Книги, научные публикации
Pages: | 1 | 2 | 3 | 4 | ... | 13 | СПРАВОЧНИК Лабораторные методы исследования в клинике Под редакцией профессора В.В.Меньшикова МОСКВА ДМЕДИЦИНА" 1987 ББК 53.4 М51 УДК 61б-074/-078:061.6 В. В. МЕНЬШИКОВ, Л. Н. ДЕЛЕКТОРСКАЯ, Р. П. ...
-- [ Страница 2 ] --лунку, находящуюся по соседству с лункой анти- Метод конкурентного связывания (сатураци гена. Оба вещества диффундируют одно на- онный анализ). Суть метода конкурентного свя встречу другому, в результате чего создаются зывания заключается в том, что некоторые градиенты концентраций, и антител, и антигена. вещества Ч лиганды Ч способны весьма изби В простейшем случае зона преципитации имеет рательно связываться с исследуемым соединени форму прямой линии, которая проходит между ем, при этом нет различия между веществом лунками антигена и антител. Но если лунок не биологического происхождения (анализируе две, а больше (например, одна лунка антител, мым) и его меченым аналогом, добавленным вокруг которой несколько лунок с разными раз- извне. Они конкурируют за лиганд, который ведениями испытуемого раствора, или же одна должен быть добавлен в таком количестве, что лунка со смесью антител, вокруг которой не- бы его связывающая способность полностью сколько лунок с идентичными или неидентичны- насытилась (отсюда и название "сатурацион ми антигенами), образуются довольно сложные ный Ч насыщающий анализ). Очевидно, что фигуры. По ним можно судить не только о коли- чем больше в пробе определяемого вещества, честве, но и о структуре исследуемых веществ, тем меньше связывается меченое вещество. По 3. Ракетный электрофорез, который называ- сле этого отделяют комплекс от свободных ин ют-также электроиммуноопределением, основан гредиентов и подсчитывают количество метки Ч на том же принципе, что и радиальная иммуно- в одних вариантах в комплексе, в других не диффузия, т. е. пластинка геля предварительно связанного с комплексом.
. Особенность метода конкурентного связыва- низкомолекулярными веществами, позволяю ния заключается в том, что используют лиганды щие получать антисыворотки с высокими титра исключительно биологического происхождения;
ми специфических антител. В этой связи следует меченое соединение обычно получают из при- упомянуть также о способе получения моноспе родного, присоединяя к нему метку в виде цифических клоновых антител, которые выра отдельного атома или химической группировки. батываются не в целом организме, а в тканевых Как следует из краткого описания принципа, культурах, в которых растут клетки, в больших метод конкурентного связывания имеет два неу- количествах продуцирующие только нужные им добства: во-первых, это нелинейная зависимость муноглобулины (обладающие свойствами ка между результатом непосредственного измере- ких-либо антител). Такие культуры получают ния, т. е, количеством меченого соединения, и ис- путем гибридизации лимфоидных клеток имму следуемым параметром, т. е. содержанием опре- низированного животного со злокачественными деляемого вещества;
во-вторых, это многоэтап- клетками, обладающими свойствами неограни ность анализа. Оба обстоятельства сказываются ченно расти в тканевых культурах. Затем отби на точности определения, причем особенно важ- раются (клонируются) клетки, обладающие но помнить, что в силу нелинейности хорошие нужными качествами, т. е. способностью проду результаты получаются лишь в определенном цировать требуемые антитела и неограниченным диапазоне концентраций исследуемого веще- ростом в культуре.
ства, поэтому обычно рекомендуют каждую про- Транспортные белки крови обычно использу бу исследовать два или даже три раза (в дупле- ются в качестве лигандов при определении сте тах или триплетах), отбрасывая результаты, роидных гормонов, в частности глюкокортикои которые находятся вне нужного диапазона. Од- дов. Транскортин удобен как лиганд потому, что нако эти недостатки компенсируются необыкно- он необязательно должен быть использован в венно высокой чувствительностью и избиратель- чистом виде (реактивом может быть лишь незна ностью метода, широкое внедрение которого чительно обогащенная фракция или даже сыво вызвало переворот в традиционных методах кли- ротка) и не обладает видовой специфичностью, нической биохимии. поэтому пригодны сыворотки различных лабора По своему принципу метод конкурентного торных и домашних животных. Недостаток ис связывания примыкает к классическим иммуно- пользования транспортных белков состоит в том, логическим методам, основанным на реакции что они не очень специфичны и, как правило, не связывания комплемента, однако количество позволяют дифференцировать гормоны от их комплемента может быть определено лишь полу- непосредственных метаболитов (например, кор количественно. Кроме того, для этого метода тизол, кортизон и гидрокортизол).
необходимы определенным образом обработан- Третий источник нгандов Ч белки из орга ные эритроциты (или другие заменяющие их нов-мишеней Ч шире всего используется для частицы), в то время как реактивы, используе- определения эстрогенов. В целом они обладают мые для сатурационного анализа, значительно свойствами, аналогичными транспортным бел легче стандартизуются и более устойчивы. Одна- кам крови, но их извлекают путем соответствую ко приготовление их настолько сложно, что щей обработки из органов лабораторных жи недоступно практическим лабораториям, поэто- вотных, чувствительных к эстрогенам, например му в условиях клинико-диагностических лабора- из матки крыс.
торий метод конкурентного связывания может Чтобы получить меченое соединение, обычно быть выполнен лишь с помощью промышленно используют чистый препарат определяемого ве изготовленных готовых наборов реактивов, так щества, полученный из биологического источни называемых китов (от английского слова kit, ка или синтетическим путем. Белковые вещества означающего набор инструментов или команду). удобно метить, вводя в их состав радиоактивный В клинической биохимии и иммунологии йод Ч обычно изотоп |25 I;
для этого препарат метод конкурентного связывания шире всего инкубируют с радиоактивным индикатором в используется для определения трех групп ве- присутствии окислителя, а затем очищают от ществ: 1) гормоновЧкак белковой природы, побочных продуктов. Низкомолекулярные веще так и небелковых;
2) индивидуальных белков Ч ства метят тритием путем неспецифического как нормально присутствующих (альбумин, изотопного обмена. Использование радиоактив макроглобулин и т. д.), так и появляющихся ных меченых соединений связано с теми неудоб в условиях патологии (антитела к микробам ствами, что для работы с ними необходима и вирусам и белки инфекционных агентов);
специально оборудованная лаборатория, поэто 3) лекарственных соединений и вредных веществ му все большее распространение приобретают из окружающей среды, что относится к сфере такие варианты метода конкурентного связыва фармакодинамики и токсикологии. ния, в которых исследуемое вещество метится В качестве лигандов используются три ферментом. Таким способом можно пометить группы веществ биологического происхождения: лишь относительно крупные молекулы, так как 1) антитела;
2) специфические транспортные образовавшаяся химическая связь не должна белки плазмы крови;
3) рецепторные белки орга- затрагивать функционально важные группы нов-мишеней. Наибольшее значение имеет ис- ни в молекуле меченого соединения, ни в фер пользование антител, полученных путем имму- менте низации. Сатурационный анализ стал возможен Очень важная техническая проблема Ч от лишь после того, как были разработаны весьма деление связанных с лигандом меченого и неме совершенные способы иммунизации, в том числе ченого соединений от их свободных форм. Для решения этой задачи применяются самые разно образные приемы, причем может удаляться сво бодная форма и подсчитываться количество связанной формы, а может быть и наоборот Ч удаляться связанная форма и определяться количество свободной формы. Однако во всех случаях для разделения используется суще ственное различие в молекулярной массе ком плекса и свободных форм определяемого веще ства. Более крупные молекулы комплекса можно отделить гель-фильтрацией или электрофорезом, а также осаждая их полиэтилеигликолем. Воз можен такой вариант анализа, когда лиганд заранее адсорбирован на твердой фазе Ч бром ацетил целлюлозе, полиэтилене н т. д., поэтому комплекс легко отделяется от находящихся в растворе свободных форм определяемого веще ства. Используется также так называемый ме тод двойных антител, когда комплекс лиганд Ч определяемое вещество осаждается (преципити руется) после добавления антител против белка самого лиганда. Свободные формы можно уда Рис. 4. Комплекс, образующийся при одном из лить также, адсорбировав их на специфических вариантов определения сывороточного альбу сорбентах, которые не связывают комплекс ли мина с помощью связанного с иммуносорбентом ганда и определяемого вещества, например на энзима (схема).
целлюлозе, амберлнте, силикагеле, активиро АЛБ Ч сывороточный альбумин человека (опреде ванном угле. Особенно широкое распростране ляемое вещество);
римскими цифрами обозначены ние при определении низкомолекулярных гормо компоненты аналитической системы: I Ч полистн нов получило использование активированного реновая стенка лунки ммкротнтратора;
II Ч первич угля, покрытого декстраном, тонкий слой кото- ные антитела (из сыворотки кролика, иммунизиро рого пропускает лишь молекулу гормона, кото- ванного против сывороточного альбумина человека);
рая поэтому адсорбируется на угле, а высокомо- IIIЧвторичные антитела (из сыворотки морской свинки, иммунизированной против сывороточного лекулярный комплекс остается в растворе. Та альбумина человека);
IV Ч пероксидаза из хрена, кой прием получил название мгновенного фиксированная на кроличьих антителах против диализа.
иммуноглобулинов морской свинки.
Определение при помощи энзима, связанного с иммуносорбентом. Определение при помощи энзима, связанного с иммуносорбентом (сокра щенно ЭЛИСА Ч заглавные буквы английских ловеческого альбумина;
они фиксируются на тех слов Ч Enzyme Linked Immunosorbent Assay), же альбуминовых молекулах, которые другими представляет собой дальнейшее развитие мето- группами адсорбированы на первичных антите да двойных антител, используемого в сатурацн- лах. Четвертый слой иммунного пирога Ч онном анализе, но здесь отсутствует конкурен- фермент пероксидаза, фиксированная на кро ция между определяемым природным соедине- личьих антителах против иммуноглобулинов нием и его меченым вариантом. Суть метода морской свинки;
они связываются со вторичны заключается в том, что образуется нечто вроде ми антителами, при этом количество фиксиро слоеного пирога, причем определяемое веще- ванной пероксидазы оказывается пропорцио ство составляет один из его внутренних слоев, нальным содержанию альбумина в исследуемой а индикаторный фермент Ч самый внешний;
об- пробе. После добавления каждого реагента и за щий размер всей структуры зависит от количе- вершения реакции связывания избыток непроре ства определяемого вещества. Рассмотрим фун- агировавших белков тщательно удаляют отмы кционирование этого метода на примере набора ванием буферным раствором, кроме того, до для определения альбумина в моче (рис. 4). бавляют инактивированные Сыворотки для Определение выполняют в лунках (гнездах), подавления неспецифических реакций. После стенки которых изготовлены из специального син- окончания всех адсорбции н отмываний прово тетического материала, эффективно адсорбиру- дят ферментативную реакцию, для чего в лунку ющего антитела,Ч полистирена. Сначала в них добавляют о-фениленднамин и перекись водоро вносят так называемые первичные антитела, в да. Благодаря присутствующей пероксндазе данном случае кроличьи антитела против чело- о-фенилендиамин окисляется, и через некоторое веческого альбумина, затем после их адсорбции время интенсивность окраски измеряется фото на стенках и отмывания избытка вносят исследу- метрией.
емую пробу. Содержащиеся в ней молекулы Для иммуноферментных исследований не альбумина через посредство первичных антител только в методе ЭЛИСА, но н в других его вари оказываются фиксированными на стенках лун- антах чаще всего используется пероксидаза, так ки. Затем добавляют вторичные антитела: в дан- как этот фермент с небольшой молекулярной ном случае источником их служит сыворотка массой, который легко определять, но находят морской свинки, иммунизированной против че- применение и другие энзимы, например щелоч 2 п/р В. В. Меньшикова Исследование светорассеивання. В обычных условиях осадок комплекса антиген-антитело образуется медленно, ему препятствует как из быток антител, так и антигена. Это затруднение удается в значительной степени преодолеть, если реакция проходит в растворе коллоида, обычна полиэтиленгликоля. Его большие молекулы, за нимая значительный объем раствора, вытесняют оттуда молекулы белков, относительная концен трация которых в свободном пространстве повы шается, а взаимодействие ускоряется. В резуль тате область, в которой имеется достоверная зависимость между количеством добавленного антигена и размером осадка (преципитатом), значительно расширяется и ход реакции ускоря ется. Поэтому, проводя иммунохнмнческую ре акцию в растворе полиэтиленгликоля, удается определять содержание антигена по светорассе иванию (мутности) пробы уже через несколько минут после добавления антител. Чаще всего измерения проводят по конечной точке, когда реакция уже остановилась и светорассеивание больше не увеличивается, но существует и дру гой вариант пробы, когда измеряется скорость нарастания мутности.
Классическая теория светорассеивання, раз работанная Релеем, рассматривает случай, когда размер рассеивающей частицы мал по сравнению с длиной волны, составляя '/ ее или меньше. Для фиолетового света с длиной волны 400 им это составляет 40 нм, а для красного света с длиной волны 700 нм размер релеевской частицы не должен превышать 70 нм. Для срав нения заметим, что наибольший диаметр моле кулы альбумина 8 нм, IgG Ч 20 нм, а длина молекулы фибриногена (которая имеет форму нити) Ч около 50 нм.
Интенсивность релеевского светорассеива ния зависит от длины волны света и угла, под которым измеряется рассеянный свет по отноше Ряс. 5. Угловое распределение света, рассеян нию к падающему: оно обратно пропорциональ ного частицами разного размера.
но четвертой степени длины волны, когда вперед А Ч размер частицы меньше, чем 1/10 длины волны и назад попадает немного больше света, чем света;
Б Ч размер частицы больше, чем 1/10 длины в бок, но диаграмма симметрична (рис. 5). Если волны света, но меньше длины волны света;
В Ч раз же размер частиц больше 1/10 длины волны, мер частицы больше, чем длина волны света.
рассеивание света становится несимметричным, т. е. вперед по отношению к лучу падающего ная фосфатаза. Вместо фенилендиамина иногда света его интенсивность заметно больше, чем используют другие хромогенные субстраты или в задней полусфере. Характер этого распределе образование молекулярного йода из его солей ния также зависит от размера частиц (см. рис.
под влиянием перекиси водорода. 5). В ряде случаев оказывается выгодным изме Метод ЭЛИСА очень чувствителен и высо- рять свет рассеянный не под углом 90 к падаю коспецифичен;
в отличие от радиоиммунных щему лучу, а под меньшими углами, что значи методов он не требует специальных условий. тельно повышает чувствительность.
Многочисленные адсорбции и отмывания, кото- Судить о мутности раствора можно двумя рые проводятся по ходу определения, занимают способами: по количеству рассеянного света и По 5Ч6 ч, требуя постоянного внимания работника. количеству прошедшего;
первый способ называ Поэтому для выполнения анализа изготовляют- ется нефелометрией, второй Ч турбиднметрией.
ся специальные приборы, в которых эти опера- Нефелометрия точнее и надежнее, так как фон, ции механизированы или даже автоматизирова- т. е. показания прибора, когда он заполнен про ны. Результаты во многом зависят от качества зрачным раствором, очень мал и даже неболь материала, использованного для приготовления шое количество взвешенных частиц приводит лунок микротитратора. В результате многосту- к заметному возрастанию сигнала, который в пенчатости анализа зависимость между содер- широких пределах пропорционален размеру жанием исследуемого вещества в пробе и окра- осадка. Если же измерение проводят в турбидит ской, которая развивается в результате фермен- метрическом варианте, то количество преципи тативной реакции, обычно нелинейная. тата должно быть таким, чтобы рассеялось не Та блица 8. Сравнительная характеристика некоторых нммунохимическнх методов менее 10Ч20% света, иначе измерение будет работе с лампами накаливания;
благодаря па недостоверным. Кроме того, неизвестен физиче- раллельности пуука удается избавиться от бли ский закон, связывающий количество света, ков. В лазерном нефелометре можно измерять прошедшего через мутный раствор, и число свет, рассеянный в направлении, близком к на частиц, поэтому калибровочные графики всегда правлению освещающего;
это оправдывает себя сугубо эмпиричны и трудно добиться хорошей в том случае, когда частицы большие и свет воспроизводимости. Зато турбидиметрические рассеивается вперед значительно больше, чем измерения не требуют специального прибора, вбок и назад. Частицы иммунных комплексов измерения можно выполнять на любом фото- как раз такие.
метре или спектрофотометре. Метод поляризационной флюорометрии по Нефелометрировать можно на специальном своему принципу близок к методу конкурентного приборе Ч нефелометре или флюорометре. Раз- связывания, поскольку там также идет конку личие между этими приборами состоит в том, что ренция между меченым и немеченым соединени при нефелометрии длина волны первичного све- ем за антитела, но исследование поляризации та, которым освещается раствор, и вторичного, света флюоресценции позволяет определять ко в данном случае рассеянного, одинакова, поэто- личество флюоресцирующего соединения, обра му нет необходимости во вторичном светофиль- зовавшего комплекс механически, не отделяя его тре. При флюорометрии раствор освещается от свободной формы. В этом методе меченые светом, длина волны которого меньше, чем дли- соединения получают, присоединяя к молекуле на волны излучаемого света, поэтому требуются определяемого вещества молекулу флюоресцеи два светофильтра Ч первичный и вторичный, на Ч вещества, способного ярко светиться зеле Если же оба они одинаковы или вторичного ным светом при освещении его синим светом.
светофильтра вообще нет, флюорометр можно Способ химического присоединения флюоресце использовать как нефелометр. нна к белковым молекулам был разработан При нефелометрии абсолютное количество давно и широко используется при приготовлении рассеянного света не имеет большого значения, флюоресцирующих антител.
так как чувствительность прибора обычно вели- Физически явление флюоресценции заключа ка. В связи с тем что надо измерить количество ется в том, что молекула вещества, поглощая светорассенвающих частиц безотносительно их квант света, переходит в возбужденное со формы и размера, удобно работать в красной стояние, в котором находится очень неболь области спектра: длина волны больше и спектр шой промежуток времени, а затем возвращается частиц, которые ведут себя как релеевские, ши- в исходное состояние, испуская при этом квант ре: Если проводят турбидиметрическое измере- света с длиной волны, которая несколько боль ние, очень важно увеличить долю рассеянного ше, чем у света, который использовался для света, которая, согласно теории Релея, -обратно возбуждения флюоресценции. Если за время, пропорциональна четвертой степени длины во- прошедшее между поглощением света и его ис ны т. е. в фиолетовой области значительно пусканием, молекула флюорофора не изменила больше, чем в красной. Поэтому выбирают све- своего положения в пространстве, то свет флюо тофильтр, с самой короткой длиной волны, обыч- ресценции будет поляризован в той же плоско но 340 им.
сти, в которой поляризован и возбуждающий Чувствительность метода зависит и от фона, свет. Если же молекула успела повернуться на т.,е. света, рассеянного чистым растворителем. некоторый угол, то соответственно изменяется Эта величина определяется многими причинами, и плоскость поляризации излучаемого света.
в том числе фокусировкой пучка света. Тут лазер Поэтому исследование поляризации флюорес дает значительные преимущества: интенсив- ценции называют молекулярной вискозимет ность освещающего (и, следовательно, рассе- рией, она позволяет оценить скорость вращения янного) света велика;
нет нагревания, как при молекул исследуемого вещества. В связи с тем что большие молекулы комплекса антиген - Диапазон измерения ко антитело вращаются значительно медленнее, эффициента. светопро чем небольшие молекулы определяемого веще- пускания, % 10Ч ства, меченного флюоресцеинрм, метод позволя Спектральный диапазон ет определять одно из них в присутствии пропускания, нм 400Ч другого.
Ширина выходной щели Практически анализ проводят следующим прибора, мм 0,1;
0,2;
0,3;
0,4.
образом:, так же как в остальных вариантах метода конкурентного связывания, к исследуе- Скорость перемещения мой пробе добавляют известное количество оп- электрофореграммы, ределяемого вещества, меченного флюоресцеи- мм/мин 0,5;
1;
5;
10;
ном, затем титрованный раствор антител. После Продолжительность не того как реакция завершена и наступило равно прерывной работы, ч (не весие, раствор облучают поляризованным све менее) том и измеряют интенсивность флюоресценции светом, поляризованным в направлении, перпен дикулярном, к управлению поляризации воз- Лабораторное оборудование для пробопод буждающего света. В таких условиях светятся готовкн. Доз а т оры п о л у а в т ома т и только молекулы свободного меченого соедине- ч ес к и е п и п е тo ч н ы е П1 (СССР) предна ния, а молекулы, вошедшие в комплекс с антите- значены для дозирования реактивов и биожид лом, не светятся, так как весь излучаемый ими костей. Обладают высокой Точностью дозирова свет поляризован в том же направлении, что ния, легки, удобны и надежны в эксплуатации.
и возбуждающий (табл. 8).
Дозаторы П1-О,2 и П1-0,5 Ч поршневого ти па, дозаторы П1О,02, П1-0,05 и П|-0,1Ч плунжерного типа без стеклянного цилиндра, поршень заменен металлическим плунжером, уп лотненным эластичной втулкой. Корпус дозато 1.6.5. Некоторые виды ров заканчивается наконечником, на который лабораторного оборудования надевают сменные насадки, позволяющие уско рить отбор проб биожидкостей от разных паци Приборы для электрофореза на пленке из ентов. Использованные сменные насадки стери ацетата целлюлозы. Ап п а р а т для лизуют. Технические характеристики полуавто электрофорез а на пленке из аце- матических пипеточных дозаторов П1 приведены тата целлюлозы (ЭПАУ 20-50) предна- в табл. 9.
значен для разделения белков сыворотки на Дозатор а вт ома т иче с кий по пленках из ацетата целлюлозы. Аппарат позво- р шне в о й АХ-3-5. Химически стойкий трех ляет выполнять электрофорез на ацетатцеллю- компонентный дозатор. Предназначен для дози лозных пленках в микроварианте, что обеспечи- рования реактивов (кислот с концентрацией до вает значительную экономию реактивов и элек- 20 %), растворов щелочей и солей (с концентра троэнергии. Оборудование состоит из электрофо- цией до 6 %). Состоит из механизма перемеще ретической камеры, выполненной из органиче- ния и блока дозаторов, имеющих три дозирую ского стекла, и источника постоянного тока. щих устройства, работающих по принципу по Экспериментальный завод Всесоюзного научно- ршневого насоса.
исследовательского института синтетических Ниже приведены технические характеристи смол (г. Владимир) предоставляет ацетатцеллю- ки дозатора поршневого АХ-3-5.
лозные пленки необходимых размеров;
удобнее употреблять пленки размером 9Х 9 см, что дает возможность наносить последовательно от 4 до Объем дозы, мл От 0,1 до 2 (через 0,1 мл) 7 образцов. Пленки выдерживают в растворе 0,5 5 (через 0,5 мл) буфера, применяемого для электрофореза. Для Предел допускае получения 5 фракций рекомендуется веронал- мой основной прн мединаловый буфер или мединал-цнтратный бу- \веденной погреш фер рН 8,6. Длина камеры на 4 пленки 9Х 9 см' ности, % 2 2, 42 см, ширина 13 см. Для визуальной оценки Сходимость дозиро электрофореграмм, а также прямого ;
-денсцто- вания, % 2 > 2, метрнрования- достаточно 1Ч2 мкл сыворотки;
Производитель элюироваине фракций 1с последующим фотомет- кость, цикл/мин 15 и рированием требует 3 -4 мкл сыворотки. Элёк- Питание от сети пе трофоретическое разделение проводят при на- ременного тока:
пряжении 200 В в течение 20 мин. После окраши- напряжение, В 220 10 % вания краской, например Понсю С, в течение частота, Гц 15 мин н просветления пленки (устранения, из- Габарит, мм:
бытка красителя) проводят измерения на денси- механизма пере тометре.
мешивания 380 X 272 X Денситометр ДМ-1 предназначен для блока дозаторов 232 X 250 X фотометрирования окрашенных фореграмм, по- масса общая, кг лученных методом диск-электрофореза. (не более) Та блица 9. Технические характеристики полуавтоматических пипеточных дозаторов П Доз атор а вт ома т иче с кий по- Дозатор Имеет 3 сменные дозирующие на ршне в ой ме д и ц и н с к и й А-2 (СССР) садки на 2;
5 и 10 мл. Дозирование может предназначен для дозирования водных раство- осуществляться с частотой 15 доз в 1 мин, а так ров с содержанием солей до 5%, кислот (кроме же разовыми дозами.
уксусной, азотной и плавиковой) и оснований до Ниже приведены технические характеристи ки дозатора А-2.
2%.
Питание дозатора от однофазной сети переменного тока;
напряжение, В 220 частота, Гц 50 или потребляемая мощность, Вт (не более) Пределы дозирования, мл:
при применении насадки на 2 мл От 0,1 до 2.
> > > 5 От 0,2 до > > 10 От 0,2 до Цена деления шкал, мл:
шкалы для насадок на 2 и 5 мл 0, > > > 10 мл 0, Предел допускаемого значения приведенной погреш ности дозатора (не более):
для диапазона дозирования От 0,1 до 2 мл > От 0,2 до 5 мл и > от 0,2 до 10 мл Предел допускаемого значения среднеквадратическо го отклонения случайной составляющей приведенной погрешности с доверительной вероятностью 0,9 % (не более):
для диапазона дозирования От 0,1 до 2 мл I > > От 0,2 до 5 мл и 0, > > от 0,2 до 10 мл Габаритные размеры, мм 265X145X Масса в комплекте доставки кг (не более) Ав т о д ил ют о р " X и р а т и к - 21" Объем дозы, мкл:
(ЧССР). Предназначен для дозирования и раз- пробы бавления различных объемов биожидкости. До- реактива затор состоит из цилиндров с калиброванными поршнями разных диаметров н системы шлан гов. Величина дозы зависит от диаметра поршня н высоты хода поршня. Возможно присоедине- Продолжительность ние автодилютора к транспортеру проб Хира- дозирования, с (макс) тик-12 для автоматического;
дозирования за- Точность дозирования, данного объема реактива в отдельные пробирки. 2 Ч для дозы до 20 мкл;
1 Ч для дозы 20 мкл Ниже приведены технические характеристи- Габариты, мм 258X265X ки автодилютора Хиратик-21. Масса, кг Устройство автоматической подачи проб ра Хиратик-21. Имеется кодирование проби "Хиратик-12" (ЧССР) рассчитано на 120 проби- рок для обработки калибровочных проб. Систе рок, помещаемых в 10 штативов по 12 штук. Все ма идентификации в устройстве позволяет иден штативы одновременно можно переносить в под- тифицировать 4000 проб. Многоцелевое назна доне вручную от одного устройства автоматиче- чение устройства, помещение проб в поддонах ской подачи проб к другому или поместить и возможность его соединения с другими устрой в баню или термостат для инкубации. Интервал ствами Хнратик делают возможным применег между двумя шагами дозирования составляет ние данного устройства как для механизации 2,5 с, но может быть увеличен до 10 с. На задней работ в лаборатории, так и в комплекте автома панели имеется гнездо для подключения дозато- тизированной лабораторной линии.
Вместимость устройства 20 калибровочных проб и 100 проб па циентов Организация проб Поддон с 10 штативами, штатив для пробирок;
1-я н 7-я пробирки Ч для калибровочных проб Размер пробирок, мм 12,5X Вместимость пробирок, мд 7, Рабочая температура поддона До 100 С Управление Ручное от встроенного генератора;
вре мя шага 2,5;
10 с Автоматическая блокировка работы Ч после 120-й пробы.
Возможность перемещения по шагам Ч в 6 проб.
Возможность пропуска дозирования для калибровочных проб.
Габаритные размеры, мм 241X202X Масса, кг Доз ирующе е устройство DS реактивов. Пределы дозирования от 250 до 201E (ГДР) предназначено для дозирования 5000 мкл. Может работать по принципу дилюто водных растворов, в том числе и агрессивных ра.
Дозирующий орган (ДО) Соотношение Диапазон объема для проб для реактива проба/реактив проб, мкл ДО-0,5 ДО-5 50Ч 1: ДО- ДО-1 1:5 100Ч ДО- ДО-5 1:1 250Ч Возможно дозирование проб менее 50 мкл ДО-0,5 10 мкл и дозирование реактивов менее 250 мкл при ДО-1 20 мкл использовании устройства как дозатора: ДО- 100 мкл Ниже приведены технические данные дозирующего устройства DS 201E Дозирующее Дозируемый Соотношение Дознруюшнй Применение устройство объем, мл проба/реактив орган В качестве дозирующего Для реактива 0,25Ч5,0 ДО- устройства 0,5Ч10,0 2 X ДО- Ч В качестве разбавителя Для пробы 0,25Ч5,0 1:1 ДО-5: ДО- 0,1Ч1,0 1:5 ДО-1:ДО- 0,05Ч0,5 1:10 ДО-0.5:ДО- Прис пос обле ние для фи к с а ц и и свете. Состоит из прозрачных корпуса и крышки.
и о к р а с к и ма з ков кров и Корпус имеет 96 лунок цилиндрического профи ФОМ К - 1 (СССР) предназначено для фикса- ля. Прозрачность корпуса и крышки обеспечива ции и окраски мазков крови на предметных ет визуальное наблюдение за содержимым лунок стеклах с минимальным расходом красителей планшета. Размеры, форма панели и расположе и максимальным количеством предметных сте- ние лунок позволяют использовать имеющиеся кол. В состав приспособления входят: узел в лабораториях дозаторы для розлива. Техниче фиксации, узел окраски, узел промывки и узел ские характеристики планшета: габариты сушки предметных стекол, а также съемные 125Х84Х 14 мм;
масса 0,71 кг.
кассеты для размещения предметных стекол. Лабораторное оборудование для гематологи Приспособление имеет световую сигнализацию ческих исследований. Ге моцнт оме т р и обеспечивает установку времени окрашива- конду кт омет риче с ки й ГЦМК- ния мазков. Ниже приводится его техническая (СССР) предназначен для измерения кон характеристика. центрации эритроцитов и лейкоцитов в суспен зиях крови кондуктометрическим методом при Количество одновременно помощи датчика с отверстием. Принцип дей окрашиваемых стекол, шт. ствия основан на регистрации электрических Время окрашивания мазков, импульсов, возникающих при прохождении мик мин От 2 до рочастиц через отверстие датчика. Конструктив Напряжение, В но оформлен в виде прямоугольного корпуса Потребляемая мощность, Вт с ручкой, предназначенной для ручной пере Габариты, мм 280X155X носки прибора. На передней части расположены Масса, кг осциллоскоп, устройство крепления датчика, представляющего собой пробирку, в дно которой Планшет для и мму н о л о г и - введен часовой камень с микроотверстием, и ста че с ких р е а к ц и й о д но кр а т но г о кан для помещения пробы. С помощью гидрав п р и ме н е н и я предназначен для внесения в лической системы, управляемой рычагом, выве его лунки различных реагентов объемом 0,05Ч денным на боковую поверхность прибора, иссле 0,2 мл, последующего термостатирования и мик-, дуемую пробу протягивают через датчик и вы рокопирования или просмотра при естественном брасывают ее обратно в стакан.
Ниже приведены технические характеристики ГЦМК-3.
Систематическая составляющая основной относительной по грешности при нормальных условиях, % (не более):
для эритроцитов в диапазоне (2Ч8)Х лейкоцитов (2Ч20) Х 10 /л диапазона (4Ч10)-10 /л Изменение показаний при изменении температуры окружающе го воздуха в рабочих климатических условиях, % (не более на каждые 10):
питание от сети переменного тока:
напряжение, В 220 частота, Гц 50 или мощность, потребляемая прибором, Вт (не более) Время установления показаний при измерении концентрации микрочастиц в суспензиях крови, с (не более) Время достижения установившегося режима, мин (не более) Наработка на отказ Ч время условно непрерывной работы, ч (не менее) Габаритные размеры в пределах:
длина, мм 385 ширина, мм 180 высота, мм 305 масса, кг (не более) Ге мо г л о б ино ме т р фотоэ- расположено кюветное отделение блока измере л е кт рич е с кий ГФ-Ц-04 (СССР) предна- ния для размещения в нем стеклянной прямоу значен для определения концентрации гемогло- гольной кюветы с исследуемой пробой (в ком бина в крови. Принцип действия основан на плект поставки прибора входят 2 кюветы). Ре измерении оптической плотности исследуемой зультаты измерений индуцируются на цифровом пробы. Конструктивно оформлен в виде прямоу- табло на лицевой панели прибора. Ниже приве гольного корпуса. В передней части прибора дены технические характеристики ГФ-Ц-04.
Диапазон определения концентрации гемоглобина в крови, г/л 0Ч Основная приведенная погрешность, вызванная нелинейностью градуировочной характеристики прибора, % (не более) Питание от сети переменного тока:
напряжение, В 220 частота, Гц Мощность, потребляемая прибором, Вт (не более) Время достижения установившегося режима, мин (не более) Время установления показаний, с (не более) К) Наработка на отказ Ч время условно непрерывной работы, ч Средний срок службы до капитального ремонта, годы (не менее) Габаритные размеры в пределах:
длина, мм 370 ширина, мм 235 высота, мм 150 тами. Может поставляться в трех вариантах.
Компле кс г е ма т о л о г ич е с к ий л а б о р а т о р ный КГ-2 (СССР) предназна- Ниже приведена техническая характеристика чен для определения в автоматическом режиме КГ-2.
8 гематологических показателей: концентрации эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, гемогло Время одного анализа крови с бина, величины гематокрнта, среднего объема выводом 7 показателей на эритроцита, среднего содержания гемоглобина цифропечатающем устройстве, с Не более в 1 эритроците, средней концентрации гемогло Количество крови;
для анали бина в эритроцитах. В комплексе использованы;
за, мл 0, безртутная гидравлическая система протяжки взвеси с автономным управлением, автоматиче Питание от сети переменного ское-введение поправки на совпадение частиц, тока:
автоматическая коррекция амплитудной харак напряжение, В теристики. Имеет блок управления и индикации;
приставки счетные Ч 2 штуки;
блок преобразо частота, Гц вания информации;
блок вакуума, приставку для гемоглобина, приставку вычислительную, цифропечатающее устройство;
устройство для перемешивания проб. Блоки размещаются на В табл. 10Ч14 приведены технические ха подвижной тележке. Функциональная связь рактеристики различных приборов производства между ними обеспечивается межблочными жгу- СССР и других странЧчленов СЭВ.
Р а з д ел ХИМИКО-МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ 2.1. МОЧА Для исследования собирают всю порцию ная присутствием жира, исчезает при взбалты утренней мочи после тщательного туалета поло- вании мочи со смесью эфира и спирта. Если моча вых органов. Мочу необходимо собирать в со- остается мутной, несмотря на все эти процедуры, вершенно чистую, сухую посуду;
хранить до то муть, по всей вероятности, вызвана микроба исследования можно не более l' /2 ч в холодном ми, что распознается при микроскопическом месте. Применение консервирующих веществ не- исследовании.
желательно, но допускается в виде исключения, Реакция мочи. Определение рН при помощи если анализ не может быть произведен в поло- лакмусовой бумаги следует проводить одновре женное время. Лучшие результаты наблюдения менно двумя ее видами: синей и красной.
при обработке мочи тимолом (кристаллик тимо- Рез ультаты;
1) синяя лакмусовая бума ла на 100Ч150 мл мочи). га краснеет, красная не изменяет своего цвета Ч кислая реакция;
2) красная лакмусовая бумага синеет, синяя не изменяет своего цвета Ч ще 2.1.1. Физические свойства лочная реакция;
3) оба вида бумаги не меняют своего цвета Ч нейтральная реакция.
Количество. Количество утренней мочи Унифицированный метод определения рИ (обычно 150Ч250 мл) не дает представления мочи с индикатором бром-тимоловым синим о суточном диурезе. Измерение объема утренней (1979). Ре а кт ивы. Бромтимоловый синий мочи целесообразно для интерпретации ее отно- (З1, 3"-дибромтимолсульфофталеин): 0,1 г сительной плотности, растертого в фарфоровой ступке индикатора Цвет. Нормальная моча окрашена в более растворяют в 20 мл теплого этилового спирта или менее насыщенный желтый цвет (от соло- и после охлаждения до комнатной температуры менного до янтарно-желтого). Окраска мочи доводят водой до 100 мл.
может меняться при приеме лекарственных пре- Ход о пр е д е л е ния. Исследуют мочу паратов (ревеня, амидопирина, салицилатов в первые 2Ч3 ч после мочеиспускания. К 2Ч и др.) или употреблении некоторых пищевых 3 мл мочи добавляют 1Ч2 капли рабочего продуктов (свеклы, черники). Патологически раствора индикатора. Границы изменения окра измененная окраска мочи бывает при гематурии ски индикатора лежат в диапазоне значений рН (вид мясных помоев), билирубинурии (оранже- 6,0Ч7,6;
этот диапазон обеспечивает определе во-красный цвет).
ние кислой и щелочной реакции. Желтый цвет Прозрачность. В нормальной моче все со- соответствует кислой реакции, бурый Ч слабо ставные части находятся в растворе, поэтому кислой, травянистый Ч нейтральной, буровато свежевыпущенная моча совершенно прозрачна.
зеленый Ч слабощелочной, зеленый и синий Ч Если моча оказывается мутной в момент выделе- щелочной. Практическое выполнение этой ре ния, то это обусловлено наличием в ней большо- акции очень просто и при большом количестве го количества клеточных образований, солей, исследований значительно экономит время. Од бактерий, жира. Ориентировочно установить нако эти методы дают только ориентировочное причину помутнения можно следующим обра- представление о кислой или щелочной реакции, зом: если при нагревании 4Ч5 мл мочи в про- отличить мочу с нормальной кислотностью от бирке она становится прозрачной, то помутнение патологически кислой не представляется воз было вызвано мочекислыми солями (уратами);
можным.
если степень помутнения после нагревания не Выпускаемая в нашей стране универсальная изменяется, то к моче прибавляют 10Ч15 капель индикаторная бумага дает возможность опреде уксусной кислоты, полное или даже частичное лить рН (значения даны с интервалом 1,0 в ши исчезновение мути после этого говорит о том, что роком диапазоне Ч от 1,0 до 10,0 ). Кроме того, она была вызвана фосфатами. Полная прозрач- некоторыми фирмами выпускаются специаль ность мочи может не достигаться потому, что ные виды индикаторной бумаги, предназначен в таких случаях обычно имеется щелочная моча, ные для определения рН мочи (диапазон зна находящаяся в процессе разложения, которая чении рН 5,0Ч8,0), или комбинированные экс содержит микробы и клеточные элементы. По пресс-тесты, которые включают, кроме определе мутнение, исчезающее при добавлении НС1, ния величины рН, несколько других показа вызвано оксалатом кальция. Муть, обусловлен- телей.
Но р ма л ь ные в е л ич ины. Моча здо- растворенных в ней веществ (белка, глюкозы, ровых взрослых людей при обычном питании мочевины, солей натрия и др.). Каждые 3 г/л имеет средние значения рН 6,25 0,36 (от 5,0 до белка повышают относительную плотность мочи 7,0). Колебания рН мочи обусловлены составом на 0.001, а каждые 10 г/л глюкозы увеличивают питания;
мясная диета обусловливает кислую цифру плотности на 0,004. Цифры плотности реакцию мочи, растительная диета Ч щелочную. утренней мочи, равные или превышающие 1,018, Кл инич е с к о е з на че ние. В норме свидетельствуют о сохранении концентрацион при смешанной пище в организме образуются ной способности почек и исключают необходи главным образом кислые продукты обмена. Ос- мость ее исследования с помощью специальных нования попадают в организм при приеме ще- проб.
лочных лекарств и питании богатой основания- Кл инич е с к о е з на че ние. Очень вы ми пищей (овощи, фрукты, молочные продукты). сокие или низкие цифры плотности утренней Излишнее количество бикарбонатов выводится мочи требуют выяснения причин, обусловивших почками, при этом моча становится щелочной. эти изменения. Низкая относительная плотность Органические кислоты и кислые соли неорга- связана с полиурией, а высокая при объеме нических кислот содержащиеся в моче, диссоци- утренней мочи 200 мл и больше чаще всего ируют в водной среде, выделяя известное коли- бывает при глюкозуриях.
чество свободных Н+. Концентрация (актив + ность) свободных Н -ионов представляет ис тинную реакцию мочи Ч активную кислотность 2.1.2. Химическое исследование (РН).
Щелочность мочи увеличивается при рвоте, особенно при высокой кислотности желудочного БЕЛОК- Большинство качественных и коли сока, ощелачивающей терапии, хронической ин чественных методов определения белка в моче фекции мочевыводящих путей. Кислотность уве основаны на его коагуляции в объеме мочи или личивается при сахарном диабете, туберкулезе на границе сред (мочи и кислоты);
если есть почек, почечной недостаточности. Изменение рН способ измерить интенсивность коагуляции, то мочи соответствует изменениям рН крови;
при проба становится количественной.
ацидозах моча имеет кислую реакцию, при алка Унифицированная проба с сульфосалицило лозах Ч щелочную. Однако иногда наблюда вой кислотой (1972). Реакт ив: 20% раствор ется расхождение этих показателей. При хрони сульфосалициловой кислоты.
ческих поражениях канальцевого аппарата по Ход опре де ле ния. В2 пробирки нали чек (туберкулопатиях) в крови отмечается вают по 3 мл профильтрованной мочи. В опыт картина гиперхлоремического ацидоза, а реак ную пробирку прибавляют 6Ч8 капель реакти ция мочи щелочная, что связано с нарушением ва. На темном фоне сравнивают контрольную синтеза кислоты и аммиака в связи с поражени пробирку с опытной. Помутнение в опытной ем канальцев.
пробирке указывает на наличие белка, пробу При гипокалиемнческом алкалозе наблюда считают положительной.
ется ацидурия. Недостаток калия увеличивает + секрецию Н -ионов канальцами. В данной ситу- Приме ча ние. Если реакция мочи ще ации это физиологический ответ почечных ка- лочная, то перед исследованием ее подкисляют нальцев, направленный на поддержание ионного 2Ч3 каплями 10 % раствора уксусной кислоты.
равновесия между клетками и межтканевой Унифицированный метод Брандберга Ч Ро жидкостью. Таким образом, определение рН мо- бертсаЧСтольникова (1972). Пр инцип.
чи может иметь значение при дифференциальной В основу положена кольцевая проба Геллера, диагностике алкалоза и ацидоза разной этиоло- заключающаяся в том, что на границе азотной гии. кислоты и мочи при наличии белка происходит Относительная плотность мочи (удельный его коагуляция и появляется белое кольцо.
вес). Пр инцип. Сравнение плотности мочи Ре а кт ивы. 30% раствор азотной кисло е плотностью воды при помощи ареометра (уро- ты (относительная плотность 1,2) или реактив метра) с диапазоном шкалы от 0,001 до 1,050. Ларионовой. Приготовление реактива Ларионо Необходимое оборудование. вой: 20Ч30 г хлорида натрия растворяют при Цилиндр вместимостью 50 мл, урометр. нагревании в 100 мл дистиллированной воды, Ход опре де ле ния. Мочу наливают дают остыть, фильтруют. К 99 мл фильтрата в цилиндр, избегая образования пены, затем приливают 1 мл концентрированной азотной в нее осторожно погружают урометр. После кислоты.
прекращения его колебаний отмечают относи- Ход определения. В пробирку нали тельную плотность по положению нижнего мени- вают 1Ч2 мл азотной кислоты (или реактива ска на шкале урометра. Урометр не должен Ларионовой) и осторожно, по стенке пробирки, касаться стенок цилиндра. Температура иссле- наслаивают такое же количество профильтро дуемой мочи должна быть 153С. Если мочи ванной мочи. Появление тонкого белого кольца Мало, то можно перед исследованием развести ее на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й ми в 2Ч3 раза дистиллированной водой, а потом нутой указывает на наличие белка в концентра полученную цифру относительной плотности ум- ции примерно 0,033 г/л. Если кольцо появляется ножить на степень разведения. раньше 2 мин после наслаивания, мочу следует Норма л ь ные величины. Относи- развести водой и провести повторное наслаива тельная плотность зависит от концентрации ние уже разведенной мочи. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, П р и м е ч а н и е. Прямолинейная зави т. е. его ширины, компактности и времени по- симость при построении калибровочного графи явления. При нитевидном кольце, появившемся ка сохраняется до 1 г/л. При более высоких ранее 2 мин, мочу.разводят в 2 раза, при широ- концентрациях пробу следует разводить и учи комЧ в 4 раза, при компактномЧв 8 раз тывать разведение при расчете.
и т. д. Концентрацию белка при этом вычисляют Ложноположйтельные результаты могут путем умножения 0,033 на степень разведения быть получены при наличии в моче контрастных и выражают в граммах на 1л (г/л).
веществ, Содержащих органический йод. Поэто П р и м е Ч а н и е. Иногда белое кольцо му тест Нельзя использовать у лиц, принимаю получается при наличии больших количеств ура- щих Препараты йода;
лоЖноположительный тест тов. В отличие от белкового кольца уратное может быть Также обусловлен приемом сульфа появляется немного выше границы между двумя ниламидных препаратов, больших доз пеницил жидкостями и растворяется при легком нагрева- лина и при высоких концентрациях в моче нии.
мочевой кислоты:
Бнуретовый метод. Пр инцип. Пептидные Количественное определение белка в моче по связи белка с солями меди в щелочкой среде помутнению, образующемуся, при добавлении образуют комплекс фиолетового цвета: Белки сульфосалнциловой кислоты (1972). Прин предварительно осаждают трихлоруксусной кис цип. Интенсивность помутнения при коагуля лотой.
ции белка сульфосалициловой кислотой пропор Р е а к;
т и в ы с у л ь ф а т а. I. 10% раствор циональна его концентрации.
трнхлоруксусной кислоты. 2. 20 % раствор меди Ре акт ивы. 1.3% раствор сульфосалици (CuSо4-2H2O): 3, 3% раствор NaOH.
ловой кислоты. 2. 0,9 % раствор хлорида натрия.
Ход опре д е ле ния. К 5 Мл мочи, взятой 3. Стандартный раствор альбумина Ч 1 % из суточного количества, прибавляют 3 мл раствор (I мл раствора, содержащий 10 мг раствора трихлоруксусной кислоты, центрифу альбумина): 1 г лиофилизированного альбумина гируют до постоянного объема осадка. Надоса (из человеческой или бычьей сыворотки) раство дочную жидкость отсасывают пипеткой, осадок ряют в небольшом количестве 0,9% раствора затем растворяют в 5 мл раствора NaOH.
хлорида натрия в колбе вместимостью 100, мл, К раствору добавляют 0,25 мл Си SO4, смесь а затем доводят до метки тем же раствором.
перемешивают к центрифугируют. Надосадоч Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5 % ную жидкость фотометрируют при длине волны раствора азида натрия (NaN3). При хранении 540 им в кювете с длиной оптического пути 10 мм в холодильнике реактив годен в течение 2 мес.
против дистиллированной воды. Концентрацию Спе циа л ь но е обору дова ние : фо белка рассчитывают по калибровочной кривой, тоэлектроколориметр.
при построении которой на оси ординат отклады Ход определения. В пробирку вносят вают концентрацию белка (г/л). а на оси аб 1,25 мл профильтрованной мочи, доливают до сцисс Ч оптическую плотность в единицах эк 5 мл 3 % раствором сульфосалициловой кисло стинкции. По полученной концентрации рассчи ты, перемешивают. Через 5 мин измеряют на тывают суточную потерю белка с мочой.
фотоэлектроколориметре при длине волны 590Ч Обнаружение белка с помощью индикатор 650 им (оранжевый: или красный-светофильтр) ной бумаги (полосок), которые выпускаются против контроля в. кювете длиной оптического фирмами llachemi (ЧССР), Albuphan, пути 5 мм. Контролем служит пробирка в кото Ames (Англия), Albustix, Boehringer рой к 1,25 мл профильтрованной мочи долили до (ФРГ), Comburtest и др.
5 мл 0,9 % раствор хлорида натрия. Расчет ведут по калибровочному графику, для построе- Пр и н ц и п основан на феномене так назы ния которого из стандартного раствора готовят ваемой протеиновой ошибки некоторых кислот разведения, как указано в табл. 15.
но-щелочных индикаторов. Индикаторная часть бумаги пропитана тетрабромфеноловым синим и цитратным буфером. При увлажнении бумаги Та блица 15. Приготовление разведений для буфер растворяется н обеспечивает соответству построения калибровочного графике ющий, рН для реакции индикатора. При рН 3,0Ч3,5 аминогруппы белков реагируют с инди катором и меняют его первоначально желтую окраску, на зеленовато-синюю, после чего, срав нивая с цветной шкалой, можно ориентировочно оценить концентрацию, белка в исследуемой мо че. Основной предпосылкой правильной работы индикаторных полосок является обеспечение рН 3,0Ч3,5 для протекания реакции. Если бумага находится в. контакте с исследуемой мочой до льше экспозиции, указанной в инструкции, то цитратный буфер, в, ней растворяется, и тогда индикатор реагирует на истинный рН. мочи, т. е. дает ложноположительную реакцию. В свя Из каждого полученного раствора берут зи с тем, что емкость буфера ограничена, то :
1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы. даже при соблюдении методических указаний в пробах слишком щелочной мочи (рН>6,5) фракций мочи. Наиболее точны методы электро получаются ложноположительные результаты, фореза в крахмальном н полиакрнламидном ;
а в пробах слишком кислой мочи (рН<3,0) Ч геле. По результатам, полученным этими мето-, ложноотрицательные. Число реагирующих ами- дами, можно судить о селективности протеину-, ногрупп в составе отдельных белков различно, рии.
поэтому альбумины реагируют в 2 раза интен- Обнаружение в моче белка Беис-Джонса.
сивнее, чем такое же количество у-глобулинов Исследование целесообразно проводить только:
(белок Бене-Джойса, парапротеины), и гораздо при положительной пробе с сульфосалициловой интенсивнее, чем гликопротенды. Однако при кислотой. Индикаторная бумага для обнаруже большом количестве слизи с высоким содержа- ния белка Бенс-Джонса непригодна.
нием гликопротеидов (воспаление мочевыводя- Пр инци п основан на реакции термопре щих путей) оседающие на индикаторной полоске ципитации. Методы, с помощью которых оцени хлопья слизи могут давать ложноположитель- вают растворение белка Бенс-Джонса при тем ные результаты. Чувствительность отдельных пературе 100 С или повторное осаждение при производственных серий индикаторной бумаги, последующем охлаждении, ненадежны, так как равно как и отдельных видов бумаги, выпускае- далеко не все белковые тела Беис-Джонса обла мых одной и той же фирмой, может быть различ- дают соответствующими свойствами. Наиболее ной;
поэтому к количественной оценке белка достоверно выявление этого парапротеина осаж этим методом следует относиться осторожно. дением его при температуре 40Ч60 С, но и в Определение суточной потери белков с мочой этих условиях осаждение может не произойти при помощи индикаторной бумаги невозможно.
в слишком кислой (рН<3,0Ч3,5) или слишком Таким образом, индикаторная бумага уступает щелочной (рН>6,5) моче, при низкой относи химическим пробам, в первую очередь пробе тельной плотности мочи и при низкой концентра с сульфосалициловой кислотой, хотя и дает воз- ции белка Бенс-Джонса. Наилучшие условия можность быстрого исследования серии образ- осаждения обеспечивает методика, предложен нов. ная Patnem.
Норма ль ное з на ч е ние. Небольшое Реактив. 2М ацетатный буфер рН 4,9.
количество белка в суточной моче обнаружива- Ход ис с ле дов а ния. Профильтрован ется и у вполне здоровых лиц, однако такие ную мочу в количестве 4 мл смешивают с 1 мл небольшие концентрации не выявляют в разо- буфера и согревают 15 мин на водяной бане при вых порциях используемыми в настоящее время температуре 56 С. При наличии белков Бенс методами. Приблизительно 70 % белков мочи Джонса уже в течение 2 мин появляется выра здорового человека приходится на долю урому- женный осадок, при концентрации белка Бенс коида Ч белка, являющегося продуктом почеч- Джонса менее 3 г/л проба может получиться ной ткани;
таким образом, доля гломерулярного отрицательной, На практике это встречается белка в моче здоровых людей является ничтож- крайне редко, так как большей частью концен но малой. Большинство исследователей указы- трация белка Бенс-Джонса в моче значитель вают, что протеинурия в норме составляет 50Ч ная.
150 мг/сут. Большинство белков мочи идентично С полной достоверностью белок Бенс-Джон сывороточным.
са может быть обнаружен иммуноэлектрофоре Кл и ни ч е с к о е з на ч е ние. Принято тическим исследованием при использовании различать следующие формы протеинурни в за- специфических сывороток против тяжелых и лег висимости от места возникновения: пререналь- ких цепей иммуноглобулинов.
ную, связанную с усиленным распадом белка Кл инич е с к о е з начение. Белок тканей, выраженным гемолизом;
ренальную, Бенс-Джонса может выделяться с мочой при :
обусловленную патологией почек, которая мо- миеломной болезни, макроглобулииемни Валь жет быть разделена на клубочковую и канальце- денстрема.
вую;
постренальную, связанную с патологией Лит е ра т у ра. Михеева А. И., Богодаро мочевыводящих путей и чаще всего обусловлен ва И. А.Ч Лаб. дело, 1969, т. 7, с. 441;
Рябов ную воспалительной экссудацией. В зависимо С. И., Наточин Ю. В., Бондаренко Б. Б. Диагно сти от длительности существования выделяют стика болезней почек.Ч Л.:' Медицина, 1979, постоянную протеинурию, существующую в те с. 29Ч32;
Kingsburry F. В., Clark С. P., Willi чение многих недель и даже лет, и преходящую, ams G., Post A.Ч J. Lab. Clin. Med., 1926, vol.
прявляющуюся периодически, иногда даже при 11, p. 981.
отсутствии патологии почек, например при лихо радке и выраженной интоксикации. Целесооб- ГЛЮКОЗА. Унифицированный метод опре разно различать вариабельность протеинурии:
деления с помощью индикаторных полосок при сутрчной, потере белка до 1 г Ч умеренную, (1972). Принцип. Метод основан на специ от 1 до 3 г Ч среднюю и более 3 г Ч выражен- фическом окислении глюкозы с помощью фер ную. мента глюкозооксидазы;
образовавшаяся при этом перекись водорода разлагается пероксида Обнаружение в моче белков с относительно зой н окисляет краситель. Изменение окраски большой молекулярной массой свидетельствует об отсутствии избирательности почечного филь- красителя при окислении свидетельствует о при тра и выраженном его поражении. В этих случа- сутствии глюкозы в моче.
ях говорят о низкой селективности протеинурии. Реактивная бумага Глюкотест представля Поэтому в настоящее время широкое распро- ет собой полоски бумаги 0,5Х 5 см, имеющие странение получило определение белковых поперечную полосу светло-желтого цвета, про питанную раствором ферментов и красителя.
пропорционален концентрации глюкозы в С понощью бумаги Глюкотест можно обнару- растворе.
жить глюкозу в моче и ориентировочно опреде- Ре а кт ивы. 30% раствор ацетата свинца.
лить ее концентрацию. Комплект состоит из Спе циа л ь но е о б о р у до в а н и е: по 100 штук реактивных полосок, цветной шкалы, ляриметр.
пластинки из пластмассы и инструкции. Иссле- Ход ис с ле дов а ния. Исследуемая мо дование проводят строго по инструкции. ча должна быть кислой реакции, прозрачной Х од и сс л е д о в а ни я.. Бумагу Глюко- и не содержать белка. Белок удаляют кипячени тес погружают к исследуемую мочу так, чтобы ем с последующим фильтрованием. Необходимо желтая полоса с реактивами оказалась смочен- также обесцветить мочу, так как некоторые пиг ной, после этого ее немедленно извлекают из менты могут быть оптически активны. Лучше мочи и на 2 мин оставляют на пластмассовой всего обесцвечивание достигается обработкой пластинке. По истечении 2 мин сразу же сравни- ацетатом свинца, для этого к 10 мл мочи прили вают изменившуюся окраску цветной полосы на вают 1 мл 30 % ацетата свинца, подкисленного бумаге со шкалой, имеющейся в комплекте.
несколькими каплями уксусной кислоты (в ще Содержаяие глюкозы в моче определяют по лочной среде свинец осаждает глюкозу), переме наиболее совпадающему со шкалой цвету по- шивают, фильтруют. Исследовать можно только лоски.
прозрачный фильтр. Затем трубку поляриметра наполняют прозрачным фильтратом, избегая по П р и м е ч а н и я: I. Хранить полоски падания пузырьков воздуха, накрывают шлифо надо при температуре от +8 до +18 С, избе ванным стеклом, помещают в аппарат и через гать попадания на них прямых солнечных лучей;
2Ч3 мин проводят определение;
это время не не рекомендуется дотрагиваться рукой до цвет обходимо для затихания колебаний частиц жид ной шкалы полоски. 2. Исследуют свежесобран кости. Определение ведут строго по инструкции, ную мочу. 3. При содержании в моче глюкозы прилагаемой к данному аппарату.
более 20 г/л интенсивность окраски цветной Точность поляриметра проверяют, исследуя полосы становится предельной (соответствует стандартный раствор глюкозы, но этот раствор 2 % по шкале) и далее не меняется.
годен для работы только через 24 ч после его Срок годности полосок Глюкотест 8 мес со приготовления.
дня выпуска. Подобные тесты выпускают и зару Пр име ч а ние. Определению могут бежные фирмы.
мешать р-оксимасляная кислота, препараты тет Унифицированные методы обнаружения глю рациклннового ряда, стрептомицин.
козы в моче. Проба Гайнеса (1972). Можно Определение сахара в моче по цветной ре использовать готовый набор реактива.
акции с ортотолуидином см. Определение глюка П р и н ц и п метода основан на способности зы в крови.
глюкозы восстанавливать в щелочной среде при Но р ма л ь но е з на че ние. Нормаль нагревании гидрат окиси меди (синего цвета) ную концентрацию глюкозы в моче до 0,2 г/л в гидрат закиси меди (желтого цвета) и закись обычными пробами не обнаруживают. Появле меди (красного цвета). Для того чтобы из гидра ние глюкозы в моче может быть результатом та окиси, меди при нагревании не образовался физиологической гипергликемии (алиментар черный осадок окиси меди, к реактиву добавля ной, эмоциональной, лекарственной).
ют глицерин, тидроксильные группы которого Кл и н и ч е с к о е з на че ние. Появление связывают гидрат окиси меди.
глюкозы в моче зависит от концентрации ее Реакт ивы. Реактив Гайнеса: 1) 13,3 г в крови, от процесса фильтрации в клубочках кристаллического сульфата меди х. ч. (Сu- (гломерулярных клиренсов) и от реабсорбции SO4 5НаО) растворяют в 400 мл дистиллиро- глюкозы в канальцах нефрона. Патологические ванной воды;
2) 50 г едкого натра растворяют глюкозурии делятся на панкреатогенные и вне в 400мл дистиkлированной воды;
3) 15 г глице- панкреатические. Важнейшая из панкреатоген рина (ч. или ч. д. а.) растворяют в 200 мл ных Ч диабетическая глюкозурия.. Внепанкреа дистиллированной воды. Смешивают раство- тические глюкозурии наблюдаются при раздра ры 1 и 2 и тотчас же приливают раствор 3. Ре- жении ЦНС, гипертиреозе, синдроме Иценко Ч актив стоек. Кушинга, патологии печени, почек. Для оценки X о д и с с л е д о в а н и я. К 6Ч8 мл мочи степени выраженности глюкозурии необходимо прибавляют 20 капель реактива до появления рассчитывать потерю глюкозы с мочой за сутки.
голубоватой окраски, смешивают н нагревают Кетоновые тела. Унифицированная проба верхнюю часть пробирки до начала кипения.
Ланге (1979). Принцип. Нитропрусснд на Нижняя часть пробирки Ч контроль. При нали- трия в щелочной среде реагирует с кетоновыми чии глюкоэы в моче появляется желтая окраска телами (ацетоуксусной кислотой, р-оксимасля в верхней части пробирки. ной кислотой и ацетоном) с образованием ком Приме ча ние. При бактериурии глю- плекса красно-фиолетового цвета.
коза мочи быстро разлагается. Можно использо- Ре акт ивы. 1. Натрия нитропрусснд, вать готовый набор реактивов: раствор 50 г/л;
готовят перед употреблением.
Унифицированный поляриметрический метод 2. Уксусная кислота концентрированная. 3. Ам определения содержания глюкозы (1972). миак водный (МШОН) Ч 25 % раствор.
П р и н ц и п. Метод основан на использовании Ход опре де ле ния. Исследуют мочу свойства раствора глюкозы вращать плоскость в первые 3 ч после мочеиспускания. В пробирку поляризованного луча вправо. Угол вращения к 3Ч5 мл мочи приливают 5Ч10 капель раство в холодильнике;
Кетоновые тела могут исчезать pa натрия нитропруссида и 0,5 мл уксусной кислоты, смешивают, а затем осторожно по стен- из мочи и in vivo при бактериурии.
ке пробирки пипеткой наслаивают 2Ч3 мл во Но р ма л ь н ые в е личины. В норме дного раствора аммиака. Пробу считают поло с мочой выделяется 20Ч50 мг кетоновых тел за жительной, если в течение 3 мин на границе сред 24 ч.
образуется красно-фиолетовое кольцо.
Кл и ни ч е с к о е з на че ние. Чаще всего Модифицированная проба Ротеры (1979).
кетонурия наблюдается при диабете, что явля Пр и н ц и п тот же, что и в пробе Ланге.
Ре акт ивы. 1. Натрия ннтропруссид, ется критерием правильности подбора пищевого раствор 50 г/л;
готовят перед употреблением. режима: если количество вводимых жиров не со 2. Аммония сульфат. 3. Аммиак водный ответствует количеству усваиваемых углеводов, то увеличивается выделение кетоновых тел. При (NН ОН) Ч 25 % раствор.
Ход опре де ле ния. Приблизительно уменьшении введения углеводов (лечение без инсулина) при обычном количестве жиров начи 200 мг сухого сульфата аммония, 5 капель мочи и 2 капли раствора натрия нитропруссида тща- нает выделяться ацетон;
при лечении инсулином тельно смешивают в пробирке, а затем на эту уничтожение глюкозурии достигается лучшим смесь осторожно наслаивают 10Ч15 капель усвоением углеводов и не сопровождается кето раствора водного аммиака. При наличии кетоно- нурией. Таким образом, обнаружение кетоновых тел в моче больных диабетом необходимо для вых тел на границе раздела в течение 3Ч5 мин образуется красно-фиолетовое кольцо, интен- регулирования диеты.
сивность окраски которого позволяет ориентиро Лит е ра т у ра, Меньшикова В. В., В айн вочно судить о концентрации кетоновых тел штейн Т. Я Ч Лаб. дело, 1984, № 2, с. 84;
Мето в моче (табл. 16).
дические рекомендации по применению экспресс тестов (сухих диагностических проб) в медицин ской практике.Ч М., 1977;
Henry R. I. Clinical Таблица 16. Ориентировочная количествен chemistry. Principles and technics.Ч New York, ная оценка кетоновых тел в моче 1964, p. 689Ч698.
ЖЕЛЧНЫЕ ПИГМЕНТЫ. БИЛИРУБИН.
Обнаруживаемые вещества, г/л Большинство качественных проб для обнаруже Интенсивность ния билирубина в моче основано на его превра окраски щении под действием окислителя в зеленый ацетоуксусная ацетон кислота биливердин или пурпурно-красные билипур пурины, которые, примешиваясь к биливердину, дают синее окрашивание.
Следы 0,05 0, Унифицированная проба Фуше (.1972). Р е Умеренная 0,3 2, а к т и в ы. 1.15 % раствор хлорида бария. 2. Ре Интенсивная 0, актив Фуше: 25 г трихлоруксусной кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды и приливают 10 мл 10 % раствора хлорного же леза (FeCU).
Ход опре де ле ния. К 10 мл мочи при При незначительной концентрации кетоно бавляют 5 мл 15 % раствора хлорида бария.
вых тел слабое кольцо может появиться на Смешивают, фильтруют. На вынутый из воронки 8Ч10-й минуте.
и расправленный на дне чашки Петри фильтр Метод с готовым набором для экспресс наносят 2 капли реактива Фуше. Появление на анализа ацетона в моче. Пр инци п тот же, что фильтре сине-зеленых пятен говорит о присут и в предыдущих 2 пробах.
ствии билирубина. Если реакция мочи щелоч Ход опре де ления. На полоску филь ная, то необходимо подкислить ее несколькими трованной бумаги помещают таблетку, на кото каплями уксусной кислоты.
рую пипеткой наносят 2 капли исследуемой Унифицированная проба Резина (1972).
мочи. Через 2 мин окраску таблетки сравнивают Ре акт ив: 1% спиртовой раствор йода.
с цветной шкалой. Наличие ацетона вызывает Ход опре де ле ния. В пробирку нали фиолетовое окрашивание разной интенсивности;
вают 4Ч5 мл мочи и осторожно по стенкам согласно шкале, реакцию оценивают как слабо пробирки наслаивают раствор йода. Появление положительную, положительную и резко поло на границе между жидкостями зеленого кольца жительную.
говорит о наличии билирубина:
Ряд фирм выпускает экспресс-тесты для оп Проба Готфрида. Пр инцип. Билирубина ределения кетоновых тел (табл. 17);
определе глюкуронид (холебилирубин) при соединении ние с помощью таких тестов проводят строго по с диазотированной сульфаниловой кислотой инструкции.
(диазобензосульфоновая кислота) дает розовую Приме ч а ние. Ацетоуксусная кисло- окраску за счет образования билирубина.
Реактивы. 1. 10% раствор хлорида ба та в стерильной моче стабильна до 8Ч10 дней, при бактериурии или большом количестве дрож- рия. 2. Диазореактив: а) диазораствор 1: 5 г жевого грибка может полностью исчезнуть в те- сульфаниловой кислоты растворяют в неболь шом количестве воды, прибавляют 15 мл концен чение 24 ч. Около 20% ацетона при комнатной трированной НС1 и доливают до 1000 мл дистил температуре исчезает за 24 ч, но сохраняется Таблица 17. Экспресс-тесты для обнаружения кетоновых тел в моче лированной водой;
б) диазораствор II: 0,5 % ра- Но р ма л ь н ые з на ч е ния. Моча, здо створ нитрата натрия. Непосредственно перед ровых людей содержит минимальные количества определением смешивают 10 мл диазораство- билирубина, которые не могут быть обнаружены ра I и 0,25 мл диазораствора II, 3. Спирт этило- качественными пробами, применяемыми в прак вый 96 %, 4. 6 % раствор двузамещенного фос- тической :медицине. С мочой выделяетсй только фата натрия. билирубина глюкуроннд (прямой билирубин), Ход определения. К 10 мл мочи, под- концентрация которого в норме в крови незна кисленной несколькими каплями уксусной кисло- чительна.
ты, прибавляют 5 мл 10 % раствора хлорида ба- Кл и нич е с к о е значение. Биляруби нурню наблюдают главным образом при порa рия, перемешивают, фильтруют через бумажный фильтр. Фильтр раскладывают на дне -чашки жениях паренхимы печени (паренхиматозные Петри и на осадок, содержащий билирубин, желтухи) и нарушении оттока, желчи (обтура капают 1Ч2 капли свежеприготовленной диазо- ционные желтухи). Для гемолитической желту смеси, 4 капли спирта и 1 каплю двузамещенного хи билирубинурия нехарактерна, так как гемо фосфата натрия. При положительной пробе по- билирубин (непрямой билирубин) не проходит лучается красно-фиолетовая окраска. через почечный фильтр;
Принцип описанной пробы лег в основу эк- УРОБИЛИНОИДЫ. Унифицированная про спресс-тестов для определения билирубина, вы- ба Флорамса (1979). Пр и н ц и п С HCI уроби лин образует соединение, окрашенное в крас пускаемых зарубежными фирмами Ames (Англия), Boehringer (ФРГ) и др. ный цвет.
Реактивы. 1. Серная кислота концентри- Унифицированный метод с пара-диметил рованная. 2. Диэтиловый эфир. 3. НС1 концен- аминобензальдегидом (1979). Принцип. Уро трированная. билиноген с пара-диметнламинобензальдегидом Ход ис с л е д о в а ния. Мочу в количе- образует комплекс, окрашенный в красный цвет, :
стве 8Ч10 мл подкисляют в пробирке 8Ч10 кап- интенсивность окраски пропорциональна содер лями концентрированной серной кислоты, пере- жанию уробилиногена. Для восстановления уро мешивают, затем приливают 2Ч3 мл эфира и, билина в уробилиноген используют аскорбинок закрыв пробирку пробкой, несколько раз осто- вую кислоту н гидрат окиси железа. Для увели рожно пропускают эфир через слой мочи для чения специфичности реакции добавляют ацетат экстрагирования уробилина. Затем эфирную вы- натрия.
тяжку мочи наслаивают, лучше пастеровской Реактивы. 1. 4-Диметнл аминобензаль пипеткой, на 2Ч3 мл концентрированной HCI, дегид (пара-диметнламинобензальдегнд). 2. HCI налитой в другую пробирку. При наличии уроби- концентрированная х. ч. 3. Реактив Эрлиха;
лина иа границе жидкостей образуется розовое 0.7 г пара-диметиламинобензальдегида раство кольцо. Интенсивность окраски пропорциональ- ряют в 150 мл концентрированной HCI, прили на количеству уробилина. вают к 100 мл дистиллированной воды и смеши О ц е н к а ре з у ль т а т а. Проба настоль- вают. Раствор должен быть бесцветным или ко чувствительна, что даже в норме на границе слегка желтоватым. Хранят в посуде из темного между двумя жидкостями видно легкое розовое стекла. Реактив стабилен. 4. Натрия ацетат окрашивание. Этой пробой можно установить ч. д. а., х. ч., насыщенный раствор: 375 г полное отсутствие уробилиноидов в моче. СНзСООNa-ЗН О (или 226 г CH COONa) 2 Унифицированная проба Богомолова (1979). растворяют в 250 мл теплой дистиллированной Пр и нц ип. Уробилин с сульфатом меди обра- воды, охлаждают до комнатной температуры.
зует соединение красно-розового цвета. Хранят при температуре 20 "С. Раствор должен Ре а кт ив ы. 1. Меди сульфат ч. д. а., насы- быть бесцветным и прозрачным. 5. Аскорбино щенный раствор: 23 г CuSO 5H O растворяют вая кислота. 6. Натр едкий: 0,5 г/л раствора.
4 в 100 мл дистиллированной воды. 2. Хлороформ. 7. Бария хлорид, 100 г/л раствора. 8. Фенол Ход ис с л е д о в а ния. К 10Ч15 мл мочи сульфофталеин (феноловый красный). Исполь приливают 2Ч3 мл насыщенного раствора суль- зуют для приготовления калибровочного раство фата меди. Если образуется помутнение, то при- ра. 9. Основной калибровочный раствор: 20 мг бавляют несколько капель концентрированной фенолсульфофталеина растворяют в 100 мл HCI до прояснения раствора. Через 5 мин прили- 0,5 г/л раствора едкого натра. Стабилен при вают 2Ч3 мл хлороформа и, закрыв пробирку хранении. Рабочий калибровочный раствор го пробкой, несколько раз встряхивают.
товят разведением основного раствора 0,5 г/л Оце нка ре з у ль т а т ов. Если хлоро- раствором едкого натра в 100 раз. Стабилен в те форм окрашивается в розовый цвет, то концен- чение недели с условием хранения при 20 С.
трация уробилина в моче выше нормальной.
Рабочий раствор содержит 0,2 мг фенолсуль Унифицированная бензальдегидная проба фофталеина в 100 мл и эквивалентен по окраске Нейбауэра (1979). Пр инцип. Проба основа- раствору уробилиногена Ч 0,345 мг/100 мл.
на на том, что уробилиногеновые тела с пара- Точность приготовления можно проверить изме диметяламинобензальдегидом (реактив Эрли- рением оптической плотности раствора на спек ха) дают соединение красной окраски.
трофотометре: при длине волны 562 им опти Ре а кт ив. Реактив Эрлиха: 2 г пара-диме- ческая плотность раствора должна быть 0,380Ч тила.минобензальдегида растворяют в 100 мл 0,390.
20%;
раствора НС1 кислоты.
Спе циа л ь но е о б о р у д о в а нне : фо Х о д ис с ле дов а ния. К 3Ч4 мл свеже- тозлектроколориметр или спектрофотометр.
вьщущенной мочи, охлажденной до комнатной Подг отовка образца. Исследова температуры, прибавляют 3Ч4 капли реактива ние проводят в первые 2Ч3 ч после мочеиспуска Эрлиха (I каплю на I мл мочи). Окрашивание ния. При наличии мутности мочу центрифуги жидкости в красный цвет в течение первых 30 с руют, а затем проводят качественное определе говорит об увеличенном содержании уробилине- ние билирубина. Если обнаруживают билиру гена в моче;
если окрашивание развивается по бин, то 8 мл мочи смешивают с 2 мл 100 г/л раст прошествии 30 с, то концентрация уробилина вора хлорида бария и фильтруют через бумаж в моче нормальная, а если через 30 с окраска ный фильтр. Конечный результат умножают на не развивается, то это может быть вариантом 1,25, чтобы внести поправку на разведение.
нормы или говорить о полном отсутствии уро- Ход опре деле ния. 100 мг аскорбино бнлиногена в моче.
вой кислоты растворяют в 10 мл исследуемой.. Пр име ч а ние. Билирубин мешает опре- мочи и помещают по 1,5 мл в 2 пробирки для делению уробилиноидов, поэтому, если он об- опытной и холостой пробы. В пробирку с холо наружен в моче, его следует предварительно стой пробой прибавляют 4,5 мл свежеприготов удалить, осаждая хлоридом бария с последу- ленной смеси одного объема раствора Эрлиха ющим фильтрованием, для этого к 10Ч12 мл и двух объемов насыщенного раствора ацетата мочи-приливают 5Ч6 мл 10% раствора натрия. В пробирку с опытной пробой прибав BaCl и фильтруют. Затем фильтрат прове- ляют 1,5 мл раствора Эрлиха и немедленно при ряют на полноту осаждения билирубина и ливают 3 мл насыщенного раствора ацетата процедуру повторяют, если первое осаждение натрия. Через 5 мин измеряют экстинкцию обеих было, неполным. проб против воды на ФЭК при длине волны 500 - 590нм (зелений светофильтр) В кювете Но р ма л ь н ые в е личины. В моче здо с толщиной слоя 1 см на спектрофотометре при рового человека содержатся следы уробилино длине волны 562нм. Рабочий калибровочный гена, а за сутки выделяется не больше 6 мг, у де раствор измеряют при тех же условиях, что и тей не более 2 мг.
опытную пробу. Клиниче с кое значение. В свеже Результаты выражают в единицах Эрлиха выпущенной моче-содержится уробилиноген, ко (I ед. соответствует 1 мг уробилнногена). Кон- торый при стоянии мочи окисляется в уробили центрацню уробилиногена выражают количест- ны. Все эти вещества являются производными вояг единиц Эрлиха в 100 мл мочи (Ед,). билирубина и называются уробилнноидами.
Расчет производят по формуле: Уробилиноиды образуются под действием фер ментов бактерий и клеток слизистой оболочки кишечника из билирубина, выделившегося с желчью. Уробилнноидурия является одним из характерных симптомов поражения паренхимы где " ЕД -Ч экстинКцня опытной пробы;
, Ч эк- печени (гепатиты, циррозы), гемолитических со стинкция холостой пробы;
л ХЧ экстинкция ка- стояний и заболеваний кишечника (энтериты, либровочной пробы;
0,346 Ч концентрация уро- наклонность к запорам, кишечная непроходи билиногена в растворе (0,346 мг/ 100 мл), окрас- мость). Полное отсутствие уробилиноидов гово ка которого эквивалентна окраске калибро- рит о полном нарушении поступления желчи вочного раствора фенолфталеина;
6,0 Ч объем в кишечник.
пробы (мл);
1,5 Ч количество мочи в пробе (мл). Лит е р а т у р а. Henry R. /., Cannon D. С., Соотношение ингредиентов при определении Winkelman J. W. Clinical chemistry. Principles уробилиногена в моче представлено в табл. 18. and technics.Ч New York, 1974, p. 1354Ч1369;
Terwen A. G, L. Dtsch. Arch. Klin, med., 1925, Т а б л к ц а 18. Соотношение ингредиентов H. 149, S. 72.
(в миллилитрах) при определении уробнлн ПОРФОБИЛИНОГЕН. Уннфнцнрованный ногена в моче метод с пара-днметнламинобензальдегндом (1979). Пр инцип. Порфобилиноген (ПБГ) реагирует с пара-диметиламинобензальдегидом с образованием окрашенного в красный цвет соединения. Для повышения специфичности ре акции добавляют ацетат натрия.. Соединения, дающие аналогичную реакцию с пара-димешл аминобензальдегидом (уробилиноген, производ ные индола, скатола и др.), удаляют путем экстракции хлороформом и бутанолом, в кото рых ПБГ нерастворим.
Ре а кт ив ы. 1. 4-(Диметиламино)-бен зальдегид (пара-диметнламннобензальдегид).
2. НС! кислота концентрированная х. ч. 3. Реак тив Эрлиха: 0,7 г пара-диметиламинобензальде гнда растворяют в 150 мл концентрированной НС1 кислоты, приливают к 100 мл дистиллиро ванной воды и смешивают. Раствор должен быть бесцветным или слегка желтым. Хранят в посуде из темного стекла. Реактив стабилен.
4. Натрия ацетат х. ч. или ч. д. а., насыщенный раствор: 375 г CH COONa Х ЗН О (или 226 г 3 Пр име ч а ния. 1. Рекомендуется соби- CH COONa) растворяют в 250 мл теплой дис рать мочу в посуду из темного стекла, так как тиллированной воды, охлаждают до комнатной при дневном свете окисление уробилиногена температуры. Хранят при температуре 20 С.
происходит значительно быстрее. Раствор должен быть бесцветным и прозрач 2. Для расчета выделения уробилиногена за ным. 5. Хлороформ. 6. Бутиловый спирт. 7. Бума определенное время для исследования надо га индикаторная для измерения рН (в интервале брать мочу из всего собранного за это время 4,0Ч5,0).
объема и, учитывая его, провести расчеты Ход о б на р у же ни я и оце нка ре :
по формуле: з у ль т а т ов. Исследуют мочу в первые 2Ч3 ч после мочеиспускания. Смешивают в пробирке 2,5 мл реактива Эрлиха и 2,5 мл мочи. Добав ляют 5 мл насыщенного раствора ацетата нат рия и перемешивают. Измеряют рН индикатор деУ-Ч-объем мочи (в мл)^ выделенный за ной бумагой;
рН должен быть в интервале 4,0Ч 5,0. Если рН меньше 4,0, то добавляют раствор определенный промежуток времени;
-т~г- ацетата натрия до установления нужного рН.
;
ч ' 1 \flj Если окраска не развивается, результат считают коэффициент для расчета количества уроби- отрицательным. При развитии розовой или крас нногена в 1 мл мочи. ной окраски к пробе добавляют 5 мл хлороформа и встряхивают. Если окраска переходит в слой Ход ис с ле дов а ния. На фильтроваль хлороформа, а верхний слой остается бесцвет- ную бумагу, предварительно пропитанную бар ным или слегка желтоватом, то результат сле- биталацетатным буфером и высушенную, на дует считать отрицательным. Если окраска оста- носят 0,02 мл исследуемой мочи. После высыха ется в слое над хлороформом, то 6Ч8 мл из окра- ния бумагу с нанесенной пробой окрашивают шенного слоя переносят в другую пробирку, индикатором, а избыток краски отмывают рас добавляют бутиловый спирт в соотношении 1: твором уксусной кислоты в течение 5Ч7 мин.
и встряхивают. Если фазы не сразу разделяют ся, то смесь центрифугируют при переходе ок- Оце нк а ре з у ль т а т ов. Результат раски в слой бутилового спирта Ч результат оценивают визуально, сравнивая окраску в отрицательный, если же окраска остается в ис- опыте с окраской, которую дают стандартные следуемом слое, то в исследуемой моче концен- растворы альбумина, обработанные так же, как трация ПБГ превышает нормальную. и опытная проба. Метод позволяет обнаружить в Но р ма л ь ные в е л ич ины. Если кон- моче белок, содержание которого составляет центрация ПБГ в моче нормальна (до 2 мг/л), 2 мкг в пробе.
то проба отрицательная: ПБГ данным методом Но р ма л ь н ые в е л и ч и н ы. В норме бе обнаруживают при концентрации выше 6 мг/л.
лок в моче не обнаруживают.
Пр и ме ч а н и е. При хранении мочи более Проба на гипераминоацидурню. Прин 3 ч при, комнатной температуре положитель- цип. Аминокислоты при нагревании с нингид ная реакция может стать отрицательной. Это рином образуют соединения, Окрашенные в сине можно объяснить превращением порфобили- фиолетовый цвет.
ногена в порфирин и образованием ингиби- Реактивы. 1. Нингидрии. 2. Ацетон. 3. Уксус торов реакции. Если нет возможности иссле- ная кислота (ледяная). 4. Раствор нингидрина:
довать мочу в первые 2 ч, то хранить ее надо 5 г нингидрина на 1 л смеси. К 0,5 г нингидрина в холодильнике при 4 С, доведя рН мочи до прибавляют 95 мл ацетона, 1 мл ледяной уксус 6,0Ч7,0, так как в этих условиях порфобили- ной кислоты и 4 мл дистиллированной воды.
ноген стабилен длительное время. 5. Гликолол (глицин). 6. Раствор глицина:
Лит е ра т у ра. Идельсон Л. И. Наруше- 150 мг глицина растворяют в 100 мл дистиллиро ние порфиринового обмена в клинике.Ч Л.: ванной воды;
1 мл раствора содержит 1,5 мг Медицина, 1968;
Пименова Л. М, В кн.: Унифи- глицина, что соответствует 0,28 мг аминоазота.
кация лабораторных методов исследования. Из данного раствора глицина готовят серию Вып. VIII.Ч М., 1978;
Henry R. I., Cannon D. С., разведений: 1;
3, 6;
9;
\18;
24;
36;
54 мл рас Winkelman ]. Clinical chemistry. Principles and твора глицина доводят до 100 мл водой. Приго technics.Ч New York, 1974, p. 1251Ч1263;
Pie- товленные растворы соответствуют 0,28;
0,84;
rack C. A.,, Cardinal R., Bossenmaier 1., Wat- 1,68;
2,52;
5,04;
6,72;
10.08;
16,12 мг аминоазота son C. J. Clin. Chem., 1977, vol. 23, p. 1666. в 100 мл. Растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 мес.
Ход и с с л е д о в а н и я. На фильтроваль 2.1.3. Скрининг-тесты для выявления ную бумагу наносят 0,02 мл мочи и после подсу наследственных или приобретенных шивания окрашивают раствором нингидрина, нарушений обмена веществ у детей затем высушивают на воздухе до полного исчез новения запаха уксусной кислоты и помещают Приведенные ниже тесты унифицированы в сушильный шкаф при температуре 60 "С на 15 мин.
в 1979 г.
Оце нка р е з у л ь т а т о в. Окраску опы Исследуют утреннюю порцию мочи.
ОБНАРУЖЕНИЕ БЕЛКА. Проба с бромфе- та сравнивают с окраской стандартных раство ноловым синим. Пр инцип. Изменение ок- ров глицина, обработанных так же, как образец мочи, для чего берут по 0,02 мл каждого раство раски индикатЪра в присутствии белка.
ра. Результаты выражают в миллиграммах аминоазота, выделенного с мочой за сутки, Реактивы. 1, 5,5-Диэтилбарбитуровой кислоты натриевая соль (мединал). 2. Натрия Но р м а л ь н ые в е л и ч и н ы. Выделение ацетат (NaOOCCH3-3H2O). 3. НС1 0,1 моль/л. аминоазота за сутки у детей не превышает IЧ 4. Варбитал-ацетатный буфер рН 8,6: 8,6 г меди- 2 мг/кг. В ночное время выделяется 2/зЧ3/< су нала и 6,48 г ацетата натрия растворяют в 100 мл точного количества аминоазота.
воды;
добавляют 60 мл НС1 и доводят до 1 л Кл и н и ч е с к о е з на ч е ние. Гиперами водой. 5. БромфеноЛовый синий водораствори- ноацидурия возникает при наследственной мый. 6. Цийка сульфат (ZnSO, Х 7Н2О). 7. (синдром Дебре Ч де Тони Ч Фанкони) и при Раствор индикатора: 0,5 г бромфенолового обретенной (гломерулонефрит) патологии в синего и 50 г сульфата цинка растворяют в 1 л почках, а также при некоторых заболеваниях воды. 8. Уксусная кислота: к 1 мл концентриро- печени. Для выяснения причины гиперамино ацидурии необходимо определение концентра ванной уксусной кислоты добавляют 99 мл воды.
9. Раствор альбумина: 10 г альбумина ции аминокислот в крови и' моче и вы растворяют в 1 л изотонического раствора хло- числение их клиренса.
рида натрия (9 г/л). Рабочие растворы альбу- Обнаружение цистина и гомоцистииа.
мина готовят путем разведения основного рас- Пр и н ц и п. Азид натрия и йод образуют твора в 2;
4;
8 и 16 раз водой. 10. Натр едкий комплекс бурого цвета, который обесцвечивает 0,02 моль/л. ся в присутствии цистина и гомоцистина.
Реактивы. I. Натрия азид. 2. Йод кри- Клинич е с ко е з начение. Пролин сталлический. 3. Раствор йода: 12,69 г кристал- урия возможна при патологии почек и как сим лического йода отвешивают в бюксе, растворя- птом наследственногс) нарушения обмена.
Обнаружение мтокнслот (проба с треххло ют в насыщенном растворе йодида калия (37 г ристым железом). П р.и и ц.и п, Треххлористое KI в 26 мл дистиллированной воды), переносят в колбу и доливают дистиллированной водой до железо в присутствии HCI дает с кетокислотами 1 л. Можно использовать фиксанал йода 0,1 н. специфически окрашенные соединения.
4. Этиловый спирт 96 %, 5. Раствор азида Ре а кт ивы. 1. Железо треххлористое натрия: 1,5 г азида натрия растворяют (FеСl -6Н О), 10 % раствор. 2. HCI, 10% рас 3 в 50 мл раствора йода и доводят объем этиловым твор. 3. Аммиак водный концентрированный.
спиртом до 100 мл. Раствор хранят в посуде тем- 4. Магния хлорид (MgCl -6H O): к 11 г хлорида 2 ного стекла в холодильнике. магния прибавляют 20 мл концентрированного Ход ис с ле дов а ния. Каплю мочи на- водного аммиака и объем доводят водой до 1 л.
носят на фильтровальную бумагу и после вы- Ход о б на р у же ния. Вариант 1: к 0,5мл сушивания добавляют 1 каплю раствора азида мочи добавляют 0,25 мл раствора треххлористо натрия. В течение 5 мин наблюдают за исчезно- го железа, при положительной реакции появля вением бурой окраски. ется темно-зеленый осадок. Вариант П: для свя-, Оце нка ре з у ль т а т ов. По времени зывания фосфатов, мешающих реакции, к 4мл исчезновения окраски судят о наличии амино- мочи прибавляют 1 мл раствора хлорида маг кислот в исследуемой моче. Для полуколичест- ния, перемешивают и через 5 мин фильтруют, венной оценки результатов окраску пробы К фильтрату добавляют по 2 капли раствора можно сравнивать с цветной шкалой, для полу- соляной кислоты и раствора треххлористого чения которой готовят раствор цистина и гомо- железа;
5 мин наблюдают развитие окраски.
цистина, содержащий 0,6 мг каждой амино- Оце нка ре з у ль т а т ов. О наличии ке кислоты в 1 мл. Из этого раствора готовят токислот судят по характеру окраски, но окраска растворы с содержанием аминокислот от 0,6 до может развиваться и за счет других соединений 0,3 мг/мл. Нижняя граница чувствительности (табл. 19).
пробы 0,3 мг/мл.
Но р ма л ь ные в е л ич ины. Бурая окраска исчезает через 2Ч3 мин после добавле ния азида натрия.
Пр име ч а ние. Ложноположительную реакцию дают ангидрид аргииинянтарной кис лоты, ацетон, некоторые лекарственные пре параты.
Кл и н и ч е с к о е з на ч е ние. Тест поло жителен при наследственной или приобретенной цистинурии или гомоцистинурии, в этом случае окраска остается более 5 мин.
Обнаружение пролииа и других аминокислот.
Пр и н ц и п. Изатин образует с некоторыми аминокислотами специфически окрашенные соединения.
Ре а кт ив ы. 1. Изатин. 2. Ацетон. 3. Рас твор изатина в ацетоне 0,2 г/л. Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 С. 4. Соляная кислота 1 моль/л.
Ход о б на р у же ния. Фильтровальную бумагу пропитывают раствором изатина в аце тоне и высушивают. Затем наносят на нее 1 кап лю мочи и высушивают при 100 С в течение 10 мин, смачивают раствором соляной кислоты и промывают водой.
Оце нка ре з у ль т а т ов. Сине-серую окраску дает повышенное содержание фенила ланина, коричневую Ч триптофан, пурпурнуюЧ смесь различных аминокислот, а появление си ней окраски в виде ободка свидетельствует о присутствии в моче свободного пролина (не менее 0,1 мг/мл). Можно сравнивать интенсивность окраски с цветной шкалой. Для приготовления стандартных растворов, содержащих от 0,1 до 0,5 мг/мл соответствующих аминокислот, ис пользуют растворы аминокислот с исходной концентрацией 0,5 мг соответствующей амино кислоты в 1 мл раствора.
Обнаружение кетокислот по реакции с 2,4- Обнаружение фруктозы (проба Селиванова) динитрофенилгидразином. Принцип. Кето- Принцип. При нагревании фруктозы срезор кнслоты образуют с 2,4-динитрофенилгидрази цином в кислой среде образуются соединения, ном окрашенные гидразоны. окрашенные в красный цвет.
Реактивы. 1. HCI, 2 моль/л. 2. 2,4-Ди- Реактивы. 1. НС1, 1 моль/л. 2. Резорцин:
нитрофенилгидразин (2,4-ДНФГ): 2 г 2,4- 5 г в 1 л, 1 моль/л раствора НС1.
ДНФГ растворяют в 1 л 2 моль/л HCI. 3. Диэти- Ход об н а р у же н ия. К 2 мл мочи при ловый эфир. 4. Натрия карбонат (NO CO ), ливают 1 мл раствора резорцина н нагревают 2 100 г/л. до закипания.
Ход обна ру же ния. Смешивают 1 мл Оце нка ре з ульт ат а. При положи раствора 2,4-ДНФГ и 0,25 мл мочи. Через 10 мин тельной пробе развивается интенсивное красное прибавляют 1,25 мл днэтилового эфира и пере- окрашивание. В норме окраска не появляется.
мешивают, эфирный слой отсасывают и перено- Пр и ме ч а н и е. Оценку пробы проводят е сят в пробирку, куда добавляют равный объем момент закипания, так как при длительном кипе раствора натрия карбоната. Содержимое про- нии окраска может развиться при наличии глю бирки перемешивают. козы. Пищевая нагрузка медом и фруктами Оценка результатов. При положи- может дать положительную пробу.
тельной пробе развивается окраска от желтой Обнаружение лактозы и 'мальтозы (пробе до оранжево-коричневой. В норме проба отрица- Велька). При н ц и п. Лактоза и мальтоза в тельная, окраска не развивается. щелочной среде при нагревании с аммиаком Обнаружение гомогентизиновой кислоты.
образуют окрашенные соединения.
Принцип. В щелочной среде гомогентизино- Р е а к т и в ы. 1. Аммиак водный концентри вая кислота окисляется с образованием соеди- рованный. 2. Кали едкое, 200 г/л раствора.
нений сине-фиолетового цвета. Ход о б н а р у ж е я и я. К 5 мл мочи при Реактив: едкий натр, 100 г/л.
ливают 2,5 мл аммиака и 0,2 мл раствора едкого Ход о б на р у же ния. К 0,5 мл мочи при- кали. Нагревают на водяной бане 30 мни при бавляют 3Ч4 капли раствора едкого натра, ре- 60 С.
зультат оценивают через 1Ч2 мин.
Оце нк а рез у л ь т а т о в. При положи Оценка рез ульт ат ов. При положи- тельной реакции на лактозу появляется корич тельной реакции развивается сине-фиолетовое невая окраска, а при наличии Мальтозы Ч окрашивание, при отрицательной Ч окраска не красная окраска. В норме окраска не развивает возникает.
ся.
Кл инич е с ко е з наче ние. Кетокисло- Обнаружение пентоз (проба Биаля). П р и н ты в большом количестве выделяются с мочой ц и п. Пентозы с орцином и треххлористым же при нарушении различных обменных процессов, лезом при нагревании в кислой среде образуют в частности цикла Кребса;
производные фено- окрашенные соединения.
тиазида или салицилата Ч при отравлениях Реактивы. 1. 5-Метнлрезорцим (ориин) ими, 3-окснантраннловая кислота Ч при нару- 2. HCI концентрированная. 3. Железо треххло шениях обмена триптофана. ристое (FеС1 -6Н О), 100 г/л раствора. 4. Реак 3 Обнаружение инднкана. Принцип. Пре- тив Биаля: 1 г орцина растворяют в 500 мл НСl вращение индикана в индоксил после гидролиза кислоты и добавляют 1 мл раствора треххлоряс эфирной связи сильной минеральной кислотой и того железа.
последующее окисление индоксила треххлорис- Ход о б н а р у же н и я. Нагревают 1 мл тым железом с образованием окрашенного со- мочи до кипения с 5 мл реактива Биаля.
единения.
Оце нк а рез у ль та тов. При положи Реактивы. 1. Свинца ацетат (СНзСОО) РЬХ тельной пробе появляется яркая желто-зелена?
X ЗН О), 100 г/л раствора. 2. HCI концентриро- окраска. В норме проба отрицательная.
ванная. 3. Железо треххлористое (FеСl Х 6Н О).
Кл и н и ч е с к о е з на ч е ние. Обнаруже 3 4. Реактив Обермейра: 0,4 г треххлористого же- ние глюкозы, фруктозы, пёнтозы, лактозы и леза растворяют в 100 мл концентрированной мальтозы в моче может быть результатом врож НС1. 5. Хлороформ. 6. Натрия тиосульфат денных ферментопатий, а лактоза и мальтоза (Na S O X5H O), 200 г/л раствора. могут быть обнаружены при нарушении их 2 2 3 Ход обна ру же ния. К4 мл мочи при- гидролиза в тонкой кишке.
бавляют 0,4 мл раствора ацетата свинца для Обнаружение гликозоаннномаканов {проба осаждения желчных пигментов, солей и других с цетилтриметнламмония бромидом), П р и н веществ, мешающих реакции. Фильтруют, I Ч ц и п. Цетилтриметнламмония бромид (ЦТАБ ) 2 мл фильтрата смешивают с равным объемом с гликозаминогликанами образует в кислой сре реактива Обермейра, прибавляют 0,5Ч1 мл хло- де белый осадок.
роформа и осторожно перемешивают. Реакт ивы. 1. Лимонная кислота. 2.Едкий Если слой хлороформа окрашивается в си- натр. 3. Цитратный буфер, 1 ммоль/д, рН 5,7: в ний или красный цвет, его отсасывают и небольшом количестве воды растворяют 210 г добавляют к нему 2Ч3 капли тиосульфа- лимонной кислоты, добавляют 120 г едкого та натрия. натра, растворяют, охлаждают и доливают Оценка ре з у ль т а т ов. При положи- водой до 1 л. 4. Раствор ЦТАБ, 25 г.в 1л цитрат тельной реакции окраска хлороформа не исче- ного буфера.
зает после добавления тиосульфата натрия. В Ход обна ру же ния. К 5 мл мочи при норме реакция отрицательная. ливают 1 мл раствора ЦТАБ и в течение 30 мин наблюдают образование осадка. Пробу прово- пипеткой с тонко оттянутым концом иа середину дят при комнатной температуре, для исследова- предметного стекла и покрывают покровным- На ния берут свежевыпущенную мочу. до стараться перенести осадок с минимальным Оце нка результатов. Проба счита- количеством жидкости, чтобы покровное стекло ется положительной при образовании осадка. покрывало его полностью. Большая капля рас В норме проба отрицательная. плывается, колеблется, препарат становится многослойным и 'это затрудняет микроскопиче Примечание. Следует учитывать, чтр ские исследования. Изучение препарата начина проба дает 40 % ложноположительных ре ют с малого увеличения (8X10) для общего зультатов.
обзора, а более детальное изучение препарата Определение кальция (проба Сулковича). с количественной оценкой структур производят Принцип. Ионы кальция со щавелевой при большом увеличении (10X40). Еслн струк кислотой образуют нерастворимую щавелево- туры встречаются в каждом поле зрения, то кислую соль. количественную оценку выражают их чис Реактивы. 1. Щавелевая кислота. 2. Ам- лом в поле зрения, при небольшом количестве мония оксалат. 3. Уксусная кислота ледяная.
структур, когда их встречают далеко не в каж 4. Реактив Сулковича: в 50 мл дистиллирован- дом поле зрения,Ч числом в препарате.
ной водь) растворяют по 2,5 г щавелевой кисло- Различают организованный и неорганизо ты и оксалата аммония, добавляют 5 мл ледяной ванный осадок.
уксусной кислоты и доводят объем раствора до ОРГАНИЗОВАННЫЙ ОСАДОК. Эритроци 150 мл.
ты имеют дискообразную форму, окрашены в :
Ход ис с ле дова ния. Смешивают по характерный желто-зеленый цвет. Включения в 0,5 мл мочи и реактива Сулковича. Через 1Ч цитоплазме отсутствуют. В концентрированной 2 мин оценивают степень помутнения.
моче кислой реакции эритроциты могут приобре Оценка результатов. Степень по- тать звездчатую форму. При длительном пре мутнения оценивают визуально: 0Ч отсутствие бывании эритроцитов в моче низкой относитель помутнения;
1Ч слабое помутнение;
2Ч умерен- ной плотности они теряют гемоглобин и имеют ное помутнение;
3Ч значительное помутнение;
вид одноконтурных или двухконтурных колец.
4Ч резко выраженное помутнение. О повышен- Деление эритроцитов иа измененные и неизме ном содержании кальция в моче свидетельству- ненные не имеет первостепенного значения для ют 3-я и 4-я степени помутнения.
решения вопроса об источнике гематурии.
Кл иниче с кое з начение. Высокое Дифференцировать эритроциты надо of содержание кальция в моче может быть при дрожжевых грибов и кристаллов оксаЛатов гипервитаминозе D и гиперпаратиреозе.
округлой формы. Грибы в отличие от эритроци После выявления положительных результа- тов чаще овальной формы, более резко прелом тов описанных выше тестов больной ребенок ляют свет, имеют голубоватый оттенок и почку нуждается в тщательном обследовании с по- ются. Оксалаты обычно имеют различную вели мощью точных количественных методов (амино- чину и резко преломляют свет. Прибавление к кислотный анализатор, высоковольтный препарату осадка капли 5 % уксусной кислоты электрофорез с последующей хроматографией приводит к гемолизу эритроцитов, оставляя кислот на бумаге, исследование гормонального грибы и оксалаты без изменения.
профиля и др.) в специализированных учрежде- Но р ма л ь н а я в е л ич ина. В норме ниях.
эритроциты либо не встречаются, либо обнару живаются единичные в препарате.
Лит е ра т у ра. Ранее Л., Тодоров И., Ста Кл и н и ч е с к о е з на ч е ние. Гематурия тева С. Обмен веществ в детском возрасте.Ч может быть при поражении паренхимы' почки София, 1967;
Файбель Г. Капельный анализ ор (гломерулонефрит, пиелонефрит, опухоли и др:), ганических веществ.Ч М., 1962;
Файбель Г.
при тяжелой физической нагрузке и при пора Капельный анализ неорганических веществ.Ч жениях мочевыводящих путей (почечных лоха МД 1974.
нок, мочеточников, мочевого пузыря, уретры).
Лейкоциты в моче имеют вид небольших зер 2.1.4. Микроскопия осадка мочи нистых клеток округлой формы! При низкой относительной плотности мочи размер их увели Микроскопия натнвного препарата. Прин- чивается и в некоторых из них (лактивных) можно наблюдать броуновское движение гранул.
цип. Микроскопическое исследование нативных При бактериуриях в щелочной моче лейкоциты препаратов мочевого осадка, полученного при центрифугировании мочи. довольно быстро разрушаются. Лейкоциты в мо Оборудование. 1. Центрифуга. 2, Мик- че главным образом представлены нейтрофила роскоп. 3. Центрифужные пробирки, 4. Предмет- ми, но иногда можно обнаружить лимфоциты ные и покровные стекла. и эозинофилы, которые отличаются обильной, равномерной, крупной, преломляющей свет зер Ход ис с ле дова ния. Приготовление препаратов: в центрифужную пробирку поме- нистостью. Ак т и в н ые лейкоциты, щают 10 мл из утренней порции мочи после так называемые клетки Штернгеймера Ч Маль тщательного ее перемешивания. Центрифуги- бина (Ш.Ч М.), можно выявить следующим об руют 5 мин при 2000 об/мин. Затем быстрым разом.
наклоном пробирки сливают прозрачный верх- I. Ре а кт ив Штернгеймера Ч Мальбйиа, ний слой, а оставшийся осадок переносят Раствор I: 3 г генциаиового фиолетового, 20 мл этилового спирта, 0,8 г оксалата аммония, ше лейкоцита), слегка желтоватого цвета. В 80 мл дистиллированной воды. Раствор II: 0,25 г цитоплазме клеток обычно выражены дегенера сафранина, 10 мл этилового спирта, 100 мл дис- тивные изменения: зернистость, вакуолизация, тиллированной воды. Рабочий раствор: 3 части жировая инфильтрация. В результате этих раствора 1+97 частей раствора II. Сохраняется изменений ядра часто не выявляются. Клетки в течение 3 мес. почечного эпителия относятся к кубическому и Ход определения. Центрифугируют призматическому эпителию, выстилающему по свежую утреннюю мочу. К осадку прибавляют чечные канальцы. Чаще они располагаются в 1Ч2 капли реактива, размешивают, каплю берут виде групп, цепочек. В некоторых случаях встре на стекло, покрывают покровным и микроскопи- чаются в виде комплексов округлой или фестон руют. При этом различают два вида лейкоцитов: чатой формы, состоящих из большого количест одни имеют ядра пурпурно-красного цвета и ва клеток разной величины с явлениями жирово бесцветную или бледно-розовую цитоплазму, го перерождения.
другие бледно-синее, иногда бледно-фиолетовое Но р ма л ь н ые в е л ич ины. В мочевом ядро и почти бесцветную цитоплазму. Бледно- осадке практически всегда встречают клетки синие клетки называются клетками Ш.Ч М., плоского и переходного эпителия от единичных в в цитоплазме некоторых из них замет- препарате до единичных в поле зрения. Единич но активное движение гранул. ные В препарате клетки почечного эпителия на II. Реактив: 1) 250 мг эозина;
2) 10 мл фоне нормальной микроскопической картины глицерина, 3) 2 мл 1% фенола;
4) 0,5 мл 40 % мочевого осадка не дают основания говорить формалина, 5) 87,5 мл дистиллированной воды. о патологии.
Ход определения такой же, как пре- Клиниче с кое значение. Особого дыдущий. Клетки Ш.Ч М. не окрашиваются или диагностического значения клетки плоского имеют бледно-голубой цвет. Ядра всех осталь- эпителия, попадающие в мочу из влагалища, ных лейкоцитов красятся в розовый цвет. наружных половых органов и мочеиспускатель III. Р е а к т и в: I) 30 мл насыщенного рас- ного канала, не имеют, но если их обнаруживают твора метиленового синего в, абсолютном алко- расположенными пластами в моче, взятой кате голе;
2) 1,6 мл 1 % раствора КОН;
3) 110 мл би- тером, то это может указывать на метаплазию дистиллнрованной воды. слизистой оболочки мочевого пузыря. Такую Ход опре де ле ния. Каплю реактива картину можно наблюдать при лейкоплакии наносят на предметное стекло рядом с каплей мочевого пузыря и мочеточников, что рассматри мочевого осадка. Смешивают и микроскопируют вают как предопухолевое состояние.
в первые 5Ч10 мин. Клетки Ш.Ч М. бесцвет- Переходный эпителий выстилает слизистую ные, ядра остальных лейкоцитов синего цвета. оболочку мочевого пузыря, мочеточников, почеч Но р ма л ь ные в е л ич ины. В норме в ных лоханок, крупных протоков предстательной мочевом осадке у мужчин от 0 до 3 лейкоцитов железы и простатического отдела мочеиспуска в поле зрения, у женщин Ч от 0 до 5 лейкоцитов тельного канала. Усиленная эксфолиация клеток в поле зрения. этого эпителия может быть при острых воспали Клиническое значение. Увеличе- тельных процессах мочевого пузыря и лоханок, ние числа лейкоцитов в мочевом осадке свиде- интоксикациях, а также при мочекаменной бо тельствует о воспалительных процессах в почках лезни и новообразованиях мочевыводящих или мочевыводящих путях. Наличие в моче лак- путей. Клетки почечного эпителия можно вы тивных лейкоцитов свидетельствует об интен- явить в мочевом осадке при поражении парен сивности воспалительного процесса независимо химы почек (нефритах), интоксикациях, рас oт его локализации. стройствах кровообращения.
Эпителиальные клетки. Эпителиальные клет- Обнаружение клеток почечного эпителия в ки в мочевом осадке имеют различное происхож- тесной связи с цилиндрами говорит о тяжелом дение, т. е. десквамация их происходит с орга- поражении почек.
Цилиндры Ч элементы осадка. Представля нов, покрытых различными видами эпителия (многослойного плоского, переходного и куби- ют собой белковые или клеточные образования канальцевого происхождения, имеющие цилинд ческого призматического).
рическую форму и различную величину. В моче Клетки плоского эпителия полигональной или округлой формы, больших размеров, бес- вом осадке различают следующие виды цилинд ров: гиалиновые, зернистые, весковидные, эпите цветные, с небольшим ядром, располагаются в виде отдельных экземпляров или пластами. лиальные, эрнтроцитарные, пигментные, лейкоцитарные.
Клетки переходного эпителия различной формы (полигональные, "хвостатые, цилиндри- Гиалиновые цилиндры имеют нежные конту ческие, округлые) и величины, имеют желтова- ры, прозрачны, при ярком освещении плохо заметны. На поверхности может быть легкая тую окраску, интенсивность которой зависит от концентрации мочи и наличия пигментов, содер- зернистость за счет аморфных солей или клеточ ного детрита. Образуются \из свернувшегося жат довольно крупное ядро. Среди клеток можно встретить двуядерные. Иногда в клетках наблю- белка. Появление гиалиновых цилиндров сви детельствует о развитии протеинурин, что явля дают дегенеративные изменения в виде грубой ется следствием повышенной проницаемости зернистости и вакуолизации цитоплазмы.
клубочковых капилляров. Они представляют со Клетки почечного эпителия неправильной круглой формы, угловатые или четырехуголь- бой коллоидную форму белка, возникающую при ные, небольших размеров (в 1 1/2Ч2 раза боль- изменении рН.
Зернистые цилиндры имеют более резкие разом: в 10 ч вечера больной освобождает моче контуры и состоят из плотной зернистой массы вой пузырь, мочу выливают, идо 8 ч утра моче желтоватого цвета. испускания не должно быть (интервал времени Восковидные цилиндры имеют резко очер- 10ч);
всю мочу, полученную в 8 ч утра, посыла ченные контуры и гомогенную с блеском, слегка ют в лабораторию для исследования. При желтоватую структуру. Образуются из уплот- никтурни такой вариант сбора мочи не подходит.
ненных гиалиновых и зернистых цилиндров при Ход ис с ле дова ния. Собранную мочу задержке их в канальцах.
тщательно перемешивают н измеряют ее объем.
Эпителиальные цилиндры имеют четкие кон- Для исследования получают осадок из коли туры и состоят из клеток почечного эпителия. чества мочи, выделенной за 12 мин ('/ ч), кото Эритроцитарные цилиндры желтоватого цве- рое рассчитывают по формуле:
та состоят из массы эритроцитов, образуются при почечной гематурии.
(1) Пигментные цилиндры могут быть обнаруже ны при гемоглобинурии и миоглобинурии;
корич где Q Ч объем мочи, выделенной за 12 мин невого цвета, имеют сходство с зернистыми..
(мл);
V Ч объем мочи, собранной за время Лейкоцитарные цилиндры. образуются из исследования (мл);
t Ч время сбора мочи (ча масссы лейкоцитов, обнаруживаются при гной сы);
5Ч коэффициент пересчета за 1/5 ч.
ных процессах в почках, пиелонефритах.
Рассчитанное количество мочи центрифуги Кроме цилиндров, образованных из белка и руют в мерной центрифужной пробирке при клеток, в мочевом осадке иногда встречаются 3500 об/мин в течение 3 мин или при 2000 об/мин образования цилиндрической формы из аморф в течение 5 мин, отделяют верхний слой, остав ных солей, не имеющие практического значения.
ляя 0,5 мл мочи с осадком. Если осадок превы Эти образования растворяются при подогрева шает 0,5 мл, то оставляют 1 мл мочи. Осадок нии препарата или прибавлении к препарату тщательно перемешивают и запол капли щелочи либо кислоты.
няют счетную камеру. Подсчитывают раздельно Но р ма л ь ные в е л ичины. В нормаль количество лейкоцитов, эритроцитов, цилиндров ной моче можно встретить единичные гиалино (эпителиальные клетки не считают) и рассчиты вые цилиндры (1Ч2 в препарате).
вают содержание форменных элементов в 1 мкл Кл инич е с к о е з на че ние. Цилиндру осадка мочи.
рия является симптомом поражения паренхимы Расчет. Если подсчет проводят в камере почки;
хотя и считают, что вид цилиндров особо Горяева, объем которой равен 0,9 мкл, то коли го диагностического значения не имеет, гиали чество форменных элементов в 1 мкл определяют новые цилиндры подтверждают реальную про по формуле:
теинурию, а лейкоцитарные и эрнтроцитарные дают возможность предположить источник лей (2) коцнтурии и гематурии.
Унифицированное определение числа фор менных элементов в суточном объеме мочи по где X Ч число форменных элементов в 1 мкл;
методу Каковского Ч Аддиса (1979). Прин А Ч число форменных элементов, подсчитанных цип. Подсчет числа форменных элементов во всей камере;
0,9 Ч объем камеры (мкл).
(эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) в суточ Для камеры ФуксаЧРозенталя, объем ко ном объеме мочи с помощью счетной камеры.
торой 3,2 мкл:
Спе циа л ь но е обору дова ние. 1.
Микроскоп. 2. Счетная камера.
(3) Со б ир а ние мочи. Классический вари ант исследования требует строго соблюдать пра вила хранения мочи на протяжении длительного периода. Мочу собирают в течение суток: утром Количество форменных элементов, выделен больной освобождает мочевой пузырь, а затем в ных с мочой за сутки, рассчитывают по фор течение 24 ч собирает мочу в сосуд с несколькими муле:
каплями (4Ч5) формалина или 2Ч3 кристал лами тимола, желательно хранить мочу в холо (4) дильнике.
Во избежание получения заниженных дан- если для исследования взять 0,5 мл (500 мкл) ных, обусловленных распадом форменных из 12-минутной порции мочи, или:
элементов в нейтральной (щелочной) моче или при низкой ее плотности, надо назначать боль В=Х-1000-5-24=Х-120000, (5) ному в течение суток, предшествовавших иссле дованию, мясную пищу с ограничением жидкос- если осадок был обильным и был оставлен 1 мл ти, чтобы получить мочу кислой (1000 мкл), где В Ч число форменных элемен реакции и более высокой концентрации. Если нет тов, выделенных за сутки;
X Ч число формен возможности собрать мочу с учетом описанных ных элементов в 1 мкл мочи, оставленной для условий, то можно собирать мочу 10Ч12 ч. В исследования с осадком;
500 или 1000 Ч коли этом случае точность результата страдает, но чество мочи (мкл), оставленной с осадком из собрать мочу легче. Собирают мочу за ноч- 12-минутной порции мочи. Умножение на 5 и ное время н организуют это следующим об- 24 дает расчет количества клеток за 24 ч.
Нормальные в е л ич ины суточной после перемешивания заполняют камеру. Произ экскреции форменных элементов с мочой: водят подсчет клеток в 1 мкл осадка мочи по до 2- 106 лейкоцитов, до 1 Х 106 эритроцитов н формуле (2) или (3). Расчет числа форменных 2-104 цилиндров. элементов, выделенных за Iмин, проводят по формуле Приме ча ние. Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер с сеткой Горяева или одну камеру Фукса Ч где Н Ч число клеток.в минутном объеме мбчи;
Розенталя.
к Ч число клеток в 1 мкл, осадка;
VЧ объем Унифицированное определение количества мочи за 3 ч;
S Ч количество мочи, взятое для форменных элементов в 1 мл мочи методом центрифугирования;
tЧ время, за которое Нечипоренко (1979). Принцип. Определение собрали мочу, в минутах.
количества форменных элементов (эритроцитов, Норма льные величины. За 1 мин с лейкоцитов, цилиндров) в 1 мл мочи с помощью мочой выделяется до 2000 лейкоцитов и;
до счетной камеры. 1000 эритроцитов.
Специальное оборудование то Клиниче с кое значение. Приведен же. ные методы количественного исследования Ход опре де ле ния. Берут одноразовую элементов мочевого осадка могут быть исполь порцию ночи (желательно утреннюю) в середи- зованы для распознавания скрытой (не обнару не, мочеиспускания, определяют рН (в моче со живаемой при ориентировочной микроскопии щелочной реакцией может быть частичный рас- осадка) лейкоцитурии, для выяснения вопроса пад клеточных элементов);
5Ч10 мл мочи цент- о преобладании лейкоцитурии или гематурии и рифугируют при 3500 об/мин в течение 3 мин, оценки их степени, для динамичес отделяют верхний слой, оставляя вместе с осад- кого наблюдения за этими симптомами в теченре ком 0,5 мл (500 мкл) мочи терапии. В практике отечественных лечебных уч при небольшом осадке или 1 мл (1000 мкл) Ч реждений наибольшее распространение Получил при большом. Хорошо перемешивают осадок и метод, разработанный А. 3. Нечнпоренко.
заполняют счетную камеру. Подсчитывают от- При отрицательных результатах количест дельно лейкоциты, эритроциты и цилиндры во венного исследования лейкоцитурии у пациен ;
всей сетке камеры.
тов с подозрением на латентно текущий хрони Расчет. Рассчитывают количество клеток ческий пиелонефрит повторный подсчет лейко в 1 мкл осадка мочи по формуле (2) или (3). цитов следует проводить после провокационной Установив эту величину, рассчитывают число пробы;
наибольшее распространение получил форменных элементов в 1 мл мочи по формуле: преднизолоновый тест.
Преднизолоновый тест. П ри н ц и п. Введе ние гормона активирует воспалительный про (6) цесс, и количество лейкоцитов в моче возрастает.
Степень лейкоцитурии определяют по методу если оставлено 0,5 мл (500 мкл) мочи с осад- Нечипоренко до и после внутривенного введения ком, или: преднизалона.
Спе циа ль ное оборудованиe тo же.
(7) Ход ис с ле дов а ния. Утром бопьной если оставлен 1 мл (1000 мкл) мочи с осадком, опорожняет мочевой пузырь. Мочу выливают.
где N Ч число форменных элементов в 1 мл Через час собирают мочу (контрольная порция), мочи;
х Ч число форменных элементов в 1 мкл после чего внутривенно вводят 30 мг преднизо мочи, оставленной вместе с осадком;
500 (или лона в 10 мл изотонического раствора натрия 1000) Ч объем мочи (мкл), оставленной вместе хлорида. После вливания с интервалами 1ч с осадком;
V Ч количество мочи, взятой для собирают 3 порции мочи, подлежащие, как и центрифугирования. контрольная порция, исследованию по Нечипо Но р ма л ь ные в е л ич ины. В I мл ренко;
следовательно, собирая мочу, берут яри мочи выделяется до 2000 лейкоцитов и до мочеиспускании: только среднюю порцию. Еще эритроцитов;
цилиндры отсутствуют или обнару- раз исследуют мочу через 24 ч после вли живаются в количестве не более одного на каме- вания преднизолона.
ру Фукса Ч Розенталя или на 4 камеры Горяева Оценка рез ультатов. Тест расцени (до 20 в 1 мл). вают как положительный, если-хоть в одной из Определение количества форменных элемен- порций мочи количество лейкоцитов увеличива те, экскретируемых с мочой за 1 мин, по мето- ется по сравнению с исходным в 2 раза и при ду Амбурже. Пр инцип. Определение коли- этом выявляют активные лейкоциты.
чества форменных элементов, выделенных с Экспресс-метод определения скрытой лейко мочой за 1 мин, с помощью счетной камеры. цнтурии (метод Gadeholt). П.р и н ц и п. При Специальное оборудование то проведении пероксидазной реакции цитоплазма же. лейкоцита приобретает голубую или синюю Ход опре д е ле ния. Мочу собирают 3 ч окраску.
(180 мин). Перемешивают и 10 мл центрифуги- Реактив. Краситель: 300 мг диамиио руют в течение 5 мин при 2000 об/мин. Надоса- флуорена и 130 мг флюксина В растворяют в дочную жидкость отсасывают, оставляя I мл, и 70 мл 95 % этанола. К этой смеси добавляют 1 1 г ацетата натрия (CH3COONa - ЗН2О), раство- методами, используемыми для ее количественно го определения.
ренного в 20 мл 0,5 % уксусной кислоты, и 1 мл 3 % перекиси водорода. Через 48 ч реактив Лит е ра т у ра : Каковский А. О. К методи фильтруют и он годен к употреблению. Хранить ке счисления организованных элементов в темной, химически чистой посуде и периоди мочи.Ч Русский врач, 1910, 9, 41, 1444;
К. Поз чески фильтровать.
нер. Диагностическое и прогностическое зна Ход о пр е д е л е ния. 10 мл свежевыпу чение мочевых осадков. М., 1928;
Пытель А. Я., щенной мочи фильтруют через фильтровальную Рябинский В. С., Родоман В. Е. Новые методы бумагу, после чего на бумагу наносят 3 капли выявления пиурии при пиелонефрите.Ч М.: Ме красителя. При содержании в 1 мкл мочи более дицина, 1968, с. 56Ч62;
Нечипоренко А. 3.
10 лейкоцитов на месте нанесения краски появ Определение количества лейкоцитов и эритро ляется темно-синее пятно. Проба считается от цитов в 1 мл мочи.Ч Лаб. дело, рицательной, если пятно красного цвета, и со 1969, № 2, с. 121;
Пименова Л. М,Ч В кн.: Уни мнительной, если пятно голубого цвета.
фикация лабораторных методов исследования.
Кл и н и ч е с к о е з на ч е ние. Проба Вып. VIII. М., 1978;
Addis Т. G,Ч J. clin.
проста и достаточно надежна, ответ можно invest., 1925, vol. 2, p. 409.
получить через несколько минут. Экспресс-метод выявления скрытой лейкоцнтурии имеет боль- Неорганизованный осадок представлен крис шое значение при профилактических осмотрах, таллическими образованиями (табл. 20).
особенно детей в яслях, детских садах и школах. Лит е р а т у р а. Краевский В. Я- Атлас При положительном значении этой пробы микроскопии осадков мочи.Ч М.: Медицина, лейкоцитурня выявляется и всеми другими 1976.
2.2. КАЛ 2.2.1. Подготовка больного Наибольшее распространение получили дие ты Шмидта и Певзнера.
и сбор материала Диета Шмидта является щадящей: утром Ч Результаты исследования зависят от пра- 0,5 л молока, чая или какао, белый хлеб с маслом вильной подготовки больного и от правильного и яйцо всмятку;
завтрак: 0,5 л жидкой овсяной сбора, хранения и доставки материала исследо- каши, сваренной на молоке;
обед: 125 г хорошо вания. изрубленного тощего мяса, слегка обжаренного Исследовать кал надо не позднее 8Ч12 ч пос- в масле (внутри сырого), и 200Ч250 г карто ле его выделения, а до этого его следует хра- фельного пюре;
полдник: то же, что и утром, за нить при температуре от 3 до 5 С. Собирать исключением яйца;
ужин: 0,5 л молока или кал надо в чистую сухую посуду, желательно тарелка жидкой овсяной каши, белый хлеб с стеклянную. Следует избегать примеси к ис- маслом и 1Ч2 яйца всмятку (или яичница).
пражнениям мочи, выделяемого половых орга- Общая калорийность данной диеты составляет нов и других веществ, в том числе лекарствен- 2250 ккал.
ных. Если надо знать точно количество испраж- Диета Певзнера основана на принципе мак нений, то посуду, в которую их собирают, симальной для здорового человека пищевой на следует предварительно взвесить. грузки. В пищевой рацион входит 400 г хлеба Подготовка больного. Перед копрологичес- (половина черного), 250 г мяса, жаренного кус ким исследованием надо отменить больному ком, 100 г масла, 40 г сахара, гречневая и рисо медикаменты, примеси которых мешают микро- вая каши, жареный картофель, салаты, кваше скопическому исследованию и влияют на внеш- ная капуста, компот, свежие фрукты. Калорий ний вид каловых масс, а также усиливают ность 3250 ккал.
перистальтику кишечника. К этим лекарствам Диету выбирают с учетом состояния органов относятся все слабительные, ваго- и симпатико- пищеварения.
тропные средства, каолин, бария сульфат, При пробной диете Шмидта в условиях нор препараты висмута, железа и препараты, мального пищеварения пищевые остатки в кале вводимые в ректальных свечах, приготовлен- не обнаруживаются. В кале здорового человека, ных на жировой основе. Если целью исследова- получавшего диету Певзнера, содержится боль ния является обнаружение скрытых кровотече- шое количество непереваримой клетчатки и не ний, то в предшествующие анализу 3 дня следует много мышечных волокон.
избегать пищи, содержащей пищевые продукты, Пробную диету дают в течение 4Ч5 дней, которые наравне с кровью могут быть катализа- фекальные массы исследуют на 3-й день при торами в реакциях, направленных на ее обнару- условии ежедневного самостоятельного опорож жение. К этим продуктам относятся мясо, рыба, нения кишечника. Копрологическое исследова все виды зеленых овощей. При исследовании, ние проводят при 3-й, 4-й и желательно 5-й де основной целью которого является изучение фекации. Трехкратное исследование фекалий степени усвоения пищи, целесообразно приме- дает наиболее точное представление о функцио нять диеты, содержащие точно дозированные нальном состоянии пищеварительного тракта.
определенные наборы продуктов.
2.2.2. Физические свойства Та б л иц а 21. Изменение окраски экскремен тов в зависимости от различных условий Цвет Когда наблюдается Количество выделяемых ежедневно испраж нений и при нормальных условиях колеблется в значительных пределах, что зависит от коли- Темно-корич- Нормальный кал на смешанной чества и состава пиши. При растительном пита- невый диете нии количество кала гораздо больше, чем при Черно-корич- Мясная диета пище животного происхождения. По Шмидту, невый после пробной диеты в течение суток при Светло-корич- Растительная диета нормальных условиях выделяется до 200Ч невый 250 г экскрементов. Увеличение суточного коли- Коричнево- Неизмененная кровь, пурген, чества кала (полифекалия) может быть обу- красный какао словлено нарушением всасывания, желчеотделе- Черный Измененная кровь (кровотече ния, заболеваниями желудка, поджелудочной ние в верхних отделах пищева железы и кишечника. рительного тракта), при приеме Консистенция и форма. По консистенции висмута различают плотный, или оформленный, густо- Зеленовато- При приеме железа или жидко-кашицеобразный и водянистый кал. черный При пище преимущественно животного проис- Зеленый При содержании билирубина и хождения фекальные массы имеют цилиндри- биливердина, в условиях уси ческую форму, при растительной пище в боль- ленной перистальники, при шинстве случаев выделяется густо-кашицеоб- чисто овощной диете разный кал. При стенозах или спазмах на протя- Зеленовато- При углеводном брожении жении толстой кишки плотный кал может иметь желтый форму карандаша или вид ловечьего кала. Золотисто- При содержании неизменного Жидко-кашицеобразный и водянистый кал бы- желтый билирубина (у грудных детей) вает обусловлен большим (более 80 %) содер- Оранжево- Молочная диета жанием жидкости в испражнениях и наб- светло-жел людается при ускоренной перистальтике или тый гиперсекреции в толстом кишечнике. Белый или се- При прекращении поступления Цвет. У здоровых людей (взрослых) пигмен- ровато-белый желчи в кишечник том каловых масс является стеркобилин, кото рый придает им коричневатую окраску. Однако цвет фекальных масс обусловлен не только пигментами, но и целым рядом факторов, важ- Те х ник а ис с л е д о в а ния. Лакмусо нейшим из которых является характер питания. вую бумагу, предварительно смоченную дистил На окраску испражнений влияют лекарства и лированной водой, прикладывают к нескольким патологические примеси (табл. 21). местам поверхности испражнений;
результат Запах кала зависит преимущественно от ска- учитывают спустя 2Ч3 мин, сравнивая измене тола, индола и в меньшей степени Ч от фенола, ния окраски на поверхности лакмусовой бумаги орто- и паракрезолов. Эти органические соеди- с различными оттенками контрольной шкалы.
нения ароматического ряда образуются при Если пользуются красной и синей лакмусовой распаде белков. При усилении гниения белков в бумагой, то результаты учитывают следующим кишечнике запах усиливается.
образом: при кислой реакции кала синяя бумага Меконий и стул при голодании практически краснеет, а красная не изменяет своего цвета;
запаха не имеют. Кал грудных детей, находя- при щелочной реакции красная лакмусовая бу щихся на молочном вскармливании, имеет сла- мага синеет, а синяя остается без изменения;
бокислый запах. В анализе запах кала отмечает при нейтральной реакции оба вида бумаги не ся лишь в том случае, если он очень резко отли- меняют свой цвет.
чается от обычного.
Кл и н и ч е с к о е з на че ние. В нормаль Макроскопически видимые примеси. Диаг- ных условиях кал имеет нейтральную или слабо ностическое значение имеют остатки тех пище- щелочную реакцию. Реакция кала преиму вых продуктов, которые хорошо переваривают- щественно зависит от жизнедеятельности мик ся;
остатки соединительной и мышечной ткани, робной флоры кишечника;
в результате усилен жира, т. е. все то, что с большей очевидностью ной жизнедеятельности бактерий, расщепляю выявляет микроскопическое исследование. щих белки, образуется много аммиака, при В кале можно видеть также гной, кровь, слизь, дающего среде щелочную реакцию. Продуктами конкременты и паразитов. жизнедеятельности бродильной флоры являют Определение реакции кала (рН). Прин- ся СО2 и органические кислоты, создающие цип. Лакмусовая бумага после контакта с кислую реакцию среды. Активация бродильной фекальными массами изменяет свой цвет в за- флоры связана с усилением перистальтики тол + висимости от концентрации в них Н -ионов. стой кишки, а процессы гниения усиливаются Не о б х о д имые ма т е р и а л ы. Универ- чаще ри разложении белков, выделяемых ее сальная лакмусовая бумага для измерения рН от стенкой (клетки, воспалительный экссудат). Та 1,0 до 10,0 или два вида лакмусовой бумаги (си- ким образом, основа бродильной диспепсии Ч няя и красная). чаще энтериты, а гнилостной Ч колиты.
2.2.3. Химическое исследование тана испражнениями, наносят 2Ч3 капли реак тива, в который входят кислота и перекись водо КРОВЬ. Пигменты крови, обладая перокси- рода.
дазными свойствами, расщепляют перекись во- При наличии крови на фильтровальной бума дорода и освобождают атомарный кислород, ге развивается сине-зеленое окрашивание. Опре который может окислять вещества, принима- деление крови подобным тестом не ускоряет ис ющие при этом различную окраску (бензидин, следование, но позволяет проводить его у посте амидопирин, гваяковая смола). ли больного и значительно упрощает транспор Бензидиновая проба. Ре а кт ив. 1. 1% рас- тировку испражнений при необходимости иссле твор бензидина в 50 % уксусной кислоте (при дования только крови.
хранении в посуде из темного стекла годен в те- Кл инич е с к о е з начение. Обычно чение нескольких дней с условием ежедневного кал дает отрицательные реакции на кровь. Обна контроля). 2. 3 % раствор НзСЬ. ружение крови в испражнениях имеет ценность Ход ис с ле дова ния. Неразведенный при выявлении изъязвлений и новообразовании кал тонким слоем наносят на предметное стекло. желудочно-кишечного тракта. Для того чтобы Мазок кладут в чашку Петри, лежащую на бе- связать выделение кровн с калом с патологией лом фоне, и наносят на него 2Ч3 капли раствора желудочно-кишечного тракта, следует исклю бензидина и столько же перекиси водорода. При чить кровотечение из носа и десен. При крово положительной реакции появляется зеленое или течении из геморроидальных узлов кровь обыч синее окрашивание. Интенсивность окраски про- но располагается на поверхности каловых масс, порциональна количеству крови в испражне- а при кровотечении из нижних отделов толстой ниях. Если окраска не развивается или появля- кишки при микроскопическом исследовании ется позже 2 мин, то проба считается отрица- испражнений можно обнаружить эритроциты.
тельной. Бензидиновая проба является наиболее чувствительной и дает положительный резуль- СТЕРКОБИЛИН. БИЛИРУБИН. Унифици тат с разведением крови 1:100000Ч1:250000 рованный метод с двухлорнстой ртутью (проба Гваяковая проба. Ре а кт ив ы. 1.2% спир- Шмидта) (1979). Пр инцип. В результате товая настойка гваяковой смолы. 2. Ледяная реакции стеркобилина с двухлористой ртутью уксусная кислота. 3, 3 % раствор ЬЬОг. образуется соединение, имеющее розовое окра Ход ис с ле дова ния (упрощенный ва- шивание.
риант). На предметное стекло, помещенное в Ре а к т ив ы. 1. Раствор двухлористой рту чашку Петри, кладут кусок фильтровальной бу- ти (HgCh Ч хлорид ртути, сулема), 70 г/л рас маги, на которую наносят небольшое количество твора. Растворяют при кипячении, после охла кала в виде мазка. На кал капают по 2Ч3 капли ждения фильтруют.
ледяной уксусной кислоты, настойки гваяковой Ход ис с л е д о в а ния. Комочек кала ве смолы и перекиси водорода. В присутствии кро- личиной с лесной орех растирают в фарфоровой ви появляется сине-зеленое или фиолетовое ок- чашечке или в пробирке с 3Ч4 мл раствора рашивание. Проба с гваяковой смолой дает по- двухлористой ртути, закрывают крышкой или ложительный результат с разведениями крови пробиркой и оставляют при комнатной темпера 1:50000. туре в вытяжном шкафу на сутки. Контроль Пирамндоновая проба. Ре а кт ивы. 1.5% ную пробу ставят так же, как опытную, но вместо спиртовой раствор амидопирина (пирамидона). двухлористой ртути берут воду.
2. 30 % раствор уксусной кислоты. 3. 3 % рас- Оце нк а ре з у ль т а т ов. В присутствии твор HjOj. стеркобилина в опытной пробе появляется розо Ход ис с л е д о в а ния. Небольшой кусо- вое окрашивание. Оценку результатов можно чек кала растирают с 4Ч5 мл воды и фильт- провести немедленно, если подогревать пробир руют. К фильтрату добавляют равный объем ки с опытной и контрольной пробами на пламени раствора амидопирина и по 10Ч12 капель уксус- горелки. При наличии билирубина образуется ной кислоты и перекиси водорода. В присут- зеленое окрашивание. В норме реакция положи ствии крови появляется сине-фиолетовое окра- тельная.
шивание;
если через 2 мин окраска не развилась, Унифицированный метод с пара-диметила то проба считается отрицательной. Проба с ами- мннобензальдегидом (1979). Пр и нц и п. Стер допирином по чувствительности стоит между кобилиноген (уробилиноген) с пара-диметила описанными выше. минобензальдегидом образует окрашенный в Экспресс-тесты. Фирмы Germed (ФРГ), красный цвет комплекс, интенсивность окраски Roham Pharma" (Чехословакия), "Smith которого пропорциональна содержанию уроби Klein (США) и др. выпускают бумажные тесты линогена. Для восстановления уробилина в уро для определения скрытой крови в испражнениях, билиноген используют аскорбиновую кислоту и которые основаны на пробе с гваяковой смолой. гидрат окиси железа. Для увеличения специфич Ход и с с л е д о в а ния. Испражнения на- ности реакции добавляют ацетат натрия.
носят на пропитанную гваяковой смолой филь- Реактивы. 1. 4-(Диметиламино)-бен тровальную бумагу, укрепленную на дне неболь- зальдегид (пара-диметиламинобензальдегид).
шого окошка, прорезанного в картонной пласти- 2. HCI концентрированная, х. ч. 3. Реактив Эрли не, и закрывают створкой. С противоположной ха: 0,7 г пара-диметиламинобензальдегида рас стороны также имеется створка, которую откры- творяют в 150 мл концентрированной HCI, при вают непосредственно при исследовании, и на ливают к 100 мл дистиллированной воды и сме фильтровальную бумагу, которая уже пропи- шивают. Раствор должен быть бесцветным или слегка желтоватым. Хранят в посуде из темного калибровочный раствор измеряют при тех же стекла. Реактив стабилен. 4. Натрия ацетат условиях, что и опытную пробу.
ч. д. а., х. ч. насыщенный раствор: 375 г Результат выражают числом миллиграммов CH3COONa Х ЗН2О (или 226 г CH3COONa) рас- стеркобилиногена (уробилиногена) на 100 г ка творяют в 250 мл теплой дистиллированной ла (Ст);
1 мг стеркобилиногена (уробилино воды, затем охлаждают до комнатной темпера- геиа) соответствует 1 единице Эрлиха. Расчет туры. Хранят при комнатной температуре. Рас- производится по формуле:
твор должен быть бесцветным и прозрачным, 5. Железа сульфат (FeSO4 Х 7Н2О) ч. д. а., 200 г/л раствора. Стабилен при хранении в хо лодильнике в течение суток. 6. Аскорбиновая кислота. 7. Натр едкий: а) 100 г/л раствора;
где Е0 Ч экстинкция опытной пробы;
, Ч эк б) 0,5 г/л раствора. 8. Бария хлорид, 100 г/л стинкция холостой пробы;
л Ч экстинкция ка раствора. 9. Фенолсульфофталеин (феноловый либровочной пробы;
0,346Ч концентрация стер красный) Ч для приготовления калибровочного кобилиногена в растворе (0,346 мг/100 мл), раствора. 10. Основной калибровочный раствор:
окраска которого эквивалентна окраске калиб 20,2 мг фенолсульфофталеина растворяют в ровочного раствора фенолсульфофталеина;
100 мл 0,5 г/л раствора едкого натра. Стабилен 6,0Ч объем пробы (мл);
1,5Ч объем фильтрата при хранении.
в пробе (мл);
Pages: | 1 | 2 | 3 | 4 | ... | 13 | Книги, научные публикации