Книги, научные публикации Pages:     | 1 |   ...   | 10 | 11 | 12 | 13 |

СПРАВОЧНИК Лабораторные методы исследования в клинике Под редакцией профессора В.В.Меньшикова МОСКВА ДМЕДИЦИНА" 1987 ББК 53.4 М51 УДК 61б-074/-078:061.6 В. В. МЕНЬШИКОВ, Л. Н. ДЕЛЕКТОРСКАЯ, Р. П. ...

-- [ Страница 12 ] --

после чего пробирки помещают в лед. Подсчет Сенсибилизированные к определенному ан В-клеток проводят описанным выше способом тигену лимфоциты резко снижают скорость под (см. Определение Т-клеток). вижности в среде, в которую вносят этот анти Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Из реко- ген. Реакция осуществляется при непосредствен мендаций ВОЗ и нашего более чем 10-летнего ном взаимодействии антигенспецифических ре опыта определения Т- и В-клеток при различных цепторов с антигеном, а также через воздействие заболеваниях ясно, что информативность этого фактора, ингибирующего миграцию клеток, вы вида иммунологического анализа ограничена.

деляющегося при контакте со специфическим Это исследование абсолютно показано при пер- антигеном. Этот феномен позволяет продемон вичных иммунодефицитных состояниях не толь- стрировать органоспецифическую клеточно ко для их типирования, но и для дифференци- опосредованную гиперчувствительность.

рования от вторичных иммунодефицитных со- Реакция торможения миграции агармигра стояний. Диагностическая значимость подсчета ционным тестом. Пр и б о р ы и обору д о Т- и В-лимфоцитов выявлена при идентифика- в а ние. 1. Пластиковые или стеклянные чашки ции лимфопролиферативных расстройств. Учи- диаметром 50 мм. 2. Пробойники для агара тывая то обстоятельство, что лимфоциты при диаметром 2,5 мм. 3. Проекционный аппарат различных стрессорных воздействиях под влия- Микрофот типа 5ПО-1.

нием эндогенных гормонов некоторых лекарст- Р е а к т и в ы. 1. Агар-агар (способ приго венных препаратов мигрируют из периферической товления и очистки см. выше). 2. Трис-хлорид крови в лимфоток, лимфоидные органы, рыхлую ный буфер рН 7,3. 3. Среда 199. 4. Сыворотка соединительную ткань, широкое применение ис- крупного рогатого скота. 5. Гепарин. 6. Анти следований Т- и В-клеток крови в клинической биотики (для консервации), нетоксичные для практике малообоснованно. Диагностическую клеток.

ценность несут исследования этих лимфоцитов Ход р е а к ц и и. 3% агар-агар на изото в синовиальной жидкости при ревматоидном ническом растворе натрия хлорида, забуферен артрите, в моче при верификации определенных ном трис-хлоридным буфером рН 7,3, охлажден форм поражения почек. Очевидна необходи- ном до 50 С, добавляют к 10 мл смеси: 9 мл мость изучения реакции Т-клеток на различные среды 199,1 мл сыворотки крупного рогатого медикаментозные препараты, используемые в скота, 3000 ЕД мономицина (смесь предвари настоящее время клиникой в качестве иммуно- тельно прогревают до 37 С). Полученный гель модуляторов, для объективизации их назначе- разливают в чашки (если используются стек ния в каждом конкретном случае. Выявление лянные, то их необходимо силиконировать), значительного снижения Т-клеток может способ- установленные строго горизонтально в коли ствовать утверждению в диагнозе амилоидоза.

честве, необходимом для создания слоя толщи Можно ожидать, что изучение субпопуляций ной 2 мм. В затвердевшем геле пробивают лунки Т-лимфоцитов, их соотношения друг с другом и (2,5 мм) в количестве, обусловленном опытом.

в общем пуле лимфоцитов будет более инфор- Концентрацию антигена, которую необходимо мативно в оценке ряда патологических состоя- внести в смесь, высчитывают опытным путем ний и эффективности выбранной терапии. (по дозе, вызывающей наименьший разброс в Т-активная субпопуляция представляет со- повторных постановках) для каждого антигена бой преимущественно клетки, несущие супрес- и серии опытов.

Вы д е л е ни е л е й к о ц и т е в. В пробир- вают экспериментально и определяют в мкг/мл ку помещают 10 мл гепаринизированной крови по концентрации белка. На каждую концентра обследуемого (25 ЕД гепарина на 1 мл крови). цию антигена и контроль используют по 2 ка В течение 1 ч пробирку выдерживают в термо- пилляра и соответственно получают 4 зоны ми стате 37 С под углом 45. Через 50 мин про- грации. Измерение зон миграции, исчисление их бирки переводят в вертикальное положение и площади проводят различными способами. Наи выдерживают еще 10 мин. После отстаивания более распространен метод проектирования плазму осторожно отсасывают и переносят в чашек (камер) с мигрирующими лейкоцитами, центрифужную пробирку. Центрифугируют 5 мин образующими облачко над капилляром, с ис при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость уда- пользованием фотопроектора на миллиметровую ляют. Примесь эритроцитов в клеточном осадке бумагу или фотопленку. Проекцию зоны мигра лизируют в гипотоническом растворе хлорида ции обводят карандашом и высчитывают пла натрия, для чего к клеточному осадку добав- ниметром или (при использовании рентгенов ляют 5 мл 0,35 % раствора и осторожно пасте- ской пленки) вырезают и взвешивают. Индекс ровской пипеткой ресуспендируют клетки, не миграции (И) определяют по формуле:

допуская образования пены, в течение 30Ч45 с.

После экспозиции к суспензии клеток немедлен но добавляют 0,6 мл 5 % раствора хлорида нат рия и тщательно перемешивают. В результате раствор становится изотоничным. Полученную взвесь лейкоцитов трижды отмывают средой Приготовление и очистка антигенов доста 199 или фосфатным буфером рН 7,4. точно полно отражены в ряде руководств (см.

Контрольные и опытные исследования про- рекомендованную литературу).

водят в 4 параллельных лунках, внося в каждую Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Выявле из них по 5 мкл ресуспендированной лейковзвеси ние сенсибилизированных к определенному ан (1,5 млн. клеток). Через 20 ч инкубации чашек тигену лимфоцитов говорит об участии этого в термостате при 37 С их заливают 10 % раст- антигена в развитии специфической гиперчувст вором формалина (в целях фиксации клеток).

вительности и в ряде случаев может быть ис Через 4 ч слой агара осторожно удалают, чашки пользовано в диагностике опухолей, гломеруло промывают и высушивают. Результаты учиты- нефрита, дифференциальной диагностике неспе вают путем проектирования полей миграции на цифических миокардитов и кардиопатий.

бумагу с помощью аппарата Микрофот. Ин декс миграции (И) определяют по расчету соот- Ли т е р а т у р а. Петров Р. В. Иммуноло ношения величин площадей миграции в опыте гия.Ч М.: Медицина, 1982;

Руководство по им и контроле по формуле: мунологии / Под ред. О. Е. Вязова, III X. Ход /72 J2 жаева.Ч М.: Медицина, 1973;

Лимфоциты. Вы,, Да U деление, фракционирование и характеристика / Под ред. Д. Натвига, П. Перлмана, X. Виг где До Ч средний диаметр 4 зон миграции в зеля.Ч М.: Медицина, 1980.

опыте;

Д1 Ч средний диаметр 4 зон миграции в контроле;

dl Ч средний диаметр 4 централь 6.6.4. Фагоцитарная активность ных лунок в опыте;

dl Ч средний диаметр центральных лунок в контроле. нейтрофилов периферической крови Реакция торможения миграции лейкоцитов в прямом капиллярном тесте. Выделение лей- Пр и н ц и п. Полиморфноядерные лейко коцитов проводят аналогично описанному выше. циты, моноциты периферической крови способны Выделенные лейкоциты ресуспендируют в 0,1 мл связывать на своей поверхности, поглощать и среды 299 или фосфатного буфера. Этой кле- переваривать микробную тест-культуру.

точной взвесью заполняют стеклянные капил- Обычно используют стафилококк штамма ляры с внутренним диаметром 0,7 мм и длиной 209. Однако он практически не подвергается 12 см (капилляры необходимо точно калибро- внутриклеточному перевариванию и исключает вать, так как от этого зависит стандартизация прямое изучение этой функции фагоцитоза.

объемов клеточной взвеси). С одного конца ка- Мы рекомендуем использовать штамм 9198.

пилляр запаивают и центрифугируют при Пос у д а и о б о р у д о в а ни е. (. Хими 1000 об/мин в течение 5 мин. Концы капилляров, ческие пробирки. 2. Предметные стекла. 3. Шли содержащие клетки, нарезают кусочками по 5Ч фовальное предметное стекло. 4. Пипетки мер 6 мм и погружают в стеклянные камеры, запол- ные. 5. Микроскоп. 6. Центрифуга.

ненные средой 199, закрепляя их в центре с по- Ре а к т и в ы. 1. Метанол. 2. Красители:

мощью вазелина, предварительно нанесенного азур II, эозин. 3. Глицерин. 4. Среда 199.

на дно камеры. Камеру герметически закрывают 5. Смесь донорских сывороток (2Ч3) AB(IV) (притирают с вазелином) покровным стеклом группы. 6. Изотонический раствор хлорида нат и помещают в термостат при 37 С на 20 ч в рия. 7. Набор стандартов для определения кон строго горизонтальном положении. Оба конца центрации микробных тел по мутности. 8. Су капилляра открыты (камеры готовят из стеклян- точная культура Staphilococcus epidermidis ных колец 20X10X2 мм, фиксированных на шт. 9198.

предметных стеклах смесью воск-парафин). Ход о п р е д е л е н и я. В стерильную про Концентрацию вносимого антигена рассчиты- бирку с заранее внесенным раствором 0,6 мл ге парина (G. Richter), разведенного 1 : 10, вносят под микроскопом в иммерсионной системе (счи 10 мл крови из кубитальной вены. Кровь тща- тают не менее 200 клеток) и производят расчет тельно перемешивают и центрифугируют 10 мин показателей фагоцитоза.

при 1000 об/мин. Плазму вместе со слоем лейко- 1. Фагоцитарный индекс (ФИ) Ч процент цитов осторожно отсасывают и помещают в клеток, вступивших в фагоцитоз, от общего их чистую центрифужную пробирку, добавляя 5Ч числа.

6 мл среды 199. Лейкоциты отмывают центри- 2. Фагоцитарное число (ФЧ) Ч среднее фугированием 10 мин при 1000 об/мин. Надоса- число бактерий, находящихся внутриклеточно дочную жидкость удаляют, а находящиеся в (частное от деления общего числа поглощен осадке лейкоциты ресуспендируют в среде 199 ных бактерий на число клеток, вступивших в дважды, каждый раз повторяя процедуру Мяг- фагоцитоз).

кого центрифугирования. После последнего 3. Оба показателя рассчитывают на мазках, центрифугирования пипеткой отсасывают над- сделанных после 30- и 90-минутной (т. е. в общей осадочную жидкость и часть клеточной взвеси, сложности 120-минутной) инкубации, иными оставив в центрифужной пробирке 0,2 мл словами, речь идет о ФИЗО и ФИ120, соответст (10Х106 кл/мл) клеточной взвеси в среде 199. венно ФЧЗО и ФЧ120.

С косого агара с суточной культурой стафило- 4. Коэффициент фагоцитарного числа:

кокка стерильным изотоническим раствором нат ФЧЗО рия хлорида смывают колонии микробов. Ис ФЧ120 ' пользуя стандарт оптической мутности, разводят микробную взвесь до концентрации 1 млрд.

5. Индекс бактерицидности нейтрофилов:

микробных клеток в 1 мл;

0,3 мл этой взвеси вносят в пробирку, содержащую 0,2 мл лейко цитов в среде 199, и добавляют 0,15 мл пула свежих донорских сывороток AB(IV) группы где Чу Ч число убитых внутри фагоцитов микро (для опсонизации). Осторожным ротированием бов;

Чп Ч общее число поглощенных фагоци перемешивают компоненты и термостатируют тами микробов.

30 мин при 37 С. По истечении указанного вре 6. Опсонический индекс поглощения:

мени в пробирку добавляют 5 мл прогретого до 37 С изотонического раствора натрия хлорида, встряхивают и центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин. По окончании центрифугирования надосадочную жидкость удаляют и делают мазки Но р м а л ь н ые в е л и ч и н ы: ФИЗО из лейкоцитарной взвеси, остатки которой вновь 94,18+1,55%;

ФИ120 92,00 + 2,52%;

ФЧЗО помещают в термостат при 37 С для продолже- 11,29 + 1,00%;

ФЧ120 9,81+0,96%;

КФЧ ния инкубации еще в течение 90 мин. Затем мазки 1,16 + 0,04 %;

ИБН 66,3 + 2,58 %.

приготавливают повторно из осадка двухчасовой Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Изучение инкубации. показателей фагоцитоза имеет значение в комп Мазки готовят как обычно, на тщательно лексном анализе диагностики иммунодефицит вымытых обезжиренных предметных стеклах. ных состояний: часто рецидивирующие гнойные Каплю лейкоцитарной взвеси помещают неда- воспалительные процессы, длительно не зажи леко от края стекла и шлифованным предметным вающие раны, склонность к послеоперационным стеклом, поставив его под углом 45 к поверх- осложнениям. Помогает в диагностике вторичных ности впереди капли и подождав, пока капля иммунодефицитных состояний, вызванных ле равномерно распределится вдоль его ребра, карственной терапией. В связи с тем что фаго легким быстрым движением проводят вперед, циты участвуют в элиминации иммунных комп не отрывая от предметного стекла раньше, чем лексов и активность фагоцитоза тесно связана иссякнет вся капля. с активностью компонентов комплемента, а имен Правильно сделанный мазок имеет равно- но Сз, концентрацией IgG антител, наличием мерно матовый оттенок, не достигает краев стек- других опсонирующих факторов, исследование ла и заканчивается остроконечными язычками. фагоцитоза играет роль в диагностике, оценке Приготовленные мазки сушат на воздухе, активности и эффективности терапии при ревма затем фиксируют 10 мин в абсолютном метило- тических болезнях, коллагенозах.

вом спирте и красят по РомановскомуЧГимзе Наиболее информативным для оценки фаго азур-эозином.

цитарной активности следует считать индекс Состав готового красителя: азур II Ч 3 г, поглощения, т. е. фагоцитарное число, коэффи водорастворимый желтый эозин Ч 0,8 г, мети- циент фагоцитарного числа, которые отражают ловый спирт Ч 250 мл и глицерин Ч 250 мл. завершенность фагоцитоза и индекс бактери Для окраски мазков берут 2 капли основного цидности Ч способность фагоцита переваривать раствора красителя на 1 мл дистиллированной захваченный микроб. Особое значение в выявле воды.

нии причин изменений фагоцитарной активности Можно готовить краску непосредственно пе- имеет определение опсонического индекса погло ред окрашиванием мазков из азура II, эозина щения, так как он характеризует наличие сыво и дистиллированной воды в соотношении 3: 2: 5.

роточных факторов, сопутствующих миокарди На один мазок наслаивают 3 мл раствора кра- там, ревматизму, ревматоидному артриту и др., сителя. Длительность окраски 45Ч50 мин.

способных изменить активность иммунокомпе После окрашивания мазки просматривают гентных и фагоцитирующих клеток.

Раздел МЕТОДЫ КЛИНИЧЕСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ 7. 1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ Микробиологические исследования при гной- в начале озноба, при повышении температу но-воспалительных заболеваниях проводят с ры и т. п.

целью их диагностики, изучения этиологической 4. Соблюдать строжайшую асептику во из структуры, определения чувствительности воз- бежание загрязнения пробы микрофлорой окру будителей к антибактериальным препаратам. жающей среды.

Результаты микробиологического исследования 5. Материал для выделения аэробов и фа способствуют выбору наиболее эффективного культативных анаэробов брать стерильными препарата для антибактериальной терапии, ватными тампонами (отделяемое из раны, мазки своевременному проведению мероприятий для со слизистых оболочек, из глаза, носа, зева, цер профилактики внутрибольничных инфекций. викального канала, влагалища, анального от Возбудителями гнойно-воспалительных за- верстия), шприцем (кровь, гной, экссудаты), болеваний (ГВЗ) наиболее часто являются непосредственно в стерильную посуду (моча, условно-патогенные микроорганизмы (УПМ), мокрота, фекалии) (подробно см. соответствую входящие в состав естественной микрофлоры че- щие разделы).

ловека или попадающие извне. УПМ вызывают Материал для выделения строгих анаэробов заболевания преимущественно у людей с пони- получают из патологического очага путем пунк женной иммунологической реактивностью, этио- ции шприцем, из которого предварительно уда логическая структура их непостоянна, часто лен воздух;

при исследовании кусочков ткани их встречаются ассоциации микроорганизмов. берут из глубины очага. При необходимости Микробиологические исследования при за- использовать тампоны их нужно сразу после болеваниях, вызванных УПМ, направлены на взятия материала погружать в транспортную выделение всех микроорганизмов, находящихся среду. ' в патологическом материале, что существенно 6. Количество материала должно быть доста отличает их от аналогичных исследований при точным для проведения исследования, и для его заболеваниях, вызванных истинно патогенными повторения в случаях необходимости.

микроорганизмами, когда проводится поиск 7. Транспортировку нативного клинического определенного возбудителя.

образца в лабораторию следует производить в Для получения адекватных результатов максимально короткие сроки Ч это определяет анализа при ГВЗ особенно важно соблюдать ряд эффективность микробиологического исследо требований при взятии материала для исследо- вания. При длительном хранении материала вания, его транспортировки в лабораторию, про- происходит гибель наиболее требовательных к ведения анализа и оценки его результатов.

питательным веществам видов микробов, на чинают размножаться менее требовательные и быстро растущие виды, что приводит к наруше 7.1.1. Сбор и транспортировка проб нию количественного соотношения видов и дез ориентирует врача-микробиолога при интерпре При взятии материала для проведения мик- тации полученных результатов. Если материал робиологического исследования необходимо соб- нельзя немедленно транспортировать в лабора людать ряд правил.

торию, хранить его следует в холодильнике или 1. Брать материал до начала антибакте- использовать транспортные среды.

риальной терапии или через определенный про- Клинические образцы для культивирования межуток времени после введения препарата, не- строгих анаэробов следует транспортировать в обходимый для его выведения из организма лабораторию, максимально защищая их от воз (практически через 8Ч10 ч после введения боль- действия кислорода воздуха. Используют спе шинство антибиотиков уже выводится из орга- циальные флаконы, заполненные газом, не со низма). держащим кислорода. Уколом иглы через рези 2. Брать материал непосредственно из очага новую крышку, плотно завальцованную, во фла инфекции или исследовать соответствующее от- кон вносят исследуемый материал. Материал деляемое (гной из фистулы, мочу, желчь и пр.).

3. Брать материал во время наибольшего со держания в нем возбудителей заболевания: на пример, кровь для выделения гемокультуры См. с. 313.

можно транспортировать прямо в шприце, 8. К клиническому образцу, направляемому на кончик которого надета стерильная в лабораторию, прилагают сопроводительный пробка. документ, содержащий основные сведения, необ Транспортировку материала осуществляют ходимые для проведения микробиологического также в транспортных средах (например, в смеси исследования (характер материала, фамилия, лизированной крови донора 10 %, глицерина имя и отчество больного, название учреждения 10 %, изотонического раствора хлорида натрия или отделения, номер истории болезни, предпо 80%). лагаемый диагноз заболевания, предшествую Материал для микробиологического иссле- щая антимикробная терапия, дата и время взя дования транспортируют в специальных биксах, тия материала, подпись врача, направляющего пеналах и т. п. материал на анализ).

7.2. ПРОВЕДЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ 7.2.1. Микроскопическое тельных средах. Специальный прием в виде штрихового последовательного посева на чашку, исследование мазка разделенную на 3 части, обеспечивает такое рас Микроскопию мазка, окрашенного по Граму средоточение микробов, что из одной клетки в или другими красителями, проводят при иссле- процессе ее роста и размножения формируется довании мокроты, гноя, отделяемого из ран, сли- отдельная колония. Посевы культивируют при зистых оболочек (мазок из зева, носа, глаза, 37 С, учитывая требовательность бактерий к цервикального канала и пр.) и некоторых других кислороду, наличию СО2 или анаэробных усло клинических образцов. Это позволяет ориенти- вий.

ровочно судить о характере микрофлоры, ее ко- Выявляют некоторые особенности изменения личественном содержании и соотношении раз- цвета среды, ее просветления в процессе роста ных видов микроорганизмов в патологическом культур. Многие группы микробов образуют ха материале. Иногда микроскопия помогает вы- рактерные формы колонии, выделяют пигменты, явить микроорганизмы, плохо растущие на которые окрашивают колонии или среду вокруг обычных питательных средах. На основании них;

колонии изучают визуально, отмечая фор данных микроскопии проводят выбор набора му, величину, характер края, поверхностей, кон питательных сред для выделения микробов, систенцию. Из каждой колонии делают мазки, обнаруженных в мазке. окрашивают по Граму и микроскопируют в све товом микроскопе с иммерсией при увеличении в 700Ч900 раз. Оценивают однородность клеток, 7.2.2. Культивирование микроорганизмов форму и размер, наличие спор или других вклю чений, капсулы, расположение клеток (одиноч Посев исследуемого материала на питатель- ное, парное, гроздья, цепочки), отношение к ок ные среды производят с целью выделения чистых раске по Граму, интенсивность и равномерность культур микроорганизмов, определения их так- распределения краски в клетке.

сономического положения, чувствительности к Колонии отсевают на плотные, жидкие, полу антибактериальным препаратам. Используют жидкие питательные среды, оптимальные для питательные среды, позволяющие выделить культивирования определенного вида микробов.

наибольшее количество видов микроорганизмов: Выделенные чистые культуры подвергают даль оптимальными являются питательные среды, со- нейшему изучению в диагностических тестах, держащие кровь животного или человека, а так- основанных на морфологических, ферментатив же сахарный бульон, среды для анаэробов. ных, биологических свойствах и антигенных осо Одновременно производят посев на дифферен- бенностях, характеризующих представителей циально-диагностические и селективные среды соответствующего семейства, рода, вида, ва для выделения определенных групп микроорга- рианта.

низмов, изучения свойств культур. Посевы инку бируют при 35Ч37 С 18Ч24 ч или при других 7.2.3. Дифференциация и идентификация режимах, учитывают требовательность культи бактерий Ч возбудителей вируемых микроорганизмов к СЬ, ССЬ. Для культивирования строгих анаэробов используют гнойно-воспалительных заболеваний анаэростаты.

Количественную обсемененность материала Идентификация Ч это комплекс бактерио микрофлорой устанавливают по числу колоние- скопических и бактериологических методов изу образующих единиц (КОЕ) в 1 мл или 1 мг испы- чения бактерий, позволяющий определить их си туемого образца. стематическое положение в соответствии с со Важным этапом бактериологической диагно- временным кодом и номенклатурой микроорга стики является получение каждого микроба в чи- низмов.

стой культуре для дальнейшего изучения. Выде- Для подтверждения этиологической значи ление чистых культур бактерий в значительной мости выведенных микробов при заболевании степени определяется правильностью распреде- определение рода и вида, к которому они отно ления посевного материала на плотных пита- сятся, является обязательным и должно быть отражено в названии в виде биноминального следуемых жидкостей и тканей или контамини наименования, например Klebsiella pneumoniae, ровать их из окружающей среды. Поэтому для Streptococcus pneumoniae, Escherichia coli. правильной интерпретации результатов иссле Дальнейшее подразделение на био-, серо-, дования необходимо знать состав естественной фаго-, колициноварианты позволяет маркиро- микрофлоры изучаемого образца. В тех случаях, вать выделенные штаммы, что помогает в оценке когда исследуемый материал в норме стерилен, их этиологической роли, определении идентично- как, например, кровь, ликвор, экссудаты, все вы сти культур, выделенных из разных источников, деленные из него микробы могут считаться воз при проведении эпидемиологического обследо- будителями заболевания. В тех случаях, когда вания в лечебных учреждениях. исследуемый материал имеет собственную мик рофлору, как, например, фекалии, мокрота и пр., нужно учитывать изменения ее качественного 7.2.4. Определение чувствительности и количественного состава, появление несвойст микроорганизмов к антимикробным венных данному биотопу видов микроорганиз препаратам мов, количественную обсемененность материала.

Так, например, при микробиологическом иссле Чувствительность к антимикробным препа- довании мочи степень бактериурии (число мик ратам изучают у культур микроорганизмов, робных клеток в 1 мл мочи), равная и выше 10, имеющих этиологическое значение. Определение свидетельствует об инфекции мочевых путей. Бо антибиограмм помогает лечащему врачу пра- лее низкая степень бактериурии встречается вильно выбрать препарат для лечения больного. у здоровых людей и является следствием загряз нения мочи естественной микрофлорой мочевых путей.

7.2.5. Серологические Установить этиологическую роль условно патогенной микрофлоры помогают также нара методы исследования стание количества и повторность выделения мик робов одного вида от больного в процессе забо Применяют для диагностического подтверж левания. Существенную помощь оказывают изу дения бактериальных инфекций в случаях невоз чение патогенных свойств выделенных культур, можности выделения возбудителя заболевания принадлежность их к определенным био-, серо-, или установления его этиологической роли. На фаговариантам.

растание титра антител в сыворотке больных не При интерпретации данных микробиологиче менее чем в 3Ч4 раза подтверждает диагноз за ского анализа следует учитывать клинику забо болевания.

левания, антибактериальную терапию, предше ствующую исследованию. Стерильность посева или скудность роста в изучаемых пробах может 7.2.6. Оценка результатов быть следствием антибактериальной терапии, исследования так же как изменение микробного пейзажа в жидкостях и тканях организма, имеющих собст Принадлежность УПМ к естественной микро- венную микрофлору. Особое внимание при оцен флоре организма человека создает ряд трудно- ке результатов анализа следует обращать на стей при оценке этиологической роли. УПМ мо- правильное взятие материала для исследования гут представлять нормальную микрофлору ис- и быстроту его транспортировки в лабораторию.

7.3. ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА наиболее частыми возбудителями сепсиса яв 7.3.1. Кровь ляются Staph. aureus. Streptococcus группы D, Микробиологическое исследование крови Str. viridans, Str. pneumoniae. Среди грамотри производят при заболеваниях, связанных с про- цательных преобладают Е. coli, Klebs. pneumo никновением микроорганизмов в ток крови. В niae, Ps. aeruginosa, Bacteroides fragi l is. Из гри норме кровь человека стерильна. В ток крови бов чаще других встречается Candida albicans.

микробы попадают в результате осложнения при Вз я т и е к р о в и для ис с л е д о в а ряде заболеваний, при переливании крови и раз- ния. Кровь для посева следует брать до начала личных манипуляциях, когда развиваются сеп- антибактериальной терапии или через опреде сис, бактериемия, бактериальный шок. Исследо- ленный промежуток времени (8Ч10 ч) после вание крови на содержание микроорганизмов введения лекарственного препарата, необходи следует проводить у больных с длительной неяс- мый для его выведения из организма. Если по ной лихорадкой, особенно у людей с пониженной сев крови производят во время антибактериаль иммунологической реактивностью. ной терапии, рекомендуется добавлять в пита Эт ио л о г и я. Септицемия и бактериемия тельные среды вещества, нейтрализующие дей могут быть вызваны практически всеми микро- ствие лекарственных препаратов. Так, при пени организмами Ч патогенными и условно-пато- циллинотерапии с этой целью можно использо генными. Среди грамположительных бактерий вать пенициллиназу, при применении цефало споринов Ч цефалоспориназу, тетрацикли- чественное содержание (выделение единичных нов Чионы магния, являющиеся антагонистами клеток чаще свидетельствует о контаминации), тетрациклина. наличие монокультуры или ассоциации (ассо Кровь от больного для посева следует брать циации чаще выделяются при загрязнении посе в начале озноба при подъеме температуры. ва, однако у больных со сниженной иммунологи Кровь для посева берут из вены, строго соб- ческой реактивностью возможна смешанная ин людая правила асептики. Для этого кожу на ме- фекция), повторность выделения одной и той же сте венопункции тщательно обрабатывают спир- культуры от больного и идентичность гемокуль том и йодом повторно. Шприцем, стерилизован- туры с культурами, выделенными из другого ным в автоклаве, набирают 10Ч15 мл крови материала от этого же больного.

(2Ч3 мл у маленьких детей), которую либо не- При окончательном заключении микробиолог посредственно у постели больного засевают в пи- должен сопоставить данные микробиологическо тательную среду, либо помещают в стерильную го исследования с клиникой заболевания и ре посуду, содержащую вещества, препятствующие зультатами других анализов.

свертыванию крови (0,3 % раствор цитрата нат- Если через 10 дней после посева крови роста рия, 0,1 % оксалата натрия, 1 мл гепарина микробов на питательных средах не обнаружено, и др.). Материал быстро транспортируют в лабо- анализ можно считать отрицательным.

раторию, где производят дальнейшее исследова- Сре д ы для к у л ь т и в и р о в а н и я ние. Хранить кровь в холодильнике можно не а на э р о б о в. 1. Плотная питательная среда более 1Ч2 ч, при более длительном хранении типа КАБ: 1 г. твин 80, 2 г Na2HPO4, 1 г раство возможен лизис бактерий. римого крахмала, 1 г гидрокарбоната натрия Пр о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я. Про- растворяют при подогревании в 60 мл дрожжево изводят посев 5Ч10 мл крови на 50Ч100 мл го аутолизата. Раствор фильтруют, добавляют к жидкой питательной среды Ч 1 % сахарный 940 мл растопленного мясо-пептонного агара, бульон, двухфазную среду, а также жидкие и хорошо перемешивают и автоклавируют в тече полужидкие среды для культивирования анаэро- ние 20 мин при 0,5 атм. После фильтрации при бов '. При подозрении на брюшной тиф или дру- бавляют 250 мг 1-цистеина гидрохлорида, 0,4 мл гие инфекции применяют специальные питатель- тиогликолевой кислоты и 6 г глюкозы;

устанав ные среды [Биргер М. И., 1982]. Для количест- ливают рН 7,0Ч7,2, разливают в пробирки по венного определения массивности обсеменения 10 мл, стерилизуют при 0,5 атм 20 мин. Эту осно крови делают посев нескольких капель крови из ву хранят в условиях холодильника. Перед ис шприца на поверхность чашки Петри с 5 % кро- пользованием среду регенерируют 20 мин в кипя вяным агаром. Посевы инкубируют в термостате щей водяной бане, быстро охлаждают до 50 С, в течение 10 дней. Просмотр посевов производят прибавляют 0,1 мл раствора гемина (50 мг геми ежедневно. При наличии роста на питательных на растворяют в 1 мл 1 н. NaOH, добавляют средах делают высевы на чашки с 5 % кровяным 100 мл дистиллированной воды, автоклавируют агаром, которые инкубируют в аэробных и анаэ- при 1 атм 15 мин);

1 мл лизированной двукрат робных условиях. Из колоний, выросших на ным замораживанием и оттаиванием цитратной чашках с кровяным агаром, выделяют чистую крови донора перемешивают, выливают в чашку культуру, идентифицируют ее и определяют чув- Петри, после застывания подсушивают 10Ч ствительность к антибиотикам. Посевы крови на 15 мин. Используют для посева или помещают двухфазной среде просматривают, наклоняя для хранения в анаэробные условия при комнат флакон и таким образом увлажняя поверхность ной температуре. Для придания среде селектив скошенного агара бульоном с кровью. При этом ных свойств перед разливом в чашки прибав исключается необходимость в высевах на плот- ляют один из следующих антибиотиков:

ные среды и снижается возможность загрязне- 75 мкг/мл неомицина или канамицина, 50 мкг/мл ния посевов. Во избежание высыхания питатель- гентамицина, 40 мкг/мл налидиксовой кислоты ных сред пробки флакона парафинируют. В та- (невиграмон, неграм).

ком виде флаконы можно выдерживать в течение 2. Жидкая питательная среда. Ее основной месяца, что бывает необходимо при выделении состав и способ приготовления те же, что и для медленно растущих микроорганизмов.

плотной среды. Однако вместо мясо-пептонного Однократный посев крови не всегда приводит агара используют мясо-пептонный бульон (со к выделению гемокультуры. Более информатив- держание агар-агара в среде 0,6 г/л). Приготов ным является трехкратный посев крови с интер- ленную основу разливают по 100Ч150 мл во валами между посевами в сутки. У леченых флаконы и стерилизуют при 0,5 атм 20 мин, хра больных кровь для посева следует брать 5Ч нят в холодильнике. Перед использованием сре 6 раз. ду регенерируют 20 мин на кипящей водяной Оце нк а р е з у л ь т а т о в микробиоло- бане, быстро охлаждают до 50 С, прибавляют гического исследования крови зависит от вида 1 мл раствора гемина (на 100 мл среды), 10Ч выделенных микроорганизмов и массивности ро- 15 % по объему стерильной сыворотки крупного ста. Выделение патогенных видов с несомнен- рогатого скота (можно использовать лошади ностью свидетельствует об их этиологической ную сыворотку, стерильную асцитическую жид роли в заболевании. В том случае, когда из кро- кость), разливают по 5 мл в пробирки и хранят ви выделены УПМ, следует учитывать их коли- в анаэробных условиях при комнатной темпера туре, выдержав предварительно микроанаэро статы со средой при 37 С в течение 2 сут для См. с. 315. контроля стерильности среды. Используется так вых путей, поэтому его желательно избегать.

Катетеризацию производят только в случаях необходимости Ч если больной неспособен мо читься или для разграничения воспалительного процесса в почках и мочевом пузыре. С этой целью мочевой пузырь опорожняют и вводят в него 50 мл раствора, содержащего 40 мг неоми цина и 20 мг полимиксина. Через 10 мин берут пробы мочи для исследования. При локализации процесса в мочевом пузыре моча остается сте рильной, при инфекции в почках отмечается бактериурия.

Мочу можно получить от больного путем над лобковой пункции мочевого пузыря. Этот метод взятия мочи дает наиболее достоверные резуль таты исследования, однако имеется опасность инфицирования больного.

Микробиологическое исследование мочи на до проводить как можно быстрее после ее полу чения от больного, с тем чтобы избежать раз множения находящихся в ней микроорганизмов.

Рис. 14. Схема посева мочи секторным методом. Размножение микробов в моче до начала анали за приводит к ложным результатам при количе А, I, II, III Ч последовательность посева мочи по секторам. ственном определении бактериурии и может дез ориентировать в отношении возбудителя заболе вания. Если немедленное исследование мочи невозможно, то ее следует хранить в холодиль же стандартная Питательная среда для контро- нике при 4 С не более суток.

ля стерильности сухая, к которой добавляют Пр о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я. Оп растворимый крахмал, твин 80, гемин в коли- ределяют степень бактериурии Ч количество чествах и способом, как указано выше. Готовые колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл мочи к употреблению среды хранят также в анаэроб- методом секторных посевов мочи. Платиновой ных условиях. петлей диаметром 2 мм (вместимостью 0,005 мл) 3. Желточная анаэробная среда. К 500 мл ре- производят посев мочи Ч 3Ч4 штриха на генерированной плотной среды для анаэробов сектор чашки Петри с простым агаром (рис. 14).

(основа), охлажденной до 60 С, с соблюдением После этого петлю прожигают и производят правил асептики прибавляют желток одного штриховых посева из сектора А в сектор I и ана яйца (поверхность должна быть деконтаминиро- логичным образом из сектора I в сектор II и из вана погружением яйца на 1 ч в 96 % спирт;

сектора II в сектор III (каждый раз прожигая яйцо не должно содержать антибиотиков), пере- петлю). Чашки инкубируют при 37 С 18Ч24 ч, мешивают, разливают в чашки Петри. После за- после чего подсчитывают число колоний, вырос стывания подсушивают, хранят в анаэробных ших в разных секторах. Определение степени условиях. бактериурии по количеству выделенных колоний производят согласно табл. 47.

Колонии, выросшие на плотной питательной 7.3.2. Моча среде, отсевают в пробирки со скошенным ага ром, выделенную чистую культуру идентифици Микробиологическое исследование мочи про- руют и определяют ее чувствительность к анти изводят при воспалительных заболеваниях моче- бактериальным препаратам.

испускательных путей. У с к о р е н н ы е ме т од ы опре д е л е Эт и о л о г и я. Наиболее частыми возбуди- н и я с т е п е н и б а к т е р и у р и и основаны телями воспалительных процессов мочевого на определении продуктов метаболизма, обра тракта являются грамотрицательные бактерии: зующихся при размножении микроорганизмов Е. coli, Proteus, Providencia, Enterobacter, Kleb- в моче. Они дают менее точные результаты, чем siella, Ps. aeruginosa, Serratia, Streptococcus метод секторных посевов, и используются преи группы Д. Возбудителями могут быть также мущественно при массовых профилактических Staph. aureus, Staph. epidermidis, Candida albi- обследованиях больших контингентов людей или cans, Mycoplasma и другие микроорганизмы. для экспресс-диагностики. При положительном Вз я т и е мо ч и д л я и с с л е д о в а - результате, полученном ускоренными методами, ния. Микробиологическое исследование мочи необходимо дальнейшее исследование с по нужно проводить до начала антибактериальной мощью более точного бактериологического ме терапии. тода.

После тщательного туалета наружных поло- Нитратный тест. Нитриты, являющиеся про вых органов в стерильную посуду собирают дуктами метаболизма представителей семейства среднюю порцию свободно выпущенной мочи энтеробактерий, могут быть обнаружены в моче в количестве 3Ч5 мл. Взятие мочи с помощью с помощью реактива Грисса. Готовят два рас катетера связано с риском инфицирования моче- твора: а) 1,25 г сульфаниловой кислоты раство степень бактериурии, вид выделенных культур, Т а б л и ц а 47. Определение степени бактериурии методом секторных посевов их чувствительность к лекарственным веще ствам.

Количество колоний Оц е н к а р е з у л ь т а т о в. Основная за Количество в секторах дача при интерпретации полученных данных Сектор А бактерий в заключается в доказательстве этиологической 1 мл мочи I 11 роли микроорганизмов, выделенных из мочи.

Учитывают комплекс тестов: степень бактериу 1-6 Менее рии, вид выделенных культур, повторность их Ч Ч Ч 8Ч20 выделения в процессе заболевания, присутствие Ч Ч Ч 20Ч30 в моче монокультуры или ассоциации микро Ч Ч Ч 30Ч60 организмов.

Ч Ч Ч 70Ч80 50 Степень бактериурии позволяет дифференци Ч Ч 100Ч150 5Ч10 ровать инфекционный процесс в мочевых путях Не сосчи Ч Ч тывается 20Ч30 500 000 от контаминации мочи нормальной микро Ч Ч То же 40Ч60 1 000 флорой.

Ч 100Ч140 10Ч20 5 000 Оценку производят на основании следующих Ч Не сосчи- 30Ч40 критериев.

тывается 1. Степень бактериурии, не превышающая То же 60Ч80 Еди- 10 КОЕ/мл мочи, свидетельствует об отсутст нич вии воспалительного процесса и обычно являет ные коло- ся результатом контаминации мочи.

нии 2. Степень бактериурии, равная 10 КОЕ/мл, расценивается как сомнительный результат.

Исследование следует повторить.

3. Степень бактериурии, равная и выше ряют в 500 мл 30 % уксусной кислоты;

б) 2,5 г 10 КОЕ/мл мочи, указывает на наличие воспа а-нафтиламина растворяют в 500 мл 30 % уксус- лительного процесса.

ной кислоты. Оба раствора хранят в защищен- Изменение степени бактериурии в процессе заболевания может быть использовано для ном от света месте.

Непосредственно перед исследованием оба контроля за течением процесса и эффектив раствора смешивают в равных количествах, 1 мл ностью терапии: уменьшение степени бактериу смеси добавляют к 1 мл мочи. Появление крас- рии свидетельствует о благоприятном течении ного окрашивания свидетельствует о присутст- заболевания и эффективности использованных вии в 1 мл мочи не менее 10 микробных клеток. лекарственных препаратов.

ТТХ-тест. Трифенилтетразолия хлорид (ТТХ) В некоторых случаях у больных, получающих антибактериальную терапию, при плохом оттоке под действием продуктов жизнедеятельности микроорганизмов переходит из бесцветного в мочи, при ее низкой относительной плотности красный нерастворимый в воде трифенилформа- и рН ниже 5,0 может наблюдаться низкая сте пень бактериурии при имеющемся заболевании.

зан. Интенсивность окраски находится в прямой зависимости от степени бактериурии. Поэтому, помимо степени бактериурии, следует Готовят три раствора: 1) насыщенный рас- учитывать вид выделенных из мочи микроорга твор двузамещенного фосфата натрия;

2) 750 мл низмов. Эшерихии, протей, синегнойная палоч ТТХ растворяют в 100 мл раствора 1;

3) рабо- ка, клебсиеллы чаще выделяются из мочи боль чий раствор: 4 мл раствора 1 смешивают со ных уроинфекцией. Дифтероиды, лактобациллы 100 мл раствора 2. Хранят растворы в прохлад- и другие грамположительные палочки обычно ном защищенном от света месте. Срок хранения выделяются из мочи здоровых людей. Повторное растворов 1 и 2 Ч до 2 мес, рабочего раствора Ч выделение из мочи культуры одного вида, типа, не более 2 нед. варианта свидетельствует о инфекционном про При постановке реакции пользуются сте- цессе.

рильной посудой. Монокультура чаще выделяется при острых К 2 мл мочи прибавляют 0,5 мл рабочего воспалительных процессах и коррелирует с вы раствора и помещают после перемешивания сокой степенью бактериурии. Ассоциации мик в термостат при 37 С. После 4-часовой инкуба- роорганизмов чаще встречаются при хрониче ции учитывают результаты. Появление на дне ских процессах.

пробирки красного осадка свидетельствует о на- При окончательной оценке результатов мик личии в 1 мл мочи не менее 10 микробных кле- робиологического исследования мочи необходи ток. мо учитывать данные клиники и другие лабора Ускоренные методы позволяют дать немед- торные анализы.

ленный ответ. При использовании бактериологи 7.3.3. Отделяемое при инфекциях ческих методов лаборатория дает предваритель нижних дыхательных путей ный ответ через день Ч после получения резуль татов определения степени бактериурии и окон чательный Ч через 3Ч4 дня, после выделения Микробиологическое исследование проводят микроорганизмов, их идентификации и опреде- при воспалительных заболеваниях дыхательных ления чувствительности к антибактериальным путей: пневмонии, бронхитах, плевритах, брон препаратам. В окончательном ответе указывают хоэктатической болезни, абсцессе легкого и др.

Эт и о л о г и я. Возбудителями воспалитель- верхности питательной среды. На поверхность ных процессов нижних дыхательных путей могут кровяного агара, засеянную исследуемым мате быть бактерии, микоплазмы, вирусы, риккетсии, риалом, можно положить диски с сапонином, грибы и простейшие. Наиболее частыми возбу- чтобы создать селективные условия для роста дителями среди бактерий являются Str. pneumo- H. influenzae.

niae, Staph. aureus, Klebsiella pneurnoniae, Среды с посевами инкубируют при 37 С в те H. influenzae, Ps. aeruginosa и др. чение 18Ч24 ч. Из выросших колоний выделяют При метастатических и аспирационных пнев- чистые культуры, идентифицируют их и опреде мониях с очагом инфекции в брюшной полости, ляют чувствительность к антибактериальным органах малого таза и забрюшинном простран- препаратам.

стве доминируют неспорообразующие анаэробы При обнаружении в микроскопическом пре (бактероиды, пептококки), реже выделяются парате грибов делают посев на среду Сабуро или клостридии. другие среды для выращивания грибов. При по Вз я т и е м а т е р и а л а дл я ис с ле - дозрении на туберкулез или микоплазменную д о в а ния. Исследуют мокроту, содержимое инфекцию делают посевы на соответствующие бронхов, полученное при бронхоскопии, плев- среды.

ральную жидкость, аспираты и пунктаты из тра- Чтобы различить контаминацию мокроты хеи, легочную ткань, полученную при пункции микрофлорой верхних дыхательных путей и по и биопсии легкого.

лости рта, используют количественные методы Наиболее информативно исследование пунк- исследования.

татов из легких, трахеи. Однако применение ука- Мокроту для количественного исследования занных методов связано с определенным риском, [Селина Л. Г., Дорожкова И. Р., 1980] собирают в связи с чем их следует использовать лишь при в стерильную банку с бусами для гомогенизации тяжелых заболеваниях и при отсутствии мокро- материала или в обычную посуду, но перед посе ты или отрицательном результате ее исследо- вом растирают тщательно в ступках. В стериль вания. ную банку с бусами помещают 1 мл (0,5 мл) мок Мокроту для микробиологического исследо- роты, добавляют туда 9 мл (4,5 мл) 2 % пептон вания следует брать до начала антибактериаль- ной воды или питательного бульона. Смесь ной терапии или через определенный промежу- встряхивают в течение нескольких минут, из по ток времени после введения препарата, необхо- лученной гомогенизированной мокроты готовят димый для его выделения из организма больного. последовательные десятикратные разведения, Исследуют утреннюю порцию мокроты. Перед добавляя к 0,1 мл мокроты 0,9 мл изотонического сбором мокроты больной должен прополоскать раствора натрия хлорида. Затем по 0,1 мл полу рот кипяченой водой или слабым раствором ан- ченных разведений засевают на чашки с 5 % тисептика, почистить зубы. Мокроту собирают кровяным агаром, растирая материал шпателем в стерильную посуду Ч плевательницу, чашки по поверхности среды. Через сутки инкубации Петри и пр. Наиболее информативно исследова- при 37 С учитывают результаты: подсчитывают ние мокроты, полученной при бронхоскопии, так однотипные по внешнему виду колонии, их число как она практически не загрязнена микрофлорой умножают на 10, так как производят посев 0,1 мл верхних дыхательных путей и полости рта. Хра- мокроты, и на степень разведения материала. Из нить мокроту до исследования следует в холо- колоний готовят мазки, выделяют чистые куль дильнике при 4 С не более 2Ч3 ч. При более туры, идентифицируют, определяют чувстви длительном хранении погибают малоустойчивые тельность к антибактериальным препаратам.

виды микроорганизмов (стрептококки), разви- Для выделения пневмококка можно внутри ваются процессы брожения и гниения, искажаю- брюшинно заражать белых мышей 0,5 мл взвеси щие результаты исследования.

первичного материала в бульоне или частью Пр о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я. Ис- осадка после центрифугирования материала.

следуют гнойные комочки мокроты, которые мак- Через 6Ч8 ч у зараженной мыши берут экссудат симально освобождают от микрофлоры верхних из брюшной полости, делают посев на чашки с дыхательных путей промыванием их в чашке 5 % кровяным агаром, из остатка экссудата го Петри, содержащей изотонический раствор нат- товят мазки, которые окрашивают по Граму.

рия хлорида. Готовят мазки, растирая комочек Можно также забить зараженное животное и мокроты между стеклами, окрашивают их по сделать посев крови из сердца на сывороточный Граму и Цилю Ч Нильсену (для обнаружения бульон и чашки с кровяным агаром и мазки-от в мокроте туберкулезных палочек). При бакте- печатки из селезенки на предметном стекле (ок риоскопии мазков можно ориентировочно судить раска по Граму). При наличии пневмококка в о характере и количестве микрофлоры в мокроте. исследуемом материале на питательных средах Микроскопия мазка помогает также выявить вырастет чистая культура.

трудно культивируемые микроорганизмы. Ино- Оц е нк а рез ультатов. Наиболее гда бактериоскопия определяет характер куль- сложно определить этиологическую роль со турального исследования. держащихся в мокроте микроорганизмов, кон Посев мокроты (отмытых гнойных комочков) таминирующих ее при прохождении через верх производят на ряд питательных сред: 5 % кровя- ние дыхательные пути и ротовую полость. Для ной агар (лучше использовать баранью или кро- разделения этой микрофлоры от микроорганиз личью кровь), среду Эндо, среду Левинталя, сре- мов нижних дыхательных путей используют ряд ду для анаэробов. Посев производят шпателем, тестов. С помощью количественного метода равномерно растирая комочек мокроты по по- определяют содержание в мокроте определен ного вида микроорганизмов, исходя из того, что микроорганизмов, не относящихся к естествен возбудитель находится в мокроте в значительно ной микрофлоре верхних дыхательных путей, большем количестве, чем микробы-контаминан- или необычно большое количество микробов ка 6 ты. Критическое число составляет 10 Ч10. Рост кого-либо вида указывает на их этиологическую микробов в меньших разведениях расценивают значимость в заболевании.

как контаминацию мокроты микрофлорой верх них дыхательных путей или показатель бакте 7.3.5. Цереброспинальная жидкость рионосительства. Следует, однако, учитывать, что при проведении антибактериальной терапии количественное обсеменение мокроты возбудите- Микробиологическое исследование церебро лем может уменьшаться. спинальной жидкости (ЦСЖ) необходимо в слу Определенное значение имеет вид выделен- чаях, подозрительных на менингит, а также при ных микроорганизмов. Str. viridans, Coryne- коматозных состояниях и неврологических симп bacterium, Neisseria, Staph. epidermidis состав- томах неясного генеза.

ляют нормальную микрофлору носоглотки. По- ЦСЖ в норме стерильна, поэтому положи этому как возбудителей заболевания их следует тельный результат микробиологического иссле учитывать только в случаях, когда их количество дования Ч это всегда расшифровка этиологи превышает обычное. Другие виды микроорга- ческого диагноза, своевременность постановки низмов, находящихся в мокроте в разведениях, которого может в ряде случаев предотвратить превышающих 10, следует учитывать и изучать смертельный исход заболевания.

их чувствительность к антибиотикам. Эт и о л о г и я менингитов очень разнооб Большое значение имеет первичная микро- разна. Наиболее часто из ЦСЖ выделяют сле скопия мазка из мокроты. Обнаружение в мазке дующие микроорганизмы: а) при гнойных ме видов микроорганизмов, не выросших на пита- нингитах Ч N. meningitidis, S. pneumoniae, тельных средах, часто свидетельствует о неадек- S. aureus, Streptococcus групп А, В, D, H. inf ватности этих сред. Поэтому нужно либо пред- luenzae, E. coli, Klebsiellae, Proteus, Pseudomo принять повторную попытку выделить эти куль- nas, Achromobacter, L. monocytogenes и др., туры, либо в ответе лаборатории указать на их б) при асептических менингитах Ч М. tuberculo обнаружение в микроскопическом препарате.

sis, Leptospira, Cryptococcus neoformans, Toxo Следует также учитывать повторность обнару- plasma gondii, вирусы.

жения и нарастание количества определенного Вз я т и е пр о б ЦСЖ должно проводить вида микроорганизмов в клиническом образце в ся при строжайшем соблюдении правил асепти процессе заболевания.

ки, исключающих кожную и воздушную конта минацию ЦСЖ. Первые капли ЦСЖ (до 1 мл) Ли т е р а т у р а. Селина Л. Г., Дорожко собирают в пробирку и направляют на цитоло ва И. Р. Количественный метод исследований в гическое исследование. Для посева используют диагностике неспецифических заболеваний лег следующую порцию жидкости, которую соби ких.Ч Журн. микробиол., 1980, № 2, с. 102Ч рают в стерильную пробирку в количестве 2Ч 106.

5 мл. При подозрении на туберкулезную или грибковую этиологию менингита следует брать 7.3.4. Отделяемое при инфекциях не менее 10 мл ЦСЖ.

Учитывая, что один из ведущих возбудителей носа и зева менингита Ч N. meningitidis - чрезвычайно Микрофлору верхних дыхательных путей чувствителен к охлаждению, взятые пробы изучают при заболеваниях носа и зева, а также должны быть доставлены в лабораторию как у больных пневмонией, не отделяющих мокроту можно скорее, а до этого сохраняться строго при и при обследовании на бактерионосительство. 37 С. Во всех случаях, подозрительных на ме Отделяемое из носа берут сухим стерильным нингит, помимо ЦСЖ, следует брать для микро ватным тампоном, который вводят в глубь поло- биологического исследования материал из пред сти носа. Материал из носоглотки берут стериль- полагаемого первичного очага инфекции: мазки ным заднеглоточным тампоном, из зева Ч из носоглотки, среднего уха, ран после нейрохи увлажненным ватным тампоном. Тампоны поме- рургических и других оперативных вмеша щают в стерильные пробирки и доставляют в ла- тельств, производить посев крови.

бораторию в максимально короткий срок. Хра- Пр о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я. До нить тампоны с материалом следует в холодиль- ставленную в лабораторию пробу ЦСЖ центри нике не более 2Ч3 ч. Посев тампоном произво- фугируют при 2500Ч3000 об/мин 10 мин. Над дят на чашки Петри с 5 % кровяным агаром, ко- осадочную жидкость отсасывают стерильной торые инкубируют 18Ч24 ч при 37 С. Просмат- пипеткой в пробирку и используют для биохими ривают выросшие колонии, выделяют чистые ческого и серологического исследования. Остав культуры, идентифицируют их, определяют чув- шийся осадок и около 0,5 мл жидкости исполь ствительность к антибиотикам. Из материала, зуют для приготовления мазков и посева. Гной оставшегося на тампоне, делают мазки на стек- ный ликвор можно использовать для исследова ле, которые окрашивают по Граму и Нейсеру. ния без предварительного центрифугирования.

При оценке результатов исследования сле- До конца подготовительных операций ЦСЖ дует учитывать качественный и количественный хранят при 37 С. Из осадка делают 2 тонких состав естественной микрофлоры, содер- мазка на стекле, окрашивают по Граму и мети жащейся в клиническом образце: обнаружение леновым синим и немедленно микроскопируют.

Нередко, особенно при нелеченых случаях ме 7.3.6. Отделяемое нингита, по типичной морфологии могут быть женских половых органов выявлены такие возбудители, как N. meningi tidis, S. pneumoniae, H. infl uenzae (полиморф- Воспалительные заболевания половых орга ные грамотрицательные коккобациллы). Обна- нов могут быть вызваны микрофлорой, присут ружение в мазках неспоровых четко грамполо- ствующей в норме в этих органах, а также при жительных коротких толстых палочек застав- восходящем, гематогенном, лимфогенном рас ляет заподозрить L. monocytogenes в качестве пространении микроорганизмов из других орга возбудителя менингита. Результаты первичной нов и тканей.

микроскопии служат основанием предваритель- Вз я т и е м а т е р и а л а на ис с ле д о ной диагностики, которая немедленно сообщает- в а н и е проводит врач Ч акушер-гинеколог.

ся лечащему врачу и определяет ход дальней- Вульва, преддверие влагалища. Отделяемое шего исследования (набор питательных сред, берут стерильным ватным тампоном. При вос условия культивирования).

палении большой железы преддверия (барто Посев ЦСЖ производят на следующие пита- линовой железы) производят ее пункцию или тельные среды. при вскрытии абсцесса железы гной берут сте 1. По 1Ч2 капли осадка засевают петлей на рильным ватным тампоном.

сывороточный агар (инкубация в нормальной Влагалище. После введения зеркала и атмосфере), на две чашки с 5 % кровяным ага- подъемника материал для исследования берут ром (инкубация в анаэробных условиях и при стерильным ватным тампоном из заднего свода 10% содержании СО2), шоколадный агар, в или с патологически измененных участков сли среды для анаэробов. зистой. Материал для посева должен быть взят 2. К осадку, оставшемуся в пробирке, добав- до проведения мануального исследования.

ляют около 5 мл сывороточного полужидкого Шейка матки. После обнажения шейки мат агара (среда обогащения). Эту манипуляцию ки в зеркалах влагалищную часть ее тщательно выполняют у пламени горелки, обжигая края обрабатывают ватным тампоном, смоченным обеих пробирок, выливая расплавленный и стерильным изотоническим раствором натрия остуженный полужидкий агар на осадок хлорида или водой. После этого тонкий ватный тампон осторожно вводят в шеечный канал (не ЦСЖ.

Все питательные среды должны быть свеже- касаясь стенок влагалища) и берут материал приготовленными (не ранее чем за сутки до по- для исследования.

сева) и прогреты в термостате непосредственно Матка. Правильное взятие материала из перед посевом.

матки может быть выполнено только при исполь Проверку роста проводят после ночной инку- зовании специальных инструментов типа шпри бации и в дальнейшем ежедневно до появления ца-аспиратора, имеющего на зонде наружное роста. При отсутствии роста в течение 7 дней вы покрытие. После прохождения зондом церви дается отрицательный результат. кального канала в полости матки раскрывают При появлении роста на какой-либо из сред его наружную оболочку и аспирируют содержи делают мазки, окрашивают по Граму, проводят мое. После этого закрывают наружную оболочку посевы на плотные питательные среды для выде- и выводят зонд из матки.

ления культур и их идентификации.

Придатки матки. При воспалительном про Особенности исследования ликвора при ту- цессе в придатках матки получение материала беркулезе, сифилисе, листериозе, при менинги- из очага инфекции возможно только при опера тах, вызванных грибами и простейшими,Ч тивном вмешательстве (гной, экссудат, кусочки см. соответствующие методические руко- органов) или при проведении диагностической водства. пункции опухолевидных образований в малом Оце нка ре з у ль т а т ов. Как отмеча- тазу, проводимой через влагалищные своды лось, в подавляющем большинстве случаев вы- (при этом следует учитывать возможность кон деление микроорганизмов из ЦСЖ свидетельст- таминации пробы влагалищной микрофлорой).

вует об их этиологической роли. В редких слу- В некоторых случаях, если очаг инфекции в при чаях выделение бактерий условно-патогенной датках матки сообщается с полостью матки, группы может быть связано с контаминацией могут оказаться полезными повторные исследо ликвора при его взятии. В таких случаях, чтобы вания отделяемого цервикального канала при избежать диагностической ошибки, следует по- однотипных результатах исследования.

вторить исследование. В случаях менингита, вы- Взятый материал должен быть доставлен в званного условно-патогенными видами, лечеб- лабораторию в ближайшие 1Ч2 ч.

ные мероприятия не оказывают столь быстрого При подозрении на анаэробную инфекцию посев должен быть выполнен сразу же после стерилизующего эффекта, как при патогенных возбудителях. Кроме того, должна быть прове- взятия материала.

дена количественная оценка бактериального ро- Пр о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я. Гото ста. вят мазки для бактериоскопии. Материал равно Отсутствие микрофлоры в первичных маз- мерно распределяют на стекле мягкими движе ках ЦСЖ и отсутствие роста (или рост единич- ниями, не применяя грубого втирания и резких ных колоний) на плотных питательных средах штриховых движений инструментом. Такая тех при наличии роста в жидких питательных средах ника выполнения мазков позволяет клеткам рас могут свидетельствовать о нарушении правил пределяться слоями, не повреждает их, сохра асептики при взятии ЦСЖ. няет истинное распределение и количественное соотношение компонентов исследуемого мате- можно использовать следующие критерии при риала. После высушивания при комнатной тем- штриховом посеве тампоном на '/2 чашки Петри пературе мазки покрывают чистым предметным с кровяным агаром:

стеклом (или помещают в чашку Петри) и от- I Ч очень скудный рост Ч на плотных сре правляют в лабораторию. Хранение влажного дах роста нет, рост в жидкой питательной среде;

мазка, сдавленного между двумя стеклами, не- II Ч небольшое количество Ч на агаре до допустимо. колоний микроорганизмов определенного вида;

В лаборатории микроскопируют первичные III Ч умеренное количество Ч на агаре 11 Ч мазки после окраски их по Граму, метиленовым 100 колоний;

синим, по Романовскому (влагалищные мазки). IV Ч большое количество Ч на агаре более Материал, взятый на тампон, засевают 100 колоний.

штрихами на кровяной и шоколадный агар. Па- Рост I Ч II степени чаще всего свидетельст тологический материал, доставленный в пробир- вует о контаминации, III Ч IV степени Ч об ках (гной, содержимое тубоовариальных обра- этиологической роли данного микроорганизма.

зований), засевают по 0,1 мл, растирая шпате лем по поверхности кровяного и шоколадного 7.3.7. Содержимое агара. Производят также посевы в сахарный бульон и среды для выделения анаэробов. Из желудочно-кишечного тракта оставшегося материала готовят мазки для мик роскопии. Кусочки тканей размельчают, соблю- Возбудители, выделяемые при воспалитель дая стерильность, в микроразмельчителе тканей ных процессах различной локализации, в основ или в ступке с песком и засевают полученную ном являются представителями нормальной взвесь на несколько чашек с плотными средами микрофлоры желудочно-кишечного тракта чело (кровяной агар, молочно-солевой агар, среду века. Для суждения об этиологической роли ус Эндо), а также в сахарный бульон и среды для ловно-патогенных микроорганизмов при различ выделения анаэробов. ных желудочно-кишечных расстройствах, в том Посевы инкубируют при температуре 37 С числе при диагностике кишечного дисбактерио аэробно, а также в анаэростате. При появлении за, важно знать критерии качественного и коли роста на плотных средах проводят подсчет числа чественного соотношения видов микробов в раз колоний, количественно оценивая соотношение личных отделах желудочно-кишечного тракта.

видов в данной микробной ассоциации. При по- У здорового человека микрофлора желудоч мутнении сахарного бульона делают мазок на но-кишечного тракта чрезвычайно разнообраз стекле (окраска по Граму) и высевы на плотные на, насчитывает более 60 видов и родов микро питательные среды (кровяной агар, молочно-со- организмов.

левой агар, среда Эндо). Вз я т ие м а т е р и а л а на ис с ле до Оце нк а р е з у л ь т а т о в ми к р о б и о - в а ние. Полость рта. Материал для исследо л о г и ч е с к о г о исследования половой систе- вания берут стерильным ватным тампоном до мы представляет определенные трудности, так начала лечения химиопрепаратами, до приема как чаще всего регистрируют рост нескольких пищи, не ранее чем через 4Ч5 ч после местного видов микроорганизмов условно-патогенной лечения. Обычно воспалительно измененная об группы. В каждом конкретном случае следует ласть видна на глаз (гиперемия, отек, экссуда учитывать совокупность признаков: данные мик- ция, гной, пленки). При наличии свищей (напри роскопии первичных мазков исследуемого мате- мер, при актиномикозе языка) берут для иссле риала, результаты прямого посева на плотные дования отделяемое свища или биопсированный среды (количественная оценка роста различных материал. Из десневых карманов материал по видов), а также клинические проявления забо- лучают стерильной кюреткой или тонким ватным левания и анамнез больной. Так, при исследова- тампоном. Из зубного канала Ч стерильной иг нии материала из закрытых полостей (пунктаты лой-адсорбентом, которую вставляют в канал опухолевидных образований в малом тазу, око- с соблюдением правил асептики примерно на лоплодные воды), а также органов, в норме сте- I минуту, затем извлекают и помещают в пита рильных (содержимое полости матки, кусочки тельную среду.

органов, тканей, удаляемых при полостных опе- Пищевод и желудок. Материал для посева рациях), рост микроорганизмов, особенно моно- получают при эзофагоскопий и гастроскопии.

культуры в сочетании с находками микроорга- Рвотные массы направляют на бактериологиче низмов сходной морфологии в первичных маз- ское исследование, несмотря на то что собирают ках, с определенностью свидетельствует об их их в нестерильную посуду. То же относится к этиологической роли в воспалительном про- промывным водам желудка.

цессе. Тонкий кишечник. Материал берут через же При исследовании материала из мест, в нор- лудок с помощью специально сконструирован ме имеющих разнообразную микрофлору, боль- ного зонда, который открывают на определенном шое значение принадлежит количественной участке, и после взятия содержимого снова за оценке различных видов бактерий, выросших крывают.

при первичном посеве на плотные среды, одно- Толстый кишечник. Исследованию подвер типности результатов при повторных исследова- гают испражнения, забирая материал стериль ниях, а также клиническим данным.

ной деревянной палочкой, и помещают в пробир Для ориентировочной оценки количествен- ку. При необходимости изучения микрофлоры ного соотношения в микробных ассоциациях воспалительно измененных участков слизистой оболочки взятие содержимого проводят при рек- Та блица 48. Критерии нормы кишечной тороманоскопии с пораженных участков. Мате- микрофлоры [по Эпштейн-Литвак Р. В. и Виль риал должен быть доставлен в лабораторию в шанской Ф. Л., 1977] течение 1 ч, так как при более длительном хране Микрофлора Норма нии значительно нарушаются экологические взаимоотношения между видами.

Же л ч ь получают при зондировании две- Патогенные микробы семейства надцатиперстной кишки. Исследуют все 3 пор- кишечных ции желчи. Общее количество кишечной па Пр о в е д е н и е ис с л е д о в а ния. Для лочки, млн/г 300Ч посева патологического материала из различных Кишечная палочка со слабо вы отделов желудочно-кишечного тракта используют раженными ферментативными следующие плотные питательные среды: сре- свойствами, % До да Эндо, кровяной агар, молочно-солевой агар, Лактозонегативные энтеробак агар Сабуро. Посев на набор сред производят терии, % шпателем, используя определенную дозу патоло- Гемолизирующая кишечная па гического материала (или его разведения), лочка, % чтобы определить количество колоний различ- Кокковые формы в общей сумме ных видов микроорганизмов в данной пробе. микробов, % До Инкубацию посевов производят в аэробных Гемолизирующий стафилококк условиях при 37 С (посев на среде Сабуро, кро- по отношению ко всем кокковым ме того, и при комнатной температуре). При по- формам, % явлении роста подсчитывают число колоний раз- Бифидобактерии 10-7 и выше личной морфологии и отсевают по 2Ч3 колонии Микробы рода Протея каждого вида для дальнейшей биохимической Кандида идентификации и серологического типирования.

При диагностике кишечного дисбактериоза необходим количественный учет как аэробной, так и анаэробной микрофлоры кишечника. Ме- При исследовании желчи могут быть получе тодика исследования описана в методических ны не совпадающие результаты в трех пробах, рекомендациях Р. В. Эпштейн-Литвак и однако на этом основании нельзя надежно су Ф. Л. Вильшанской Бактериологическая диаг- дить о локализации воспалительного процесса.

ностика дисбактериоза кишечника (М., 1977) Прогностически неблагоприятно расценивают и в книге В. Г. Петровской и О. П. Марко Мик- выделение из желчи различных энтеробактерий (чаще эшерихий, клебсиелл, протея), синегной рофлора человека в норме и патологии (М., ной палочки, бактероидов, особенно в количест 1976).

ве более 103 клеток в 1 мл.

Оце нка р е з у л ь т а т о в. В связи с тем Таким образом, выделение в большом коли что исследованию подвергают пробы, в норме содержащие разнообразную микрофлору, веду- честве условно-патогенных бактерий из содер жимого желудка, тонкой кишки, в пробах жел щее значение принадлежит количественной оценке различных видов в ассоциациях, выде- чи является прогностически неблагоприятным, ляемых из патологического материала, и срав- служит показателем необходимости проведения соответствующих лечебных мероприятий, осо нению полученных результатов с нормальным бенно при предоперационной подготовке составом биоценоза данной области.

Для установления этиологической роли вы- больных.

деленных микроорганизмов необходимо устано вить значительное преобладание данного вида в 7.3.8. Отделяемое ран и выпотов ассоциации или отметить присутствие в очаге инфекции видов микроорганизмов, несвойствен Раны. Микробиологическое исследование ных данному месту.

Микробиологическая диагностика кишечного ран имеет значение для постановки этиологи ческого диагноза в каждом конкретном случае дисбактериоза основана на количественной оценке содержания различных видов облигат- заболевания, а также важно в эпидемиологиче ной и факультативной групп в микроценозе тол- ском плане, так как раневая инфекция является гтого кишечника. При дисбактериозе резко на- ведущей формой проявления госпитализма в рушается равновесие состава микрофлоры. Про- настоящее время.

Практически все УПМ могут вести к разви исходит значительное снижение количества облигатных анаэробных видов и в первую оче- тию раневой инфекции, особенно на фоне ослаб ления защитных механизмов организма челове редь бифидофлоры и увеличение количества ка. В настоящее время ведущая роль в этиоло аэробных видов, в частности эшерихий, число которых может превышать 10" клеток/г фека- гии раневой инфекции принадлежит золотисто му стафилококку и грамотрицательным палоч лий. Параллельно увеличивается содержание различных видов факультативной группы, кото- кам семейств Enterobacteriaceae и Pseudomo рые в некоторых случаях становятся преобла- nadaceae. Кроме того, на фоне все большего дающими. Критерии нормы микрофлоры толсто- использования антибиотиков широкого спектра го кишечника, согласно методическим рекомен- действия увеличивается значение анаэробных неспорообразующих бактерий, грибов.

дациям, приведены в табл. 48.

Вз я т и е м а т е р и а л а на ис с ле до- после посева патологического материала. При в а ние. Раневое отделяемое берут стерильными микроскопии мазков отмечают морфологию и ко ватными тампонами из глубины раны до обра- личество микроорганизмов. Выделяемые при ботки ее антисептическими растворами. Там- этом особенности могут внести коррекцию в ход поны срочно направляют в бактериологическую исследования Ч использование добавочных пи лабораторию. При наличии в ране дренажа тательных сред.

отделяемое берут стерильным шприцем, из кото- Исследование выпотов. Все выпоты, подозри рого оно переносится с соблюдением правил тельные на экссудат, следует направлять на асептики в стерильную пробирку или анаэроб- микробиологическое исследование. Соблюдая ный флакон. Удаляемые при обработке раны правила асептики, пунктируют иглой полость и кусочки тканей отправляют в лабораторию в отсасывают содержимое с помощью шприца. Из стерильных чашках Петри.

шприца патологический материал переносят у Пр о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я. По- пламени горелки в стерильный анаэробный фла сев раневого отделяемого непосредственно с кон и отправляют в лабораторию.

тампона производят на питательные среды в сле- В лаборатории прозрачную жидкость цент дующем порядке.

рифугируют 15Ч20 мин при 3000 об/мин и оса 1. Кровяной агар (посев штрихом на ' /2 док используют для посева и приготовления маз чашки Петри). ков. При гнойном характере проб готовят тонкие 2. Сахарный бульон. мазки для микроскопии без предварительного 3. Среда для анаэробов. Тампон оставляют центрифугирования. Посев проб производят на в пробирке. кровяной агар, сахарный бульон, среду для Жидкие пробы засевают на плотную среду анаэробов. Кроме того, используют специальные петлей. Предпочтительнее производить посев по питательные среды в зависимости от особенно 0,1 мл разведенной до 10-' и неразведенной про- стей источника выпота. Так, плевральный выпот бы, растирая материал по поверхности пита- чаще всего наблюдается у больных с туберку тельной среды шпателем. В жидкие питательные лезом легких, поэтому после центрифугирова среды посев производят пастеровской пипеткой. ния осадок дополнительно засевают на среды При посеве на анаэробы пипетку с исследуемым для культивирования туберкулезной палочки материалом опускают на дно пробирки, не до- или заражают патологическим материалом мор пуская попадания пузырьков воздуха в среду. скую свинку. При эмпиемах часто возбудителем Кусочки тканей режут стерильными ножни- может быть пневмококк, стрептококк группы А, цами, взвешивают в стерильной чашке Петри и золотистый стафилококк, Haemophilus influen измельчают в стерильной ступке с питательным zae, анаэробы. Следовательно, в набор пита бульоном из расчета 1 мл бульона на 1 г ткани. тельных сред должны быть включены сыворо Затем делают десятикратные разведения взвеси точные среды, шоколадный агар, среды для ана до 10-3 (0,9 мл бульона и 0,1 мл взвеси=10-';

эробов. При исследовании синовиальной жидко 0,9 мл бульона и 0,1 мл разведения 10-' = 10-2 сти следует использовать питательные среды для и т. д.). По 0,1 мл каждого разведения засевают выделения гонококка.

на кровяной агар. Оце нк а р е з у л ь т а т о в. Интерпрета Подсчет КОЕ/г ткани производят с учетом ция полученных данных обычно не представляет числа выросших колоний и сделанных разве- трудностей, так как при условии соблюдения дений. правил асептики во время взятия патологическо Посевы инкубируют аэробно и анаэробно при го материала и из закрытых полостей, и из глу 37 С. Посевы просматривают ежедневно. При бины гнойных ран (очаги инфекции) выделен появлении роста на плотной среде изучают мор- ные микроорганизмы являются возбудителями фологию колоний. Дается количественная оцен- данного инфекционного процесса.

ка роста. В случаях выявления колоний разли- При выделении ассоциаций микроорганиз чной морфологии подсчитывают число колоний мов из раневого отделяемого ведущее значение каждого вида микроорганизмов. При этом вы- в течение раневого процесса следует отдавать являют ведущий вид в ассоциации. По 2Ч3 ко- видам, количественно преобладающим в данном лонии каждого типа отсевают на соответствую- микроценозе. Имеются следующие критерии ко щие питательные среды для дальнейшей иден- личественной оценки микробного роста при пря тификации. мом штриховом посеве тампоном раневого отде При появлении роста в жидких питательных ляемого на '/2 чашки Петри с плотной питатель средах готовят мазки (окраска по Граму), с са- ной средой:

харного бульона производят посевы на кровяной I Ч очень скудный рост Ч рост только в агар, среду Эндо, молочно-солевой агар. Отри- жидких средах, на плотной питательной среде цательный результат исследования выдают че- рост отсутствует;

рез 7 сут при отсутствии роста на всех пита- II Ч небольшое количествоЧна плотной тельных средах. среде рост до 10 колоний;

Ми к р о с к о п и я ма з к о в р а н е в о г о III Ч умеренное количество Ч на плотной о т д е л я е мо г о. Для приготовления мазков среде рост от 11 до 100 колоний;

отделяемого ран следует использовать отдель- IV Ч большое количество Ч рост на плотной ные тампоны, которыми забирают патологиче- среде более 100 колоний.

ский материал и переносят его на стекло. Мазки Показано, что уровень обсемененности тка окрашивают по Граму. Если в лабораторию до- ней в ране, равный 105 КОЕ/г, является крити ставлен только один тампон, то мазок готовят ческим. Превышение этого уровня указывает на большую вероятность развития гнойной инфек- бенно в случаях хронического или катарального ции и возможность генерализации инфекцион- конъюнктивита, наиболее выраженного в на ного процесса. При обсемененности менее ружных углах глаз, следует использовать среду 105 КОЕ/г ткани раны заживают без явлений Леффлера для выделения моракселл.

нагноения. Все питательные среды после посева на них Количественная оценка микробной обсеме- отделяемого инкубируют при 37 С 24Ч48 ч.

ненности жидких проб (КОЕ/мл) имеет особое Часто рост появляется только через 48 часов.

значение при повторных исследованиях, так как При появлении роста делают мазки на стекле, характеризует динамику течения гнойно-воспа- которые окрашивают по Граму и производят лительного процесса, являясь показателем эф- высевы с жидких питательных сред на плотные фективности терапевтических мероприятий, в среды: кровяной агар, среду Эндо, молочно-со частности химиотерапии. левой агар, агар Сабуро. Другие среды исполь зуют при соответствующих показаниях.

Оц е н к а р е з у л ь т а т о в. Выделение из 7.3.9. Отделяемое глаз и ушей патологического материала истинно патогенных микроорганизмов несомненно свидетельствует Глаза. Воспалительные заболевания глаза об их этиологической роли в воспалительном чаще всего локализуются на конъюнктиве, сли- процессе.

зистой оболочке век, слезном мешке, реже затра- Обнаружение микроорганизмов условно-па гивают роговицу. Инфекция внутренних сред тогенной группы при условии соблюдения пра глазного яблока может развиться в результате вил асептики в момент взятия материала сви гематогенного ее распространения при септиче- детельствует об их участии в воспалительном ском процессе или после операций на глазном процессе тканей глаза или является показате яблоке, особенно у ослабленных больных после лем высокого риска развития воспалительного длительных курсов антибиотике- и гормонотера- процесса в ближайшем будущем, особенно в слу пии. Ведущую роль как возбудители занимают чаях, когда больным предстоят оперативные представители условно-патогенной группы мик- вмешательства на органе зрения.

роорганизмов. Уши. В з я т и е м а т е р и а л а для микро Взятие материала для микробиологического биологического исследования при срединном исследования производят до местного приме- отите проводит врач-отоларинголог, используя нения антибиотиков и других медикаментов. Его стерильные инструменты. Отделяемое берут сте выполняет врач-окулист в присутствии лаборан- рильным ватным тампоном. Наиболее достовер та-микробиолога, который сразу производит по- ные результаты исследования получают при сев взятого материала на принесенные пита- пункции среднего уха через непрорвавшуюся барабанную перепонку. При наружном отите тельные среды.

При наличии гнойного отделяемого исполь- следует обработать кожу прилегающих областей зуют стерильные ватные тампоны, которыми раствором антисептика, чтобы при взятии мате забирают гной с внутренней поверхности нижне- риала не было контаминации тампона сапро го века к внутреннему углу глазной щели. Необ- фитной микрофлорой.

ходимо следить, чтобы ресницы при моргании не Пр о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я. Ма касались тампона (придерживать веки руками). териал засевают на кровяной агар, шоколадный При отсутствии видимого гноя следует поль- агар (штриховой посев тампоном, которым бра зоваться тампонами, смоченными стерильным ли отделяемое), а также на сахарный бульон и изотоническим раствором, чтобы собрать на там- среду для анаэробов. Проводят микроскопию пон как можно больше скудного отделяемого. первичных мазков отделяемого, окрашенных по Секрет из слезного мешка берут стерильным Граму.

ватным тампоном после осторожного массажа. Инкубацию посевов на жидких средах прово Материал с роговицы берут платиновой пет- дят в аэробных условиях при 37 С, кровяной лей после местного обезболивания. Соскобы с агар Ч в атмосфере с 5 % СО2. Посевы про конъюнктивы и роговицы для выявления эозино- сматривают ежедневно. Отрицательный резуль филов и телец включения производят инструмен- тат исследования выдается при отсутствии ро том, с которого материал переносят на предмет- ста в течение семи суток. При появлении роста ные стекла. Мазки отделяемого на стекле для на плотных питательных средах проводят его ко первичной микроскопии выполняют параллельно личественную оценку и отсевают 2Ч3 колонии со сбором материала для микробиологического различной морфологии для последующей иден исследования. тификации. С жидких сред делают мазки на Пр о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я. При стекле для микроскопии (окраска по Граму) и скудном отделяемом используют только жидкие производят высевы на кровяной агар, молочно питательные среды, такие, как среды накопле- солевой агар, среду Эндо.

ния Ч сахарный бульо.н и среда для анаэробов. Оц е н к а р е з у л ь т а т о в. При острых При более ' обильном отделяемом необходимо воспалительных процессах обычно высевают в использовать кровяной агар, сывороточный большом количестве монокультуры микроорга агар, шоколадный агар. При подозрении на го- низмов и их этиологическая значимость не вы нококковую или дифтерийную этиологию конъюн- зывает сомнения. Более трудна интерпретация ктивита используют соответствующие среды. результатов микробиологического исследования При выявлении в первичных мазках толстых при хронических воспалительных процессах, ко коротких грамположительных диплобацилл, осо- гда выявляют ассоциации бактерий. В таких случаях важна количественная оценка роста консистенции пасты. Затем производят посев на различных видов в ассоциации при первичном необходимые среды. После отстаивания пробы посеве патологического материала на плотные часть супернатанта используют для приготов питательные среды. Виду, преобладающему ко- ления мазков, которые окрашивают по Граму и личественно, по-видимому, принадлежит веду- ЦилюЧНильсену, и для внутрибрюшинного за щая роль в этиологии инфекционного процесса, ражения морских свинок и мышей. Состояние и характеристика биологических свойств этого животных проверяют ежедневно и после их вида (в том числе антибиограмма) наиболее смерти проводят микробиологическое исследова важна для выбора тактики лечебных меро- ние органов.

приятий. Выбор питательных сред для посева зависит от характера патологического процесса, его локализации, подозреваемых возбудителей.

В ряде случаев следует помнить о редких пато 7.3.10. Материал, генных микроорганизмах и использовать специ полученный на операции и во время альные среды. Не может быть однотипного патологоанатомического исследования перечня сред для всех случаев, но такие среды, как кровяной агар, шоколадный агар, среды для выделения анаэробов, микобактерий и грибов, следует использовать всегда.

Материал, полученный на операции. В ряде случаев материал из очага инфекции может Материал, полученный во время патолого быть получен только при оперативном лечении. анатомического исследования. Посмертная ин Вз я т и е м а т е р и а л а на ис с ле до- вазия тканей и органов микроорганизмами Ч в а ни е. Оперирующий врач берет кусочки нормальными обитателями кишечника и слизи патологически измененных тканей с помощью стых оболочек значительно снижает ценность стерильных инструментов. Из закрытых флюкту- бактериологического исследования трупного ирующих образований содержимое аспирируют материала. Большое значение в получении с помощью толстой иглы и шприца. Взятый ма- достоверных результатов принадлежит соблю териал хирург должен поместить в стерильную дению стерильности при взятии проб. Значитель посуду и направить в лабораторию. ное число ложноположительных результатов В ряде случаев с операций поступает в лабо- материала аутопсий связано с контаминацией раторию материал, контаминированный нор- проб персоналом, проводящим вскрытие.

мальной микрофлорой. Такие, например, пробы, Кровь для посева берут стерильным шприцем как удаленные небные миндалины, в лаборато- после прижигания раскаленным шпателем пред рии следует обработать прижиганием или про- сердия или желудочка сердца. По 5Ч10 мл греванием в кипящей воде в течение 5Ч10 с для крови засевают тут же в сахарный бульон.

снятия поверхностной контаминации. Затем Пробы других тканей получают после прижига ткань рассекают стерильным скальпелем и ния поверхностей, проходя стерильным тампо используют для посева центральную часть. ном или пастеровской пипеткой через обработан При микробиологическом исследовании тка- ную зону. Предпочтительным следует считать ней следует учитывать результаты срочного взятие блоков тканей около 1 см3, которые выре гистологического исследования удаленных тка- зают из обожженной зоны с помощью стерильных ней. Обращают внимание на характер гисто- инструментов. Пробы помещают в стерильные патологии исследуемых тканей Ч имеется вос- чашки Петри и доставляют в лабораторию. При палительный или неопластический процесс. Если подозрении на бактериальный эндокардит часть доказан невоспалительный характер процесса, рыхлых разрастаний извлекают стерильными отпадает необходимость в микробиологическом инструментами и помещают в стерильную чашку исследовании. Если подтверждается наличие Петри. В лаборатории пробы тканей промывают воспалительного процесса, в некоторых случаях стерильным изотоническим раствором натрия результаты гистологического исследования хлорида и размельчают в размельчителе тканей могут послужить основанием к отбору с добавлением питательного бульона. Из гомо определенных питательных сред и методик гената готовят мазки, красят по Граму. Произ исследования. водят посевы гомогената на кровяной агар, шо Пр о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я. Жид- коладный агар, на среды для культивирования кие пробы должны быть проверены на наличие анаэробов и при показаниях на другие питатель гранул и подвергнуты микроскопии в мазках, ные среды. Инкубацию сред проводят аэробно окрашенных по Граму. Кусочки тканей перед и в атмосфере СО2 при 37 С, просматривая посевом тщательно размельчают. При подозре- посевы ежедневно. При отсутствии роста отри нии на Cryptococcus neoformans не следует цательный результат исследования выдают растирать ткани, так как при такой обработке через 7 сут (за исключением тех возбудителей, эти микроорганизмы теряют жизнеспособность. которые требуют более длительного куль Ткани мелко режут ножницами и используют тивирования Ч микобактерий, патогенные большие дозы для посева на среды для культи- грибы).

вирования грибов. После этого нарезанную Ткани всех плодов и новорожденных, погиб ткань переносят в стерильный размельчитель ших при подозрении на инфекцию, должны быть тканей и после добавления небольшого количе- исследованы на листерии. Наиболее часто эти ства питательного бульона или изотонического микроорганизмы выделяют из мозговой ткани, раствора натрия хлорида размельчают пробу до печени, селезенки.

7.4. ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ Ч ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 7.4.1. Грамотрицательные аэробные, Се ме й с т в о э н т е р о б а к т е р и й факультативно-анаэробные палочки (Enterobacteriaceae) объединяет трибы, роды, виды (табл. 50) грамотрицательных палочек средних размеров среднего размера, подвижных и неподвижных, Род п с е в д о мо н а с (Pseudomonas) обладающих и необладающих капсулой, не объединяет грамотрицательные средних разме- имеющих диагностических включений и не обра ров, прямые или слегка изогнутые, подвижные зующих спор. Они хорошо растут на питатель палочки, равномерно окрашенные, не имеющие ных средах при температуре 37 3 С и не тре диагностически значимых включений, спор и буют дополнительных питательных добавок в характерного расположения. На плотных пита- виде специальных факторов роста.

тельных средах представители рода формируют Энтеробактерий обладают высокой фермен сероватые, непрозрачные, плоские с неровными тативной активностью в отношении углеводов, краями колонии. Многие виды вырабатывают близких к углеводам источников углерода, спир разного цвета пигмент. Для P. aeruginosa там, органическим кислотам и аминокислотам.

характерно образование сине-зеленого пигмента На основании разнообразия набора ферментов и своеобразного запаха жасмина. На кровя- к вышеуказанным субстратам сконструированы ном агаре наблюдается хорошо выраженная диагностические среды для выделения (среды гемолитическая активность. Являясь строгими Эндо, Левина, Плоскирева, висмутсульфит аэробами, бактерии окисляют углеводы. Пред- агар и т. д.) и многокомпонентные среды для ставители рода подразделены на большое коли- первичной дифференциации выделенных чество видов. P. mallei и P. pseudomallei Ч воз- культур.

будители особо опасных заболеваний (сап, мие- Отсутствие фермента оксидазы при способ лоидоз). ности редуцировать нитраты является характер Дифференциальные признаки видов псевдо- ным признаком, отличающим энтеробактерий монас, которые могут иметь значение в этиоло- от представителей других семейств и родов этой гии гнойно-воспалительных процессов человека, группы бактерий, имеющих значение в патоло представлены в табл. 49. Среди них P. aerugi- гии человека.

nosa имеет наибольший удельный вес.

Первоначально изучают особенности коло При росте P. aeruginosa на скошенной части ний, выросших на первичных средах выделения многокомпонентных сред типа Олькеницкого, (табл. 51). Для проведения идентификации ко Клиглера образуется темный пигмент с серебря- лонии засевают на одну из плотных многоком ным блеском без изменения цвета в столбике.

понентных дифференциально-диагностических Для внутривидовой идентификации P. aeru- сред (среда Олькеницкого с двумя, тремя угле ginosa применяют серологические методы водами, среда Клиглера, трехсахарный желези исследования с групповыми и факторными диаг- стый агар типа TSI, лизин-железистый агар, ностическими сыворотками в реакции агглюти- среда Ресселя с мочевиной) и цитратную среду нации на стекле. Симонса.

Та б л ица 49. Внутриродовая дифференциация некоторых видов псевдомонас Пр и м е ч а н и я. 1 Ч штаммовые различия;

2 Ч замедленная реакция.

Та б л и ц а 50. Классификационная схема 7.4.2. Грамотрицательные аэробные семейства энтеробактерий '. По кн.: Определи- и факультативно-анаэробные мелкие тель бактерий Берги. Изд. 8-е, палочки и коккобациллы Триба Род Вид (подрод) Род г е мо фил о в (Haemophilus) объеди Escherichieae няет мелкие грамотрицательные палочки, не рас 1. Escherichia E. coli тущие на простых питательных средах. Среди 2. Edwardsiella 7 видов рода гемофилус (H. parainfluenzae, E. tarda H. aphrophilus, H. ducreyi, H. influenzae и др.), 3. Citrobacter C. freundii которые выделяют при болезнях человека, наи C. intermedius больший удельный вес принадлежит палочке 4. Salmonella Подрод I инфлюэнцы (Haemophilus influenzae).

Подрод II Характерной особенностью представителей (S. salamae) данного рода является их требовательность для Подрод III своего культивирования в факторах роста крови (S. arizonae) X (гемин) и V (NAD).

Подрод IV Для выделения и культивирования гемофи (S. houtenae) лов применяют питательные агары с высоким 5. Shigella S. dysenteriae (1,6 г/л) содержанием аминного азота и 8Ч S. flexneri 10 % нативной или гретой крови животных или S. boydii человека.

S. sonnei Оптимальной средой является шоколадный Kl ebsiell eae 1. Klebsiella K. pneumoniae агар. При использовании для него лошадиной K. rhinosclero крови среду прогревают в водяной бане matis при 75 С до шоколадного цвета, человеческой K. ozaenae крови Ч не менее 30 мин. При исполь 2. Enterobacter E. cloacae зовании дефибринированной кроличьей E. aerogenes крови прогревание среды ограничивается 5Ч 3. Hafnia H. alvei 6 мин при 80 С. Рост культуры значительно 4. Serratia S. marcescens улучшается, если создать повышенную (10 %) Proteae 1. Proteus P. vulgaris концентрацию СО2 (культивирование со све P. mirabilis чой).

P. morganii На плотных средах с нативной кровью гемо P. rettgeri филы растут в виде очень мелких (^ 0,5 мм P. inconstans в диаметре) прозрачных колоний. На шоколад Yer si ni eae 1. Yersinia Y". pestis ном агаре образуются более крупные, полупро Y. enterocoliiica зрачные, нежные, сочные колонии диаметром Y. pseudotu 0.5Ч2 мм. Выросшие колонии гемофилов легко ilosis снимаются со среды. При росте на шоколадном агаре палочка инфлюэнцы обладает мыши ' Bergey's manual of determinative bacterio- ным запахом, что является характерным свой logy Ч 8th ed Ч Baltimore: The Williams, ством этого вида микробов. При росте H. influ Wilkins Company, 1974Ч 1268 p. enzae на плотных питательных средах можно наблюдать: слизистые колонии Ч круглые, рых лые, сочные, сероватые, ирригирующие при про смотре в косопроходящем свете (М-формы);

Особенности ферментации субстратов много- в мазках, окрашенных по Граму, видны мелкие короткие грамотрицательные палочки;

при окра компонентных сред представлены в табл. 52, ске мазка тушью по Гинсу выявляется хороню позволяют ориентировочно определить трибу, выраженная капсула;

круглые, гладкие, полу род энтеробактерий.

Вид выделенных культур устанавливают в прозрачные неирризирующие колонии (S-фор ма);

в мазкахЧ мелкие грамотрицательные соответствии с минимальным набором тестов, которые четко дифференцируют внутриродовые палочки, капсула выражена слабо или отсут ствует.

различия энтеробактерий (табл. 53Ч56).

Для ускорения идентификации можно при- После микроскопирования подозрительные колонии отсевают на шоколадный агар для про менить системы индикаторных бумажек (СИБ), ведения дальнейшей идентификации культур по выпускаемые Горьковским НИИЭМ МЗ РСФСР (Методические рекомендации по приме- биохимическим тестам.

Основные свойства видов и их дифференциа нению СИБ для идентификации энтеробактерий, ция приведены в табл. 57.

1982). Для уточнения видовой (групповой) Серологический анализ H. influenzae прово принадлежности культур их изучают в реакции агглютинации на стеклес поливалентными агглю- дят по капсульному антигену, по которому их тинирующими сыворотками. Сероварианты энте- подразделяют на 6 серологических вариантов:

а, Ь, с, d, e, f. Для такого исследования исполь робактерий определяют в реакции агглютинации с наборами О, Vi, H, К монорецепторных сыво- зуют поли- и моновалентные диагностические сыворотки в реакции агглютинации на стекле.

роток.

Та блица 53. Внутриродовая дифференциа- Та б л ица 56. Внутриродовая дифферен ция рода Klebsiella циация рода Proteus Виды Тест, P. in P. mira- P. vul - P. mor- P. ret субстрат con bilis garis ganii tgeri stans Мочеви Ч на + + + + Ч Индол + + + + Ч Ч Ч H2S + + Цитрат по Сим Ч м он с у ( + )' + + Желати Ч Ч Ч на + + Мальто Пр и м е ч а н и я. 1 Ч разные биовариан Ч Ч Ч Ч за + ты;

2 Ч замедленно.

Ч Ч Ч Ч Х Маннит + О р н и Та б л ица 54. Внутриродовая дифференциа- ти н де карбок ция рода Enterobacter сил а за + + Пр и ме ч а н и я, Ч замедленно;

2 Ч разные биоварианты.

мость в их дифференциальной диагностике. На бор ориентировочных тестов представлен в табл. 58.

Род мо р а к с е л л а (Moraxella) состоит из Та б л ица 55. Внутриродовая дифферен- 7 видов, встречающихся у человека. Иногда циация рода Yersinia моракселлы являются причиной воспалитель ных заболеваний человека Ч конъюнктивита, вульвовагинита, менингита, плеврита. Предста вители рода моракселла не растут на простых питательных средах, а требуют добавления 5Ч10 % крови животных или сыворотки. Коло нии крупные, полупрозрачные, гладкие, нежные, слизистые.

Род а ц и н е т о б а к т е р (Acinetobacter) представлен 2 видами Ч A. calcoaceticus и A. Iwoffii. Эти микроорганизмы могут выде ляться из цереброспинальной жидкости и мокро ты при заболеваниях нижних дыхательных путей, бронхоэктатической болезни, конъюнкти витах, хронических отитах, со слизистой оболоч ки мочеполового тракта. Они обычно хорошо культивируются на простых питательных средах, однако при первичном выделении лучше испо льзовать среды с добавлением крови или сыво Результаты более четкие по Христенсену.

Разные биоварианты. ротки. A. calcoaceticus образуют на кровяном агаре относительно большие (2Ч3 мм), бело ватые, выпуклые, иногда слизистые колонии, В патологии человека наибольшее значение име- A. Iwoffii Ч серые, плоские, немного мельче ют штаммы инфлюэнцы с капсульным антиге- колонии. 10Ч 20 % культур дают b-гемолиз.

ном типа b. Микробы рода Moraxella и Acinetobacter при В связи с тем что микроорганизмы, относя- окраске по Граму имеют форму коротких округ щиеся к разным родам, вызывают заболевания, лых палочек, часто напоминают кокки, но могут имеющие сходную клиническую картину, и могут встречаться самые разнообразные формы кле быть обнаружены в том же патологическом ток, даже нитевидные, располагаются клетки материале, что и гемофилы, возникает необходи- парами, короткими и длинными цепочками.

Таблица 57. Свойства микробов рода гемофилус Примечания: ' Чбез дрожжевых добавок;

Ч использован реактив диметил-п-фенилендиамин;

- положительная реакция у капсульных штаммов.

Таблица 58. Биохимические свойства некоторых гемофилов и других микробов, выделенных из общих источников Тест, субстрат Та б л и ц а 59. Биохимические свойства видов Moraxella, встречающиеся у человека Все виды моракселл углеводы не утилизируют, за исключением M.kingae.

Та б л и ц а 60. Биохимические свойства видов Acinetobacter Тест, субстрат Пр и м е ч а н и я. О Ч окисляется;

F Ч ферментируется.

Та б л иц а 61. Дифференцирующие свойства микробов, патогенных для человека, родов Chrotno bacterium, Flavobacterium, Cardiobacteria, Pasteurella Тест Колонии, подозрительные на моракселлы или В последние годы все чаще из клинических материалов выделяют некоторые виды бактерий, на ацинетобактер, отсевают секторами на чашку Петри или косяки с сывороточным агаром для представители которых обычно обитают на объ получения чистой культуры. ектах внешней среды, растений или имеют опре Видовые особенности моракселл и ацинето- деленный уровень патогенности для животных.

бактер даны в табл. 59, 60. Chromatobacterium violaceum обнаруживают Та б л и ц а 62. Свойства микробов рода улучшает рост. На кровяных средах формируют Bordetella очень мелкие круглые, выпуклые, матовые колонии, вокруг которых наблюдается легкое позеленение среды. Характерные особенности этой группы бактерий и их дифференциация представлены в табл. 61.

Pasteurella multocida, как и представители рода Bordetella, иногда вызывает респиратор ные и другие воспалительные процессы глотки, бронхов, тонзиллофарингиты, ларинготрахео бронхиты. По морфологии все они мелкие корот кие грамотрицательные палочки или коккоба циллы. При росте на кровяных средах P. multo cida образует мелкие колонии с коричневым окрашиванием среды;

Bordetella растут на спе циальных средах (БордеЧЖангу, казеиново угольный агар) в виде мелких, гладких, блестя щих колоний с жемчужным или сероватым оттенком. Основные свойства по дифференциа при гнойных и септических заболеваниях чело- ции бактерий этой группы даны в табл. 62.

века. Это грамотрицательные палочки, прямые или слегка изогнутые с закругленными концами;

7.4.3. Грамотрицательные в мазках располагаются одиночно, парами, ко анаэробные палочки роткими цепочками;

иногда наблюдается бипо лярное окрашивание клеток. На поверхности В род б а к т е р о ид е с ( Ge nus В а агара формируются мелкие, гладкие, блестящие cteroides) включено 22 вида микроорганизмов;

колонии фиолетового цвета. Flavobacterium некоторые из них выделены от человека и при meningosepticum могут быть причиной менинги- определенных условиях могут быть патогенны:

тов, особенно у новорожденных, а в ассоциации В. fragilis, В. ruminicola, В. serpens, В. coagu с другими микробами Ч септицемии. Это грам- lans, В. pneumosintes, В. melaninogenicus, отрицательные тонкие палочки, иногда коккоба- В. oralis.

циллы. На плотных средах колонии мелкие, По морфологии Ч это грамотрицательные гладкие, выпуклые, блестящие, прозрачные, полиморфные палочки, неподвижные или под маслянистые, серо-белого цвета, на кровяных вижные благодаря перетрихиальным жгутикам.

средах вызывают легкое позеленение среды. Строгие анаэробы. Реакция на каталазу отрица Cardiobacterium hominis Ч обычный обита- тельная. Бактероиды при росте на питательных тель слизистых оболочек верхних дыхательных средах, содержащих пептон и глюкозу, при путей человека, однако ее выделяют при эндо- рН 7,0 вырабатывают смесь кислот: уксусную, кардитах, особенно после операционных вмеша- молочную, пропионовую, а также масляную, тельств на сердце. Эти полиморфные палочки изомасляную и изовалериановую. Растут на в мазках располагаются отдельными клетками, плотных питательных средах с кровью, сыворот парами, короткими цепочками или группами. кой, на сердечно-мозговом агаре, в атмосфере При окраске по Граму плохо обесцвечиваются, природного магистрального газа.

поэтому в мазках можно видеть вариабельно Характерным признаком для анаэробной окрашенные клетки. На простых средах растут бактероидной инфекции является наличие очень скудно, добавление сыворотки и крови фекального или гнилостного запаха.

Та б л иц а 63. Биологические свойства часто выделяемых бактероидов Тест, субстрат Пр и м е ч а н и я. () Ч биоварианты;

(..) Ч нет данных;

' Ч черный пигмент.

Та б л ица 64. Основные биохимические свойства нейссерий и бранхамеллы Выделение чистой культуры и изучение био- блестящей поверхностью и ровными краями химических свойств бактероидов затруднено маслянистой консистенции, не лизируют эрит из-за их быстрой потери жизнеспособности при роцитов. На свежеприготовленном сывороточ пересевах. Идентификация некоторых видов ном агаре менингококки имеют вид бесцветных, бактероидов представлена в табл. 63. опалесцирующих, плоских, круглых колоний с ровным краем, не имеющих валика и уплотне ния в центре.

7.4.4. Грамотрицательные аэробные Непатогенные нейссерий растут на поверхно и факультативно-анаэробные кокки сти кровяного агара в виде либо круглых глад ких с ровными краями, блестящей поверхностью В род н е й с с е р и я (Neisseria.), согласно колоний, либо неправильной формы с неровными Bergey (1974), включено 6 видов, которые выде- краями шероховатых колоний с причудливо ляются от человека: патогенные виды Ч изрезанной поверхностью. На кровяном агаре N. meningitidis, N. gonorrhoeae и так называе- колонии непатогенных нейссерий мельче коло мые непатогенные нейссерий Ч N. mucosa, ний стафилококка, но крупнее стрептококка и N. sicca, N. subfl ava, N. flavescens. N. subflava палочки инфлюэнцы, не зеленят кровяной агар.

включает три пигментообразующие самостоя- Непатогенные нейссерий растут на поверх тельные группы Ч N. subfl ava, N. perflava и ности сывороточного агара в виде сероватых, N. flava. желтоватых либо бесцветных колоний диамет N. meningitidis Ч возбудитель эпидемиче- ром от 1 до 3 мм. Пигмент накапливается при ского цереброспинального менингита, менинго- культивировании на сывороточных средах через кокцемии. N. gonorrhoeae Ч возбудитель гоно- 48Ч72 ч.

реи. Другие виды нейссерий являются коменса- В мазках из подозрительных на нейссерий лами. При определенных условиях признана их колоний, окрашенных по Граму, видны грам роль в развитии менингитов, эндокардитов, сеп- отрицательные бобовидные, округлые кокки, сиса, пневмоний, отитов, синуситов и других расположенные попарно и довольно равномерно заболеваний. распределяющиеся в поле зрения;

из шерохова Для выделения нейссерий используют пита- тых колоний Ч грамотрицательные кокки в виде тельный агар (рН 7,2Ч7,4), содержащий не скоплений. Клетки микробной популяции имеют менее 1,6 г/л аминного азота, с добавлением однородное окрашивание у нейссерий, могут 5Ч10 % крови или 10Ч20 % инактивирован- быть полиморфно окрашены у менингококков, ной лошадиной сыворотки. Чашки с посевами а вследствие лизиса части клеток у гонококков следует поставить в эксикатор с зажженной сте- всегда имеются более светлоокрашенные особи.

ариновой свечой, после сгорания кислорода бу- С сывороточного агара ставят пробы на окси дет обеспечен рост культур в атмосфере с повы- дазу и каталазу '. Положительные пробы на шенной концентрацией СO2. В этих условиях оксидазу и каталазу у грамотрицательных кок культивирования хорошо растут как патогенные, так и непатогенные виды нейссерий. Через 24 ч выращивания при 37 С на плотной среде изу чают морфологию выросших колоний. Менин гококки на кровяных средах растут в виде непро- Реакцию на каталазу с 10 % Н2О2 нельзя зрачных, беловато-серых, крупных колоний с ставить с питательных сред с нативной кровью.

ков позволяют предположить, что исследуемая Т а б л и ц а 65. Биологические свойства колония относится к одному из видов нейссерий. видов стафилококка Подозрительные колонии отсевают секторами на чашки Петри или косяки с сывороточным ага ром для получения чистой культуры. С целью определения видовой принадлежности нейссе рий используют: жидкие или полужидкие среды Хью Ч Лейфсона, содержащие глюкозу, маль тозу, лактозу, сахарозу, фруктозу с двойной кон центрацией индикатора Андреде, среды для определения редукции нитратов и нитритов с 2Ч3 каплями лошадиной сыворотки, агар с 5 % сахарозы для определения полисахаридо образования (с помощью раствора Люголя), агар из гидролизата казеина для учета йодной реакции (0,25 % раствор йода наносят на по верхность культур, посеянных бляшками).

Видовые особенности рода Neisseria пред ставлены в табл. 64.

В случае выделения культур, подозритель ных на N. meningitidis, проводят определение капсульного антигена, используя диагностиче ские поливалентные и групповые менингококко вые агглютинирующие или преципитирующие сыворотки (см. Методические указания. Приказ № 98 МЗ СССР от 29.01.81 г. по бактериологи ческой диагностике менингококковой инфекции и бактериальных менингитов).

В род б р а н х а м е л л а ( Br a n h a m е 1 1 а) пока включен один вид В. catarrhalis.

Он постоянно обнаруживается на слизистых верхних дыхательных путей и мочеполового Биологические свойства и дифференциация тракта. Имеются случаи выделения В. catarrhalis видов стафилококка представлены в табл. 65.

при менингитах, острых фарингитах, бронхитах. При необходимости внутривидовой иденти фикации используют метод фаготипирования.

Методика его проведения, учета результатов, определение фагогрупп и их наименований изло 7.4.5. Грамположительные жены в инструкции по применению набора ста филококковых фагов, выпускаемых в стране.

факультативно-анаэробные кокки Иногда для маркирования штаммов используют Род с т а ф и л о к о к к а ( S t a p h y l o - их ферментативную активность, позволяющую c oc c us ). Согласно современной классифика- определить биоварианты.

ции (Берджи, 1974), состоит из трех видов: Род с т р е п т о к о к к о в ( St r e p t o S. epidermidis, S. aureus, S. saprophytic.us. Они c oc c us ) объединяет очень большую группу представляют собой грамположительные кокки, микроорганизмов, характеризующихся шаро располагающиеся парами, отдельными клетка- видной или овальной формой клеток. В мазках ми и гроздьями. Спор и капсул не образуют. микробы располагаются парами, кучками, це Неподвижны. Аэробы или факультативные почками различной длины. Стрептококки Ч фа анаэробы. Хорошо растут на простых питатель- культативные анаэробы, грамположительные, ных средах при температуре от 6,5 до 46 С, спор не образуют, неподвижны, за исключением лучше Ч при 37С. Переносят повышенное некоторых штаммов энтерококка. Реакция на содержание NaCl в среде от 5 до 10 %. Электив- ферменты каталазу и оксидазу отрицательна.

ной является желточносолевая среда, содержа- На плотных питательных средах с кровью стреп щая 7,5 % NaCl. О наличии лецитиназы свиде- тококки через 24 ч роста при 37С образуют тельствует образование вокруг колоний через мелкие 1Ч2 мм прозрачные, полупрозрачные 18Ч24 ч выращивания радужного венчика. или непрозрачные колонии, сероватые или бес Колонии стафилококка круглые, гладкие, цветные, гомогенные или зернистые. Одни виды блестящие, матовые. Пигмент белый или золоти- обладают гемолитической активностью, от резко стый разных оттенков, четко выявляется через выраженного гемолиза с полным просветлением 24Ч36 ч роста. среды (b-гемолиз) до разной степени ее позеле Стафилококки вида ауреус обладают способ- нения (а-гемолиз). Имеются виды, не обладаю ностью продуцировать экзотоксины, гемоли- щие гемолитической способностью. Стрептокок зины, лейкоцидины, имеют ферменты: коагулазу, ки хорошо растут на жидких питательных средах лецитиназу, ДНК-азу, фибринолизин, гиалуро- с 0,2 % глюкозы, на полужидких и плотных сре нидазу и др. Тесты на наличие коагулазы и дах с 5 % крови или 10 % инактивированной ДНК-азы являются ведущими при определении сыворотки животных, оптимальное значение рН S. aureus. 7,6Ч7,8.

S. agaiactiae (группа В) обычно обитают на Т а б л и ц а 66. Дифференциальные свойства слизистой влагалища, могут вызывать послеро некоторых представителей группы зеленящих стрептококков ' довые инфекции, сепсис, менингиты новорож денных, стоматиты. На кровяном агаре вокруг колоний образуется узкая зона р-гемолиза. Ге молитическая активность резко возрастает, если рядом растут штаммы стрептококков или стафи лококков, обладающие гемолитической актив ностью (САМР-тест). Для этого на чашку с кро вяным агаром (5 % бараньих эритроцитов) наносят по диаметру чашки культуру S. aureus, а затем в виде полос перпендикулярно к стафи лококку ряд изучаемых культур стрептококка.

Только S. agaiactiae образует зону усиленного гемолиза.

S. faecalis (группа D), являясь нормальными обитателями кишечного тракта, могут быть при чиной сепсиса, перитонита, острых поражений кишечника, раневых инфекций, эндокардитов, поражений мочевыводящих путей (см. табл. 68).

Стрептококки других групп (гемолитические и зеленящие) могут вызывать легко протекаю щие воспалительные процессы, иногда являясь причиной длительно текущих эндокардитов.

Определенные виды зеленящих стрептококков рассматривают как возбудителей кариеса зубов, некоторых заболеваний слизистой ротовой поло сти. Тесты их ориентировочной дифференциа ции Ч см. табл. 66.

S. pneumoniae, согласно современной класси фикации, включен в род стрептококка на уровне вида. S. pneumoniae является причиной острой долевой пневмонии, сепсиса, острых синуситов, отитов, а также бактериального менингита.

Пневмококки Ч ланцетовидные, грамполо См.: Hardie J. M., Bowden G. H. J. Dent. Res., жительные диплококки с заостренными наруж 1976, vol. 55, p. 166Ч176.

ными концами, каждая пара кокков окружена капсулой, часто видны короткие и длинные цепочки. Для выделения пневмококков исполь зуют питательный агар на гидролизате Хоттин Гемолитические штаммы стрептококка на гера (аминный азот 1,6Ч1,7 г/л, рН 7,6), содер жидких и полужидких питательных средах дают жащий 5 % крови (кролика, барана, человека) пристеночный рост с придонным осадком без и 5Ч10 % дрожжевого экстракта. На кровяном помутнения питательной среды. Зеленящие агаре колонии пневмококка гладкие, блестящие, стрептококки вызывают общее помутнение сре- полупрозрачные, плоские, 0,5Ч1 мм в диаметре, ды с образованием придонного осадка. окружены зеленящей зоной а-гемолиза. С воз Основные дифференциальные свойства неко- растом центр колоний подвергается аутолизу торых видов рода стрептококков представлены и западает, колонии приобретают вид шашки.

Встречаются слизистые сливные колонии. Для в табл. 66Ч68.

В настоящее время описано 17 серологиче- дифференцирования от других зеленящих стреп ских групп стрептококка, обозначенных латин- тококков используют способность S. pneumoniae скими буквами от А до Т (по Ленсфильд), такое ферментировать инулин, чувствительность к деление основано на наличии у представителей оптохину и желчи (см. табл. 66).

разных групп группоспецифияеского антигена. По капсульному полисахариду пневмококки Серологическую группу стрептококков опреде- делятся на 83 типа. Для серологического типи ляют в реакции преципитации с иммунными рования используют реакцию набухания кап групповыми сыворотками. сулы по Нейфельд или реакцию агглютинации Наиболее патогенен для человека вид S. руо- на стекле с поливалентными, групповыми и типо genes (группа А). Эти стрептококки являются выми сыворотками. Метод проведения серологи возбудителями многих гнойно-воспалительных ческого анализа и обозначение капсульных ва процессов человека: скарлатины, ангин, рожи- риантов приложены к наставлению по примене стого воспаления кожи, септицемии, отитов, хро- нию диагностических сывороток.

нических стрептококковых инфекций Ч рев- Оптохиновый тест. Чистую культуру засе матизма, гломерулонефрита. Они формируют вают на агар, содержащий 1 : 50 000Ч1 : мелкие, непрозрачные, зернистые колонии с зо- оптохина. На следующие сутки учитывают ре ной полного гемолиза, диаметр которого в не- зультат. Пневмококки не растут в присутствии сколько раз превышает диаметр самой колонии. оптохина. Можно использовать бумажные диски Та б л и ц а 67. Основные дифференциальные свойства некоторых видов стрептококков Пр и м е ч а н и я. 1 Ч прозрачная зона гемолиза вокруг колоний на агаре с 5 % крови;

2 Ч зеленоватое окрашивание и частичный гемолиз вокруг колоний;

3 Ч нет гемолиза на агаре с кровью;

4 Ч серотипирование стрептококков группы А проводят с помощью преципитирующих стрептококковых сывороток группы А, вы пускаемых ИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи АМН СССР.

Та б л и ц а 68. Схема дифференциальной диагностики энтерококков Тест, субстрат См. Седов В. И. Методические рекомендации по выделению и идентификации энтерококков.Ч М., 1982.

S.faecium var. durans.

12 п/р. В. В. Меньшикова Та б л ица 69. Основные свойства некоторых с 6 мкг оптохина, которые накладывают после видов рода Peptococcus посева на поверхность среды (посев лучше проводить секторами). Пневмококки вокруг диска образуют зону задержки роста не менее 18 мм.

Желчный тест основан на способности 10 % желчи и 2 % раствора оксихолатов лизировать пневмококк. В две пробирки с 2Ч3 мл сыворо точного бульона с 10 % желчи крупного рога того скота и без нее добавляют 0,5Ч1 мл испы туемой бульонной культуры и выдерживают 1 ч при 37 С. При лизисе пневмококка отмеча ется просветление бульона по сравнению с конт ролем. При сомнительном результате пробирки оставляют при комнатной температуре до сле дующего дня и проводят окончательный учет результатов.

7.4.6. Грамположительные анаэробные кокки Та б л и ц а 70. Основные свойства некоторых видов рода Peptostreptococcus Представители семейства пептококковых обитают на слизистых ротовой полости, пищева рительного, респираторного, урогенитального тракта человека и животных. При определенных условиях могут вызывать тяжелые заболевания в ассоциации с другими микроорганизмами.

В род п е п т о к о к к а (Genus Peptococ cus) Ч анаэробные микрококки Ч включены виды:

P. niger, P. asaccharalyticus, P. activus, P. апае robius, P. aerogenes. По морфологии грамполо жительные кокки располагаются поодиночке, парами, группами. Цепочек никогда не обра зуют, неподвижные, спор не образуют, ана эробы. Растут на специальных средах для ана эробов ' в анаэростате. Гемолиз отсутствует.

Реакции на каталазу и редукцию нитратов поло жительные.

Дифференциация видов представляет боль шие трудности и основывается на комплексе свойств (табл. 69).

В род п е п т о с т р е и т о к о к к а (Genus Peptostreptococcus) Ч анаэробные стрептокок ки Ч включены виды: P. anaerobius, P. productus;

Пр и ме ч а н и е. ( + ) Ч слабая реакция. P. lanceolatus, P. micros, P. parvulus. По мор фологии это грамположительные кокки, распо лагающиеся парами или цепочками разной длины, неподвижны, спор не образуют, ана Та б л иц а 71. Дифференциация представите эробы. Для выращивания их используют специ лей рода Bacillus альные среды для культивирования анаэробов 2.

Реакции их на каталазу и редукцию нитратов отрицательные. Дифференциация видов пред ставляет большие трудности (табл. 70).

7.4.7. Грамположительные аэробные и факультативно-анаэробные палочки Род б а ц и л л а ( B a c i l l u s ) состоит из 48 видов', но лишь несколько видов можно рассматривать как имеющие значение в патоло См. с. 315.

Пр и м е ч а н и я. 1 Ч В. cereus var. mycoides обычно неподвижен;

2 Ч вирулентные штаммы. См. с. 315.

Та б л иц а 72. Основные биологические свойства нокардий гии человека: В. anthracis, В. subtilis, В. cereus, жевый, красный. N. asteroides выделяется при В. pumilus. кожных поражениях человека, N. lutea Ч в слу В. anthracis является возбудителем сибир- чаях актиномикоза и при воспалениях слезных ской язвы. Другие виды рода Bacillus широко желез. Основные биологические свойства пред распространены в воде, воздухе, почве, пищевых ставлены в табл. 72.

продуктах, выделяются из организма человека Род к о р и н е б а к т е р и й ( Со г у п е и животных. Их патогенная роль для человека b a c t e r - i u m) объединяет около 20 групп и животных невелика. В последние годы име- грамположительных палочек. Часть из них ются сообщения, что спорообразующие аэроб- представляет интерес для клинических микро ные бактерии могут быть причиной септицемии, биологов. С. pseudodiphtheriticum является по пневмоний, пищевых отравлений и других вос- стоянным обитателем слизистых и кожи чело палительных процессов человека. века. С. xerosis обычно выделяют со слизистой По морфологии эта группа микробов пред- оболочки слезного канала, но может быть при ставляет собой грамположительные или грам- чиной длительно и вялотекущих конъюнкти вариабельные палочки, расположенные отдель- витов. С. diphtheriae вызывает дифтерию.

ными клетками или цепочками (В. cereus). Виды, перечисленные ниже, постоянно пара Аэробы или факультативные анаэробы. Споры зитируют на слизистых оболочках глотки, носа, образуются только в аэробных условиях, устой- трахеи здоровых лиц, но могут быть причи чивы к нагреванию. Реакция на каталазу поло- ной инфекционно-воспалительных процессов:

жительная, реакция на оксидазу отрицательная. С. ulcerans Ч дифтериеподобных заболеваний Микробы рода Bacillus не требовательны к пита- с поражением слизистых верхних дыхательных тельным средам. Указанные выше виды бацилл путей, С. minutissimum Ч характерных кожных поражений человека (эритразмы), С. pseudo образуют различные формы колоний на простых питательных средах от мелких, гладких и слегка tuberculosis Ч абсцессов с язвенно-некротиче желтоватых (В. pumilis) до крупных, круглых, скими очагами, язвенных лимфаденитов, С. еп шероховатых, неправильной формы, с матовой zymicum Ч тяжелой абсцедирующей бронхо извилистой поверхностью;

колонии с возрастом пневмонии, С. pyogenes и С. haemolyticum спо приобретают окраску от кремовой до коричневой собны вызывать у человека язвенно-некротиче (В. subtilis, В. cereus). На бульоне рост в виде ские поражения в виде фарингитов, тонзилли поверхностной морщинистой пленки, без помут- тов, гингивостоматитов, уретритов и поражений нения среды (за исключением В. anthracis, кожи. С. vaginalis Ч группа мелких палочек, В. cereus). Минимальный набор тестов, позво- вариабельно окрашивающихся по Граму;

их ляющих ориентировочно дифференцировать выделяют со слизистой оболочки влагалища бациллы до вида, представлен в табл. 71. здоровых женщин, но они могут вызывать вяло Из рода но к а р д и я (Genus Nocardia). текущие вагиниты.

N. asteroides и N. lutea могут быть выделены По морфологии все коринебактерий Ч грам от человека. По морфологии Ч грамположитель- положительные полиморфные палочки, не вет ные палочки, способные к образованию мице- вятся. Спор и капсул не образуют. Подвиж лия, воздушных гифов и ветвящихся нитей. Спор ностью не обладают. Слегка изогнутые изящные не образуют. Строгие аэробы. Неподвижны. палочки с булавовидными утолщениями на кон Реакция редукции нитратов непостоянна. Кис- цах, располагающиеся в виде войлока, пакета лотоустойчивость зависит от вида. Хорошо ра- булавок, букв VL, содержащие темноокрашен стут на простых питательных средах. Образуют ные зерна на концах Ч морфология, характер пигмент: белый, серый, желтый, розовый, оран- ная для С. diphtheriae, С. ulcerans и С. pseudo Таблица 73. Биохимические особенности микробов некоторых видов рода коринебактерий и вида листерий Пр и м е ч а н и я. 1 Ч реакцию на каталазу ставят с 10 % Н2О2 и микробами, выросшими на средах без добавления крови;

2 Ч биовариант;

3 Ч нет данных.

tuberculosis. У других видов коринебактерий мируются колонии диаметром 1Ч3 мм, круглые, палочки более толстые, короткие, обычно распо- гладкие или слегка зернистые, непрозрачные лагаются в виде частокола, темноокрашенные с желтым, кремовым или серовато-белым пиг зерна встречаются редко и с одного конца, так ментом. У дифтерийных бактерий может наблю же как и булавовидные утолщения, наблюда- даться S-форма колоний (гладкие), SR- и ются коккобациллярные формы. R-формы Ч шероховатые.

Коринебактерий растут на питательном В мазках из выросших колоний видны выше агаре, содержащем не менее 1,6 г/л аминного описанные грамположительные палочки с харак азота с добавлением глюкозы (1 %), крови терным расположением.

(5 %) или сыворотки животных (10 %), рН сред Для выделения чистых культур и проведения 7,4Ч7,6. Через 24 ч на питательных средах фор- идентификации подозрительные колонии отсе Та б л ица 74. Биологические свойства некоторых видов рода Clostridium Пр и ме ч а н и я. 1 Ч на среде Христенсена;

2 Ч КСГ Ч кислота, сгусток, газ;

3 Ч КС Ч кислота, сгусток;

4 Ч П Ч протеолиз;

() Ч биоварианты;

(..) Ч нет данных.

вают на пробирки с вышеуказанными питатель- 7.4.8. Грамположительные ными средами. Основные биохимические свой анаэробные палочки ства, позволяющие их дифференцировать по ви дам, представлены в табл. 73.

Лис т е р ии ( Ge nu s Li s t e r i a ) no Род клос т рид ия ( Genus Cl o s t r i морфологии Ч грамположительные мелкие, d i u m) объединяет более 60 видов микроорга овоидные, короткие, кокковидные палочки, рас- низмов. По морфологии грамположительные полагающиеся единичными клетками или кучка- палочки веретенообразные, имеют вид теннис ми, иногда можно видеть удлиненные палочки и ных ракеток или барабанных палочек. Образуют нити. В культуре после 24 часов роста обнару- споры;

расположение их в клетке центральное, живается типичное дифтероидное расположение субтерминальное или терминальное. Споры ова клеток в виде V или Y. Спор и капсул не образуют. льной или круглой формы, устойчивые к нагре Аэробы, микроаэрофилы. Подвижность лучше ванию. Капсула вариабельна. Анаэробы. Реак выражена, если культивировать листерии при ции на каталазу и оксидазу отрицательные.

температуре от 20 до 24 С. На простых пита- Реакция редукции нитратов вариабельна. Бо тельных средах рост скудный, необходимо до- льшинство видов рода клостридия являются бавлять кровь или сыворотку. Реакция на ката- сапрофитами и обитают в почве, некоторые виды лазу положительная. Реакция на оксидазу отри- микробов этого рода, попадая в организм чело цательная. Сероводород не образуют. века, вызывают тяжелые заболевания (табл. 74) Listeria monocytogenes патогенна для чело- Возбудитель столбняка Ч С. tetani;

ботули века и животных. У человека вызывает острое зма Ч С. botulinum группы А, В, С, D, E, F, G;

заболевание с полиморфной клинической карти- газовой гангрены Ч С. perfringens, С. novyi ной (менингиты, энцефалиты, септицемия, А, В, С. septicum, С. histolyticus, С. sordelii, эндокардиты, аборты, абсцессы) Ч листериоз. С. bifermenias, С. falla.x. Причиной пищевых Биологические свойства Listeria monocytogenes токсикоинфекций может быть С. perfringens см. в табл. 73. типов А, В, С, D, E.

7.5. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ По степени чувствительности к антибиоти- метод серийных разведении в плотных и жидких кам микроорганизмы разделяют на 3 группы: питательных средах. Используют также уско чувствительные, умеренно устойчивые, устой- ренные методы.

чивые. К чувствительным относят штаммы) рост которых подавляется концентрациями препа 7.5.1. Метод диффузии в агар рата, создающимися в сыворотке крови боль ного при введении среднетерапевтических доз с использованием бумажных дисков антибиотиков. К умеренно устойчивым относят штаммы, для подавления роста которых требу- На поверхность плотной питательной среды ', ются концентрации, создающиеся в сыворотке разлитой в чашки Петри примерно по 20 мл, на крови при введении больному максимальных носят испытуемую бактериальную взвесь в коли терапевтических доз антибиотиков. Устойчи- честве 1 мл. Используют чистую культуру Ч выми считаются микроорганизмы, рост которых либо 18Ч20-часовую бульонную, либо смыв не подавляется максимально допустимыми 18Ч20-часовой культуры с плотной питательной дозами лекарственных веществ. среды. Плотность суспензии должна соответ Степень чувствительности микроорганизмов ствовать стандарту мутности № 10 ГКИ к химиотерапевтическим веществам в лабора- им. Тарасевича.

торных условиях определяется минимальной Взвесь равномерно распределяют по чашке, концентрацией препарата, подавляющей рост остаток жидкости отсасывают пастеровской испытуемого штамма in vitro (МПК). Сопостав- пипеткой. Чашки подсушивают при комнатной ление минимальной подавляющей концентра- температуре 30Ч40 мин, после чего на поверх ции, определенной in vitro, и концентрации, до- ность чашки с помощью пинцета помещают стигаемой в организме при введении терапевти- диски с антибиотиками.

ческих доз этого препарата больному, позволяет Бумажные диски, изготовленные заводским установить степень чувствительности возбуди- путем, содержат одну концентрацию антибио теля к данному препарату [Навашин С. М., Фомина И. П., 1982].

Для определения чувствительности бактерий Сухая стандартная питательная среда к антибиотикам применяют метод диффузии АГВ, выпускаемая НИИ по производству пита в агар с использованием бумажных дисков и тельных сред (г. Махачкала).

ка, соответствующую рекомендациям ВОЗ (за по мутности соответствующей стандарту № исключением дисков с карбенициллином, кото- ГКИ им. Л. А. Тарасевича. Можно разделить рые содержат 2 концентрации Ч 25 мкг для чашку на сектора и посев культур производить определения чувствительности у штаммов штрихом.

Е. coli и Proteus и 100 мкг для штаммов Чашка с питательной средой, не содержа Ps. aeruginosa). На одну чашку следует поме- щая антибиотика, является контролем роста щать 6Ч10 дисков на равном расстоянии друг культур.

от друга и на расстоянии 2 см от края чашки. Чашки с посевом инкубируют при 37 С Чашки инкубируют при 37С в течение 18 ч 18Ч24 ч. Диапазон разведения антибиоти в перевернутом вверх дном положении. Учет ков зависит от установленных критериев чув результатов производят, измеряя с помощью ствительности для испытуемого вида микроор линейки диаметры зоны задержки роста ганизмов.

микробов вокруг дисков, включая диаметр При учете результатов отмечают наимень диска. шую концентрацию антибиотика, задерживаю Метод определения чувствительности с по- щую рост испытуемой культуры (МПК).

мощью дисков является качественным, позво- Метод двукратных разведений в жидкой ляющим разделить испытуемые культуры на питательной среде. Готовят серию двукратных чувствительные и устойчивые. Вместе с тем уста- разведений антибиотика в мясо-пептонном буль новлена корреляционная зависимость между оне или бульоне, приготовленном на переваре размерами зон задержки роста микробов и зна- Хоттингера, который разливают в 10 пробирок чениями МПК антибиотика, что позволяет оце- по 2 мл. В первую пробирку вносят 2 мл раст нить количественно степень чувствительности вора антибиотика определенной концентрации, изучаемого штамма (табл. 75). тщательно перемешивают и 2 мл из этой про бирки переносят в следующую и так далее до предпоследней пробирки, из которой 2 мл уда ляют. Затем во все 10 пробирок вносят по 0,2 мл 7.5.2. Метод разведений суточной бульонной культуры или взвеси, содер 5 в питательных средах жащей 10 Ч10 микробных тел в 1 мл, приготов ленной путем смыва бульоном из 18-часовой Количественный метод определения чувстви- агаровой суточной культуры. Последняя про тельности к антибиотикам позволяет установить бирка не содержит антибиотика и является минимальную подавляющую концентрацию пре- контролем роста культуры. Пробирки инкуби паратов. Имеются две модификации метода: руют при 37 С в течение 18Ч24 ч. При учете разведение в плотных и жидких питательных результатов отмечают последнюю пробирку, в средах. которой наблюдается полная задержка роста Из стандарта антибиотиков готовят основ- микробов.

ной раствор. Концентрация антибиотика в 1 мл Для этого навеску препарата в 5Ч10 мг рас- среды соответствует МПК по отношению к испы творяют в дистиллированной воде или соответ- туемой культуре и определяет степень ее чув ствующем растворителе так, чтобы в 1 мл содер- ствительности к антибиотику.

жалось 1000 мкг препарата. Затем из основного Выбор метода определения чувствительности раствора готовят серию разведений антибиотика к антибиотикам у испытуемых культур зависит в питательных средах.

от целей исследования и возможности лабора Ме т о д р а з в е д е н и й в п л о т н о й пи- тории.

т а т е л ь н о й среде. Плотную питательную Наиболее доступным и простым является среду (среды для определения чувствитель- метод диффузии в агар с применением дисков.

ности бактерий к антибиотикам) разливают во Он широко используется в повседневной лабо флаконы по 100 мл при определении чувстви- раторной практике. Однако результаты, полу тельности одновременно у 100 культур. При чаемые этим методом, можно расценивать как меньшем количестве испытуемых культур можно качественные. Метод серийных разведений дает использовать меньшие объемы питательной более точные количественные результаты, среды. В каждый флакон вносят 1,5Ч2 мл буль- позволяющие сопоставить чувствительность изу она, содержащего такое количество антибиотика, чаемой культуры, определенную лабораторным чтобы в 1 мл среды создавалась заданная кон- путем, с дозами препаратов, достигаемыми в ор центрация препарата (например, в 100 мл среды ганизме больного.

Pages:     | 1 |   ...   | 10 | 11 | 12 | 13 |    Книги, научные публикации