Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по биологии

Микробиологические аспекты разработки и применения антисептиков и антисептических средств для профилактики и лечения раневых инфекций

Автореферат докторской диссертации по биологии

СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА

Страницы: | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |

 

Внедрение результатов исследования

На основании проведенных исследований оформлено 8 патентов на изобретения:

1. Пат. 2284824 RU, А61Р 31/00. Клей хирургический антисептический АРГАКОЛ / Афиногенов Г.Е, Афиногенова А.Г. (RU).а Заявка № 2005107523. Приоритет изобретения 18.03.2005. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 10.10.2006. Патентообладатель ООО Сирена.

2. Пат. 2292224 RU, А61К 33/38. Способ изготовления сетчатого протеза с антимикробными свойствами для герниопластики / Басин Б.Я., Афиногенов Г.Е., Пострелов Н.А., Афиногенова А.Г., Кольцов А.И. (RU). Заявка № 2005121826. Приоритет изобретения 11.07.2005. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 27.01.2007. Патентообладатель коллектив авторов.

3. Пат. 2298036 RU, C12N 5/00. Способ оценки уровня сорбционной активности сорбента / Афиногенов Г.Е, Тихилов Р.М., Афиногенова А.Г. (RU). Заявка № 2004132319. Приоритет изобретения 04.11.2004. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 27.04.2007. Патентообладатель ФГУ РНИИТО им. Р.Р. Вредена Росздрава.

4. Пат. 2314821 RU, A61P 31/00. Антимикробное средство / Никуленкова Т.Ф., Афиногенова А.Г. (RU).а Заявка № 2007102244. Приоритет изобретения 23.01.2007. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20.01.2008. Патентообладатель коллектив авторов.

5. Пат. 2324499 RU, A61L 2/03. Способ профилактики развития гнойных процессов в области послеоперационных костных дефектов / Афиногенов Г.Е., Жирнов В.А., Тараненко М.Ю., Афиногенова А.Г. (RU). Заявка № 2006124960. Приоритет изобретения 11.07.2006. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20.05.2008. Патентообладатель ФГУ РНИИТО им. Р.Р. Вредена Росздрава.

6. Пат. 2343925 RU, А61М 37/00. Способ профилактики послеоперационного остеомиелита / Афиногенов Г.Е., Тихилов Р.М., Афиногенова А.Г., Мироненко А.Н., Богданова Т.Я., Краснова М.В., Козлов И.В., Анисимова Л.О. (RU). Заявка № 2006144370. Приоритет изобретения 12.12.2006. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20.01.2009. Патентообладатель ФГУ РНИИТО им. Р.Р. Вредена Росмедтехнологий.

7. Пат. 2354389 RU, А61Р 1/02. Способ лечения воспалительных заболеваний слизистой оболочки полости рта протетической этиологии / Сапронова О.Н., Кусевицкий Л.Я., Афиногенов Г.Е., Трезубов В.Н., Афиногенова А.Г., Колесов О.Ю., Айвазов Т.Г., Капустин С.Ю. (RU). Заявка № 2007146755. Приоритет изобретения 11.12.2007. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 10.05.2009. Патентообладатель коллектив авторов.

8. Пат. 2414882 RU, А61К 6/02. Антибактериальный материал для базисов съемных зубных протезов / Семенов С.С., Афиногенов Г.Е., Афиногенова А.Г., Трезубов В.Н., Сапронова О.Н. (RU). Заявка № 2010102999. Приоритет изобретения 01.02.2010. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 27.03.2011. Патентообладатель коллектив авторов.

Получены регистрационные удостоверения на разработанные изделия медицинского назначения:

1. Композиция пленкообразующая биодеградирующая антисептическая для лечения ожогов II-IIIа степени, трофических язв, пролежней АРГАКОЛ. Регистрационное удостоверение МЗ РФа № ФС 012б2005/1878-05 от 05.07.05, продление - регистрационное удостоверение № ФСР 2010/08285 от 09.07.2010 г.

2. Протез сетчатый для герниопластики антисептический. Регистрационное удостоверение № ФСР 2007/01388 от 10.12.2007 г.

Результаты проведенных исследований послужили основой лекционного курса и практических занятий, которые внедрены в учебный процесс и лечебную практику СПб ГМА им. И.И. Мечникова: кафедры травматологии, ортопедии и ВПХ с курсом стоматологии (акт о внедрении от 08.06.2011); кафедры хирургических болезней с курсом детской хирургии (акт о внедрении от 08.06.2011); ФГУ Российский НИИ травматологии и ортопедии им. Р.Р. Вредена (акт о внедрении от 08.06.2011); СПб ГМУ им. акад. И.П. Павлова: кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии (акт о внедрении от 10.06.2011); кафедры ортопедической стоматологии и материаловедения с курсом ортодонтии (акт о внедрении от 09.06.2011); кафедры травматологии и ортопедии (акт о внедрении от 10.06.2011); ГОУ ДПО СПб МАПО Росздрава (акт о внедрении от 10.06.2011).

Разработанные изделия медицинского назначения внедрены в практическую работу лечебно-профилактических организаций - ГУ СПб НИИ скорой помощи им. И.И. Джанелидзе (акт о внедрении от 10.06.2011); СПб ГМА им. И.И. Мечникова; ФГУ РНИИТО им. Р.Р. Вредена.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Полимерные антисептики из группы полигексаметиленгуанидинов предупреждают формирование микробных биопленок, проявляют антитоксический эффект. Эти антисептики, в том числе в сочетании с комплексонами из группы бисфосфонатов и Унитиолом, ингибируют металло-бета-лактамазу и бета-лактамазу полирезистентных грамотрицательных бактерий, при этом усиливают действие карбапенемов и цефалоспоринов.
2. Композиция на основе высокомолекулярного поливинилпирролидона, амикацина и диоксидина обладает пролонгированным эффектом, антитоксическими свойствами, способностью локализовать инфекционный очаг и придавать антимикробную активность окружающим рану тканям.
3. Нанокластеры серебра придают пролонгированную антимикробную активность протезу-сетке для герниопластики, биоситаллу, костному цементу, стоматологическим материалам для изготовления зубных протезов.
4. Выбор антисептика для применения в клинике должен быть связан со стадией раневого процесса. В период экссудации и инфильтрации необходимо применять антисептики, которые не теряют своей активности в присутствии естественных нейтрализаторов; в фазе регенерации и эпителизации - антисептики с наименьшей токсичностью.

Апробация работы

Диссертация апробирована на заседании Ученого совета ФГУ РНИИТО им. Р.Р. Вредена 19 октября 2010 г., протокол №8.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на 30 различных конгрессах и конференциях, в том числе на Международном конгрессе Европейского общества клинической микробиологии и инфекционных заболеваний (ESCMID, 2000, 2008); Всероссийской научно-практической конференции Медицинская микробиология - XXI век, Саратов, 2004; 1-й Европейской конференции по биопленкам Предотвращение микробной адгезии, Оснабрюк, Германия, 2004; Международных конгрессах МАКМАХ/ESCMID Антимикробная терапия, Москва, 2005, 2008, 2009, 2010; Итоговом заседании отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области, НИИ микробиологии им. Пастера, 2010.

Публикации

По материалам диссертации опубликована 81 печатная работа, в том числе: в изданиях, рекомендованных ВАК Российской Федерации - 15 статей, в периодических изданиях - 2 статьи, в сборниках научных трудов и в материалах конференций - 54, в 2 главах в книгах, в патентах на изобретения РФ - 6, монография - 1.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на русском языке и состоит из введения, 9 глав, заключения, выводов, списка литературы. Общий объем диссертации 325 страниц. Работа иллюстрирована 58 таблицами и 82 рисунками. Список литературы включает 276 работ, в том числе 111 - отечественных и 165 - иностранных авторов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы

Материалы. В исследованиях использовали референс-штаммы и тест-штаммы микроорганизмов, выделенные у пациентов: Staphylococcusaureus 209 Р Оксфорд (получен из ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН), S. aureus АТСС 6538, Escherichiacoli АТСС 25922, E. coli АТСС 1257, E. coli АТСС 35218, Pseudomonasaeruginosa АТСС 15442, P. aeruginosa АТСС 9027, Candidaalbicans АТСС 10232, C.albicans АТСС 15, Clostridiumperfringens 276, Proteusvulgaris АТСС 1459 (из ГНИИСК им. Л.А. Тарасевича).

Антифаговое действие антисептиков изучали в отношении стафилококковых бактериофагов №№ 80, 85, 53, а для опытов трансдукции использовали штаммы S. aureus (получены от профессора В.С.Зуевой, НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, Москва): 1) штамм 8325-1, служивший реципиентом, обладал хромосомной устойчивостью к стрептомицину; 2) штамм 8325 O11de, служивший донором, у которого фактор резистентности к эритромицину (ero) располангался внехромосомно (уровень устойчивости 400 мкг/мл). Культура 8325 Ode была лизогенна по фагу P11.

При оценке ингибирования металло-бета-лактамаз грамотрицательных микроорганизмов контрольным считали штамм Р. aeruginosa АТСС 27853 МБЛ - (из ГНИИСК им. Л.А. Тарасевича), а рабочими - Р. aeruginosa 804, оцененный методом двойных дисков с ЭДТА как МБЛ+ (клинический изолят из коллекции д.м.н. Суборовой Т.Н., кафедра военно-полевой хирургии ВМА им. С.М. Кирова), и Acinetobacterbaumannii4257 (клинический изолят из коллекции отдела раневой инфекции ФГУ РНИИТО им. Р.Р. Вредена).

Тест-штамм Streptococcus agalactiae: 1) клинический изолят серотипа IV выделен в России в НИИ акушерства и гинекологии им. Отто с кожных покровов новорожденного с септицемией (О7у/08), продуцирующий белок SspB1 (SspB1+); данный изолят характеризовался выраженной вирулентностью и высокой адгезивной активностью, проверенной на суспензиях вагинального эпителия; 2) изолят 74-430 выделен в США от бактерионосителя СГВ, дефектный по гену SspB1 и не продуцирующий белок SspB1-. Изоляты получены из отдела молекулярной микробиологии НИИЭМ СЗО РАМН от д.м.н., профессора А.Н. Суворова.

Тестируемые антисептики, антибиотики, лекарственные препараты

В исследованиях оценивали специфическую активность антисептиков из различных химических групп: полигексаметиленгуанидины, йодофоры, производное оксихинолина (диоксидин), препарат серебра (повиаргол), а также повязки аппликационной углеродноволокнистой сорбирующей, стерильной ПАС-У1, хитозана низкомолекулярного пищевого водорастворимого с молекулярной массой 30 кДа. Тестировали антибиотики из различных химических групп: цефтазидим, имипенем, меропенем, амикацин, ванкомицин; комплексоны (этилендиаминтетраацетат натрия, Бонефос, Ксидифон, Унитиол); природные антисептики Галенофиллипт и Хлорофиллипт; ферменты агрессии бактерий - препарат Коллализин; изделия медицинского назначения - протез-сетка из лавсана для герниопластики, биоситалл, порошок костного цемента DePuy CMW-1 Gentamicin 20 gа с содержанием гентамицина 1,7%, порошок зубопротезной пластмассы Фторакс. В качестве основы для разрабатываемых композиций использовали поливинилпирролидон высокомолекулярный в виде коммерческого препарата Kollidon 90F (фирмы BASF, Германия).

Животные. Оценку токсичности разрабатываемых антисептических средств проводили на кроликах породы Шиншилла обоего пола массой 3,0-3,5 кг; мышах линии SHR массой 18,0-20,0 г одного пола; морских свинках массой 250,0-300,0 г; крысах линии Вистар обоего пола массой 150,0Ц200,0 г на базе вивария ФГУ РНИИТО им. Р.Р. Вредена. Изучение формирования микробных биопленок на поверхности протеза-сетки для герниопластики проводили в эксперименте на морских свинках массой 250,0-300,0 г на базе вивария СПб ГМА им. И.И. Мечникова.

Микробиологические методы

Для выращивания микроорганизмов использовали бульон Мюллер-Хинтон для аэробных бактерий, бульон Сабуро, соответствующие плотные питательные среды. В чашечно-суспензионном методе использовали 5% кровяной агар. Исследования с анаэробами (клостридии) проводили в анаэростатах с использованием газ-паков фирмы Becton Dickinson (США). В тестах по оценке антимикробной активности антисептиков в присутствии естественных нейтрализаторов использовали эмбриональную бычью сыворотку (ООО БИОЛОТ, Россия). Инактивацию остаточных количеств антисептиков проводили с помощью универсального нейтрализатора следующего состава: твин-80 3%, сапонин 3%, гистидин 0,1%, цистеин 0,1%. В опытах по изучению трансдукции плазмид лекарственной устойчивости у стафилококков использовали бульон Хоттингера (ООО БИОЛОТ, Россия) и селективную агаризованную среду (мясо-пептонный агар), содержащую 100 мкг/мл стрептомицина, 100 мкг/мл эритромицина или оба препарата одновременно в тех же концентрациях.

Взятие биологического материала из ран и количественное определение микробиоты осуществляли согласно Методическим рекомендациям Лабораторный контроль противоэпидемического режима стационаров и методика бактериологических исследований при возникновении гнойно-септических инфекций (Л., 1985).

Выделение и идентификацию возбудителей проводили в соответствии с Приказом МЗ СССР № 535 от 22.04.85 г. и Приказом № 8 МЗ РФ от 1995 г.

Все работы с микроорганизмами и с культурой клеток фибробластов проводили в ламинарных шкафах II класса фирмы JOUAN, Франция.

Определение видового состава клинических изолятов раневой микробиоты проводили с использованием автомата iEMS Reader-MF (фирмы ThermoLabsystems, Финляндия) и программ Микроб-Автомат и Микроб-2й МедПроект-3, а также на микробиологическом автоматическом анализаторе VITEK-2 фирмы Bio-Merieux (Франция).

Культуры микроорганизмов хранили в стандартных пробирках Microbankтм с питательной средой (производства фирмы PRO-LAB Diagnostics, Канада) в холодильнике при Ц70С.

Антимикробную активность тестируемых препаратов оценивали стандартными микробиологическими методами: диско-диффузионным (Методические рекомендации по определению чувствительности микроорганизмов методом диффузии в агар с использованием дисков, М., 1985); двукратных серийных разведений в жидкой среде (А.П. Красильников, 1995; Методические указания МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам); оценку эффективности антисептиков в присутствии естественных нейтрализаторов проводили количественным чашечно-суспензионным методом в соответствии с методическими рекомендациями № 2003/17 Чашечный метод оценки эффективности дезинфектантов и антисептиков (М., 2004).

В работе по оценке ингибирования металло-бета-лактамаз грамотрицательных микроорганизмов использовали фенотипический метод двойных дисков с этилендиаминтетраацетатом (Шевченко О.В., Эдельштейн М.В., Степанова М.Н., 2007), а также его модификацию (Lee К. et al, 2001).

Для определения количества частиц фага применяли метод агаровых слоев по Грациа; в опытах по изучению передачи плазмиды ero - метод классического совместного культивирования.

Формирование биопленок оценивали при помощи видеотест-системы ВидеоТесТ-Морфология, а также по наличию микробного матрикса на поверхности протеза-сетки при просмотре в сканирующем электронном микроскопе JSM-35С (JEOL, Япония) при ускоряющем напряжении 15 кВ.

СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА

Страницы: | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |

     Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по биологии