изучение функционального состояния организма под влиянием рапы озера «Малое Лиманское» является актуальным.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Установить влияние бишофитсодержащей рапы соленого озера «Малое Лиманское» Астраханской области на физиологические параметры и свободнорадикальный гомеостаз самцов крыс.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Оценить токсикологическую безопасность рапы Астраханского озера «Малое Лиманское».
Исследовать влияние физиологически адекватного разведения раствора рапы, вводимого внутрижелудочно, на показатели крови крыс.
Изучить влияние рапы соленого озера «Малое Лиманское» на ориентировочно-исследовательское поведение крыс.
Оценить эффект раствора рапы на интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ) по следующим показателям: содержание малонового диальдегида (МДА), скорость спонтанного и аскорбатзависимого ПОЛ в гомогенатах тканей печени, почек, миокарда; уровень промежуточных продуктов ПОЛ (ацилгидроперекиси, кетодиены и сопряженные триены, диеновые конъюгаты) в липидных экстрактах плазмы крови и степень перекисного гемолиза эритроцитов.
Изучить влияние раствора рапы на процессы окислительной модификации белков (ОМБ) плазмы крови и миокарда (кетодинитрофенилгидразоны, алифатические альдегидо- и кетонопроизводные динитрофенилгидразонов основного характера) и сопоставить характер изменения интенсивности ПОЛ и ОМБ.
Изучить изменения активности ферментативного звена антиоксидантной системы самцов крыс и активность антиоксидантного белка крови – церулоплазмина – под воздействием растворов бишофитсодержащей рапы (РАР) и Волгоградского бишофита (РВБ).
Провести сравнительный анализ эффектов воздействия растворов бишофитсодержащей рапы соленого озера «Малое Лиманское» Астраханской области и Волгоградского бишофита на физиологические параметры и показатели свободнорадикального гомеостаза самцов крыс.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые исследован химический состав рапы соленого озера «Малое Лиманское» Астраханской области. В рапе обнаружены бальнеологически значимые количества бишофита, соединений калия, брома и бора, органические компоненты и установлена ее токсикологическая безопасность.

Обнаружено влияние внутрижелудочного введения бишофитсодержащей рапы на структуру ориентировочно-исследовательского поведения самцов крыс, заключающееся в снижении показателей тревожности.

Впервые установлены тканеспецифические изменения интенсивности перекисного окисления липидов и окислительной модификации белков в условиях внутрижелудочного введения бишофитсодержащей рапы.

Показано, что бишофитсодержащая рапа соленого озера «Малое Лиманское» Астраханской области способствует активации ферментативного звена антиоксидантной системы самцов крыс. Специфика влияния бишофитсодержащей рапы соленого озера «Малое Лиманское» Астраханской области заключается в значительном снижении интенсивности окислительной модификации белков миокарда. Она не является полным аналогом Волгоградского бишофита.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Экспериментально доказана целесообразность использования рапы соленого озера «Малое Лиманское» в качестве бальнеологического средства.

Разработаны технические условия на применение бишофитсодержащей рапы в качестве косметического сырья.

Созданы рецептуры и отработана технология введения бишофитсодержащей рапы в косметические средства для волос и кожи головы.

Физиологически обоснована целесообразность применения бишофитсодержащей рапы соленого озера «Малое Лиманское» Астраханской области в бальнеологической практике.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

Рапа озера «Малое Лиманское» при внутрижелудочном введении в изоосмотическом разведении не является токсичной, тканеспецифически изменяет про- и антиоксидантное равновесие в организме самцов крыс, способствует изменению структуры ориентировочно-исследовательского поведения животных и уменьшения уровня тревожности.
Физиологические аспекты бальнеологической реакции, развивающейся под воздействием внутрижелудочного введения рапы озера «Малое Лиманское» Астраханской области, заключается в активации ферментативного звена антиоксидантной системы и уменьшении интенсивности окислительной модификации белков миокарда.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты исследования доложены на конференциях и опубликованы в материалах IХ международной научной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря» (2006), II Всероссийской научной конференции «Экологические проблемы природных и урбанизированных территорий» (Астрахань, 2008), VI международной практической конференции «Человек и животные» (Астрахань, 2008), Всероссийского форума «Здравница» (Москва, 2008), XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 2009), IV Международной (XIII Всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2009), Х Всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Молодежь и наука ХХI века», посвященная 85-летию со дня рождения В.П. Астафьева (Красноярск, 2009), научной конференции с международным участием «Научный прогресс на рубеже тысячелетий - 2009» (Прага, 2009), Каспийском инновационном форуме (Астрахань, 2009).

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 8 работ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения и обсуждения результатов собственных исследований, выводов. Работа изложена на 125 стр., содержит 14 таблиц, 2 рисунка, список литературы включает 143 источника, из которых 57 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Санитарно-микробиологические показатели рапы соленого озера «Малое Лиманское» Лиманского района Астраханской области соответствуют установленным нормам. Токсичные компоненты содержатся в количествах, значительно меньших допустимых концентраций. Содержание в рапе радионуклидов не превышает пределов, установленных нормами радиационной безопасности (Бальнеологическое заключение ФГУ «РНЦ ВМиК Россздрава» № 14/98 от 04.03.2008 г.).

Изучение химического состава рапы проводили лазерным масс-спектральным методом на приборе ЭМАЛ-2.

Изучение токсикологической безопасности магнийсодержащей рапы озера Малое Лиманское Астраханской области проводилось двумя способами: 1) по санитарно-микробиологической оценке (инфузории-парамеции) («Методы определения токсичности» ГОСТ 13496.7-97); 2) при помощи методики определения токсичности в биопробе на лабораторных животных (мыши) («Методические указания по определению токсичности кормов, кормовых добавок и сырья для производства кормов в биопробе на лабораторных животных» », № 13-5-02/0795 от 26.06.2003г.).

Схема эксперимента. Исследования проводились на 60 белых беспородных крысах-самцах со средней массой 250 г. Возраст животных составлял 6 месяцев.

В качестве препарата сравнения был выбран хорошо изученный минеральный бишофит Волгоградского месторождения. Использовался раствор минерала бишофит, очищенный от техногенных примесей.

Самцы крыс были разделены на три группы: 1) животные, получавшие внутрижелудочно NaCl (0,9% раствор); 2) животные, получавшие внутрижелудочно раствор рапы Астраханского соленого озера в физиологически адекватном разведении; 3) животные, получавшие внутрижелудочно раствор Волгоградского бишофита. Процедура введения исследуемых веществ продолжалась в течение 10 дней (ежедневно, однократно). Внутрижелудочные введения производили с помощью зонда в

дозе 3 мл/кг. Все животные содержались в стандартных условиях вивария со

свободным доступом к воде и пище. Умерщвление животных декапитацией

проводили после предварительной наркотизации внутрибрюшинным введением этаминала натрия в дозе 4 мг/100 г массы тела.

Приготовление растворов. Раствор Астраханской рапы (РАР) и раствор Волгоградского бишофита (РВБ) разводили до получения изотонического раствора. Точку изотоничности находили с помощью теста на осмотическую резистентность эритроцитов (Кошев В.И., 2004).

До и после эксперимента оценивали вес животных. Определяли изменения относительной массы надпочечников и щитовидной железы. В крови определяли уровень гемоглобина (с помощью набора «LACHEMA») и цветовой показатель, количество эритроцитов и лейкоцитов (подсчет производили стандартным способом с помощью камеры Горяева).

Ориентировочно-исследовательская активность. Влияние раствора Астраханской рапы на ориентировочно-исследовательское поведение изучалась в условиях теста «открытое поле» (Bureš Y., Burešová O., 1983), при котором регистрировали следующие показатели: количество пересеченных квадратов (горизонтальная двигательная активность), количество вставаний на задние лапы (вертикальная двигательная активность), количество обследованных отверстий (ориентировочно-исследовательская активность), число выходов в центральную зону, количество актов груминга, количество фекальных болюсов (эмоциональный фактор).

Определение активности щелочной фосфатазы в плазме крови при внутрижелудочном введении раствора Астраханской рапы проводили унифицированным методом по «конечной точке». Метод основан на образовании п-нитрофенола из п-нитрофенилфосфата в реакции со щелочной фосфатазой.

Определение активности церулоплазмина в сыворотке крови. Определение активности основного медьпротеида крови – церулоплазмина проводили по ускоренной методике, предложенной Э.В. Тен (2007). Метод основан на реакции окисления парафенилендиамина. Активность церулоплазмина измеряли в единицах оптической плотности.

Интенсивность свободнорадикального окисления определяли по скорости перекисного окисления липидов в гомогенатах тканей печени, почек, миокарда по методу И.Д. Стальной и Т.Г. Гаришвили (1977). Критериями оценки ПОЛ в тканях были содержание МДА, скорость спонтанного и аскорбатзависимого ПОЛ. Промежуточные продукты ПОЛ в плазме крови определяли по методу И.А. Волчегорского и соавторов (1989). В изопропанольной и гептановой фракциях плазмы крови определяли уровень ацилгидроперекисей, диеновых конъюгатов, кетодиенов и сопряженных триенов. Активность каталазы определяли в тканях почек, миокарда и в плазме крови при помощи методики М.А. Королюка и соавторов (1988). Для определения перекисного гемолиза эритроцитов использовали модификацию метода определения степени перекисного гемолиза эритроцитов А.А. Покровского и А.А. Абрарова (1964), которую предложили А.Е. Лазько, Р.И. Асфандияров и А.А. Рязаев (1993). Оценку степени окислительной модификации белков проводили по методике Е.Е. Дубининой и соавт. (1995) метод оценки и принцип которого основан на цепи взаимодействия окисленных аминокислотных остатков белков с 2,4-динитрофенилгидразином, в результате чего образуются 2,4-динитрофенилгидразоны, алифатические альдегидо- и кетонопроизводные динитрофенилгидразонов основного характера. Для определения активности СОД в биологических материалах использовали адаптированный метод, предложенный С. Чевари и соавт. (1984). Метод основан на способности СОД конкурировать с нитросиним теетразолием (НСТ) за супероксидные анионы. Полученные данные были подвергнуты статистической обработке с использованием критерия Стьюдента и коэффициента корреляции.

Результаты исследования и их обсуждение

Исследовавшийся образец рапы был отобран в конце лета (17.08.07 г.) при минимальном уровне вод и, соответственно, при максимальном значении минерализации – 368 г/л.

Таблица 1

Лазерный масс-спектральный анализ элементного состава

рапы соленого озера «Малое Лиманское» Астраханской области

Элемент	Содержание в атом. %	Содержание в масс. %
B	0,0045	0,0018
C	0,7701	0,3463
N	0,0082	0,0043
O	34,5686	20,7082
F	0,0625	0,0445
Na	1,6250	1,3993
Mg	16,0770	14,6390
Al	0,0054	0,0055
Si	0,0085	0,0089
P	0,0034	0,0039
S	0,0555	0,0666
Cl	42,5840	56,5362
K	4,1724	6,1081
Ca	0,0183	0,0274
Ti	0,0004	0,0006
V	0,0001	0,0002
Cr	0,0003	0,0007
Mn	0,0005	0,0010
Fe	0,0103	0,0215
Co	0,0001	0,0002
Ni	0,0002	0,0005
Cu	0,0004	0,0010
Zn	0,0014	0,0033
Ga	0,0002	0,0006
As	0,0001	0,0002
Se	0,0003	0,0009
Br	0,0185	0,0554

Примечание: жирным шрифтом выделены бальнеологически значимые элементы

Реакция среды слабокислая (рН=5,3), что, видимо, обусловлено наличием в рапе повышенного содержания органических кислот. Органолептические свойства: вода полупрозрачная, светло-коричневая, с небольшим коричневым осадком и слабым своеобразным морским запахом. Токсичные компоненты (свинец, ртуть, нитраты и другие) содержатся в количествах, значительно меньших допустимых концентраций. Содержание радионуклидов не превышает пределов, установленных нормами радиационной безопасности (НРБ-99). Санитарно-микробиологические показатели рапы благополучные, чему способствует её высокая минерализация.

В соответствии с Классификацией минеральных вод Минздрава России рапа озера Лиманское при максимальных величинах минерализации (>300 г/л) относится к бромным (Вr 1096 мг/л), борным (Н₃ВО₃644 мг/л) крепким рассолам хлоридно-магниевого состава. В пересчете на гипотетические соли в рапе содержится в подавляющем количестве бишофит (МgСl₂^.6Н₂О) – 84,1 %, в качестве примесей – кизерит (МgSO₄^.Н₂О) – 7,6 %, галит (NaCl) – 4,6 %, карналлит (KCl^.МgСl₂^.6Н₂О) – 1,7 %, а также гидрокарбонат магния (Mg(HCO₃)₂) – 1,6 % и бромид натрия (NaBr) – 0,4 % (таблица 2).

Таблица 2

Минеральный состав исследуемой рапы

№ п/п	Минеральные соли	Химический состав	Содержание в %
1	бишофит	МgСl₂^.6Н₂О	84,1
2	кизерит	МgSO₄^.Н₂О	7,6
3	галит	NaCl	4,6
4	карналлит	KCl^.МgСl₂^.6Н₂О	1,7
5	гидрокарбонат магния	Mg(HCO₃)₂	1,6
6	бромид натрия	NaBr	0,4
	Итого		100

Помимо минеральных солей рапа данного озера содержит большое количество органических компонентов: гуминовые кислоты и их соли, а также битумы, составляющих основную часть разницы между сухим остатком (390,43 г/л) и минерализацией (386,0 г/л). Высокий удельный вес рапы – 1,2 г/см³(весной) и 1,4 г/см³ (в конце лета) способствует сохранению в её составе планктона после его переработки и разложения в растворенном (водорастворимые и легкогидролизуемые вещества) и во взвешенном состоянии (гуминовые кислоты и их соли, битумы). В этом основное бальнеологическое отличие озёрных рассолов от подземных (ископаемых)

(Бальнеологическое заключение ФГУ «РНЦ ВМиК Россздрава» № 14/98 от 04.03.2008 г.).

Токсикологическая безопасность Астраханской рапы проверялась по санитарно-микробиологической оценке (инфузории-парамеции) и при помощи методики определения токсичности в биопробе на лабораторных животных (мыши). Степень токсичности исследуемого образца методом санитарно микробиологической оценки определяли по выживаемости инфузорий через 1 час экспозиции в вытяжке исследуемого образца. В результате эксперимента обнаружено, что выживаемость инфузорий составила 88 %.

В результате определения токсичности в биопробе на лабораторных животных (мыши) было установлено, что в дозе 3 мл/кг изотонический раствор Астраханской рапы оказался не токсичным: все животные живы, клинические признаки интоксикации отсутствуют. Изменений в поведенческих показаниях животных контрольной и подопытных групп не выявлено, отказа от корма не было. После окончания исследования животные были вскрыты. Видимых патологических изменений не обнаружено.

Проведенные исследования показали, что раствор Астраханской рапы в физиологически адекватном разведении, вводимый внутрижелудочно, не влияет на относительную массу щитовидной железы и надпочечников, а также на изменение массы тела. Прирост массы тела был равномерным и различий в весе органов не обнаружено (таблица 3).

Таблица 3

Показатели массы крыс и относительной массы желез внутренней секреции при внутрижелудочном введении физиологического раствора, РАР и РВБ

Исследуемый показатель		Внутрижелудочное введение NaCl, (контроль), п=20	Внутрижелудочное введение раствора Астраханской рапы, п=20	Внутрижелудочное введение Волгоградского бишофита, п=20
масса тела животных, г	в начале экспери- мента	257,6±8,06	261,1±8,75	229,4±7,87
масса тела животных, г	в конце экспери- мента	359,0±10,92	368,4±8,25	320,7±12,8
относительный вес надпочечников, мг/г		0,0592±0,003	0,0559±0,002	0,05033±0,004
относительный вес щитовидной железы, мг/г		0,02344±0,002	0,0297±0,003	0,02662±0,002

Данные о влиянии Астраханской рапы на гематологические исследования приведены в таблице 4.

Из данных, представленных в таблице, видно, что существенного влияния на состояние крови физиологическое разведение рапы и минерала бишофита не оказывают. В группе, принимавшей раствор Астраханской рапы, уровень гемоглобина остался без изменений. У группы, принимавшей раствор Волгоградского бишофита, наблюдалось небольшое снижение гемоглобина.

Таблица 4

Гематологические показатели крови крыс

при внутрижелудочном введении NaCl, раствора Астраханской рапы

и раствора бишофита Волгоградского

Показатели крови	Внутрижелудочное введение NaCl, (контроль) п=20	Внутрижелудочное введение раствора Астраханской рапы, п=20	Внутрижелудочное введение Волгоградского бишофита, п=20
Гемоглобин, г/л	134,4±6,19	133,5±4,25^Δ	114,5±5,22^*
Эритроциты, 10¹²	5,27±0,37	5,05±0,39	5,17±0,65
Лейкоциты, 10⁹	4,48±0,81	2,9±0,3	2,83±0,8
Цветовой показатель	0,79±0,07	0,81±0,04	0,71±0,08

Условные обозначения: * - достоверность различий между группами животных контрольной группы и животными, получавшими раствор Астраханской рапы и раствор Волгоградского бишофита (по Стьюденту); * - р<0,05; ** - p<0,01;*** - p<0,001.

^Δ - достоверность различий между группами животных, получавшими РАР и РВБ (по Стьюденту); ^Δ- р<0,05; ^ΔΔ - p<0,01^;^ΔΔΔ - p<0,001.

Количество эритроцитов – на уровне контроля, количество лейкоцитов имело тенденцию к снижению, цветовой показатель, характеризующий среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, оставался без изменений.

Таким образом, согласно классификации токсичности веществ Саноцкого И.В. и Улановой И.П. (1975), рапа озера «Малое Лиманское» относится к малотоксичным веществам.

В ходе экспериментов было показано, что после перорального введения раствора Астраханской рапы горизонтальная двигательная активность крыс в открытом поле не изменяется (таблица 5). Наблюдалось незначительное снижение посещения центральных квадратов у крыс, принимавших Волгоградский бишофит. Количество посещений периферических квадратов осталось таким же, как и в контроле.

Количество центральных стоек в обеих группах, получавших раствор рапы и раствор бишофита, имела тенденцию к снижению, что может быть обусловлено специфическим действием ионов магния. Исследовательский компонент поведения (наибольшее число заглядываний в отверстия) у крыс обеих групп, получавших РАР и РВБ, более выражен.

Таблица 5

Показатели двигательной активности в «открытом поле» при внутрижелудочном введении крысам NaCl, РАР и РВБ

Показатели двигательной активности	Внутрижелудочное введение NaCl, (контроль), п=20	Внутрижелудочное введение раствора Астраханской рапы, п=20	Внутрижелудочное введение Волгоградского бишофита, п=20
Латентный период (сек)	3,2±0,57	2,37±0,18^Δ	3,78±0,49
Центральные квадраты	10,8±2,34	10,5±0,99	7,56±1,53
Периферические квадраты	33,5±2,72	34,3±2,87	34,2±2,92
Центральные стойки	3,125±1,34	1,857±0,55	1,4±0,4
Периферические стойки	6,2±0,9	5,1±0,99	4,78±0,46
Норки	3,44±0,29	4,6±0,82	3,89±0,77
Груминг	8±0,91	5,44±0,58*^Δ	9,67±1,84
Болюсы	-	6,0±0	2,0±1,0

Частота актов груминга, достоверно уменьшалась у группы, получавшей РАР. Количество болюсов у экспериментальных животных значительно увеличивалось по сравнению с животными, получавшими раствор хлорида натрия, что может быть обусловлено действием ионов магния, стимулирующим перистальтику кишечника.

Таким образом, существенного влияния на показатели ориентировочно-исследовательской активности крыс получавших внутрижелудочно раствор Астраханской рапы и раствор бишофита Волгоградского в тесте открытого поля не имеют.

Индикатором элементного статуса магния может быть определение активности щелочной фосфатазы (табл.6).

Таблица 6

Определение активности щелочной фосфатазы в плазме крови

при внутрижелудочном введении NaCl , раствора Астраханской рапы и

Волгоградского бишофита самцам крыс

Активность фермента, нмоль/с*л
Внутрижелудочное введение NaCl, (контроль)	Внутрижелудочное введение раствора Астраханской рапы	Внутрижелудочное введение раствора Волгоградского бишофита
1357 ± 11,13	1351 ± 9,56^ΔΔΔ	1536 ± 14,73***

Изменение количественного содержания элементного магния при введении РАР не происходило, тогда как в группе, получавшей раствор Волгоградского бишофита наблюдался достоверный рост показателей активности щелочной фосфатазы.

Существенного влияния на степень перекисного гемолиза эритроцитов относительно контроля раствор рапы Астраханского месторождения не оказывал. Изменения содержания продуктов перекисного окисления липидов в гептан-изопропанольных экстрактах следующие: в изопропаноловой фазе содержание ацилгидроперекисей при введении раствора рапы озера Малое Лиманское оставалось без изменения, а в группе, получавшей раствор Волгоградского бишофита, наблюдалось достоверное увеличение содержания ацилгидроперекиси. Аналогично изменялись показатели по содержанию диеновых конъюгатов. Содержание кетодиенов и сопряженных триенов повышалось в обеих сравниваемых группах.

Результаты, полученные при изучении процессов ПОЛ в разных органах, позволяют проанализировать тканеспецифические эффекты в изменении про- и антиоксидантного равновесия при внутрижелудочном введении раствора рапы Астраханского месторождения.

По величине исходного уровня малонового диальдегида изучаемые органы у животных контрольной группы располагались в следующей последовательности: почки > миокард > печень (рис. 1). Исходя из значений данного параметра, раствор рапы Астраханского соленого озера проявляет прооксидантные свойства в миокарде и почках, в печени просматривается тенденция к снижению исходного уровня МДА.

Рис. 1. Динамика исходного уровня МДА в различных органах при внутрижелудочном введении РАР и РВБ

Условные обозначения (здесь и далее к рис 2 – 7): * - достоверность различий между группами животных контрольной группы и животными, получавшими РАР и РВБ (по Стьюденту); * - р<0,05; ** - p<0,01;*** - p<0,001.

^Δ - достоверность различий между группами животных, получавшими РАР и РВБ (по Стьюденту); ^Δ- р<0,05; ^ΔΔ - p<0,01^;^ΔΔΔ - p<0,001.

***

^ΔΔ

***

***

Рис. 2. Изменение скорости спонтанного ПОЛ в различных органах при внутрижелудочном введении РАР и РВБ

Это подтверждают и кинетические показатели, где наблюдается динамика увеличения скорости спПОЛ и аскПОЛ у животных, получавших раствор Астраханской рапы. Показатели спПОЛ в тканях миокарда увеличивались и в группе животных, получавших РАР и РВБ (рис. 2). В ткани почек достоверный рост спПОЛ наблюдался в группе получавших РВБ.

***

***

*

Рис. 3. Изменение скорости аскорбатзависимого ПОЛ в различных тканях при внутрижелудочном введении РАР и РВБ

При изучении аскПОЛ наиболее высокими кинетическими показателями обладала ткань миокарда, несколько меньшей скорость аскПОЛ была в почках (рис 3). В печени этот процесс протекал с достаточно низкой скоростью, на уровне контроля.

При сравнении показателей, характеризующих ПОЛ, с таковыми в контроле выявлено, что прооксидантный эффект от внутрижелудочного введения раствора Астраханской рапы проявился в миокарде: скорость аскПОЛ увеличилась в 3 раза по отношению к контролю, спПОЛ – в 2,4 раза, а исходное МДА – в 2,3 раза. Это позволяет утверждать, что внутрижелудочное введение рапы соленого озера Малое Лиманское оказывает тканеспецифические эффекты. В частности, раствор рапы Астраханского озера и раствор Волгоградского бишофита оказывают кардиоспецифический прооксидантный эффект. Прооксидантный эффект наблюдался и при исследовании тканей почек у группы, получавшей раствор Волгоградского бишофита.

Окислительная модификация белков и нуклеиновых кислот в большей степени является отражением функционирования внутриклеточных систем (Вьюшина А.В., 2004). Учитывая большую и очень разнообразную функциональную нагрузку белков в тканях, их окислительная модификация может носить в отличие от пероксидации липидов более избирательный и специфический характер при различных функциональных нагрузках и патологических состояниях. (Дубинина Е.Е. и соавт., 2000).

^ΔΔ

^ΔΔ

Рис. 4. Изменение скорости окислительной модификации белков в миокарде при внутрижелудочном введении РАР и РВБ

Внутрижелудочное введение крысам рассола Астраханской рапы снижает содержание как начальных, так и конечных продуктов ОМБ в миокарде почти в 2 раза (рис. 4). У крыс, получавших внутрижелудочно раствор Волгоградского бишофита, прослеживалась тенденция к снижению содержания начальных продуктов ОМБ в миокарде. Достоверных изменений содержания продуктов ОМБ в плазме не обнаружено.

Биологическая функция каталазы состоит в защите биохимических систем клетки от токсического воздействия перекиси водорода. Активность каталазы (рис. 5) в гомогенатах почек и сердца достоверно снижалась у групп, получавших раствор Астраханской рапы и раствор Волгоградского бишофита. В плазме крови активность каталазы в группах, получавших внутрижелудочно раствор Астраханской рапы и раствор Волгоградского бишофита, достоверно увеличивалась.

Рис.5. Изменение активности каталазы (1 – почки; 2 – миокард; 3 – плазма крови) при внутрижелудочном введении РАР и РВБ

Церулоплазмин является белком плазмы крови, выполняющим в организме ряд важных биологических функций: повышает стабильность клеточных мембран, участвует в иммунологических реакциях, ионном обмене, оказывает антиоксидантное действие, тормозит перекисное окисление липидов, стимулирует гемопоэз.

**

***

Рис.6. Изменение активности церуплазмина в плазме крови

при внутрижелудочном введении РАР и РВБ

Активность церуплазмина в исследуемых группах достоверно возрастает (рис. 6), что связано, возможно, с проявлением антиоксидантных эффектов. Голдстэйн и др. ( Goldstain et al., 1979) ранее показали, что церулоплазмин утилизирует супероксид, а, следовательно, служит антиоксидантом. Антиоксидантная функция церулоплазмина может быть связана с его способностью связывать ионы меди. Ионы меди являются хорошо известными катализаторами прооксидантов, а их связывание церулоплазмином приводит к снижению окисления.

Важнейшим ферментом системы антиоксидантной защиты является супероксиддисмутаза, которая катализирует превращение высоко реакционного аниона радикала кислорода (супероксид анион, О^2-.) в относительно менее активную перекись водорода и молекулярный кислород.

Активность этого фермента в эритроцитах исследуется с целью выяснения состояния антиоксидантной системы защиты организма в условиях патологического процесса (Терехина Н. А., 1992; Sjostrom K., 1991; Zima T., 1996).

Рис.7. Изменение активности СОД в плазме крови при внутрижелудочном введении РАР и РВБ

Результаты изменения активности супероксиддисмутазы представлены на рис. 7. Повышение активности СОД рассматривается как фактор, увеличивающий общую антиоксидантную защиту клетки и препятствующий развитию патологии (Кумерова А.О., 1996; Zhu C.S., 1994; Карагезян К.Г., 1989).

А

нализ полученных данных показывает, что влияние раствора Астраханской рапы на свободнорадикальные процессы в организме крыс не однозначно. Проведенные исследования выявили изменения показателей системы ПОЛ, ОМБ и антиоксидантной защиты. Бальнеологическая реакция проявилась в увеличении продуктов ПОЛ, таким образом, организм адаптировался к комплексному воздействию антиоксидантов, содержащихся в РАР. Возможно, что активация систем перекисного окисления липидов развивается как физиологический механизм модификации структуры и функции биологических мембран, индуцированная поступлением в организм крыс антиоксидантов в составе РАР. Вероятно, это связано с присутствием в рапе Астраханского месторождения гуминовых соединений. Гуминовые вещества накапливают элементы питания и энергию, участвуют в миграции катионов, снижают негативное действие токсических веществ (Агапов А.И. и соавт., 1988, Холопов А.П. и соавт., 2002). Гуминовые вещества обеспечивают активность рапы в отношении окислительно-восстановительных, кислотно-основных и комплексообразовательных процессов (Холопов А.П. и соавт., 2002, Авакумова Н.П. и соавт., 1994).

Бальнеологический эффект от введения РАР подтверждается и снижением показателей ОМБ в миокарде. По мнению ряда ученых (Дубинина Е.Е. и др., 1993; Mickel H.S. и др.) уровень окисленных белков можно считать своего рода индикатором тканевого поражения. При введении РАР уровень ОМБ в миокарде снижался, следовательно, процессы, запущенные ПОЛ простимулировали обновление клеточной мембраны, а не разрушение ткани миокарда. Это подтверждается достоверно значимой обратной корреляцией между показателями МДА и ОМБ по количеству конечных продуктов окисления (r = - 0,75 ).

Достоверный рост показателей активности каталазы, супероксиддисмутазы и церулоплазмина в плазме крови подтверждает активацию ферментативного звена антиоксидантной системы крыс.

При изучении антиоксидантной активности РАР целесообразно иметь в виду не только многообразие механизмов антиоксидантной активности, входящих в ее состав отдельных биологически активных веществ (гуминовые кислоты и их соли), но и то, что роль каждого из них может существенно различаться при различных способах активации свободнорадикальных процессов, при этом они способны иметь одновременно несколько точек приложения. Возможно, физиологический механизм, который является действующим или доминирующим в эффектах, вызванных раствором рапы соленого озера «Малое Лиманское» Астраханской области, зависит от условий реакции и определяет выраженность антиоксидантной активности.

Выводы

Методами санитарно-микробиологической оценки и в биопробе на лабораторных животных (мыши) доказана токсикологическая безопасность рапы Астраханского соленого озера «Малое Лиманское», что согласуется с данными бальнеологического заключения ФГУ ВМиК Росздрава № 14/98 от 04.03.2008.
Вес животных, относительная масса эндокринных органов и уровень гемоглобина самцов крыс, получавших внутрижелудочно физиологически адекватное разведение рапы Астраханского соленого озера «Малое Лиманское» и Волгоградского бишофита, не отличались от соответствующих показателей в контроле.
Структура ориентировочно-исследовательского поведения самцов крыс, получавших раствор рапы соленого озера «Малое Лиманское» Астраханской области изменялась в направлении уменьшения уровня тревожности.
Внутрижелудочное введение раствора рапы соленого озера Малое Лиманское не изменяет интенсивность ПОЛ в гомогенатах ткани печени и почек. Уровень промежуточных продуктов ПОЛ (содержание ацилгидроперекисей, кетодиенов, сопряженных триенов и диеновых конъюгатов) в липидных экстрактах плазмы крови не изменяется.
Рапа Астраханского озера «Малое Лиманское» оказывает кардиоспецифический прооксидантный эффект на уровне ПОЛ, в тоже время ингибирует процесс окислительной модификации белков в миокарде крыс.
Факт активации ферментативного звена антиоксидантной системы подтверждается ростом показателей каталазы и СОД, а также увеличением активности церулоплазмина в плазме крови. Общая неспецифическая каталазная активность имеет тканеспецифические особенности: в тканях почек и сердца она снижается, в плазме крови – повышается.
Специфика влияния бишофитсодержащей рапы соленого озера «Малое Лиманское» Астраханской области заключается в значительном снижении интенсивности окислительной модификации белков миокарда.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации