Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по ветеринарии
Молекулярно-генетические и иммунохимические методы в диагностике, инди-кации и идентификации возбудителей туберкулеза и лейкоза крупного рогатого скота
Автореферат докторской диссертации по ветеринарии
|
Страницы: | 1 | 2 | 3 | |
СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА3.4 Диагностическая ценность ИФА и ПЦР в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота
Диагностическая ценность ИфА была изучена в сравнении с ПЦР с применением ДМСО(м)-антигенов микобактерий и набора препаратов для выявления антител к возбудителю туберкулеза. Всего исследовано 698 проб сывороток и крови крупного рогатого скота.
В целях сравнительного изучения эффективности ИФА и ПЦР в диагностике туберкулеза исследовано 88 проб сывороткиа и крови от одних и тех же животных реагирующих на туберкулин.
На основании полученных результатов совместно с ГУВ и Республиканской ветеринарной лабораторией в хозяйствах Ерсубайкино и Красный Октябрь Новошишминского района был установлен туберкулез крупного рогатого скота.
Из благополучных по туберкулезу хозяйств (КП Овощевод и КП Тукай Зеленодольского района) все пробы были отрицательные как в ИФА, так и в ПЦР. а2 пробы, из 21 исследованных по КП Агроснаб Спасского района, адали положительные результаты на M.bovis в ИФА, а в ПЦР все пробы были отрицательные.
Изучая сравнительную эффективность аллергической пробы, ПЦР и ИФА, с использованием ДМСОм-антигенов, исследовали 605 проб. Из благополучных по туберкулезу хозяйств - 288 проб сывороток и крови коров реагирующих на ППД, в т.ч. 50 - с отрицательной реакцией и 233 - с положительной реакцией в ИФА на атипичные микобактерии. Результаты ИФАа и ПЦР в целом, совпали.а Так,а 50 проб отрицательные в ИФА в ПЦР также были отрицательные. Из 233 проб с положительной реакцией в ИФА на атипичные микобактерии 21 проба сывороток крови из 3-х хозяйств положительно реагировали на M.bovis.а ПЦР крови от этих же животных показала положительные результаты только в пробах из хозяйства Искра Буинского района. Контрольно-диагностический убой коров и лабораторные исследования подтвердили результаты ПЦР.
Из неблагополучных по туберкулезу хозяйств было исследовано 322 пробы, в том числе 251 проба - от реагирующих и 71 - от нереагирующих на туберкулин животных. В данном случае результаты ИФА сывороток крови и ПЦР проб крови, совпали.
Полученные данные свидетельствуют о том, что по обнаружению противотуберкулезных сывороточных антител методом ИФА, не всегда удается диагностировать туберкулез. ПЦР в этом отношении является более чувствительным и специфичным. Однако, иммуноферментный анализ может помочь в определении статуса стада коров по туберкулезу, позволяя исключить туберкулез у части реагирующих на ППД, а также выявить больных туберкулезом из числа не реагирующих на ППД коров.
3.5. Иммуноферментный анализ в диагностике лейкоза крупного рогатого скота
Диагностические исследования ВЛКРС-инфекций в РФ представлены, главным образом, реакцией иммунодиффузии в геле (РИД), тогда как в странах Европы и Америки широко применяется иммуноферментный анализ.
Важным преимуществом иммуноферментных методов перед РИД является то, что ИФА будучи более чувствительным позволяет выявлять специфические антитела в пробах молока и сборного молока. Если учесть простоту и доступность данного метода, то ИФА для выявления антител в пробах молока может стать важнейшим элементом в системе противолейкозных мероприятий в хозяйствах.
3.5.1. Диагностическая ценность ИФА для выявления антител в сыворотке крови и молокеа при лейкозе крупного рогатого скота
В целях сравнительного изучения эффективности РИД и ИФА в диагностике лейкоза крупного рогатого скота исследовали 139 проб сыворотки крови, в том числе 96 проб положительные и 43 пробы отрицательные по РИД.а 5 проб отрицательные по РИД оказались положительными в ИФА, что свидетельствует о более высокой чувствительности иммуноферментного анализа.
Проводили сравнительный анализ эффективности ИФА для выявления специфических антител в пробах сыворотки крови и молока в диагностике лейкоза крупного рогатого скота относительно РИД исследованиям. Всего исследовано 35 проб сыворотки крови и молока от одних и тех же коров из хозяйств Шингальчи Нижнекамского района и Кургуза Верхне-Услонского района.
Полученные результаты свидетельствуют о более низкой эффективности ИФА молока в диагностике лейкоза крупного рогатого скота по сравнению с ИФА сывороток крови. ИФА для выявления специфических антител в молоке менее чувствителен и по сравнению с РИД анализом.
3.5.2. Диагностическое значение иммунных комплексов при лейкозе крупного рогатого скота
Возбудитель лейкоза крупного рогатого скота - РНК-содержащий вирус из семейства Retroviridae. При хронических инфекциях, вызванных вирусами этого семейства, в биологических жидкостях организма появляются иммунные комплексы лантиген-антитело. Эти иммунные комплексы в результате взаимодействия с Fc-рецепторами поглощаются макрофагами, в которых вирус восстанавливает свою инфекционность (Абелян А.В., 1977). Вполне возможно, что одна из причин феномена рецидивов ВЛКРС инфекций в ранее оздоровленных стадах именно в этом.
Для исследований по обнаружению ЦИК, методом случайной выборки были отобраны, из числа положительно реагирующих в ИФА, по 30 проб сыворотки крови и молока. Циркулирующие иммунные комплексы были выделены методом преципитации в ПЭГ. Действие ПЭГ на белковые растворы сходно с действием органических растворителей, которые могут вызвать осаждение наряду с иммунными комплексами и свободных иммуноглобулинов. Поэтому проводили исследование по определению титра анти-ВЛКРС антител в пуле сывороток крови и молока до и после обработки с ПЭГ-6000. В результате было установлено, что после осаждения ЦИК из пула сывороток крови и молока 7%-ным раствором ПЭГ титры противолейкозных антител в ИФА не изменялись и были равны титрам антител в исходной пробе.
С целью выяснения структуры выделенных иммунных комплексов проводили ПЦР анализ на наличие в них провирусной ДНК с использованием двух тест-систем. Всего было исследовано 51 проба от серопозитивных животных. Из них 38 - с использованием тест-системы Лейкоз-КРС-Провирус для диагностики лейкоза крупного рогатого скота, ФГУН ЦНИИЭ - фирмы АмплиСенс, Gene Pak (фирмы Биоком), 13 - с использованием тест-системы Лейкоз для выявления вируса лейкоза крупного рогатого скота (КРС) методом полимеразной цепной реакции, ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г.Москва.а Согласно инструкциям тест-систем положительными считаются образцы, которые содержат специфическую светящуюся полосу на уровне 444 и 294 п.н. большей или меньшей интенсивности соответственно. 24 пробы иммунных комплексов из 38 исследованных первой тест-системой и 8 из13 исследованных второй тест-системой содержали провирусную ДНК вируса лейкоза крупного рогатого скота.
Факт обнаружения иммунных комплексов, включающие в себя провирусные ДНК, выявляет новые аспекты патогенеза данного заболевания. Возможно, открыт новый способ распространения инфекции в организме. Провирус в составе ЦИК может путем фагоцитоза попасть в клетку и в процессе очередного кроссинговера ДНК встроиться в геном клетки. В результате таких событий зона поражения инфекцией организма путем митоза клетки может быстро расшириться.
Согласно исследованиям, проведенным Митиным Ю.А. (1997) подобные иммунные комплексы обладают низкой температурной устойчивостью и могут разрушаться в диапазоне от +38С до +40С (время инкубации от 30 минут до 2-х часов). Учитывая этот факт и целью выявления скрытых противовирусных антител, которые до этого находились в составе циркулирующих иммунных комплексов, мы в своей работе инкубировали пробы молока и сыворотки крови при 500С в течение 2-х часов и определяли изменение титров антител.
Предварительные исследования, проведенные на 6 пробах сыворотки крови и молока от одних и тех же коров, показали, что после инкубирования во всех пробаха титры свободных антител увеличились, и показания в ИФА повысились от 2 до 41 единицы.
В целях проверки достоверности полученных результатов были проведены исследования на большем количестве производственного материала.
Исследованы пробы сыворотки крови и молока коров из хозяйств Зеленодольского и Нижнекамского районов. Процент инфицированности животныха в этих районах составляет, соответственно, 18,8 и 44%, а больных 2,9 и 2,3%. Пробы сывороток крови и молока получены от одних и тех же коров. Всего исследованы по 92 пробы.
53 пробы сыворотки крови были положительные в ИФА до и после термической обработки. Однако внутри этой группы обнаруживается увеличение титров анти-ВЛКРС антител после инкубации. Только в трех случаях титры антител до и после инкубации остались неизменными. Пробы молока от этих же коров показали положительные результаты только в 45 случаях. Однако, после инкубации при 50оС в течение 2-х часов все пробы молока оказались положительными в ИФА. Таким образом, в данном случае чувствительность ИФА молока в диагностике лейкоза крупного рогатого скота составила, по сравнению с ИФА сывороток крови, 85%.
Из 38 проб сывороток крови с отрицательной реакцией в ИФАа после инкубирования 13 стали положительными. 33 проб молока от этих же 38 коров до нагревания также были отрицательные. После нагревания 28 - отрицательные, 10 - положительные.
Увеличение титров свободных антител после инкубирования можно объяснить диссоциацией иммунных комплексов и спецификой динамики образования антител и иммунных комплексов при лейкозе.
Определение специфичных антител в составе иммунных комплексов позволяет увеличить достоверность выявления больных лейкозом животных по сравнению с традиционно применяемым методом обнаружения свободных антител в сыворотке крови и молоке. Диссоциация иммунных комплексов, проведенная при температуре 50оС в течение 2-х часов, обеспечивает повышение чувствительности ИФА для выявления специфических антител к ВЛКРС в сыворотке крови и молоке на 20%. Данный способ открывает перспективы для более широкого применения ИФА молока для диагностики лейкоза.а
На основании полученных результатов разработан метод ИФА для выявления специфических антител к ВЛКРС в сыворотке крови и молоке с предварительной диссоциацией ЦИК в пробах. Для определения диагностической ценности данного метода исследовали пробы молока из благополучных и неблагополучных по лейкозу хозяйств. Всего исследовано 295 проб молока отрицательно и положительно реагирующих в РИД коров. ИФА ставили: 1). согласно наставления по применению набора для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота НПО НАРВАК; 2). с предварительной диссоциацией ЦИК по предложенной методике.
50 проб молока, полученные из благополучных по лейкозу хозяйств, в иммуноферментном анализе во всех случаях показали отрицательные результаты. Результаты исследований проб полученных из неблагополучных хозяйств представлены в таблице 2.
Таблица 2 - Сравнительная эффективность ИФА и РИД в диагностике лейкоза крупного рогатого скота
РИД |
Всего проб |
ИФА без обработки проб |
ИФА с обработкой проб |
||||||
Полож. |
% |
Отр. |
% |
Полож. |
% |
Отр. |
% |
||
Положит. |
177 |
136 |
77 |
41 |
23 |
165 |
93 |
12 |
7 |
Отрицат. |
68 |
9 |
13 |
59 |
87 |
11 |
16 |
57 |
84 |
Из 177 проб молока от положительно реагирующиха в РИД коров без предварительной обработки 41а прореагировало отрицательно, что свидетельствуют о более низкой эффективности ИФА молока в диагностике лейкоза крупного рогатого скота по сравнению с РИД.
ИФА с предварительной диссоциацией ЦИК в пробах гораздо чувствительнее и не уступает РИД исследованиям сывороток крови. Как видно из представленных данных, ИФА для выявления антител в молоке по предложенной методике дополнительно выявляет инфицированных животных из числа РИД отрицательных, что имеет важное значение в системе оздоровительных от лейкоза мероприятий.
3.6. Диагностическая ценность ПЦР для выявления провирусной ДНК ВЛКРС в молоке
Исследовали 136 проб молока коров положительно реагирующих в РИД из неблагополучных по лейкозу хозяйств РТ. Пробы молока получены от коров инфицированного ВЛКРС стада со стабильной гематологической картиной на разных стадиях развития инфекционного процесса. Выделили 3 условные группы проб: 1) пробы молока коров реагировавших в РИД впервые; 2) через год после первой реакции; 3) в более поздних сроках развития инфекции.
В иммуноферментном анализе с предварительной диссоциацией ЦИК все пробы молока были положительными. ПЦР на обнаружение провируса в лейкоцитах содержащихся в молоке показала положительные результаты в 37 пробах (27%).а В дальнейшем из этих проб молока были выделены иммунные комплексы и проведен ПЦР анализ. Результаты исследований показали, что в 12 из них содержится провирусная ДНК и 9 из них относится к пробам третий, 3 - второй группы.
Роль провирус содержащих иммунных комплексов в патогенезе ВЛКРС инфекции не изучена. Возможно, они формируются в процессе гибели инфицированных В-лимфоцитов путем соединения не встроенных в геном вирусных ДНК с поверхностными IgM, обладающими высокой аффинностью к ДНК.а Очевиден тот факт, что появляются они в более поздних стадиях болезни при выраженной вирусемии организма, когда животное становится потенциально опасным источником заражения стада. Гематологические изменения в этот период могут оставаться стабильными. Поэтому при лейкозе крупного рогатого скота окончательная постановка диагноза может быть направлена на обнаружение ДНК вируса в ЦИК методом ПЦР, что исключит необходимость гематологических исследований и повысит эффективность противолейкозных мероприятий.
3.7. Динамика изменения титров антител против антигена gp51 у инфицированных ВЛКРС животных
Для выполнения поставленной задачи формировали опытную группу коров из 12 голов на базе ООО Правда Высокогорского района РТ.
Из них 2 головы гематологически больные, а остальные положительно реагирующие по РИД. Наблюдения велись в течение полугода. Титры связанных и свободных антител в исследуемых пробах определялись методом иммуноферментного анализа через каждые две недели.
Результаты исследований свидетельствуют о том, что изменения титров противолейкозных антител, в сыворотке крови естественно инфицированных ВЛКРС коров, значительно отличаются от данных экспериментального заражения. По данным Ивановой Л. (2000),а при экспериментальном заражении коров вирусом лейкоза алгоритм изменения титров антител равен трем месяцам, а при естественном заражении он оказался разным.
За период исследования титры сывороточных антител в отдельных пробах оставались неизменными как в достаточно высоких, так и в относительно низких уровнях. Однако, в целом изменения титров антител в пробах происходили синусоидально.
Титры антител в молоке инфицированных коров не коррелируют с таковыми в сыворотке крови. При достаточно высоких титрах сывороточных антител, титры антител в молоке, у одних и тех же коров могут быть минимальнымиа и наоборот, при низких титрах сывороточных антител - высокие титры антител в молоке. Кроме того, несмотря на значительные изменения титров сывороточных антител по периодам исследования, титры противолейкозных антител в молоке могут не изменяться.а Это дает основания предполагать, что качественный спектр антител в сыворотке крови и молоке разный.
Титры антител, как в молоке, так и в сыворотке крови у гематологически больных животных достоверно снижаются по мере развития болезни.
Сравнивая титры свободных и связанных антител в сыворотке крови можно сказать, что они с развитием болезни меняются, и прослеживается взаимосвязь между ними. При уменьшении титров свободных антител наблюдается, в большинстве случаев, увеличение титров связанных антител, т.е. повышается степень образования циркулирующих иммунных комплексов.
Полученные данные свидетельствуют о том, что разовые серологические тесты в диагностике лейкоза крупного рогатого скота могут быть не достаточно эффективными. Изучение динамики образования иммунных комплексов раскрывают перспективы совершенствования ранней диагностики лейкоза животных.
3.8. Динамики антителогенеза у крупного рогатого скота к различным структурным компонентам вируса лейкоза
Для изучения изменения спектра антител с развитием болезни, проводили перекрестные исследования сывороток крови методом ИФА и иммуноблотанализа с антигенами вируса иммунодефицита человека.
В этих целях отобрали 25 проб сыворотки крови из числа положительно реагирующих в ИФА на лейкоз и исследовали Тест-системой иммуноферментной для выявления антител к вирусам иммунодефицита человека 1 и 2 типов производства ЗАО Вектор-бест.
В результате 16 проб сывороток крови крупного рогатого скота показали положительную реакцию, с титрами антител к антигенам ВИЧ до 1:256. Титры специфических антител на gp51 ВЛКРСа этих же проб составляли до 1:729.
С использованием Набора для выявления антител к ВЛКРС были исследованы сыворотки крови от ВИЧ-инфецированных людей. Из 20 исследованных проб только 3 показали отрицательные результаты.
Полученные данные свидетельствуют о том, что gp51 ВЛКРС обладает достаточно высокой гомологичностью белкам ВИЧ.
Однако между титрами антител против gр51 ВЛКРС и титрами антител реагирующих с белками ВИЧ, в сыворотках крови коров, больных лейкозом, закономерной взаимосвязи не просматривается.а Более того, некоторые пробы с низкими титрами противолейкозных антител обнаруживают более высокие титры антител в ИФА на ВИЧ антигены. Полученные данные еще раз подтверждают то, чтоа развитие лейкоза крупного рогатого скота сопровождается как количественным, так и качественным изменением спектра специфических антител.
Изучение спектра антител в пробах сывороток крови коров проводили методом иммуноблоттинга на все структурные белки ВИЧ. На рисунке 1 представлены денситограммы иммунноблотграмм сероактивных полинпептидов ВИЧ с положительными к gp51 ВЛКРС сыворотками на разной стадии развития инфекции.
аа 
ааБ
аВа ааГа
Рис.1. Денситограммы иммуноблотограмм сероактивных полинпептидов ВИЧ с положительными к gp51 ВЛКРС сыворотками на разной стадии развития инфекции
Обозначения: А - сыворотка крови коровы в начальной стадии инфекции, впервые реагировавшей на РИД положительно; Б, В - сыворотка крови коров в более поздних стадиях болезни;а Г - сыворотка крови гематологически больной коровы;
В начальных стадиях развития болезни в сыворотки крови животных появляются антитела перекрестно реагирующие с антигенами ВИЧ р40, р25. В более поздних сроках - с р55, р97, gp120.а GP120 ВИЧ Ца гликопротеин оболочки и соответствует gp51 ВЛКРС.
Таким образом, приведенные данные доказывают, что на разных стадиях развития иммунитета при лейкозе крупного рогатого скота спектр сывороточных антител меняется.
Данный факт свидетельствует о недостаточной эффективности серологических методов, основанных на выявление антител только против одного антигена.
В заключении следует отметить, что наиболее перспективным, в исключении недостатков существующих методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота, может являться применение методов иммуноблот анализа.
Иммуноблотинг позволит изучать титры и спектр антител против всех антигенов ВЛКРС, а также продуктов их расщепления. Изучение спектра и динамики образования антител, ЦИК в крови и молоке животных по стадиям развития инфекции, определение взаимосвязи между антительным спектром и появлением в ЦИК провирусной ДНК позволили бы стандартизировать параметров и разработать тест-систему для диагностики лейкоза методом иммуноблотинга. Такая тест-система способна при массовых исследованияха заменить серологические и гематологические методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.а
ВЫВОДЫ
- Комплекс диагностических мероприятий при туберкулезе и лейкозе крупного рогатого скота должен включать иммунохимические и молекулярно-генетические методы исследований.
- Антигены от живых и инактивированных микобактерий имеют разный электрофоретический профиль белковых фракций. Большинство сероактивных фракций ДМСО-антигенов микобактериальных культур располагаются в диапазоне от 20 до 65 кД. Серопозитивная фракция с Мм 60кД отмечается только в антигенных препаратах M.bovis и M.tuberculosis, что позволяет дифференцировать их от других микобактериальных культур.
- Антисыворотки, полученные протива микобактериальных антигенов и истощенные с использованием белково-глутаральдегидных иммуносорбентов, обладают высокой специфичностью. Использование антисывороток в ИФА позволяет дифференцировать микобактериальные антигены с коэффициентами специфичности от 3,6 до 4,5.
- Иммуноферментный анализ сывороток крови животных дает дополнительную информацию к аллергическим исследованиям, повышается эффективность диагностических мероприятий. Если наряду с аллергическим методом диагностики туберкулеза применять и иммуноферментный метод анализа сывороток крови, то степень достоверно выявленных больных туберкулезом животных составляет 92%.
- Микобактериальные антигены (ДМСОм-антиген), полученные по предложенному способу, позволяют дифференцировать в ИФА неспецифические реакции на туберкулин, вызванные атипичными микобактериями со специфичностью более 90%.
- аИФА и ПЦР являются высокоточными методами исследований туберкулеза. ИФА, как более массовый метод, перспективен в определении статуса стада коров по туберкулезу, позволяет исключить туберкулез у части реагирующих на ППД, а также выявить больных туберкулезом из числа не реагирующих на ППД коров в неблагополучных хозяйствах.
- аЗначительная часть антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота находится в циркулирующих иммунных комплексах. Титры свободных и связанных в ЦИК антител в сыворотке крови с развитием болезни меняются. Изучение динамики образования иммунных комплексов свидетельствует о том, что разовые серологические тесты в диагностике лейкоза крупного рогатого скота не достаточно эффективны. В оздоравливаемых от лейкоза хозяйствах необходимо проводить двукратные (с интервалом в 2-3 месяца) исследования сывороток крови методом ИФА с предварительной диссоциацией иммунных комплексов в пробах.
- Разработанный способ диссоциации иммунных комплексов в пробах сыворотки крови и молока позволяет повысить чувствительность методов ИФА до 20%.а Диагностика лейкоза крупного рогатого скота методом ИФА для выявления специфических антител в молоке, с предварительной диссоциацией ЦИК, не уступает по чувствительности и специфичности современным узаконенным методам диагностики этой инфекции. Данный метод, как экономически более выгодный, может применяться для мониторинга эпизоотической ситуации в хозяйствах.
- В сыворотке крови и молоке инфицированных ВЛКРС коров выявляются иммунные комплексы, содержащие провирусные ДНК. Провирус содержащие иммунные комплексы появляются в основном, в более поздних стадиях болезни, когда животное становится потенциально опасным источником перезаражения стада. Гематологические изменения в этот период могут оставаться стабильными. Поэтому при лейкозе крупного рогатого скота окончательная постановка диагноза должна быть направлена на обнаружение ДНК вируса в ЦИК методом ПЦР.
- Антитела против антигенов ВЛКРС обладают гомологичностью белкам гена gag ВИЧ в иммунохимической реакции. Степень гомологии анти-ВЛКРС антител к полипептидам ВИЧ резко меняется с развитием инфекционного процесса. На разных стадиях развития иммунитета при лейкозе крупного рогатого скота спектр свободно циркулирующих в сыворотке крови антител меняется, что свидетельствует о недостаточной эффективности серологических методов, основанных на выявление антител только против одного антигена.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ
1. Для более полного выяснения эпизоотической ситуации по туберкулезу в хозяйствах наряду с аллергической пробой использовать иммуноферментный метод анализа сывороток крови крупного рогатого скота. Метод позволяет исключить туберкулез у реагирующих, а также выявить больных туберкулезом животных из числа не реагирующих на ППД коров в неблагополучных хозяйствах.
2. В благополучных хозяйствах для дифференциации туберкулиновых реакций рекомендуется использовать ИФА для выявления микобактериальных антител в сыворотоке крови с применением ДМСОм - антигенов микобактерий.
3. Перспективным для постановки диагноза на туберкулез является ИФА для обнаружения микобактериальных антигенов в патматериале с применением антисывороток полученных и истощенных по предложенному способу.
4. Для повышения эффективности серологических методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота рекомендуется предварительно диссоциировать иммунные комплексы в исследуемых пробах сывороток крови и молока. С учетом особенностейа динамики образования свободных антител и ЦИК в сыворотке крови серологические исследования на лейкоз проводить дважды с интервалом 2-3 месяца.
5. Для мониторинга эпизоотической ситуации по лейкозу в хозяйствах использовать ИФА молока с предварительной диссоциацией иммунных комплексов.
СПИСОКа РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Якупов Т.Р. Выявление специфических антител против микобактерий в сыворотке крови крупного рогатого скота методом ИФА/ Т.Р.Якупов// Материалы республиканской научно-производственной конференции Достижения ветеринарных и зоотехнических наук в животноводство, Казань, 1989, С.38.
2. Якупов Т.Р. Возможности использования метода ИФА для выявления возбудителя туберкулеза в патологическом материале и определение его чувствительности/ Т.Р.Якупов// Материалы республиканской научно-производственной конференции Животноводству - комплексную программу развития, Казань, 1990, С.66.
3. Хафизов Ш.Х. Динамика титра антител в сыворотке крови коров экспериментально зараженных туберкулезом после иммунизации вакциной БЦЖ// Ш.Х.Хафизов, М.Ш.Зайдуллин, Т.Р.Якупов// Материалы республиканской научно-производственной конференции Животноводству - комплексную программу развития, Казань, 1990, С.61.
4. Якупов Т.Р. Выявление и типизация возбудителя туберкулеза иммуноферментным методом / Т.Р.Якупов // Материалы Всесоюзной научно-технической конференции Современные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной и клеточной инженерии в ветеринарной медицине, Н.Новгород, 1990, С.142-143.
5. Якупов Т.Р. Белково-глутаральдегидный метод очистки иммунной сыворотки против M/bovis/ Т.Р.Якупов, Р.П.Тюрикова // Удостоверение на рац. Предложение №314, Казань, 1991.
6.а Якупов Т.Р. ИФА - в прижизненной диагностике туберкулеза крупного рогатого скота / Т.Р. Якупов, В.И. Шилова // Материалы межвузовской научно-практической конференции молодых ученых Вклада молодых ученых и специалистов в научно-технический прогресс с/х производства, Ставрополь, 1991, С.133-134.
7. Хазипов Н.З. Иммуноферментный анализ сыворотки крови крупного рогатого скота в диагностике туберкулеза / Н.З. Хазипов, Р.П. Тюрикова, Т.Р. Якупов, А.А. Нуруллин // Межвузовский сборник научных трудов КВИ Эффективные меры борьбы с туберкулезом с/х животных Казань, 1991, С.3-9.
8. Якупов Т.Р. Получение высокоспецифических иммунных сывороток против антигенов М.bovis, M.avium, M.phlei и др. / Т.Р. Якупов, Р.П. Тюриковаа // Материалы научно-практической конференцииа Достижения Казанской ветеринарной школы в практику животноводства Казань, 1991, С.10.
9. Якупов Т.Р. Иммуноферментный анализ в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота: Дис. Е канд. вет. наук / Т.Р. Якупов; КГВИ. - К., 1991, С.127.
10. Якупов Т.Р. Иммуноферментный анализ в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота: Автореф. дис. Е канд. вет. наук / Т.Р. Якупов; КГВИ. - К., 1991, С.17.
11. Якупов Т.Р. Иммуноферментная тест-система для выявления антител к возбудителю туберкулеза крупного рогатого скота / Т.Р. Якупов, Н.З. Хазипов, Р.П. Тюрикова, М.А. Сафин // Материалы научно-практической конференции, Казань, 1993, С.32-33.
12. Хазипов Н.З. Антигенная структура микобактерий М.bovis / Н.З.Хазипов, Р.П. Тюрикова, Т.Р. Якупов, Т.М. Ахметов // Тезисы стендовых сообщений II съезда биохимического общества РАН. Пущино, 1997. С.542-543.- Шифр 97-14028-2.
13. Якупов Т.Р. Метод иммуноферментного анализа в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота / Т.Р.Якупов, Р.П.Тюрикова, К.В.Усольцев // Материалы международной научной конференции, посвященной 125Цлетию КГАВМ, Казань, 1998, С.127-128.
14. Якупов Т.Р. Сравнительная характеристика современных методов диагностики туберкулеза / Т.Р.Якупов, Т.М.Ахметов // Материалы республиканской научно-производственной конференции Молодые ученые - агропромышленному комплексуа Казань, 1998, С.68-69.
15. Якупов Т.Р. Роль специфических антител в диагностике туберкулеза / Т.Р.Якупов, Р.А.Хамзин, К.В.Усольцев // Проблемы инфек. и инваз. болезней в животноводстве на современном этапе, МВА им. Скрябина, 1999, С.146-148.
16. Якупов Т.Р. Диагностическое значение определения противотуберкулезных антител в сыворотке крови крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа /Т.Р.Якупов, Р.А.Хамзин, К.В.Усольцев, А.А.Перлова // Материалы международной научно-производственной конф., посвященной 100-летию члена-корр. ВАСХНИЛ В,Т,Котова Воронеж, 1999, С.132-134.
17. Якупов Т.Р. Сравнительная оценка эффективности ИФА и ПЦР в диагностике туберкулеза / Т.Р.Якупов, К.В.Усольцев// Материалы республиканской научно-производственной конференции, Казань, 1999, С.51.
18. Усольцев К.В. Изучение антигенной структуры микобактерий / К.В.Усольцев, Т.Р.Якупов // Материалы Всероссийской конференции молодых ученых. АН РТ, Казань, 2000, С.42-43.
19. Якупов Т.Р. Эффективность ИФА сывороток крови в системе диагностических мероприятий при туберкулезе крупного рогатого скота / Т.Р.Якупов, К.В.Усольцев // Материалы международной научной конференции, посвященной 70-летию зооинженерного факультета Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана, Казань, 2000, С.140-144.
20. Якупов Т.Р. Иммунофермент ысулын кулланып эре м?гезле терлекл?рд? туберкулезга диагноз кую турында / Т.Р.Якупов // Наука и язык, 2000.- № 2, С.51-52.
21. Якупов Т.Р. Совершенствование способа получения микобактериальных антигенов/ Т.Р.Якупов, Н.З.Хазипов, К.С.Хаертдинов //аа Современные вопросы медицины и биологии. Сборник научных трудов БГАУ Уфа, 2000, С.318-319.
22. Якупов Т.Р. ПЦР в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота / Т.Р.Якупов, К.В.Усольцев, А.Н.Аскарова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана, т.172. Казань, 2002, С.37-43.
23. Якупов Т.Р. Гель-хроматография ППД-туберкулина / Т.Р.Якупов // Материалы Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса. Казань, 2004, С.67-69.
24. Якупов Т.Р. Электрофоретические профили микобактериальных антигенов / Т.Р. Якупов, К.С. Хаертдинов // Материалы Всероссийской научно-практической конференции, Казань, 2006, С.66-68.
25. Волков А.Х. ИФА в диагностике лейкоза крупного рогатого скота / А.Х. Волков, Т.Р. Якупов, В.А. Кокорев // Материалы Всероссийской научно-практической конференции, Казань, 2006, С.23-26.
26. Якупов Т.Р. Диагностическое значение иммунных комплексов при лейкозе крупного рогатого скота / Т.Р. Якупов, В.А. Кокорев, А.Х. Волков // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана, т.128. Казань, 2007, С.215-219.
27. Якупов Т.Р. Метод ИФА в диагностике лейкоза крупного рогатого скота / Т.Р. Якупов, В.А. Кокорев, Ф.Ф. Зиннатов, А.Х.Волков // Материалы международной научной конференции УЭнтузиазм и творчество студентов в развитии наукиФ, Троицк, 2007, С.255-258.
28. Кокорев В.А. Показатели химического состава молока инфицированных ВЛКРС коров / В.А. Кокорев, А.Х. Волков, Т.Р. Якупов // Материалы Всероссийской научно-практической конференции, Казань, 2007, С.112-113.
29. Якупов Т.Р. Обнаружение антител, общих к антигенам микобактерий и ВЛКРС / Т.Р. Якупов // Материалы Всероссийской научно-практической конференции, Казань, 2007, С.121-123.
30. Якупов Т.Р. Изучение активности антител против ВЛКРС в иммунохимической реакции с антигенами ВИЧ / Т.Р. Якупов, Н.З. Хазипов, В.П. Коксин // Вятский медицинский вестник, 2007, спецвыпуск, № 4, С.79-80.
31. Якупов Т.Р. Антигенное родство ВЛКРС с вирусами иммунодефицита человека / Т.Р. Якупов // Ветеринарный врач, 2008, № 2, С.13-15.
32. Кокорев В.А. Изменение титров антител против антигена gp51 инфицированных ВЛКРС животных / В.А. Кокорев, Т.Р. Якупов, А.Х.Волков // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана, т.192. Казань, 2008, С.83-84.
33. Хазипов Н.З. Внеклеточная провирусная ДНК лейкоза крупного рогатого скота в патогенезе инфекции / Н.З. Хазипов, Т.Р. Якупов, Ф.Ф. Зиннатов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана, т.192. Казань, 2008, С.161-164.
34. Хазипов Н.З. Провирусная ДНК лейкоза крупного рогатого скота и ее роль в патогенезе инфекции / Н.З. Хазипов, Р.П. Тюрикова, Т.Р. Якупов,а // Материалы 1У съезда Российского общества биохимиков и молекулярных биологов, Новосибирск, 2008, С.505.
35. Хазипов Н.З. Внеклеточный провирус ВЛКРС в патогенезе лейкоза / Н.З. Хазипов, Р.П. Тюрикова, Т.Р. Якупов, Б.В. Камалов // Международная научно-практическая конференция Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии Москва, 2008, С.158.
36. Якупов Т.Р. Дифференциальная диагностика туберкулеза крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа / Т.Р. Якупов, К.С. Хаертдинов, Р.А. Хамзин, И.К. Фахртдинов//Ветеринарный врач, 2010, № 6, С.24-26.а
37. Якупов Т.Р. Динамика изменений титров свободных и связанных антител у инфицированных ВЛКРС коров/ Т.Р.Якупов, Н.З.Хазипов// Ученые записки КГАВМ, 2009, т.197, С.150-154.
38. Якупов Т.Р. Возможности ИФА молока в диагностике лейкоза крупного рогатого скота/ Т.Р.Якупов, Н.З.Хазипов, А.М.Алимов, Б.В.Камалов// Ученые записки КГАВМ, 2010, т.201, С. 133-136.
39. Якупов Т.Р. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа молока/ Т.Р.Якупов, Н.З.Хазипов, А.С.Козлов// Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии, 2009, №4, С.99-100.
40. Якупов Т.Р. Иммуноблот анализ в диагностике туберкулеза/ Т.Р.Якупов К.С.Хаертдинов// Ветеринарный врач, №1, 2011.
41. Зиннатов Ф.Ф. Диагностическая ценность выявления провирусной ДНК ВЛКРС в молоке/ Ф.Ф.Зиннатов, Т.Р.Якупов//а Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии, 2010. №4, С.21-22.
42. Якупов Т.Р. Новые подходы в диагностике лейкоза крупного рогатого скота/ Т.Р.Якупов// Ученые записки КГАВМ, 2010, т.204, с.342-347.а
|
Страницы: | 1 | 2 | 3 | |
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по ветеринарии