Применение УФтАУспектрофотометрии в фармацевтической практике
Дипломная работа - Химия
Другие дипломы по предмету Химия
(тонкослойная и другие виды хроматографии) [17,4].Так же применяется для определения природных соединений в растительном и животном сырье. Разработаны методики определения флавоноидов, основанные на образовании окрашенного продукта с хлоридом алюминия в среде уксусной кислоты (406.410 нм), для стандартизации гомеопатических настоек, получаемых из туи [12,15] и чистотела [9,13]. На основе реакции с гидроксамовым реактивом разработан способ фотоколориметрического определения иридоидов (биологически активные вещества в растениях) в сырье и настойке пиона [15] и в сырье пустырника [31]
Помимо этого есть данные о том, что УФ-спектрофотометрия применяется для определения концентрации РНК и ДНК. РНК и ДНК абсорбируют УФ свет и за iет этого есть возможность количественно определять концентрацию этих веществ. [28]
Для идентификации могут быть использованы атлас спектров лекарственных веществ, систематизирующие сведения о характере спектральных кривых и значения удельных показателей поглощения.
Рассмотрим спектр поглощения бензола в УФ-области, приведенный на рис 1. Он имеет три полосы. Самая длинноволновая (255 нм) имеет небольшую интенсивность (200л-моль_1*см-1), так как обусловлена запрещенным -> *-переходом. Этот переход становится возможным только в результате взаимодействия с колебательными уровнями энергии. Соответствующая полоса имеет хорошо выраженную колебательную структуру. В области около 200 нм наблюдается еще одна, более интенсивная ( 8000 л*моль_1*см-1) полоса. Третья, самая интенсивная полоса (105 л*моль_1*см-1) отвечает разрешенному -> *-переходу.
200 220 240 260
Рис. 1. Спектр поглощения бензола в УФ-области.
Поглощение представлено по оси ординат в виде логарифма молярного коэффициента поглощения. [7]
2. Основная часть (описание метода)
УФ спектрофотометрия основывается на измерении количества поглощения веществом электромагнитного излучения в определенной узкой волновой области. Обычно для УФ - измерений используют приближенно монохроматическое излучение в области от 200 до 800 нм. [8]
В качестве источников излучения в УФ-области используют главным образом дейтериевые, а в видимой - вольфрамовые или (в последнее время все чаще) галогеновые лампы. [7]
Для монохроматизации света можно использовать самое простое устройство - светофильтр. [7]
Количественное определение. Спектрофотометрия в ультрафиолетовой области, как было упомянуто выше, широко используется для количественного определения лекарственных средств. Чувствительность метода определяется в основном способностью вещества к поглощению и выражается молярным коэффициентом поглощения. Предельные концентрации веществ, анализируемые при помощи спектрофотометрии, как правило, меньше, чем при обычных, применяемых в кислотно-основном титровании или при весовых измерениях. Это обстоятельство и объясняет тот факт, что спектрофотометрия используется при определении небольших количеств веществ, особенно в различных лекарственных формах.
Основным условием для количественного анализа является соблюдение закона Бугера-Ламберта-Бера Исследования Бугера (1698-1758) и Ламберта (1728-1777) показали, сто относительная оптическая плотность прямо пропорциональна толщине кюветы. Зависимость оптической плотности раствора поглощающего вещества от его молярной концентрации установил Бер (1825-1863). Закон объединяющий в себе все эти зависимости называется законом Ламберта-Бера или Бугера-Ламберта-Бера. [7] Применительно к спектрофотометрии и УФ - видимой области его записывают следующим образом:
Где: - молярный коэффициент поглощения (л*моль*см) при длине волны ,
b - длина оптического пути(см),
с - концентрация поглощающих частиц (моль/л).
Для проверки соответствия закону строят график зависимости: поглощение - длина волны или расiитывают фактор для каждого стандартного раствора и определяют область концентраций, в пределах которой величина А/с остается постоянной.
При помощи данного метода можно определить вещества в составе молекул присутствуют определенные группы - хромофоры, а так же в состав которых входят ароматические фрагменты, тройные или двойные связи, а так же следующие группы: азо -, нитро- , и др.
Существуют и применяются два принципиально различных способа спектрофотометрических количественных определений. (По ГФУ) По одному из них содержание вещества в процентах (х) расiитывают на основании предварительно вычисленной величины поглощения, чаще по величине:
Где b - разведение;- навеска, г.
Примером такого определения является определение содержания кортизона ацетата в таблетках по ГФУ.
Основным недостатком этого метода является общеизвестный факт, что различные спектрофотометры (даже различные приборы одной и той же модели и одного производства) дают значительные отклонения по величине поглощения для одного и того же стандартного раствора.
Этим методом можно определить такие вещества как: меркаптопурин, папаверина гидрохлорид, дубильные вещества (танин), флавоноиды (рутин).
Более достоверные и воспроизводимые результаты обеспечивает сравнение поглощения испытуемого вещества с поглощением стандартного образца, определяемого в тех же условиях. При этом учитываются многочисленные факторы, влияющие на спектрофотометричесие измерения, например установка длинны волны, ширина щели. Поглощение кюветы поправки на поглощение растворителя и т.п.