Разработка методики определения флавоноидов в лекарственном растительном сырье
Дипломная работа - Химия
Другие дипломы по предмету Химия
?агревании на водяной бане. После растворения содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры и доводят 70 % спиртом до метки [25].
)Приготовление раствора ГСО кверцетина проводилось по методике аналогичной методике приготовления ГСО рутина (см. выше).
)Методика приготовления экстрактов из растительного сырья
Приготовление экстрактов из цветков календулы, плодов боярышника и травы пустырника проводилось аналогично методике, описанной в п. 2.2.3.
Проведение количественного анализа биофлавоноидов в растительном сырье методом хроматомасспектрометрии
Анализ проб экстрактов проводился с использованием жидкостного хроматографа Dionex UltiMate 3000, оснащенного трехквадрупольным масс-спектрометром API 2000 c ионизацией электростатическим распылением при атмосферном давлении (API-ES). Регистрация и обработка данных проведена с использованием программного комплекса Analyst 1.5.
Хроматографическое разделение флавоноидов осуществлялось на хроматографической колонке Luna C18 длиной 300 мм и внутренним диаметром 2 мм, в изократическом режиме при следующих условиях:
Подвижная фаза:компонент А - вода (0.37 % раствор муравьиной кислоты);
компонент В - ацетонитрил (0.33 % раствор муравьиной кислоты).
Скорость подачи подвижной фазы:0.250 мл/мин.
Объем вводимой пробы:100 мкл.
Давление на входе колонки:80 атм.
Температура термостата колонки:50?С.
Время анализа:15 мин.
Состав подвижной фазы на выходе из хроматографической колонки регистрировался масс-спектрометрически. В ходе масс-спектрометрического анализа регистрировались хроматограммы по ионному току, обусловленные положительно-заряженными ионами 303 и 610 m/z, соответствующие молекулярным ионам кверцетина и рутина соответственно. Пример хроматограммы представлен на рисунке 2.1.
Рисунок 2.1 - Хроматограмма рутина и кверцетина
Ионизация потока элюэнта проводилась при следующих условиях:
температура в источнике ионов - 180?С;
давление в распылителе:атмосферное (азот);
напряжение на капилляре: 4500 В;
газ 1 (обдув капилляра) - 40 мл/мин;
газ 2 (на входе в источник) - 50 мл/мин;
газ 3 (в источнике) - 90 мл/мин.
Проведение анализа осуществлялось в день приготовления экстрактов для предотвращения окисления флавоноидов.
2.2.5 Использованные реагенты
Сведения об использованных реактивах представлены в таблице 2.1.
Таблица 2.1 - Список использованных реактивов
№ п/пНаименование, формулаПроизводитель, марка1.Трава пустырникаОАО Здоровье, серия 40845 2.Плоды боярышникаОАО Тверская фармацевтическая фабрика, серия 708073.Цветки календулыОАО Тверская фармацевтическая фабрика, серия 505074.Алюминия хлорид АlCl3ГОСТ 3759-75, ч.д.а.5. Кверцетин C15H10O7ООО Фитопанацея, ТУ 2638-012-80884467-10, 99.576.Рутин C27H30O16ООО Фитопанацея, ТУ 2638-011-80884467-10, 98.59.7.Спирт этиловый 95%; C2H5OHООО Реактив, х.ч.8Серная кислота, концентрированная H2SO4Пр-во ОАО Реактив, Санкт-Петербург, ч.д.а.
2.3 Результаты и обсуждение
В ходе работы проводилось исследование лекарственного растительного сырья на количественное содержание биофлавоноидов (рутина и кверцетина).
Производителями анализируемого сырья являются Тверская фармацевтическая фабрика и ОАО Здоровье.
Для объективной оценки были выбраны три образца лекарственного растительного сырья, представленных в таблице 2.2.
Таблица 2.2 - Наименование и производители лекарственного растительного сырья
№ пробыНаименование растительного сырьяПроизводительПроба 1Трава пустырника сердечногоЗдоровьеПроба 2Цветки календулы лекарственнойТверская фармацевтическая фабрикаПроба 3Плоды боярышника кроваво-красногоТверская фармацевтическая фабрика
2.3.1 Определение влажности
Для определения влажности проводили два параллельных определения на содержание влаги в растительном сырье по методике, указанной в п. 2.2.2. Для этого берут по две точные навески (около 5 г) каждой пробы. Отбор проб производился согласно ГОСТ 24027.0-80 Правила приемки и метода отбора проб. В сушильном шкафу при температуре 100-1050С навески были доведены до постоянной массы. После проведения испытаний и расчетов, указанных в п. 2.2.2 получены следующие результаты, приведенные в таблице 2.3.
Таблица 2.3 - Содержание влаги в пробах лекарственного растительного сырья
№ пробыМасса пробы до высушиванияМасса пробы после высушиванияСодержание влаги, %Среднее значение содержания влаги, %Проба 1 Навеска 1 Навеска 2 5.0137 5.0073 4.5976 4.5817 8.30 8.50 8.40Проба 2 Навеска 1 Навеска 2 5.0203 5.0508 4.4329 4.4498 11.70 11.90 11.8Проба 3 Навеска 1 Навеска 2 5.0196 5.0068 4.4925 4.4661 10.50 10.80 10.70На основании проведенных исследований можно сделать вывод о том, что во всех пробах лекарственного растительного сырья содержание влаги соответствует ГФ 11 (содержание влаги для травы пустырника должно быть не более 13%, а для цветков календулы и плодов боярышника - не более 14%).
2.3.2 Количественное определение суммы флавоноидов в растительном сырье спектрофотометрическим методом при оптимальных условиях экстрагирования
В ходе исследования было выявлено, что наиболее полное извлечение определяемых веществ достигалось с использованием 70%-го спирта этилового, временем экстрагирования 2 ч и при температуре проведения эксперимента 60 С. При определении количественного содержания флавоноидов лекарственного растительного сырья в пересчете на рутин, были получены данные, представленные в таблице 2.4. Экс