Источники и пути образования оксида азота в организме
Дипломная работа - Биология
Другие дипломы по предмету Биология
?та или же модифицированную во время трансляции или после нее индуцибельную NOS (как это имеет место в скелетных мышцах для нейрональной) - остается открытым [3].
Таблица 1. Физико-химические характеристики NO-синтаз человека[1].
ХарактеристикаИзоформа NO-синтазыНейрональнаяИндуцируемаяЭндотелиальнаяИсточник выделения белка Молекулярная масса Нативная структура Аминокислотная длина Локализация в клетке Локализация в геномеНейроны мозга 160кДа Димер 1433 Цитозоль Хромосома 12Макрофаги 130кДа Димер 1153 Цитозоль Хромосома 17Эндотелий сосудов 133 кДа Нет данных 1203 Мембрана, цитозоль Хромосома 7Регуляция активности NOS
В процессе образования NO флавин редуктазы принимает электроны с НАДФ*Н и переносит их на железо гемовой группы. В результате этой реакции образуется активированная молекула О2, необходимая для синтеза NO. В эндотелиальной NOS и нейрональной NOS перенос электронов с флавина на гемм инициируется связыванием СаМ соответствующим сайтом фермента., т.е. СаМ участвует в регуляции продукции NO этими конститутивными NOS [3].
Рис.3. Схематическое представление синтеза NO и регуляции работы NO-синтазы[2].
Считается, что механизм активирующего действия СаМ на нейрональную NOS обусловлен изменением конформации редуктазного домена при связывании этого белка, что, в свою очередь, приводит к повышению скорости переноса электронов как на флавины, так и на конечные акцепторы электронов. Показано, что при этом СаМ активирует выраженные, происходят и при связывании СаМ эндотелиальной формой NOS. В отличие от нейрональной и эндотелиальной NOS, индуцибельная связывает редуктазный домен независимо от домена оксигеназы. Такие же изменения, но менее СаМ практически необратимо, что проявляется длительной продукцией NO этим ферментом [3].
Таким образом, нейрональная и эндотелиальная NOS неактивны при нормальном уровне Са2+ в клетке и начинают синтезировать NO в ответ на увеличение концентрации кальция в цитозоле, вызывающее связывание СаМ этими конститутивными ферментами. Длительное повышение уровня кальция приводит к постоянной продукции NO. Напротив, продукция индуцибельной формой NOS не зависит от уровня внутриклеточного кальция и при нормальном его уровне лимитирована только количеством фермента и субстрата и наличием кофакторов [3].
Один из механизмов регуляции продукции NO - фосфорилирование молекулы NO-синтазы. Фосфорилирование конститутивных NOS цАМФ-зависмой протеинкиназой, протеинкиназой С, цГМФ-зависимой протеинкиназой, Са2+-кальмодулинзависимой протеинкиназой ведет к снижению активности этих ферментов. С другой стороны, протеинфосфатаза-кальцийнейрин может дефосфорилировать NOS, вызывая тем самым повышение ее каталитической активности [3].
Кроме того, для NO-синтаз характерна регуляция по механизму отрицательной обратной связи. При этом к действию оксида азота, выступающего в качестве неконкурентного ингибитора, более чувствительны конститутивные изоформы, снижение активности, которых происходит за счет связывания NO с атомом железа гемовой группы ферментов [11]. Ингибирующее действие NO на индуцибельную NOS, возможно, связано с ограничением димеризации молекулы фермента [3].
Считается, что NO может осуществлять ретроградную регуляцию не только путем взаимодействия с гемом фермента, но и через ингибирование транскрипции мРНК NO-синтазы (либо непосредственно, либо за счет угнетения активации фактора транскрипции NF-kB) [3] .
Рис.4. Стимуляция и ингибиция индуцибельной NO-синтазы [8].
Активация рецепторов гепатоцитов, клеток моноцитарно-макрофагальной системы и некоторых клеток крови цитокинами (Cyt) и липосахаридами (LPS), под влиянием которых происходит индукция индуцибельной синтазы окиси азота, синтезирующей NO из L-аргинина. Блокада (ХХ) i-NOS глюкокортикоидами или другими блокаторами ее активности. Образовавшийся NO диффундирует в межклеточное пространство [8],[9].
Таблица 2. Синтетические и природные агенты, модулирующие активность NO-синтаз [1].
Типы модулятораИзоформа ферментаNoc-INoc-IINoc-IIIАктиваторы/индукторы ИнгибиторыГлутамат, N-метил-D-аспартат L-тиоцитруллин, 7-нитроиндазол, нитроаргининЦис-платина, интерлейкин 1-?, интерферон-?, липополисахарид, фактор некроза опухоли -? и -?, ?-излучение N-(3-(аминометил)-бензил)-ацетамидин, N6-(1-иминоэтил)-бензил)-ацетамидин; аминогуанидин, дексаметазон, ингибиторы сериновых протеаз, интерлейкин-4 и -10; L-NMMA; простагландин Е2, простациклин; N6-(1-иминоэтил)-L-лизин; 3-гидроксиантраниловая кислота; метотрексатСубстанция Р, АДФ, сдвиговое напряжение и пульсации давления крови, тромбин, гипомагнеземия, гистамин, Са2+-ионофоры, лейкотриены, олеиновая кислота, фактор активации тромбоцитов, аденозин, АТФ, ацетилхлин, брадикинин, серотонин; хлористый калий, эндотелин. Нитроимидоорнитин; иминоэтилорнитин, L-НАМЭ; АДМА
Неферментативное образование оксида азота
Для биологических тканей помимо генерации оксида азота в ходе ферментативных реакций с участием NOS обнаружена возможность превращения нитрит-аниона в NO [7]. Этот процесс происходит в условиях ацидоза и при наличии восстановленных форм гемсодеращих белков, что характерно для такого патологического состояния как ишемия [3].
Так, образование оксида азота из нитрита может происходить в соответствии со следующей последовательностью реакций:
NO-2 + H + HNO22 {NOOH}
{NOOH