Иммуноблотинг при диагностике губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота
Информация - Сельское хозяйство
Другие материалы по предмету Сельское хозяйство
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ
РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ
"Витебская ордена "Знак Почета"Государственная
академия ветеринарной медицины"
Реферат
на тему:
ИММУНОБЛОТИНГ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ ГУБКООБРАЗНОЙ
ЭНЦЕФАЛОПАТИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Красочко П.А., Притыченко А.Н., Бойчук С.В.
Витебск 2011
Cодержание
Введение
Иммуноблотинг (Western-blott)
Принцип диагностики ГЭ КРС с помощью иммуноблотинга
Техника постановки иммуноблотинга
Учёт и интерпретация результатов
Заключение
Список использованных источников
Введение
Губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота (ГЭ КРС) представляет собой медленно прогрессирующее заболевание крупного рогатого скота с необыкновенно длинным инкубационным периодом, преимущественным поражением нервной системы и неизбежным летальным исходом. Характерным признаком ГЭ КРС является обнаружение дистрофических изменений с вакуолизацией нейронов в головном мозге, что делает мозговую ткань похожей на губку. Подобные заболевания встречаются и у других животных, а также у человека. Ввиду сходства клинических признаков и патоморфологических изменений эти заболевания объединены в группу трансмиссивных губкообразных энцефалопатий (ТГЭ). В настоящее время к группе ТГЭ относят следующие заболевания животных: ГЭ КРС, скрепи, трансмиссивную энцефалопатию норок, губкообразную энцефалопатию кошек, хроническую изнуряющую болезнь оленей и лосей, а также заболевания человека: болезнь Крейтцфельда-Якоба (БКЯ), синдром Герстманна-Штраусслера-Шейнкера (СГШШ), летальную семейную бессонницу, куру, невыясненную БКЯ (нв БКЯ). Единичные случаи ТГЭ встречаются у экзотических зоопарковых животных - обезьян, тигров, пум, диких жвачных.
Особую тревогу вызывает возможность адаптации приона ГЭ КРС к организму человека. Недавнюю вспышку на БКЯ в Великобритании связывают именно с преодолением межвидового барьера прионом ГЭ КРС. Считается, что заражение происходило при употреблении в пищу продуктов, содержавших PrPSc от больных коров. Это подтвердили исследования, показавшие неразличимость возбудителей на БКЯ и ГЭ КРС.
Для предупреждения развития эпизоотии ГЭ КРС на территории Республики Беларусь важным мероприятием является проведение систематических диагностических мероприятий. Перспективным направлением в диагностике ГЭ КРС является применение иммуноблотинга.
Иммуноблотинг (Western-blott)
Иммуноблотинг - разновидность гетерогенного иммунного анализа.
Назначение:
1) идентификация белков, в том числе вирусных антигенов;
) идентификация антител.
Метод используется для диагностики губкообразной энцефалопатии (спонгиоформная энцефалопатия, бешенство коров) крупного рогатого скота. Существуют различные производители тест-систем, например, тест-системы "Western-Blot" фирмы "Prionix" (Швейцария). Особенностью тест-системы "Western-Blot" является то, что для проявления реакции используются моноклональные антивидовые антитела, меченные щелочной фосфатазой, а субстратной смесью является флуорохром, взаимодействующий со щелочной фосфатазой, и в результате реакции появляется люминесценция, выявляемая с помощью рентгеновской пленки.
Сущность. Метод основан на комбинации гель-электрофореза и реакции антиген-антитело. Сущность его заключается в переносе молекул исследуемого вещества с одного твердого носителя, используемого для фракционирования биополимеров, на другой, где с помощью иммунохимической реакции происходит их специфическое выявление. В зависимости от исследуемого вещества различают ДНК-, РНК - и белок-блотинг. Высокая степень разрешения достигается за счет электрофоретического разделения белков, глико - и липопротеинов и максимальной специфичностью детектирующих иммунных сывороток или моноклональных антител. Замена вышеуказанных меченых антител на меченые антитела пероксидазой позволяет удешевить учет реакции и повысить ее чувствительность и специфичность.
Основные этапы постановки.
Технически иммуноблотинг выполняется в три приема:
иммуноблотинг энцефалопатия рогатый скот
1) подлежащие анализу белки подвергаются разделению в полиакриламидном геле методом электрофореза в присутствии денатурирующих веществ: додецилсульфата натрия или мочевины. Этот процесс часто обозначают как SDS-PAGE, при котором разделенные белки могут визуализироваться после окрашивания и сравниваться с эталонными образцами;
) разделенные белки переносятся с геля электрофоретически путем наложения (блотинга) на нитроцеллюлозный фильтр, помещённый в специальную камеру, и фиксируются на нём, во многих случаях, но не всегда при переносе сохраняются количественные соотношения белков;
) на фильтры наносятся детектирующие поли - или моноклональные антитела, содержащие радиоизотопную или ферментную метку. На блоты наносят антитела к специфическому антигену, отмывают и добавляют радиоактивномеченный конъюгат для определения связавшихся с антигеном антител. Для обнаружения связавшихся антител применяют также антивидовую меченую сыворотку, иными словами, на заключительном эта