Разработка методики определения флавоноидов в лекарственном растительном сырье
Дипломная работа - Химия
Другие дипломы по предмету Химия
?еримент проводился согласно методике, представленной в п. 2.2.3.
Таблица 2.4 - Содержание флавоноидов в пересчете на рутин в растительном сырье
Наименование экстрактаСодержание флавоноидов в пересчете на рутин, мг/млЭкстракт травы пустырника0.0055Экстракт цветков календулы0.0053Экстракт плодов боярышника0.0015
2.3.3 Количественное определение флавоноидов в лекарственном растительном сырье методом хроматомасспектрометрии
Метод количественного анализа основан на комбинации двух самостоятельных методов - хроматографии и количественный анализ. Перед количественным определением содержания кверцетина и рутина в исследуемых образцах экстрактов растительного сырья, необходимо построение градуировочного графика с использованием ГСО анализируемых биофлавоноидов. Градуировочный график в координатах площадь пика - концентрация должен быть линеен и прямая должна проходить через начало координат. Для построения такого графика достаточно, вообще одной экспериментальной усредненной точки. Однако градуировочный график обычно строят не менее чем по 3-8 средним точкам, полученным в результате 3-х последовательных измерений, что повышает точность и надежность определений. Для построения калибровочного графика используют аликвоты растворов рутина и кверцетина равные 0.2 см3. Далее путем последовательного разбавления 70% этиловым спиртом получают растворы с концентрацией, указанной в таблице 2.5, 2.6 для рутина и кверцетина, соответственно.
Для построения калибровочной кривой методом последовательного разбавления была приготовлена серия растворов каждого исследуемого биофлавоноида. Затем анализируемые образцы помещали в виалки и последовательно располагали в автоматическом пробоотборнике. Далее с использованием программного обеспечения прибора задавали условия проведения анализа, указанные в п. 2.2.4.
Данные для построения калибровочных кривых для рутина и кверцетина, представлены в таблице 2.5, 2.6, соответсвенно:
Таблица 2.5 - Данные для построения калибровочных кривых для рутина и кверцетина
Концентрация раствора, мг/млПлощадь пика.10-6 (рутин), импульсыПлощадь пика.10-6 (кверцетин), импульсы0.00010.06640.8080.00020.06571.0600.00050.41503.8900.0012.320017.100.0020.56906.0900.022.190025.8000.056.250056.6000.17.000097.500
На основании полученных данных были построены калибровочные графики, на которых показана зависимость площади пика от концентрации рутина и кверцетина. Построение графика производилось с помощью программы SigmaPlot 11. Полученные зависимости приведены на рисунке 2.2 для рутина и на рисунке 2.3 для кверцетина.
Рисунок 2.2 - График зависимости площади пика от концентрации рутина
Следует отметить, что кривая, описывающая зависимость площади пика от концентрации рутина имеет область линейности и область полного насыщения детектора. Отклонение от линейности связано с увеличением концентрации анализируемого вещества.
Рисунок 2.3 - График зависимости площади пика от концентрации кверцетина
По разработанной методике, указанной в п. 2.2.3 раздела подготовка к анализу, получены экстракты травы пустырника сердечного, цветков календулы и плодов боярышника. Далее был проведен хроматомасспектрометрический анализ биофлавоноидов (рутина и кверцетина) в исследуемых образцах. Результаты, полученные в ходе анализа представлены в таблице 2.7 для рутина и в таблице 2.8 для кверцетина.
Таблица 2.7 - Площадь пика для рутина в исследуемых экстрактах
Наименование экстрактаПлощадь пика.10-6, импульсСредняя площадь пика 10-6, импульсы123Экстракт травы пустырника0.07840.077900.07710.0783Экстракт цветков календулы0.03590.035900.03600.0358Экстракт плодов боярышника0.002600.002640.002680.00264
Таблица 2.8 - Площадь пика для кверцетина в исследуемых экстрактах
Наименование экстрактаПлощадь пика.10-6, импульсСредняя площадь пика 10-6, импульсыЭкстракт травы пустырника0.005460.005460.005440.00547Экстракт цветков календулы0.001920.001930.001990.00188Экстракт плодов боярышника0.01720.015400.01210.0168
На основании полученных данных, с использованием градуировочных графиков для рутина (рисунок 2.1) и кверцетина (рисунок 2.2), определи количественное содержание исследуемых биофлавоноидов в экстрактах растительного сырья. Результаты количественного содержания рутина и кверцетина представлены в таблице 2.9 и 2.10, соответственно. Для расчетов использовали данные средних площадей пиков для рутина и кверцетина в анализируемых экстрактах.
Таблица 2.9 - Содержание рутина в исследуемых экстрактах
Наименование экстрактаСодержание рутина.10-3, мг/млЭкстракт травы пустырника0.1900Экстракт цветков календулы0.0353Экстракт плодов боярышника0.0097
Таблица 2.10 - Содержание кверцетина в исследуемых экстрактах
Наименование экстрактаСодержание кверцетина.10-3, мг/млЭкстракт травы пустырника0.0051Экстракт цветков календулы0.0014Экстракт плодов боярышника0.0140
На основании полученных данных (таблица 2.4 и 2.9) было проведено сравнение количественного содержания рутина в анализируемых экстрактах. На рисунке 2.3 представлено сравнение содержания рутина в экстрактах растительного сырья по данным, полученным на основании спектрофотометрического и хроматомасспектрометрического анализа.
Рисунок 2.4 - Сравнение спектрофотометрического и хроматомасспектрометического методов
&n