Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по ветеринарии
Цитоморфология органов иммуногенеза кур при реализации комплексных программ вакцинаций и коррекция иммунного статуса в условиях промышленных птицефабрик
Автореферат докторской диссертации по ветеринарии
|
Страницы: | 1 | 2 | 3 | |
СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА- аРЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Анализ комплексных программ вакцинаций на птицефабриках Красноярского края
Анализ существующих схем специфической профилактики инфекционных болезней на птицефабриках Красноярского края и синдроматики поголовья свидетельствовал о крайней напряженности комплексных программ вакцинаций, тенденции дальнейшего роста кратности антигенных стимуляций, расширении арсенала живых вирусвакцин, что являлось чрезмерной функциональной нагрузкой на иммунную систему птицы раннего периода выращивания, отличающейся неоднородностью живой массы.
Ретроспективный анализ за последние 25 лет показал рост числа вакцинаций птицы. С 1983 по 2010 год количество прививок выросло почти в 4 раза. В настоящее время схемы вакцинопрофилактики включают от 7 до 15 иммунизаций цыплят яичных пород, 7-8 вакцинаций цыплят-бройлеров; 9-10 раз прививают поголовье индюков-бройлеров. Племенную птицу прививают до 23 раз против вирусных,а бактериальных и паразитарных инфекций.
Неуклонно увеличивается набор антигенов. В 80-х годах 20-го века кур вакцинировали против болезни Марека и ньюкаслской болезни. В настоящее время схемы иммунизаций предусматривают применение от 9 до 15 вакцин, в том числе против болезни Марека (БМ), ньюкаслской болезни (НБ), инфекционного бронхита кур (ИБК), инфекционной бурсальной болезни (ИББ), инфекционного ларинготрахеита (ИЛТ), инфекционного энцефаломиелита (ИЭМ), синдрома снижения яйценоскости (ССЯ) и других. В 2004 году суммарное количество вакцинаций по краю достигло более 180,5 млн., из них большую часть составили антигенные стимуляции против НБ, ИББ и БМ.
Все программы иммунизаций начинаются в инкубаториях с одной, чаще двух вакцинаций. Интервал между последующими прививками составляет 7-10 дней, а в отдельные периоды сокращается до 2-5 суток. При этом на молодняк первых двух месяцев жизни приходится более 90% всей антигенной нагрузки.
Исследование суточных цыплят показало, что при выводе 81-83% около 19% цыплят, имеют отклонения живой массы выше или ниже показателей стандарта породы. При нарушениях режимов инкубации процент вывода снижается, а неоднородность цыплят по живой массе увеличивается до 25% и более. При вскрытии выбракованных цыплят наблюдаются признаки эмбрионального недоразвития, в том числеа омфалиты и объемные нерассосавшиеся желточные мешки в грудобрюшной полости. Сравнение динамики гибели птицы разных партий в СПХ Владимировское показало, что ежедневная смертность птицы неблагополучной партии, полученной при низком выводе, превысила показатели благополучной партии в 2,7-3,5 раза, а при вспышке колибактериоза - в 10-16 раз.
Анализ структуры падежа птицы по Красноярскому краю показал значительное сокращениеа инфекционных заболеваний в 2003-2008 годах, при этом основной причиной гибели являлся колибактериоз, на долю которого приходилось от 63% до 96% от всех инфекционных болезней, причем 98-99% павших от колибактериоза - это цыплята первых двух месяцев жизни. Установлена прямая зависимость между гибелью птицы от колибактериоза и вспышками ИББ. Так, в структуре падежа птицы по краю смертность цыплят в 2003 году от ИББ составила 6,5%, от колибактериоза - 11,7%; в 2004 году - 2% и 9% соответственно. В 2005 гибель птицы от ИББ сократилась до 0,1%, что сопровождалось снижением смертности от колибактериоза до 7%.
3.2 Морфометрия и цитоморфология органов иммуногенеза кур в постнатальном периоде развития
3.2.1 Динамика морфометрических параметров органов иммунной системы кур в период выращивания. Органы иммуногенеза клинически здоровых цыплят раннего возраста имели признаки незавершенного морфогенеза и характеризовались интенсивным ростом и становлением основных структурных компонентов в первый месяц жизни, на который приходится основная масса антигенных стимуляций вирусвакцинами.
|
Рис. 2. Динамика темпов роста органов иммунной системы кур в период выращивания, % |
Максимальные темпы роста органов иммуногенеза наблюдались в первый месяц жизни (рис. 2). Скорость роста тимуса за 30 суток составила 167%, фабрициевой бурсы - 186%, селезенки - 193% (Р<0,001). На этот же период приходились максимальные показатели относительной массы тимуса - 0,550,03%, бурсы - 0,500,08% и селезенки - 0,400,02% (рис. 3-А). Абсолютная масса тимуса за первый месяц жизни увеличилась в 11, фабрициевой бурсы - в 28, селезенки - в 58 раз. Тимус рос поступательно в течение периода выращивания, его абсолютная масса за четыре месяца жизни поднялась до 4,17 г, что в 28,4 раза превысило исходные показатели (рис. 3-Б).
|
|
Рис. 3. Динамика относительной (А) и абсолютной (Б) массы органов иммунной системы кур в период выращивания |
|
Абсолютная масса фабрициевой бурсы достигла максимальных величин на 30-е и 120-е сутки, составляя 1,30 и 1,82 г соответственно. С 30-х по 60-е сутки жизни бурса прекратила рост, ее абсолютная масса сократилась в 2,5 раза, относительная масса - почти в 5 раз по сравнению с показателями 30-х суток (Р<0,01). Селезенка росла до трехмесячного возраста, увеличиваясь в 110 раз относительно исходных данных, затем ее показатели стабилизировались.
3.2.2 Структурно-функциональная характеристика тимуса кур в постнатальном периоде развития. Тимус суточных цыплят имел типичное строение с отчетливым делением долек на корковую и мозговую зону. Индекс коры составил 1,260,03 ед.; плотность лимфоцитов в условном поле зрения коры составила 107,12,36, в медулле - 24,61,17 клеток; митотический индекс - 1,470,22; количество телец Гассаля - 1,440,39, их размеры - 8,780,23 мкм. В местах скопления эпителиальных клеток медуллы обнаружен субстрат, дающий позитивную реакцию на кислые гликозаминогликаны (ГАГ).
У суточных цыплят с признаками эмбрионального недоразвития в 63% обнаружена гипоплазия тимуса, характеризующаяся сокращением весового индекса в 3-4 раза относительно показателей полноценно развитой птицы, фестончатыми контурами долек, отсутствием деления на корковую и мозговую зоны, криброзным видом субкапсулярного слоя, отсутствием телец Гассаля.
В процессе постнатального развития у здоровых кур 30-, 60-, 90- и 120-суточного возраста размеры долек тимуса увеличивались, морфометрические параметры колебались в зависимости от состояния иммунной системы.
3.2.3 Структурно-функциональная характеристика фабрициевой бурсы в постнатальном периоде развития. Максимальное развитие структур фабрициевой бурсы зарегистрировано у цыплят 30- и 120-суточного возраста, у 45-60-суточной птицы наблюдались признаки инволюции органа.
Фабрициевая бурса суточных цыплят типичного строения: наружная оболочка - серозная, на каудальной поверхности встречались участки, покрытые адвентицией; средняя оболочка - мышечная, образована двумя слоями гладких мышц; слизистая оболочка формировала 7-8 высоких и 5-6 низких складок. С возрастом число высоких складок увеличилось до 14, низких - сократилось до 2. Соединительная ткань представлена преимущественно коллагеновыми и ретикулярными, реже эластическими волокнами, расположенными в стенках крупных сосудов и центре складок.
Эпителиальная выстилка складок представлена интерфолликулярным (ИФЭ) и фолликул-ассоциированным (ФАЭ) эпителием. ИФЭ образован цилиндрическими, камбиальными и светлыми бокаловидными клетками. Цилиндрические клетки с пенистой цитоплазмой, дающей положительную реакцию на кислые ГАГ. Бокаловидные клетки расположены тонкой ножкой на базальной мембране, их цитоплазма заполнена аргирофильными гранулами, реакция на кислые ГАГ отрицательная. Камбиальные клетки низкие, некоторые из них с аргирофильными гранулами в цитоплазме. ФАЭ расположен над куполом фолликулов, образован клетками, не содержащими кислые ГАГ.
Случаев врожденной аплазии фабрициевой бурсы не установлено. Однако у цыплят с живой массой 33-35 г, абсолютная масса органа была ниже средних возрастных показателей на 25%, относительная масса - на 12%.
У цыплят первой недели жизни лимфатические фолликулы складок мелкие, диаметром от 60 до 95 мкм и средней площадью 4994,7405,4 мкм2, без деления на корковую и мозговую зоны. Часть складок не содержала фолликулы, вследствие чего складки приобретали древовидную форму, часть фолликулов не была заполнена лимфоцитами, что свидетельствовало о незавершенности морфогенеза бурсы у цыплят первой недели жизни.
На 30-е сутки площадь фолликулов увеличилась до 0,0640,003 мм2. Они плотно заполняли складки, приобретая полигональную форму. У 45-60-суточной птицы складки извилистые с неравномерной эпителиальной выстилкой и сниженной секрецией кислых ГАГ; коллагеновые волокна грубые и разросшиеся; площадь фолликулов сокращена до 0,0380,004 мм2, часть фолликулов в состоянии железистого или кистозного перерождения. У трехмесячной птицы складки бурсы вновь укрупнялись, фолликулы имели запустевший вид, их площадь выросла до 0,0560,004 мм2. В 120 суток часть складок содержала крупные фолликулы, площадью 0,13-0,15 мм2, другие складки имели мелкие фолликулы площадью 0,017-0,045 мм2. Высота эпителия достигла 35-40 мкм, секреция кислых ГАГ интенсивная.
3.2.4 Структурно-функциональная характеристика селезенки кур в постнатальном периоде развития. В первые дни постэмбрионального развития селезенка характеризовалась отсутствием оформленных лимфатических фолликулов и рыхлыми диффузными скоплениями мелких лимфоцитов. Клеточный состав красной пульпы у суточных цыплят представлен преимущественно эритроцитами (28,92,35%), лимфоцитами (24,91,18%) и гранулоцитами (14,81,34%). Встречались молодые гранулоциты с бобовидными или овальными ядрами. Маргинальная зона имела запустевший криброзный вид и содержала сеть ретикулярных волокон.
За первые адве недели жизни толщина капсулы увеличилась с 10,41,03 мкм до 18,82,23 мкм, появились единичные фолликулы размером 114,213,8 мкм.. Содержание эритроцитов и гранулоцитов сократилось, а уровень лимфоцитов, макрофагов и плазмоцитов постепенно увеличивался, стабилизируясь у 30-45-суточной птицы. С возрастом периартериальные лимфоидные скопления расширялись и плотно заполнялись лимфоцитами, на поперечном срезе встречалось до 5-7 фолликулов диаметром от 90 до 220 мкм.
3.2.5 Структурно-функциональная характеристика лимфоидной ткани кишечника и печени. Лимфоидная ткань, ассоциированная со слизистыми оболочками кишечника и печенью, слабо представлена у цыплят первых двух недель жизни, о чем свидетельствовало отсутствие оформленных лимфатических фолликулов в подслизистом слое слепых кишок и лимфоидных скоплений в печени. Единичные мелкие фолликулы появлялись в кишечнике у птицы 14-21-суточного возраста. В 30-60 суток количество фолликулов не менялось, но их размеры достигали 125-160 мкм. У трех-четырех месячной птицы в области бифуркации слепых кишок обнаружены скопления из 6-8 крупных овальных окруженных коллагеновыми волокнами фолликулов,а формирующих слепокишечную миндалину. Помимо оформленных фолликулов встречались обширные диффузные поля лимфоцитов, инфильтрирующих собственную пластинку слизистого слоя и подслизистую основу кишечника.
Лимфоидные очаговые скопления в печенивпервыеобнаружены у цыплят старше двух-трехнедельного возраста. Они не имели постоянной локализации, располагались вблизи кровеносных сосудов, отличались размерами и плотностью заполнения лимфоцитами.
3.3 Возрастная динамика показателей крови иммунизированных и неиммунизированных кур
3.3.1 Динамика морфобиохимических показателей крови иммунизированных и неиммунизированных кур в период выращивания. На фоне закономерных возрастных изменений показателей крови установлены сдвиги морфобиохимических, цитохимических, цитокариометрических и метаболических параметров, обусловленные многократными иммунизациями.
Содержание гемоглобина в течение первых шести суток снизилось на 20,8% относительно суточных цыплят (Р<0,05), а к концу третьей недели стабилизировалось на уровне 100-110 г/л (табл. 2).
Таблица 2 - Динамика морфобиохимических показателей крови привитых кур яичных кроссов Родонит-2, Хайсекс браун и Хайсекс уайт за период выращивания
Возраст, сутки |
Гемоглобин, г/л |
Эритроциты, 1012/л |
ейкоциты, 109/л |
СОЭ, мм/ч |
Общий белок, г/л |
1 |
102,746,52 |
1,980,11 |
12,180,63 |
2,010,29 |
24,01,32 |
6 |
81,324,06* |
2,060,13 |
17,701,05** |
2,310,18 |
21,91,10 |
12 |
91,042,85 |
2,070,07 |
24,991,52*** |
2,680,29 |
34,72,25** |
18 |
98,913,32 |
2,340,03* |
22,340,83*** |
2,340,21 |
31,40,67** |
24 |
107,423,95 |
2,680,13** |
31,690,93*** |
3,060,22* |
33,92,14** |
30 |
104,412,59 |
2,760,07** |
33,251,08*** |
2,580,30 |
34,21,97** |
60 |
105,903,05 |
2,450,06** |
28,642,41*** |
3,100,25* |
32,81,17** |
90 |
104,651,83 |
2,500,14* |
26,341,08*** |
3,650,18* |
36,31,85** |
120 |
100,362,99 |
2,470,12* |
26,772,19** |
3,160,25* |
38,42,11** |
Примечание - * Р<0,05; ** Р<0,01; *** Р<0,001 по сравнению с показателями суточной птицы
|
Рис. 4. Соотношение глобулиновых фракций крови привитых кур раннего возраста |
За период выращивания уровень общего белка повысился почти на 60% с 24,01,32 г/л до 38,42,11 г/л (Р<0,01), что характерно для постэмбрионального периода развития птицы. У цыплят раннего возраста в сыворотке крови преобладали альбуминовые белковые фракции. За первые три недели уровень глобулинов увеличился, а содержание альбуминов сократилось с 53,63,15% до 30,41,95% (Р<0,01). Вакцинации вызывали изменение соотношения глобулиновых фракций: ?-глобулинемия, характерная для первых суток, сменялась ?-глобулинемией, уровень которой достигал 46,92,75% (рис. 4). Высокое содержание ?-глобулинов сохранялось на протяжении всего периода интенсивных антигенных стимуляций. Показатели СОЭ были минимальными у суточной птицы, что связано с низким уровнем общего белка, в том числе глобулиновых фракций. После каждой иммунизации СОЭ увеличивалась в 1,5-2 раза, оставаясь в верхних пределах физиологической нормы.
Количество эритроцитов у суточных цыплят составило 1,980,11?1012/л, что в 1,5-1,7 раза ниже, чем у взрослых кур, из них 10-12% занимали незрелые клетки. К 30-м суткам уровень эритроцитов увеличился на 33,5% (Р<0,05). Содержание лейкоцитов у суточной птицы составило 12,180,63?109/л, что почти в 2 раза ниже показателей взрослой птицы. За 30 суток количество лейкоцитов выросло в 3 раза по сравнению с исходным состоянием (Р<0,001). Вакцинации вели к развитию абсолютного и относительного лейкоцитоза, наиболее выраженного у 30-суточной птицы (табл. 2). В 90-120-суточном возрасте уровень лейкоцитов стабилизировался на уровне 26-27?109/л.
Рост лейкоцитов при антигенных стимуляциях происходил, прежде всего, за счет лимфоцитов, хотя уровень моноцитов в течение первого месяца также вырос с 0,8 до 7,6% (Р<0,001). У суточных цыплят гранулоциты занимали 70-71%, из них на псевдоэозинофилы приходилось 63,52,43% (табл. 3).
Таблица 3 - Динамика возрастных изменений морфологического состава белой крови кур яичных кроссов при антигенных стимуляциях вирусвакцинами*, %
Возраст, сутки |
Базофилы |
Эозинофилы |
Псевдо-эозинофилы |
имфоциты |
Моноциты |
6-8 часов |
1,80,29 |
6,10,47 |
63,52,43 |
27,81,09 |
0,80,29 |
1 |
1,00,47 |
5,00,67 |
51,02,02 |
42,31,91 |
1,00,47 |
6 |
1,00,42 |
3,00,82 |
22,32,28 |
72,32,99 |
2,30,55 |
12 |
0,80,42 |
4,20,29 |
30,23,08 |
62,03,12 |
2,80,47 |
18 |
0,60,27 |
1,20,65 |
34,82,64 |
60,22,34 |
3,20,22 |
24 |
1,80,22 |
3,00,35 |
32,42,84 |
57,22,72 |
5,60,84 |
30 |
1,20,27 |
4,80,22 |
28,03,03 |
58,11,65 |
7,60,82 |
45 |
1,90,34 |
5,30,18 |
25,92,24 |
62,62,49 |
4,30,58 |
60 |
0,70,29 |
2,50,46 |
18,51,33 |
74,71,98 |
2,70,59 |
70 |
0,70,27 |
2,50,52 |
15,31,08 |
77,91,76 |
3,60,47 |
90 |
2,40,27 |
4,70,39 |
24,43,13 |
66,02,15 |
2,50,32 |
120 |
3,00,30 |
4,20,34 |
22,82,32 |
64,82,90 |
5,00,29 |
Примечание - * программа вакцинаций включала однократные антигенные стимуляции против БМ, ИЭМ, ССЯ, двукратные против ИЛТ, трехкратные против ИББ, НБ, четырехкратные против ИБК
Абсолютное содержание лимфоцитов у суточных цыплят составило 3,490,22?109/л, относительное - 27,81,09%. У непривитой птицы гранулоцитарный профиль крови сохранялся до трехнедельного возраста. У цыплят привитых в первые сутки жизни против БМ и ИБК, резко менялся профиль крови: уровень лимфоцитов за сутки увеличился на 53,2%, а к шестым суткам - в 2,6 раза (Р<0,01) относительно исходного состояния.
Абсолютный и относительный лимфоцитоз был характерен для всего периода вакцинаций. При интервалах между прививками 10-14 дней лимфоциты составляли 62-67%, если интервалы сокращались до 3-5 суток, в крови наблюдался высокий уровень лимфоцитов, достигающий у отдельных особей 80-85%. При этом содержание гранулоцитов снижалось до 10-12%, что, на наш взгляд, отрицательно влияло на устойчивость птицы к заражению условно-патогенными микроорганизмами, циркулирующими среди поголовья.
|
Рис. 5. Популяция лимфоцитов крови при вакцинациях, % |
В крови только что вылупившихся цыплят малые лимфоциты занимали 78,52,27%, средние - 21,03,06%, большие - 0,50,33% (рис. 5). После первых иммунизаций уровень малых лимфоцитов сократился на 11%, а средних - вырос почти на 40% относительно исходных показателей. К 30 суткам число малых лимфоцитов сократилось в 4,3 раза, средних лимфоцитов увеличилось в 3 раза, а больших - почти в 38 раз относительно данных суточной птицы (Р<0,001). На фоне вакцинаций в крови появились большие гранулярные лимфоциты, соответствующие NK-клеткам, проявляющим цитотоксическую активность в отношении клеток, пораженных вирусами, опухолевыми клетками и некоторыми микроорганизмами.
3.3.2 Цитокариометрические изменения лимфоцитов кур в постнатальном периоде развития и при антигенных стимуляция. Антигенные стимуляции молодняка кур вызывали усиление биосинтетических процессов в иммунокомпетентных клетках и колебания цитокариометрических параметров лимфоцитов крови, отражающие развитие общего адаптационного синдрома.
|
Рис. 6. Распределение средних объемов ядер лимфоцитов крови у привитой и интактной птицы |
Распределение объемов ядер лимфоцитов крови показало неоднородность ядерной популяции. Средний объем ядер у суточной птицы составил 126,42,46 мкм3. В течение нескольких часов после первых прививок показатель снизился на 3,2% относительно интактной птицы, что, на наш взгляд, являлось следствием вакцинального стресса и свидетельствовало о развитии стадии тревоги общего адаптационного синдрома (рис. 6). У 6-12-суточного молодняка объемы ядер колебались от 221 мкм3 до 408 мкм3.
Средний объем ядер увеличился на 12% относительно показателей непривитой птицы (Р<0,05), что расценивалось нами, как развитие стадии резистентности. У 18-30-суточной птицы нарастала гетерогенность ядер, их объемы распределялись от 21 мкм3 до 640 мкм3. Появлялись клетки с мелкими оптически плотными ядрами объемом до 21-45 мкм3, свидетельствующими об истощении адаптивных возможностей лимфоцитов.
У суточных цыплят преобладали лимфоциты с высоким ЯКО - 0,7 (25,40,61%), 0,8 (34,72,85%) и 0,9а (10,71,08%). К концу первого месяца жизни подавляющее число лимфоцитов имели низкое ЯКО - 0,3 (30,83,72%), 0,4 (28,83,41%), 0,5 (24,32,28%), что отражало усиление в них биосинтетических процессов и сопровождалось появлением в цитоплазме вакуолей и образованием многочисленных цитоплазматических выпячиваний.
|
Рис. 7. Средний цитохимический коэффициента ЛКБ у привитой и интактной птицы, усл. ед. |
3.3.3 Цитохимические параметры лейкоцитов крови кур в постнатальном периоде развития и при антигенных стимуляциях. Цитохимические исследования клеток крови показали положительную реакцию на катионные белки гранул гетерофилов, моноциты и лимфоциты давали отрицательную реакцию. Содержание ЛКБ в псевдоэозинофилах у суточных цыплят составило 1,020,09 ед., что свидетельствовало о низком уровне естественной резистентности. Преобладали клетки со слабоположительной (48%) и умеренной (33%) реакцией. У семисуточных привитых цыплят уровень ЛКБ снижался на 4,9% (рис. 7). У 21-суточных привитых цыплят наблюдали снижение уровня ЛКБ на 16,3% по сравнению с непривитойа птицей. В 45-60-суточном возрасте содержание ЛКБ составило 1,6-2 ед., а в трех-четырех месячном возрасте поднялось до 2,05-2,23 усл. ед., что соответствовало показателям среднего уровня естественной резистентности. Псевдоэозинофилы содержали два типа катионных гранул - мелкие, дающие светло-зеленое окрашивание цитоплазмы, и крупные удлиненные светло- или темно-зеленого цвета. Гранулы ЛКБ эозинофилов и базофилов - крупные интенсивно-зеленые.
Установлено отсутствие миелопероксидазы в псевдоэозинофильных гранулоцитах и интенсивная положительная реакция эозинофилов и базофилов, что свидетельствовало о видовых особенностях кислородного метаболизма гетерофилов кур по сравнению с млекопитающими.
У суточных цыплят гликоген содержался в цитоплазме гранулоцитов и тромбоцитов. За два месяца жизни СЦК гликогена увеличился в 2,7 раза (Р<0,01). Около 12-14% гетерофилов крови, давали отрицательную реакцию, что являлось показателем функциональной незрелости этих клеток. Лимфоциты крови 1-7-суточных цыплят не содержали гликогена, на 14-21 сутки у 16-20% лимфоцитов привитой птицы появлялся ШИК-положительный субстрат, наличие которого характерно для В-лимфоцитов. В эозинофилах и базофилах наблюдалось диффузное окрашивание цитоплазмы в красноватый цвет, при этом гранулы клеток всегда давали ШИК-отрицательную реакцию.
Таким образом, незначительные запасы ЛКБ и энергетического субстрата в лейкоцитах периферической крови цыплят раннего постнатального возраста, а также отсутствие миелопероксидазы в псевдоэозинофильных гранулоцитах, характеризовали низкие потенциальные возможности этих клеток в качестве фагоцитов и свидетельствовали об особенностях их метаболизма у кур.
3.3.4 Особенности кислородного метаболизма клеток цельной крови кур в постнатальном периоде развития и при вакцинациях. Исследование кинетики генерации АФКа клетками цельной крови выявило специфические особенности кислородного метаболизма кур. Использование в качестве ХЛ-зондов люцигенина и люминола позволило определить, что в спектре АФК, генерируемых клетками цельной крови кур, преобладает супероксиданион (О2?), т.к. объем его внеклеточной продукцииа ва 10-24а раза превосходил продукцию люминолзависимых радикалов (Н2О2, ОН?, HOCl?) как в спонтанном, так и в антигенактивированном состоянии (рис. 8).
|
|
Рис. 8. Кинетика индуцированной (1, 2) и спонтанной (3, 4) генерации люцигенин- (А) и люминол- (Б) зависимых АФК клетками цельной крови кур (1 и 3 - разведение крови в 2 раза, 2 и 4 - разведение крови в 5 раз) |
|
При использовании люцигенина время достижения максимума ХЛ сокращалось на 4-25% по сравнению с люминолом и наблюдалась достоверная (Р<0,01) разница этого показателя между спонтанной и индуцированной ХЛ у суточных и 90-дневных цыплят. Удельная генерация люцигенинзависимых АФК в 30-38 раз превысила продукцию люминолзависимых АФК у суточных и 210-дневных птиц (табл. 4).
Таблица 4 - Возрастная динамика удельной антигениндуцированной продукции АФК лейкоцитами и активными фагоцитами крови кур (разведение крови 1:1)
Возраст, сутки |
S/лейкоцит, имп./кл.?106 |
S/фагоцит, имп./кл. ?106 |
||
юминол |
юцигенин |
юминол |
юцигенин |
|
1 |
1,16 0,16 |
35,13 10,45 |
2,23 0,19 |
66,44 18,82 |
30 |
1,26 0,19 |
23,11 3,96 |
2,85 0,26 |
51,97 6,45 |
60 |
1,13 0,26 |
23,32 9,98 |
2,64 0,71 |
54,94 25,59 |
90 |
0,43 0,07 |
7,08 1,10 |
0,89 0,14 |
14,45 2,41 |
120 |
0,37 0,04 |
6,29 1,06 |
0,64 0,07 |
11,24 1,89 |
210 |
0,75 0,12 |
28,54 10,57 |
1,26 0,18 |
44,97 14,79 |
500 |
0,67 0,13 |
12,80 1,69 |
1,19 0,28 |
23,53 4,41 |
Эта особенность указывала на значительное отличие кислородного метаболизма клеток крови кур от рыб, амфибий и млекопитающих, у которых преобладают люминолзависимые формы АФК.
Степень разведения крови изменяла объема и интенсивность продукции АФК, но не оказывала значительного влияния на время наступления максимума ХЛ. Разведение цельной крови в пять раз приводило к уменьшению спонтанной и индуцированной ХЛ в 1,5-3 раза, по сравнению с двукратным разведением. Кинетика показателей генерации АФК у кур в постнатальном онтогенезе носила волнообразный характер и демонстрировала два пика максимальной активности - на 30-е и 210-е сутки (рис. 9).
|
|
Рис. 9. Возрастная динамика параметров кинетики индуцированной и спонтанной генерации люцигенин- (А) и люминолзависимых (Б) аАФК клетками цельной крови кур
К 30-м суткам индуцированная светосумма люцигенин- и люминолзависимых АФК увеличилась в 1,6 и 2,7 раза, а спонтанная - в 2,6 и 2,8 раза соответственно, по сравнению с птицей суточного возраста. Второй пик активности продукции АФК, зарегистрированный у 210-суточной птицы, отличался крайней неоднородностью параметров ХЛ, о чем свидетельствовала высокая вариабельность их значений. Объем индуцированной ХЛ у 210-суточной птицы увеличился в 2,6 раза относительно средневозрастных показателей (22,88,37?106 против 8,771,25?106 имп. за 90 мин.), а у 28,6% особей - в 5,6 раза (491,98?106 против 8,771,25?106 имп. за 90 мин.).
Всплеск индуцированной активности свободнорадикальных процессов на 30- и 210-е сутки, свидетельствовали не столько об увеличении потенциальных возможностей клеток крови, участвующих в реакциях неспецифической защиты, сколько о дисбалансе прооксидантной и антиокислительной системы организма, представляющем реальную угрозу повреждения экзо- и эндоцеллюлярных молекулярных структур клеток.
Общая индуцированная продукция люцигенинзависимых АФК у трехмесячных цыплят по сравнению с первыми и 210-и сутками снижена в 2 и 5 раз соответственно. В 120-дневном возрасте параметры ХЛ находились на уровне суточной птицы и были в 2-6 раз ниже показателей 210-суточных кур. У кур старше 500-дней снижалась активность кислородного метаболизма клеток крови, что указывало на сокращение потенциальных возможностей адаптивного иммунитета.
Анализ индекса активации (ИА) показал его значительные колебания в процессе постнатального онтогенеза. Минимальный ИА зарегистрирован при люцигенинзависимой ХЛ у 60-и и 500-суточной птицы - 1,49 и 1,95 ед. соответственно, максимальный - 5,88 ед. у 90-суточных кур на фоне низкой общей продукции АФК, что, демонстрировало высокие потенциальные возможностиа клеток крови к реакции на антигенную стимуляцию.
Исследование влияния вакцинации суточных цыплят против БМ не выявило достоверных изменений в продукции АФК клетками периферической крови. Однако, через 5 ч после прививки показатели интенсивности продукции люцигенин- и люминолзависимых АФК снижались на 6% и 10%, а суммарная генерация АФК - на 6% и 13% относительно интактных кур (рис. 10).
|
|
Рис. 10. Параметры хемилюминесцентной кинетики активированной invitro и спонтанной генерации АФК клетками цельной крови интактных и привитых суточных цыплят через 5 часов после иммунизации против БМ |
|
Уровень спонтанной генерации люминолзависимых АФК у привитых против БМ цыплят был ниже, чем у интактной птицы на 37,5%, а интенсивность реакции - на 9,4%. При этом спонтанная продукция супероксиданиона увеличилась на 41,3%. аУ привитых кур выросло содержание лейкоцитов и доля фагоцитов с 525 до 663%; снизилась удельная индуцированная in vitro генерация АФК и время выхода на максимум индуцированной продукции люцигенинзависимых АФК на 8,3%, а спонтанной - в 2,14 раза. У привитой птицы ИА сократился на 33,5% для люцигенинзависимых АФК и повысился на 52% дляа люминолзависимых АФК, что свидетельствовало о снижении генерации первичных радикалов кислорода и повышении объемов вторичных АФК под влиянием вакцинного вируса БМ.
Массированные антигенные стимуляции оказывали негативное влияние на способности клеток крови к продукции АФК. Так, у цыплят 55-суточного возраста через 48 ч после очередной иммунизации против ИБК объем продукции люцигенинзависимых АФК и максимальная интенсивность индуцированной ХЛ сократились более, чем в 3 раза (Р<0,01), спонтанной - в 1,7 раза относительно суточной птицы. При этом генерация люминолзависимых АФК снизилась в 1,4-1,6 раза, содержание лейкоцитов в крови увеличилось в 1,89 раза, количество фагоцитов снизилось в 2,4 раза по сравнению с суточными цыплятами, что привело к сокращению удельной активности генерации АФК в ответ на антигенную стимуляцию in vitro частицами латекса.
У 58-суточной птицы через 48 часов после иммунизации против ИЛТ светосумма индуцированных и спонтанных люцигенинзависимых АФК снизилась на 30,5% и 11,6% по сравнению с показателями до вакцинации (рис. 11). Индуцированная продукция люминолзависимых АФК сохранилась на прежнем уровне, но почти в 2 раза сократилось время достижения максимума ХЛ-кривой, с 235 мин. до 121 мин. (Р<0,05). Уровень лейкоцитов увеличился до 22,82,01?109/л, фагоцитарная активность клеток составила 35,75,34%.
|
|
Рис. 11. Динамика показателей активированной invitro и спонтанной продукции люцигенин- (А) и люминолзависимых АФК (Б) клетками крови молодняка кур через 48 часов после иммунизаций против ИЛТ, ИБК и НБ |
|
Ревакцинация 64-суточных цыплят против ИБК стимулировала рост индуцированной продукции люминол- и люцигенинзависимых АФК через 48 ч после иммунизации на 22,2% и 61,7% соответственно. У 66-суточных цыплят интенсивность продукции индуцированных люцигенинзависимых АФК в 1,5 раза превысила показатели кур 58-суточного возраста.
Вакцинация 66-суточной птицы против НБ обусловила истощение функциональной активности клеток в отношении продукции всех АФК. Объем индуцированной и спонтанной продукции люцигенинзависимых АФК через 48 ч после вакцинации против НБ сократился почти в 2 раза относительно предыдущего возраста. Спонтанная продукция люминолзависимых АФК сохранилась на прежнем уровне, а индуцированная - снизилась в 1,75 раза.
Максимальный ИА люминолзависимых АФК наблюдался у 68-суточных кур, ревакцинированных против ИБК; люцигенинзависимых - у 55-суточных цыплят после стимуляции против ИБК. Вакцинация против НБ вызывала резкое снижение ИА люминолзависимых АФК в 2,25 раза (Р<0,01), а люцигенинзависимых - в 1,43 раза. Фагоцитарная активность лейкоцитов после вакцинации против НБ сократилась в 1,5 раза.
Таким образом, кислородный метаболизм клеток цельной крови кур характеризовался преобладанием генерации первичных радикалов кислорода, как в спонтанном, так и в антигениндуцированном состоянии. Иммунизации птицы вирусвакцинами подавляли интенсивность и объемы индуцированной и спонтанной продукции люминол- и люцигенинзависимых АФК, что свидетельствовало о снижении неспецифической резистентности организма и сокращении потенциальных возможностей клеток цельной крови кур к ответу на антигенную стимуляцию.
3.4 Влияние многократных антигенных стимуляций на органы и ткани иммунологического обеспечения кур
3.4.1 Цитоморфология тимуса кур при многократных вакцинациях. Многократные антигенные стимуляции молодняка кур вызывали гиперплазию лимфоидных структур органов иммуногенеза, интенсивную плазмоцитарную реакцию и развитие иммунопатологических процессов, характеризующихся лимфофолликулярной гиперплазией тимуса, преждевременной инволюцией фабрициевой бурсы и системным гиалинозом сосудов тимуса и селезенки.
Тимус реагировал на вакцинацию суточных цыплят против БМ ростом абсолютной массы на 5-6%, относительной - на 6-15% в течение суток после стимуляции. При одновременной стимуляции против ИБК и БМ разница с непривитой птицей достигала 20% (Р<0,05), что было обусловлено пролиферацией лимфоцитов корковой зоны, о чем свидетельствовал рост митотического индекса и индекса коры на 54-55% по сравнению с интактной суточной птицей (Р<0,01). При этом плотность лимфоцитов в условном поле зрения коры выросла на 5%, медуллы - почти на 13%.
В корковой зоне наблюдалась картина звездного неба, в мозговом веществе усилилась секреция кислых ГАГ эпителиальными клетками. Отмечалось полнокровие тимуса, отечность междольковой соединительной ткани, активизация эндотелия мелких сосудов. Количество телец Гассаля в течение суток выросло почти в 2 раза по сравнению с непривитой птицей. На 6-е сутки после начала вакцинаций индекс коры сократился на 31% и составил 1,060,05 ед., плотность лимфоцитов в коре снизилась до 110,52,21 клеток, а в мозговой зоне увеличилась и составила 29,20,91 клеток. Содержание телец Гассаля увеличилось с 2,80,34 у привитых суточных цыплят до 6,50,39 у шестисуточной птицы. В сосудах кортико-медуллярной границы и в междольковой волокнистой ткани появлялись первые плазмоциты.
Длительные антигенные стимуляции вели к росту показателей индекса коры, плотности лимфоцитов в условном поле зрения коры и медуллы, количества и размерам телец Гассаля у 12-18-суточной птицы. У 30-суточных цыплят после 6-8-кратных вакцинаций в верхних слоях корковой зоны появлялись лимфоидные фолликулы, появление которых свидетельствовало о развитии лимфофолликулярной гиперплазии тимуса.
У 90-95-суточных кур в области кортико-медуллярной границы тимуса встречались фолликулы со светлыми центрами. По завершении программ вакцинаций, включающих до 15 прививок, в тимусе 120-дневных кур помимо многочисленных фолликулов обнаружен гиалиноз сосудов мелкого и среднего калибра, характеризующийся отложением в иха стенках и периваскулярных пространствах стекловидных гомогенных масс, что являлось, по-нашему мнению, следствием фиксации циркулирующих иммунных комплексов.
3.4.2 Цитоморфология фабрициевой бурсы кур при многократных вакцинациях. Фабрициевая бурса реагировала на вакцинации против ИБК и БМ ростом абсолютной и относительной массы на 17% и 10,4% соответственно в течение суток после стимуляции. На шестые сутки абсолютная масса бурсы у привитых цыплят увеличилась на 32,2% (Р<0,05), относительная масса - на 22,4%а по сравнению с непривитой птицей аналогичного возраста.
Иммунизация семисуточных цыплят против ИББ вызывала резкий рост массы органа в 1,5-1,7 раза относительно показателей непривитой птицы. Орган становился отечным, с набухшими складками, покрытыми обильной слизью. Складки приобретали изрезанные контуры, эпителиальная выстилка становилась неравномерной, вакуолизированной, с участками десквамации. Площадь фолликулов увеличилась до 0,0130,001 мм2, т.е. в 1,82 раза относительно суточной привитой птицы. Фолликулы крупные вытянутые со светлой мозговой зоной, рыхло заполненной пикнотичными лимфоцитами. В центре отдельных фолликулов обнаружены скопления распадающихся клеток. Корковая зона узкая, образована одним-двумя рядами малых лимфоцитов.
В соединительной ткани у привитой птицы появлялись плазмоциты разной степени зрелости. У 15-суточных цыплят преобладали плазмобласты, у трехнедельной птицы - незрелые плазмоциты. У 30-суточных цыплят суммарное содержание плазмоцитов в 30 полях зрения составило 179,24,08 клеток, среди которых преобладали зрелые клетки.
У привитой птицы отмечалась гиперплазия лимфатических фолликулов, они плотно заполняли складки и приобретали полигональную форму, их площадь у 30-суточной птицы увеличилась до 0,1070,028 мм2. Корковое вещество содержало 6-8 рядов клеток; кортико-медуллярная граница имела извитые контуры; в мозговой зоне встречались лимфобласты и фигуры митоза; росло число фолликулов, контактирующих с эпителиальной выстилкой; увеличилась высота эпителия складок и усилилась секреция кислых ГАГ.
Не смотря на продолжающиеся антигенные стимуляции, в фабрициевой бурсе 60-суточного молодняка развертывались инволютивные процессы. Размеры фолликулов сокращались в 1,7-2,2 раза относительно показателей месячной птицы и составляли 0,0470,005 мм2, появлялись фолликулы в состоянии кистозного или железистого перерождения, эпителиальная выстилка становилась неравномерной, уменьшалась секреция кислых ГАГ, суммарное содержание плазмоцитов снижалось до 1024,04 клеток.
Вакцинация 105-110-суточного молодняка кур комбинированной убитойа вакциной, включающей антигены НБ, ИБК и ССЯ, вызывала резкий рост размеров фабрициевой бурсы до 15?22 мм, что сопровождалось гиперплазией фолликулов, всплеском секреторной активности эпителиальной выстилки, интенсивной плазмоцитарной реакцией в соединительной ткани.
3.4.3 Цитоморфология периферических органов иммунной системы кур при вакцинациях. Иммунизации вызывали изменения морфофункциональных показателей селезенки, лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистой оболочкой кишечника и печенью. Вакцинация суточных цыплят обеспечила рост абсолютной массы селезенки на 11,7% относительно непривитой птицы. У 30-суточных цыплят на поперечном срезе селезенки содержалось 5-6 фолликулов, у 45-60-суточной птицы - 7-8 фолликулов.
Динамика накопления плазмоцитов в селезенке аналогична реакции фабрициевой бурсы. В первые 15 дней после начала программы вакцинаций плазмоциты составляли 11,30,41% клеток красной пульпы, причем плазмобласты и незрелые плазмоциты занимали более 8%. Они формировали небольшие скопления вблизи сосудов и по периферии лимфатических фолликулов. К 30-м суткам содержание плазмоцитов увеличилось в 2 раза по сравнению с предыдущим возрастом. В 45-60-суточном возрасте уровень плазмоцитов составил 12-15%, нарастало число макрофагов и гранулоцитов, появилось плазматическое пропитывание стенок сосудов. К 120 суткам плазматизация сосудов разного калибра становилась повсеместной.
Лимфоидная ткань, ассоциированная со слизистой оболочкой толстого кишечника, реагировала на антигенные стимуляции увеличением размеров лимфатических фолликулов цекальной миндалины, диффузной инфильтрацией собственной пластины слизистой оболочки и подслизистого слоя лимфоцитами, плазмоцитами, макрофагами и гранулоцитами.
Вакцинации индуцировали появление в печени лимфоидных скоплений, располагающихсяа вблизи кровеносных сосудов и имеющих вид диффузных периваскулярных скоплений без определенной локализации.
|
Страницы: | 1 | 2 | 3 | |
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по ветеринарии