Симбиотические взаимодействия микроорганизмов и растений
Курсовой проект - Биология
Другие курсовые по предмету Биология
d1.">Травянистая растительность ежегодно оставляет в почве большое количество опада - растительных остатков, 70-80% которых составляют корни. Гидротермические условия степной и лесостепной зон благоприятствуют процессу гумификации , в результате которого образуются сложные гумусовые соединения (в основном гуминовые кислоты) (благодаря микробиологическим процессам), придающие почвенному профилю тёмную окраску.
Методы биологического исследования почвы. Определение влажности почвы
Необходимо определить влажность исследуемой почвы, так как полученные данные анализа при оценке результатов должны быть пересчитаны на 1 г воздушно-сухой почвы.
Берём пустой бюкс и взвешиваем его. Затем помещаем в него 10 г почвы и снова взвешиваем. После сушки бюкса с навеской почвы в сушильном шкафу при 105С и достижения постоянной массы, бюкс с навеской почвы взвешивают и определяют влажность по формуле:
% = 100%, где
-масса бюкса с сырой почвой (50,2)-масса бюкса с сухой почвой (47,9)-масса пустого бюкса (24,7)
А%= ((50,2 - 47,9)/(47,9-24,7)) • 100% = 9,91%
Приготовление почвенной суспензии и посев
Навеску почвы (10 г) переносят в колбу на 250 мл с 90 мл стерильной водопроводной воды, взбалтывают 10 мин (лучше на механической мешалке) и дают отстояться грубым частицам почвы.
Одновременно со взятием навески для анализа из средней пробы отбирают 10-20 г почвы для определения влажности, так как полученные при анализе данные пересчитывают на 1 г абсолютно сухой почвы.
После того, как почва в колбе с водой отстоялась, начинают готовить разведения: первая колба с суспензией соответствует разведению 10-1, последующие разведения - 10-2,10-3,10-4,10-5.
Из каждого предыдущего разведения отдельной стерильной пипеткой берут 10 мл суспензии и переносят в следующую колбу с 90 мл. Всякий раз пипетку ополаскивают и отставляют. Последующие колбы встряхивают по 1 мин.
Из полученных разведений делают посев на плотные среды.
При определении количества бактерий в почве для посева на МПА, берем разведение 10-5 и 10-4, среде Гетчинсона берем разведение 10-2 и 10-3, на сусло-агаре берем разведение 10-3 и 10-4, на среде Эшби применяют метод обрастания комочков.
Для глубинного посева берут 1 мл почвенной суспензии из разведения на порядок меньшего, чем для поверхностного посева.
Суспензию вносят в стерильную чашку Петри, заливают агаром, расплавленным и охлажденным до 45С, и смешивают с ним. При глубинном посеве показатели получаются более низкие, чем при поверхностном.
Среды, используемые в данной работе
При определении численности микроорганизмов нами были использованы плотные среды: МПА, сусло-агар, среда Эшби и среда Гетчинсона.
МПА (мясо-пептонный агар) - используют для выращивания сапротрофных микроорганизмов (из различных типов почв, зерна, воды, навоза, воздуха), усваивающих органические формы азота, учета количества бактерий, выделения чистой культуры и других целей.
Сусло-агар используют для микроскопических грибов; среду Эшби - для выявления аэробных азотфиксаторов путём раскладывания комочков почвы; среда Гетчинсона - для аэробных целлюлозоразрушающих микроорганизмов.
Определение численности различных групп микроорганизмов
Учёт на плотных средах
После инкубации чашки с засеянными средами вынимают из термостата и в них подсчитывают число колоний, которые отражают число живых клеток микроорганизмов в почве.
При подсчете колоний на плотных питательных средах закрытые чашки Петри просматривают в проходящем свете. Посчитав число колоний в чашке, определяют количество клеток микроорганизмов в 1 мл соответствующего разведения.
Учёт микроорганизмов на МПА
Проводят его визуально на 4-й день после посева. При наличие колоний Bacillus mycoides количество микроорганизмов определяют на 2-й или 3-й день. После подсчёта всех колоний на чашке их группируют по культурным признакам и определяют роды (а иногда и виды) микроорганизмов.
Учет микроорганизмов на Сусло-агаре
Колонии микроорганизмов (грибов) на сусло-агаре подсчитывают через 2 суток после инкубации. После 7 суток определяют родовой состав.
В почве часто встречаются грибы родов: Mucor, Rhizopus, Penicillium, Aspergillus, Alternaria, Fusarium,Macrosporium, Chaetomium, Cephalosporum, Phoma, Coremium, Trichoderma, Trichothecium, Stachybotrys.
Учет микроорганизмов на среде Гетчинсона
Определяют на 8-10-е сутки после инкубации в термостате при 28С по образованию колоний и разрушению целлюлозы на границе между жидкой средой и воздухом.
Учет микроорганизмов методом обрастания комочков почвы в среде Эшби
Для определения качественного состава почвы и относительной оценки населенности почвы азотобактером, используют среду Эшби. На среде Эшби следует разместить 25 комочков почвы диаметром 1-2 мм, чашки поместить во влажную камеру и поставить в термостат при 28С. Если в комочках почвы находятся соответствующие клетки микроорганизмов, то они начинают развиваться и образуют вокруг комочков колонии. При подсчете результатов вычисляют процент обросших комочков почвы от их исходного числа.
Содержание колоний азотобактера на среде Эшби определяют на 3-5 сутки инкубации по бело-серым слизистым колониям, которые постепенно приобретают темно-бурый или зеленый пигмент.
Результаты опыта
Таблица 1 - Учёт микроорганизмов на различных типах почв
Наименование образцаРазведениеКоличество колоний в чашке, шт.Среднее количество колоний, шт.Число м/о КОЕ/г, влажн. почвыЧисло м/о КОЕ/г, абсол. сух. почвыЧерно