Книги, научные публикации Pages:     | 1 |   ...   | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |

под редакцией М.М.ДЕЙЛА, ДЖ.К.ФОРМЕНА Руководство по иммунофармакологии ПЕРЕВОД С АНГЛИЙСКОГО КАНД. МЕД. НАУК О.Г. ЯНОВСКОГО ПОД РЕДАКЦИЕЙ Д-РА МЕД. НАУК Б.СУТЕШЕВА МОСКВА "МЕДИЦИНА" 1998 УДК ...

-- [ Страница 7 ] --

фицируется в позиции 2', фосфолипаза А2 Фоновая фосфолипазная активность может является гидролитическим ферментом. стимулироваться или подавляться. Активация Стимулируют ли фосфолипазу вещества, фермента и фонового гидролиза осуществляет выделяющие простагландины? И если это так, ся различными веществами. Стимулирующая то является ли данный ферментативный этап фосфолипазу активность гистамина, РФ и ан чувствительным к стероидам? Для ответа на эти тигена дозовозависимо блокируется мепакри вопросы был использован метод определения ном и стероидами.

фосфолипазной активности в перфузируемых Показано, что противовоспалительные сте легких. Этот метод зависит от метаболизма роиды отменяют выделение тромбоксанов за специфических меченых фосфатидов счет предупреждения мобилизации арахидоно- Кортжостероиды Рис. 108. Подавление фосфолипаза-А2 подобной активности легких дексаметазоном.

вой кислоты, вторичной по отношению к акти- антифосфолипазного фактора. В ряде после вации фосфолипазы. Как это достигается? И дующих экспериментов были получены весо почему стероиды действуют только на мые доказательства этой гипотезы. Легкие интактные клетки?

морских свинок перфузировали в разных усло виях (рис. 109, а). Перфузат из одного легкого (называемого легкое-генератор) реоксигениро Индукция синтеза глюкокортикоидами вали и подавали насосом в другое легкое (тест белкового ингибитора фосфолипазы А легкое), получавшее также циклогексимид для подавления чувствительности к стероидам.

Как отмечалось выше, для проявления боль Противовоспалительные стероиды вводили либо шинства эффектов стероидов необходимо свя через легкое-генератор, либо прямо в перфузат зывание препарата с цитозольным рецептор (минуя генераторное легкое). Таким образом, ным белком. Комплекс препарат-рецептор единственная разница между перфузатами тест затем переносится в ядро, где начинается цепь легкого заключалась в прохождении (или событий, приводящих к биологическому эф непрохождении) стероидов через первое легкое.

фекту. Подобная ситуация наблюдается в лег Для определения фосфо-липазной активности ких;

было показано, что легкие морских свинок проводился биологический или содержат белковые растворимые глюкокорти радиоиммунологический анализ.

коидные рецепторы, способные к связыванию Если стероиды инфузировали прямо в тест [3Н]-дексаметазона. Интересно, что кортексо легкое, они не влияли на фосфолипазную лон, аналог глюкокортикоидов, предупреждает активность, но при их введении в легкое-гене связывание дексаметазона с рецептором в ратор отмечалось существенное снижение фос данной системе, подавляя тем самым действие фолипазной активности тест-легкого. Сходные дексаметазона не менее эффективно, чем это наблюдается при введении ингибиторов синтеза результаты были получены, когда стероиды РНК (актиномицина D), синтеза белка вводили сначала в легкое-генератор, после чего (пуромицина) или обоих (циклогексимид). Эти легкие меняли местами. В этом случае подав данные четко свидетельствуют о том, что ленный фосфолипидный гидролиз на РФ вос (несмотря на короткий латентный период станавливался, когда стероиды добавляли к действия) стероиды вызывают антифосфоли тест-легкому.

пазный эффект, индуцируя транскрипцию и Эти и подобные им эксперименты убеди трансляцию в легочных клетках-мишенях.

тельно продемонстрировали высвобождение под Одним из возможных объяснений этого действием стероидов некоторыми типами может служить предположение, что стероиды клеток легких сильного ингибитора фосфоли инициируют синтез de novo (или секрецию) пазозависимого биосинтеза простагландинов.

256 Глава Рис. 109. Фактор, индуцированный стероидами, выделяется в эффлуент легкого и может оказывать антифосфолипазное действие на второе легкое.

Оба легких перфузируются в определенной последовательности (а).

Реоксигенированный эффлуент из генерирующего легкого направляется насосом в тест-легкое, которое также обрабатывается циклогексимидом для предотвращения действия стероидов.

Дексаметазон (1 мкг/мл) инфузировали или прямо в эффлуент первого легкого (1Э), или сначала пропускали через генерирующее легкое (ТЛ). После достижения равновесия стероиды вводили в 1Э, при этом изменения активности фосфолипазы не происходило (б). Однако при инфузии ТЛ наблюдалось немедленное падение фосфолипазной активности второго легкого, что свидетельствует о возвращении уровня фактора, обладающего антифосфолипазной активностью к контрольным значениям.

Светлые столбики-биооценка, темные радиооценка.

Несмотря на целесообразность модели пер- биторного пептида, причем нижняя часть кри фузируемых легких, она не является типичной вой доза - ответ проходит в области, соот для многих типов экспериментальных моделей. ветствующей нормальной концентрации сте Аналогичный эффект наблюдается при роидов надпочечников в крови.

использовании некоторых других типов клеток. Характеристики белковых факторов перфу Например, перитонеальные макрофаги крысы зируемых легких морских свинок и инкуби образуют простагландины при инкубации с руемых перитонеальных макрофагов крыс, по бактериями. В присутствии глюко-кортикоидов видимому, весьма сходны, а при гель-хро это образование подавляется, но оно может матографии подтверждается их близость по быть восстановлено добавлением арахидоната. молекулярной массе (например, 15 000). Вполне Последующие исследования показали, что вероятно, что они идентичны или по крайней эффект стероидов зависит от биосинтеза de novo мере близкородственны. Белок крысиных белка и РНК;

как и в легких, блокирующее лейкоцитов назван макрокортином, и все действие стероидов связано с растворимым экспериментальные данные свидетельствуют о белком, выделяемым макрофагами. Определена его сходстве с легочным макрокортином.

связь между дозой гидрокортизона и Если перитонеальные макрофаги могут ин количеством выделенного инги- дуцироваться к выделению макрокортина in Кортикостероиды vitro, то не исключено, что подобные события Вскоре было установлено, что все эти белки происходят in vivo после введения стероидов. иммунологически родственны и, вероятно, об Для проверки этой гипотезы крысам вводили разуются при протеолитическом распаде белка глюкокортикоиды (обычно дексаметазон), а 40 К. Позже это семейство белков было названо затем спустя 1-5 ч собирали при помощи лаважа липокортинами, а белок 40 К - просто белки перитонеальной полости (пери- липокортином.

тонеальная полость содержит большое коли чество резидентных макрофагов). В лаважной Очистка, определение аминокислотной жидкости определялось наличие антифосфоли последовательности и клонирование пазной активности, которая повышалась в не липокортина сколько раз после введения дексаметазона или гидрокортизона. Интересно, что у адренэкто- Недавно был очищен белок 40 К и определена мированных крыс базальный уровень макро- его аминокислотная последовательность;

его кортина был значительно ниже, но ответ на человеческий ген был клонирован учеными из стероиды сохранялся на нормальном уровне. Biogen Genetic Engineering Company (США).

Это свидетельствует о существовании посто- Белок, который является мономером, до янного стероидного давления, которому под- статочно необычен ввиду высокого содержания вергаются все здоровые млекопитающие и ко- в нем аминокислотных остатков с большим торое отвечает за фоновые значения макро- зарядом;

поэтому данная молекула очень кортина в лаважной жидкости. АКТГ также полярна. Белок достаточно консервативен:

вызывает появление макрокортина в лаважной выявлено большое сходство липокортина у жидкости;

то же наблюдается при стрессе (со- крысы и у человека.

держание крыс в холодной комнате в течение 30 Ген, кодирующий липокортин, очень чувст мин). Ни один из стимулов не был эффек- вителен к стероидам, уровень иРНК для ли тивным у адреналэктомированных крыс, что покортина повышается после стимуляции кле указывает на критическую роль надпочечников ток глюкокортикоидами.

в этой реакции. Неожиданным является то, что при опре делении внутренней структуры белка липокор тина обнаружены четыре повторяющиеся Липокортиновое семейство белков:

субъединицы, которые способны связывать макрокортин, ренокортин и кальций и фосфолипид. Это свойство служит липомодулин характеристикой семейства белков, располага Хотя в данной главе основное внимание уде- ющихся в клеточных мембранах, которым да ляется открытию макрокортина, другие группы вались различные наименования разными исследователей, занимавшиеся проблемой группами исследователей. Весьма вероятно, что действия стероидов, достигли аналогичных липокортин идентичен или близкородствен результатов. некоторым из этих белков. Как показали не Идея о том, что глюкокортикоиды индуци- давние исследования, существует несколько руют синтез антифосфолипазного белка, была типов липокортина, хотя неизвестна биологи одновременно выдвинута Hirata и Axelrod ческая роль и других членов этого семейства.

(Национальный институт здоровья, США). В Pepinsky и соавт. (1988) предположили сущест серии изящных экспериментов они показали, вование связи между семейством липокортина и что ингибиторное влияние глюкокортикоидов другими мембранными белками, связывающими на хемотаксис лейкоцитов связано с образо- кальций и липиды.

ванием гликопротеина с молекулярной массой При изучении внутренней структуры липо примерно 70000 дальтон. Образование белка, кортина получено возможное объяснение ме названного липомодулином, зависит от окку- ханизма его влияния на фосфолипидный гид пации рецептора, ДНК-зависимого синтеза РНК ролиз. Липокортин может сильно связываться с и синтеза белка. В больнице Necker (Париж) анионными фосфолипидами в присутствии другая группа исследователей выделила кальция, поэтому предложена модель подав белковую фракцию из культурируемых почеч- ления липокортином фосфолипазы, согласно ных клеток, обработанных глюкокортикоида- которой механизмом является конкуренция за ми, которая подавляет фосфолипазу А2. Эта субстрат. Davidson и соавт. (1987) подтвердили фракция представляет собой смесь белков с возможность этого механизма;

однако необхо молекулярной массой 15 и 30 К. димо помнить, что липокортин может само- 258 Глава стоятельно связываться с фосфолипазой А2. Очевидно, что действительный механизм, с помощью которого белок предотвращает фос-фолипидный гидролиз, крайне сложен.

Противовоспалительное действие липокортина Высокоочищенный белок обладает сильным противовоспалительным действием в моделях острого воспаления, таких как каррагенановый плеврит и каррагенановый отек лапы. Он активен при введении парентеральными способами (местно, внутривенно, подкожно или внутримышечно) в дозах, выражающихся в мкг/кг. При определении in vitro липокортин подавляет образование медиаторов изолированных клеток, предупреждая хемотаксис, ми-тогенез лимфоцитов и секрецию гистамина тучными клетками. При системном введении (в противоположность местному) основным действием липокортина является предупреждение направленной миграции лейкоцитов в зону воспаления, тогда как при местном введении происходит снижение концентрации вос палительных медиаторов, что препятствует полному развитию воспаления.

Группа исследователей из Национального института здоровья показала, что у большого числа больных с тяжелым воспалительным заболеванием в плазме содержатся аутоанти-тела к липотропину, что свидетельствует о нарушении системы контроля воспаления.

О возможности контроля активности липокортина фосфорилированием Фундаментальным вкладом в понимание регуляции фосфолипазы А2 является открытие Hirata регуляции фосфолипазной активности липотропина с помощью фосфорилирования. Длительное время было непонятно, каким образом контролируется мембранная фосфо-липаза, т. е. как она активируется или подавляется в зависимости от потребностей. Совершенно очевидно, что мембрана должна сильно повреждаться, если фосфолипаза постоянно находится в активном состоянии.

Согласно схеме Hirata, мембранные фосфолипазы постоянно связаны с липотропином и поэтому неактивны. Когда клетки стимулируются агентами, активирующими фосфолипазу (например, хемотаксическим трипептидом ф.мет-лей-фен), липокортин фосфорилируется. Этот про- цесс, возможно, опосредованный протеинки-назой С, связанной с рецептором, инактиви-рует липокортин, переводя фосфолипазу А2 в каталитически активное состояние.

Изучение аминокислотной последовательности липокортина выявило наличие двух фосфорилируемых центров, один из которых представлен тирозином. Реактивация фосфо рилированного белка происходит при удалении фосфатной группы реакцией, катализируемой гидролитическим ферментом щелочной фосфатазой.

Количество липокортина в клеточной мембране, которое постоянно уменьшается в результате протеолитического распада и нормальных процессов обмена, находится под контролем стероидов.

При изучении адренал-эктомированных крыс, у которых не происходит востановления липокортина, показано, что лейкоциты, лишенные стероидов, имеют более высокие фоновые значения активности фосфо-липазы А2.

Липокортин как возможный предшественник нового поколения противовоспалительных препаратов Хотя в настоящее время еще нет полной определенности, не исключено, что или сам липокортин, или препарат, действие которого основано на подавление фосфолипазной активности, однажды станет полезным для лечения больных с воспалительным заболеванием. Такое лечение могло бы сочетать в себе все преимущества стероидной терапии, но без серьезных побочных эффектов, сопровождающих обычное лечение стероидами.

Эта идея активно развивается в основных фармацевтических центрах, однако необходимо какое то время, прежде чем выяснится, оправдал ли такой препарат возлагаемые на него надежды.

25 Нестероидные противовоспалительные препараты М. М. Дейл, Дж. К. Формен (М. М. Dale, J. С. Foreman) Нестероидные противовоспалительные препа- Таблица 28. Химическая классификация нестероидных про тивовоспалительных препаратов раты (НСПВП) представляют собой разнород ную группу соединений. В данной главе рас Производные салициловой кислоты сматриваются лишь те соединения, для которых Ацетилсалициловая кислота характерно хотя бы одно свойство - способность Салицилат натрия Дифлунисал подавлять биосинтез простагланди-нов. Другие Производные пропионовой кислоты нестероидные противовоспалительные Напроксен Ибупрофен Кетопрофен препараты, такие как золото, пени-цилламин и Флурбипрофен Фенбруфен хлорохин, будут описаны в последующих Производные анилина главах (см. главы 31, 32 и 33). НСПВП, Парацетамол подавляющие биосинтез простаглан-динов, называют также жаропонижающими Ацетокислоты Индометацин анальгетиками, поскольку некоторые из них (не Фенклофенак все!) обладают обезболивающим, жаропо Сулиндак нижающим и противовоспалительным эффек Оксикамы тами.

Пироксикам Как и у многих других используемых в кли нике препаратов, терапевтические возможности Пирозолоны Оксифенбутазон НСПВП были открыты (у человека) задолго до Азапропазон понимания механизма их действия. В 1763 г.

Фенилбутазон Rev. Edward Stone сообщил в Королевском Фенамовая кислота обществе об эффектах коры ивы при лихорадке;

Мефенамовая кислота затем было показано, что активным началом Меклофснамовая кислота ивовой коры является гликозид салицин.

Синтетические салицилаты натрия и ацетилсалициловая кислота (аспирин) заменили в терапии вещества из природных источников, Однако для любого конкретного препарата но только в 1972 г. было показано, что активность в отношении каждого из этих эф ацетилсалициловая кислота и другие НСПВП фектов может значительно различаться. На подавляют биосинтез простагландинов. Это пример, парацетамол является очень слабым открытие сделало доступным новую систему противовоспалительным агентом, но доста определения- простагландинсинтетазу, которая точно сильным аналгезирующим и жаропо позволила выявить неизвестные химические нижающим средством, а у ацетилсалициловой структуры, на основе которых в свою очередь кислоты противовоспалительная, обезболи были разработаны новые сильные НСПВП. вающая и жаропонижающая активность вы В табл. 28 приведены различные химические ражена примерно одинаково. Причины этих группы, к которым принадлежат основные различий будут обсуждаться ниже.

НСПВП, и, хотя этот список далеко не полный, в него вошли основные представители каждого Биосинтез простагландинов химического класса НСПВП.

Открытие механизма действия НСПВП, ко торое было сделано Vane и его коллегами, Фармакологические эффекты началось с описания веществ, выделяемых легкими морских свинок при анафилаксии.

Все НСПВП обладают тремя основными эф фектами: 1) противовоспалительным;

2) анал гезирующим;

3) жаропонижающим.

Нестероидные противовоспалительные препараты Этот материал с очень коротким периодом быть представлена не единичным белком, а полураспада определялся по способности вы- семейством различных изоферментов, причем зывать сокращение гладких мышц аорты кро- разные ткани могут экспрессировать разные ликов, ввиду чего и был назван веществом, изоферменты. Во-вторых, поскольку разные сокращающим аорту кроликов (ВСАК). Вы- препараты подавляют фермент посредством деление ВСАК легкими блокируется ацетил- различных механизмов, то условия проведения салициловой кислотой;

арахидоновая кислота, экспериментов могут влиять на активность напротив, вызывает его высвобождение. Впо- препаратов. Этот аспект детально обсуждается следствии было показано, что ВСАК пред- ниже на примере парацетамола. Важность ставляет собой тромбоксан А2. Эти наблюдения условий определения также можно показать на подготовили почву для гипотезы о подавлении примере значения концентрации субстрата. Так, ацетилсалициловой кислотой цикло- некоторые препараты при низких оксигенации арахидоновои кислоты, что при- концентрациях субстрата в 20-500 раз активнее, водит к нарушению образования простаглан- чем при высоких.

динов, тромбоксанов и других продуктов цик- Некоторые факторы, помимо неодинаковой лооксигеназы. Это предположение было под- чувствительности к НСПВП простагландин тверждено исследованием эффектов ацетилса- синтетазы из разных источников, осложняют лициловой кислоты и других НСПВП в отно- соотнесение активности этих препаратов in vivo шении активности простагландинсинтетазы как противовоспалительных, аналгези-рующих (циклооксигеназы) в гомогенатах легких с ис- или жаропонижающих с их же активностью in пользованием в качестве субстрата арахидо- vitro в отношении фермента. К этим факторам новои кислоты. В табл. 29 показана активность относятся связывание с белком, проникновение различных НСПВП как ингибиторов проста- препарата в клетки и ткани, метаболизм и рН гландинсинтетазы. Отличительной чертой ре- ткани. С учетом этих факторов будут зультатов, представленных в таблице, является обсуждены три основных свойства данной вариабельность С50, которая может объяс- группы препаратов в контексте их способности няться по крайней мере двумя факторами. Во- подавлять активность простагландинсинтетазы.

первых, простагландинсинтетаза может Противовоспалительное действие Таблица 29. Подавление активности простагландинсинте тазы из разрушенных клеток различного происхождения На многих различных моделях НСПВП не нестероидными противовоспалительными препаратами снимают воспаления;

они скорее ограничивают его или изменяют его временные характерис тики. Наиболее вероятное объяснение этого существование медиаторов, отличных от цик лооксигеназных продуктов арахидоновои кис лоты. При использовании каррагенана для ин дукции воспаления у крыс его начальные про явления опосредуются гистамином и серото нином. Между 1-м и 6-м часом после введения каррагенана главными медиаторами воспали тельной реакции являются кинины. Проста гландины определяются в воспалительном экс судате через 6 ч после введения каррагенана и достигают пика между 18-м и 24-м часом.

НСПВП ослабляют более позднюю фазу кар рагенанового воспаления и не влияют на на чальную фазу. Таким образом, способность НСПВП модифицировать определенный этап реакции на каррагенан хорошо согласуется с ролью простагландинов в данной модели воспаления. В другой модели воспаления (дей ствие ультрафиолетового облучения на кожу) наблюдается аналогичная связь между обра- Различные концентрации субстрата (арахидоновая кис лота-АК).

18 262 Глава зованием простагландинов и временем выяв- Таблица 30. Сравнительная активность НСПВП как инги биторов простагландинсинтетазы и противовоспалитель ления эффекта НСПВП. НСПВП отсрочивают ных агентов реакцию, индуцированную ультрафиолетовым облучением, подавляя образование проста гландинов, но не отменяют ее полностью, поскольку в ней участвуют и другие медиаторы.

При ревматоидном артрите применение ацетилсалициловой кислоты позволяет снизить (до неопределяемых значений) уровень простагландинов в синовиальной жидкости, однако воспалительный процесс лишь несколь ко ослабевает.

К эффектам простагландинов при воспа лении относятся вазодилатация и повышение сосудистой проницаемости. Вызываемое прос тагландинами расширение сосудов достаточно длительно сохраняется в коже, но в других областях оно бывает кратковременным. Кроме Активность в подавлении вызванного каррагенаном отека того, простагландины обусловливают дли- лапки крыс по сравнению с активностью индометацина.

Подавление образования ПГ циклооксигеназой разру тельный антагонизм к сосудосуживающему шенных клеток по сравнению с действием индометацина.

действию норадреналина и других вазоконст Активность препаратов в отношении их влияния на рикторов. Простагландины менее эффективны в синтез простагландинов определена по результатам не индукции повышенной сосудистой проницае- скольких опубликованных исследований, в основном представленных в табл. 29;

поэтому приведенные в таб мости по сравнению с индукцией вазодила лице значения могут быть использованы лишь для при тации. Сравнение ПГЕ1 с гистамином в дозах, близительной оценки, и их нельзя интерпретировать вызывающих эквивалентную вазодилатацию, количественно.

показало, что гистамин дает больший отек, чем ПГЕ1. В то же время простагландины усиливают образование отека другими медиа дины опосредуют усиление отека (см. главу торами, которые вызывают повышение сосу 17).

дистой проницаемости (гистамин). Показано, Представлены убедительные доказательст что отек, индуцированный гистамином или ва, касающиеся механизма подавления НСПВП брадикинином, усиливается при их совместном вазодилатации и отека при воспалительных введении с ПГЕ1. Кроме того, ПГЕ1 увеличивает реакциях, в которых простагландины играют отек, индуцированный инъекцией кар-рагенана роль медиаторов. Действительно, все в лапу крыс, которым вводили ин-дометацин.

препараты, у которых обнаружена способность Предварительное введение индо-метацина к ингибированию простагландинсинтетазы, необходимо для предупреждения могут подавлять или ослаблять воспаление.

простагландинового синтеза, вызываемого Однако существует проблема связи между ак каррагенаном, поэтому в данном эксперименте тивностью препарата и его способностью к показано, что ПГЕ1 усиливает воспалительный подавлению простагландинсинтетазы и воспа отек, индуцированный другими медиаторами, ления;

в табл. 30 иллюстрируется это поло выделяющимися в ответ на каррагенан. Этот жение. Однако, как уже отмечалось, сравнение важный результат позволяет объяснить, почему активности в бесклеточной ферментативной НСПВП подавляют воспалительный отек системе и активности in vivo не может быть несмотря на слабое влияние самих простаглан валидным по ряду причин. Поясним это под динов на сосудистую проницаемость. Вызван робнее на примере салицилатов. По сравнению ное простагландинами усиление отека проис с ацетилсалициловой кислотой салицилат яв ходит, вероятно, за счет увеличения кровотока в ляется слабым ингибитором синтеза проста микроциркуляции, сосуды которой становятся гландинов in vitro;

однако оба препарата оди более проницаемыми под действием других наково эффективны при подавлении индуци медиаторов (гистамина или брадикинина).

рованного каррагенаном отека лап у крыс. Оба Таким образом, сосудистые эффекты индуци препарата обладают сходной активностью, руются другими медиаторами, а простаглан- уменьшая образование простагландинов in vivo у человека и крыс. Одним из возможных Нестероидные противовоспалительные препараты объяснений здесь является то, что гентизино- ческим и химическим стимулам, например к вая кислота, метаболит салицилата, в 30 раз брадикинину и гистамину. Гипералгезия, ин сильнее самого салицилата в отношении по- дуцируемая простагландинами, сохраняется давления активности простагландинсинтетазы. длительное время и не блокируется НСПВП.

Таким образом, низкая активность салицилата в Таким образом, НСПВП не изменяют реакции отношении синтеза простагландинов in vitro периферических ноцицепторов на простаглан может быть связана с отсутствием in vitro дины, а предотвращают образование проста метаболизма салицилата до более активного гландинов, которое вызвано повреждающими соединения. стимулами, и тем самым предупреждают раз Другое объяснение различий между про- витие простагландиновой гипералгезии.

тивовоспалительной активностью НСПВП и их При прямой регистрации активности ней способностью угнетать циклооксигеназу ронов центральной нервной системы показано, получено в экспериментах по изучению дейст- что ацетилсалициловая кислота уменьшает вия парацетамола на циклооксигеназу из раз- разряды, вызванные повреждающими перифе личных источников. Парацетамол в 10 раз рическими стимулами. Например, у крыс с менее активен, чем ацетилсалициловая кислота, хроническим адъювантным артритом увеличе в отношении фермента из селезенки собак, но ние разрядов регистрируется в нейронах вент проявляет почти одинаковую с ней активность в робазального таламуса при движении пора отношении фермента из головного мозга женного сустава. Ацетилсалициловая кислота кроликов. Таким образом, очень слабый уменьшает разряды ноцицептивных нейронов противовоспалительный эффект парацетамола дорсального рога в ответ на предъявление может отражать нечувствительность изофер- термических стимулов на периферическое ре мента циклооксигеназы в одной ткани по срав- цепторное поле. Электроэнцефалографическая нению с другой. Концепция изоферментов для регистрация у людей выявляет уменьшение под объяснения различных форм активности действием препарата кортикальных вызванных НСПВП должна восприниматься с некоторой потенциалов при стимуляции зубов. Во всех осторожностью, поскольку разные образцы этих экспериментах препарат вводили ферментов, приготовленных из различных перорально или парентерально, поэтому влия тканей, в основном не контролируются при ние на нейрональную функцию могло осуществ одинаковых условиях рН, ионной силы и ко- ляться за счет угнетения синтеза простаглан факторов. При соблюдении этих условий в од- динов, который индуцировался перифериче ном из исследований (что также может быть скими или центральными стимулами. Альтер неадекватным, поскольку не все клетки обла- нативно ацетилсалициловая кислота или другие дают одинаковым состоянием цитозоля) не НСПВП могут проявлять анальгетическое было обнаружено разницы в активности раз- действие, не связанное с угнетением проста личных НСПВП в отношении разных фермен- гландинсинтетазы. У кошек электрическая сти тативных образцов. В данном исследовании муляция пульпы зуба вызывает болевые сти был сделан вывод об отсутствии изоферментов мулы, чувствительные к анальгетическому циклооксигеназы. действию НСПВП, но при этом образование простагландинов играет незначительную роль (или вовсе не имеет значения).

Анальгетическое действие Таким образом, в настоящее время возможно Анальгетическое действие НСПВП проявляет- объяснение анальгетического действия НСПВП ся как на периферии, так и в центральной с учетом подавления синтеза простагландинов нервной системе, но доминируют перифери- на периферии и в центральной нервной системе;

ческие эффекты. Более того, представлены до- однако препараты могут обладать и другими казательства того, что периферическое аналь- анальгетическими эффектами, не связанными с гетическое действие препаратов связано с их подавлением биосинтеза простагландинов.

противовоспалительным эффектом. При нане сении простагландинов на основании волдыря Жаропонижающее действие на коже человека их эффективность как аналь гетических агентов невысока, поскольку они не Механизмы пирогенеза и роль простагландинов сами вызывают боль, а индуцируют состояние в возникновении лихорадки обсуждались в гипералгезии, повышая чувствительность пе- главе 19. Скажем только, что представлены риферических болевых рецепторов к механи- 264 Глава веские доказательства участия простагландина ратом арахидоновой кислотой (KD-2 мкМ). В Е, образуемого в гипоталамусе в ответ на реакции участвуют гидрофобные силы. Таким интерлейкин-1, в настройке механизмов ре- же действием обладает пироксикам.

гуляции температуры в гипоталамусе. Это 3. Быстрое, обратимое, неконкурентное образование простагландинов подавляется подавление, в котором участвует антиоксидан НСПВП, чем, вероятно, и объясняется антипи- тный эффект, или эффект ловушки свободных ретическое действие препаратов. Однако су- радикалов. Основой этого эффекта является то, ществует ряд данных, не вписывающихся в эту что циклооксигеназная активность включает модель, поэтому вполне вероятно, что НСПВП необычную положительную обратную связь, могут подавлять действие простагландинов на заключающуюся в образовании липидных гипоталамус. Кроме того, существуют пероксидов, которые ускоряют действие альтернативные механизмы индукции фермента. Длительное присутствие липидных лихорадки, которые нечувствительны к перекисей необходимо для поддержания цик подавлению НСПВП. лооксигеназной активности;

их высокие кон центрации, напротив, угнетают фермент. В нормальных условиях клеточные пероксидазы Механизм действия на циклооксигеназу поддерживают низкий уровень перекисей, но циклооксигеназа может стимулироваться пе жирных кислот рекисями липидов в концентрации примерно нм, что на несколько порядков ниже Кт для Как показано выше, первичное действие большинства пероксидаз, таких как глутати НСПВП заключается в подавлении образования онпероксидаза и пероксидазы, превращающие из арахидоновой кислоты циклической ПГG2 в ПГН2. Таким образом, небольшие эндоперекиси ПГG2. В большинстве случаев количества гидроперекисей, ускользающие от процесс подавления включает в себя связывание действия пероксидаз, могут стимулировать препарата с ферментом, причем есть данные о образование простаноидов.

наличии двух мест связывания. Активность Поступление нейтрофилов и моноцитов в препаратов соотносится со взаимодействием с места воспаления характеризуется заметным активным центром фермента, однако важное увеличением синтеза простаноидов. Недавно значение имеет и контакт с дополнительным показано, что эти клетки образуют лактиватор местом связывания. Вероятно, слабые циклооксигеназы, который, вероятно, ингибиторы циклооксигеназы взаимодействуют представляет собой смесь Н202 и липидных главным образом с дополнительным центром.

Подавление циклооксигеназы может про- перекисей.

исходить несколькими путями, описанными Некоторые НСПВП, такие как парацетамол, Lands (1981). оказывают действие, участвуя в связывании 1. Необратимая, зависимая от времени субстрата с ферментом, а также (частично) за инактивация фермента. Наиболее ярким при счет антагонизма в процессе активации мером препарата с таким действием на цикло циклооксигеназы Н202 и перекисями липидов.

оксигеназу является ацетилсалициловая кисло При высоких уровнях этих соединений, напри та. Она образует ковалентную связь с остат мер при активации фагоцитирующих клеток в ком серина фермента. Для продолжения син очаге острого воспаления, парацетамол не теза простаноидов и тромбоксанов необходим эффективен в подавлении синтеза простаноидов синтез нового фермента. В результате этого и, следовательно, имеет низкую активность как эффект препарата продолжается какое-то вре противовоспалительный препарат. Однако он мя после выведения его из ткани. Некоторые эффективен при состояниях с невысоким другие НСПВП, такие как индометацин, также уровнем лейкоцитарной инфильтрации.

обладают зависимым от времени характером инактивации циклооксигеназы. Однако имеют Отдаленное влияние на воспалительный ся данные, что действие индометацина явля процесс подавления циклооксигеназы ется легкообратимым.

НСПВП 2. Быстрое, обратимое, конкурентное по давление. Некоторые НСПВП, например ибу- Препараты, угнетающие циклооксигеназу и тем профен, обратимо связываются с ферментом самым уменьшающие образование прос (KD-5 мкМ), конкурируя с природным субст- таноидов и тромбоксанов, обладают весь- Нестероидные противовоспалительные препараты ма важными прямыми противовоспали- Эффекты НСПВП, не опосредованные тельными эффектами, которые были описаны циклооксигеназой выше.

Однако уменьшение синтеза простаноидов Хотя главной мишенью НСПВП является может обусловить и ряд противовоспалитель циклооксигеназа, в исследованиях in vivo могут ных эффектов. Показано, что простагландины быть выявлены и другие эффекты, лежащие в Е2 и I2 оказывают сильное стимулирующее основе различий между разными препаратами.

действие на аденилатциклазу, активируя тем Некоторые из них, такие как индометацин и самым цАМФ-зависимую киназу. В воспали фенаматы, оказывают ингибиторное действие и тельных клетках, таких как полиморфно-ядер на другие ферменты, а именно: на фосфо-липазу ные клетки и мононуклеарные лейкоциты, этот А2, диацилглицеролкиназу и диацил фермент играет преимущественно ингибитор глицероллипазу. В случае индометацина эти ную роль, снижая их активацию. ПГЕ, обра эффекты (хотя они и требуют значительно более зуемые макрофагами, тормозят некоторые высоких концентраций, чем при подавлении функции лимфоцитов: пролиферацию и выде циклооксигеназы) достижимы in vivo при ление лимфокинов (см. главу 14). Согласно проведении лечения (примерно 1 мкг/мл).

последним данным, этот эффект частично свя Действие на ферменты, метаболизирующие зан с прямым действием на клетки в митозе и диацилглицерол, может привести к повышению частично-с активацией супрессорных Т-кле-ток его концентрации. А поскольку диацилглицерол (хотя некоторые исследователи утверждают является эндогенным активатором наличие угнетающего действия ПГЕ2 на протеинкиназы С, этот факт может объяснить супрессорные Т-клетки). Простагландины Е увеличение образования токсических метабо также снижают выделение лизосомных фер литов кислорода в нейтрофилах человека и в ментов нейтрофилов и гистамина тучных кле макрофагах морских свинок, а также фактора ток, уменьшают образование продуктов 02, некроза опухолей и интерлейкина-1 челове повреждающих ткани, в макрофагах и нейтро ческими моноцитами под действием индоме филах.

тацина. Другим возможным объяснением яв Таким образом, продукты циклооксигеназы ляется то, что препараты, нарушая арахидо могут угнетать функции лейкоцитов и умень новый метаболизм, увеличивают образование шать повреждение тканей, а препараты, по липоксина А, который также активирует про давляющие образование этих продуктов, могут теинкиназу С. Любой из этих форм активности в некоторых условиях (особенно при хро можно объяснить усиление повреждений суста ническом воспалении) вызывать противовос вов под действием индометацина при артрите, палительный эффект.

индуцированном антигеном у морских свинок.

Другим способом, посредством которого Некоторые неспецифические эффекты ряда ингибиторы циклооксигеназы могут нарушать НСПВП в отношении ферментов могут быть регуляцию иммунных и воспалительных реак связаны с высокой гидрофобностью их молекул.

ций, является увеличение образования других Это свойство имеет важное значение для эйкозаноидов. Снижение метаболизма арахи связывания с белками и взаимодействия с доната циклооксигеназой приводит к увели мембранами. Выявлена четкая корреляция чению количества субстрата для других фер между эффективностью НСПВП и их связы ментов, действующих на эту жирную кислоту.

ванием с сывороточным альбумином, который Показано in vivo и in vitro, что в присутствии обладает липофильными карманами. Нали ингибиторов циклооксигеназы образуется чием аналогичной липофильно-пептидной пос большее количество продуктов 5-липоксиокси ледовательности у различных ферментов может геназного пути. Так, в частности, увеличивает легко объясняться их чувствительность к ся образование ЛТВ4, который обладает вы подавлению такими препаратами, как ин раженными хемотаксическими свойствами и дометацин.

иммунорегуляторными эффектами. Значение in Гидрофобная природа многих НСПВП, по vivo первой формы активности пока не ясно, видимому, лежит в основе вмешательства этих поскольку НСПВП в разных экспериментах как препаратов в связывание фагоцитов с увеличивают, так и уменьшают накопление гидрофобными медиаторами (ф. мет-лей-фен), а клеток.

также в последующую стимуляцию клеток этими пептидами, что показано во многих 266 Глава исследованиях. С другой стороны, большинство же могут иметь важное значение, скрининг НСПВП не подавляет взаимодействия ме- новых НСПВП только по определению синтеза диатора ФАТ с его рецептором. Показано, что простагландинов не может быть адекватным.

многие НСПВП угнетают клеточное накопление Применение этого метода чревато не (особенно мононуклеарных клеток) при адекватным использованием микросомальных некоторых типах воспаления у эксперимен- образцов, поскольку величины IС50, получен тальных животных. По поводу этой активности ные для конкретного препарата, например для высказываются и другие точки зрения, индометацина, варьируют в разных лабора поскольку профили активности различных ториях от 0,07 до 20 нм. Более надежным НСПВП отличаются от таковых при влиянии на методом представляется определение выделе миграцию мононуклеарных клеток. ния простагландинов макрофагами. При его Возможно, что НСПВП оказывают и другое применении эффективность индометацина влияние на воспаление, необязательно варьирует от 1 до 10 нм в трех лабораториях, связанное с подавлением циклооксигеназы (или хотя в них использовались разные источники с последствиями ее подавления) и обу- клеток (мышиные, человеческие и клетки мор словливающее провоспалительные эффекты, ских свинок), различные культуральные усло особенно при хроническом воспалении. вия и разные стимулы.

Совершенно ясно, что НСПВП являются полезными и эффективными при снятии симп томов воспалительных состояний. Вопрос зак- Токсические побочные эффекты лючается в следующем: не усугубляют ли они Поскольку НСПВП представляют собой ряд основные состояния в случае их длительного разнородных химических соединений, ясно, что применения при хронических воспалительных большинство из них обладает токсическими заболеваниях, таких как ревматоидный артрит.

эффектами, уникальными для конкретной хи Более точное понимание эффективности мической структуры. Целью данного раздела НСПВП как противовоспалительных препаратов главы является не перечисление имеющихся при хроническом воспалении требует, чтобы в токсических эффектов НСПВП, а рассмотрение экспериментальных исследованиях отражалось нежелательных реакций и токсических эффек значительно большее знание ситуации, тов, свойственных всем НСПВП. Ввиду того превалирующей in vivo при таких состояниях.

что общим свойством НСПВП является по Так, исследования влияния этих препаратов на давление простагландинсинтетазы, токсичес хемотаксис лейкоцитов не должны проводиться кие эффекты препаратов обсуждаются с учетом с использованием ф.мет-пептидов в качестве ее подавления.

хемотаксических агентов. При исследовании Прежде всего надо отметить следующие влияния препаратов данной группы на токсические и неблагоприятные эффекты: 1) выделение ферментов или образование токсических продуктов кислорода фа- изъязвление и кровотечения в желудочно кишечном тракте;

2) повреждения и некрозы гоцитирующими клетками не должны исполь почек;

3) задержка родов.

зоваться растворимые хемотаксины совместно с Другие возможные побочные эффекты те цитохалазином В;

следует включать лиганды, рапии НСПВП упоминались выше в связи с имеющие большее отношение к ситуации in провоспалительным действием этих препа vivo, например лиганды, взаимодействующие с ратов. Возможно, и антипиретическое действие рецепторами к Fc и С3b, такие как комплекс не всегда относится к лечебным эффектам (см.

антиген-антитело. Более того, при использо главу 19);

однако этот вопрос еще не решен вании in vitro концентрации НСПВП должны окончательно.

соответствовать концентрациям, достигаемым in vivo, т.е. примерно 1 мкМ или меньше.

Возникает еще один не менее сложный вопрос:

Изъязвление желудочно-кишечного тракта оказывают ли препараты влияние на регуляцию иммунитета in vivo и как это отражается на Являясь слабыми кислотами, ацетилсалицило прогнозе. Ответ на него может быть получен вая кислота и некоторые другие НСПВП не лишь при тщательно контролируемом ионизированы в кислой среде желудка, поэтому проспективном клиническом исследовании.

они быстро попадают в клетки его слизистой Поскольку другие свойства НСПВП, кроме оболочки. Попав в клетку с более высоким подавления активности циклооксигеназы, так- значением рН цитозоля, препараты дис- Нестероидные противовоспалительные препараты социируют и задерживаются в ней. В резуль- дов, поврежденных изъязвлением. Таким обра тате этого в клетке создается более высокая зом, повышается вероятность кровотечения в концентрация препаратов. Предполагается, что зоне изъязвления.

высокая внутриклеточная концентрация препаратов служит причиной подавления ак- Повреждения почек тивности множества ферментов, включая ци Несколько лет назад НСПВП фенацетин был тохромоксидазы, что приводит к повреждению изъят из применения, поскольку его хрони и в конечном счете к изъязвлению слизистой ческое использование сопровождается почеч оболочки желудка. Возможно, повышение кон ным папиллярным некрозом. Сам по себе фе центрации играет важную роль в вызываемых нацетин не оказывает действия на простаглан некоторыми НСПВП повреждениях желудка, динсинтетазу почек, но его метаболит па однако это не может полностью объяснить рацетамол обладает такой активностью.

появление повреждений, индуцируемых дру Известно, что многие другие НСПВП вы гими препаратами, у которых не отмечается зывают повреждения почек при хроническом внутриклеточной задержки или при системном введении экспериментальным животным;

од введении которых наблюдаются подобные нако у людей, длительное время получающих повреждения.

высокие дозы НСПВП при ревматоидном арт Подавление НСПВП образования цитопро рите, нефропатии наблюдаются относительно тективных простаноидов, вероятно, играет роль редко. Предполагают, что НСПВП проявляют в возникновении поражений желудка при различную нефротоксичность в зависимости от действии этих препаратов. ПГЕ2 и ПП2 уве их химической структуры. Возможно, что в личивают кровоток в слизистой оболочке же нефропатии, индуцированной НСПВП, может лудка. ПГЕ2 также подавляет секрецию кислоты играть роль подавление синтеза простаноидов.

париетальными клетками слизистой оболочки.

Показано участие простагландинов в Более того, показано, что ПГЕ2 и некоторые его ауторегуляции и поддержании кровотока в аналоги способствуют заживлению почках;

в частности, они осуществляют конт дуоденальных пептических язв, как и Н2 роль кровотока между корой и мозговым ве антагонисты. Таким образом, предполагается, ществом. НСПВП снижают кровоток внутрен что НСПВП вызывают изъязвление желудочно ней коры, поэтому предполагают, что угнетение кишечного тракта в результате подавления в синтеза простаноидов участвует в папиллярном нем простаноидов, что приводит к снижению некрозе.

кровотока и ишемии и увеличивает продукцию кислоты, которая повреждает слизистую Задержка родов оболочку.

Известно, что под действием НСПВП про Хотя это действие препаратов отнесено к не исходят химические изменения в защитном желательным побочным эффектам, оно ис барьере слизи, покрывающей слизистую обо пользуется для терапевтической задержки лочку желудка, что приводит к его поврежде преждевременных родов. В родах возрастают нию. Этот эффект опять-таки может быть активность фосфолипазы А2 и уровни проста связан с подавлением синтеза простаноидов под гландинов в амнионе. Простагландины Е2 и F2a влиянием НСПВП. При повреждении сли ввиду их способности вызывать сокращение зистого барьера возникает обратная диффузия гладких мышц матки используются для кислоты из просвета желудка в клетки слизи индукции абортов. Показано, что для женщин, стой оболочки. Если же при этом снижается принимающих ацетилсалициловую кислоту, кровоток, то кислота не удаляется циркуляцией характерны более длительный период беремен и повреждает клетки слизистой оболочки.

ности, продолжительные роды и повышенная Кроме того, обратная диффузия кислоты к ос кровопотеря во время родов. Все эти эффекты новным клеткам активирует пепсиноген, ко могут быть связаны с подавлением биосинтеза торый они продуцируют, что приводит к обра простагландинов.

зованию активного пепсина, разъедающего слизистую оболочку.

Помимо индукции кислотных и ишемиче Заключение ских повреждений, НСПВП подавляют агрега цию тромбоцитов (см. главу 4), что приводит к НСПВП-это разнородная группа химических увеличению времени кровотечения из сосу- соединений, имеющих общее свойство - угне- 268 Глава тение циклооксигеназы. Однако понимание механизмов подобного подавления в настоящее время довольно ограничено, и, хотя данный эффект препаратов может быть использован для объяснения многих фармакологических, терапевтических и токсических эффектов, какой-либо конкретный препарат может об ладать и другим действием, которое вносит свой вклад как в лечебные, так и в нежелательные эффекты. Несмотря на все это, данные препараты относятся к наиболее важным про тивовоспалительным лекарственным средствам.

26 Циклоспорин Дж. Ф. Борель (J. F. Borel) Введение включая иммунокомпетентные. Следующим этапом стала разработка лимфоцитотоксиче Циклоспорин (ЦС-А) является циклическим ских препаратов или процедур (например, ан ундекапептидом, выделенным из Tolypocladi-um тилимфоцитарная сыворотка, L-аспарагиназа, inflatum Gams. Это соединение состоит из стероиды, общее лимфоидное облучение и т.д.), нескольких N-метилированных аминокислот и в результате применения которых происходит одной новой С9-аминокислоты;

его структура элиминация иммунокомпетентных клеток.

представлена на рис. ПО. Пептид нейтрален, Последний этап характеризуется избирательной богат гидрофобными аминокислотами, иммунорегуляцией и использованием нерастворим в воде и н-гексане, но растворяется соединений или методов, специфически во многих других органических растворителях и модулирующих определенные субпопуляции в липидах.

иммунокомпетентных клеток. ЦС-А представ История открытия ЦС-А началась в 1970 г., ляется первым таким препаратом, до некоторой когда в морских образцах был найден новый степени отвечающим этим требованиям и штамм грибков (Tolypocladium inflatum Gams).

применяется в настоящее время в клинике.

Поиск потенциально активных веществ в мор Поскольку ЦС-А является первым соединением, ских организмах не является необычным на специфически и обратимо подавляющим правлением в разработке препаратов из при иммунокомпетентные лимфоциты, его можно родных продуктов. Многолетний опыт работы считать прототипом иммунодепрессивных пре микробиологов и химиков, занимающихся вы паратов нового поколения. Очевидно, ЦС-А даст делением микробных метаболитов, показал, что новый импульс развитию иммунологии.

такие соединения часто обладают цито статической и другой фармакологической ак Фармакокинетика тивностью в значительно большей степени, нежели антибактериальными свойствами, в Данные об абсорбции и элиминации ЦС-А были связи с поиском которых они первоначально получены в условиях стационара после отбирались. ЦС-А испытывался в тест-систе- перорального и внутривенного введения пре мах, уже доказавших свою ценность при изу- парата. У всех исследованных видов животных чении подобных соединений.

и у человека препарат выводится главным В январе 1972 г. на мышиных моделях было образом через печень и с желчью и лишь обнаружено иммунодепрессивное действие ме- некоторое его количество- через почки. За 96 ч у таболита, в том числе подавление гемагглю- человека с мочой выводится 6% пероральной тинации;

однако соединение не оказывало ка- дозы меченого ЦС-А. В неизмененном виде с кого-либо влияния на мышиные опухолевые мочой выделяется только 0,1% введенного клетки (Р-815) в клеточных культурах и не препарата (табл.31).

повышало выживаемости лейкозных мышей.

Метаболизм ЦС-А осуществляется в печени.

Такая иммуносупрессия оказалась новой, по- Все метаболиты, еще не идентифицированные скольку она не была связана с общей цито- полностью, сохраняют интактную циклическую статической активностью.

олигопептидную структуру исходного Для понимания необычной природы ЦС-А соединения. Наблюдаемые модификации за необходимо вспомнить этапы развития кли- ключаются в моно- и дигидроксилировании и N нической иммунодепрессии. Приблизительно деметилировании в разных частях молекулы.

можно выделить три таких этапа. Первое по- Основной путь биотрансформации ЦС-А коление препаратов, используемых в клинике представляется одинаковым у всех исследо (циклофосфамид, азатиоприн, метотрексат и ванных видов (крыса, кролик, собака, человек).

др.), обладает неспецифической цитотоксич- В табл. 32 показано распределение 3Н-ЦС-А ностью в отношении всех делящихся клеток, в плазме, лимфоцитах, гранулоцитах и эритро- 270 Глава Рис. ПО. Химическая структура циклоспорина.

цитах через 20 мин после его добавления к че- В настоящее время уровень ЦС-А в крови ловеческой крови. Примерно 34% препарата может определяться различными методами, содержится в плазме: 5%-в свободном виде, включая биологический, радиоиммунологиче- 24% связано с липопротеинами и 5% связано ский и высокоразрешающую жидкостную хро- с другими белками плазмы. матографию.

Таблица 31. Объединенные данные по фармакокинетике Таблица 32. Распределение циклоспорина (по компонентам циклоспорина у человека крови) в зависимости от его концентрации Концентра- Распределение, % Абсорбция лимфо- грануло- эритро Абсолютная пероральная био- нт/мл плазма циты циты 20-50% (в среднем циты доступность 34%) 500 33 4 7 5 6 Время пика концентрации в 100 35 9 1-6 ч плазме 25 33 Распределение Связывание с белками плазмы 90% (20 С) Кажущийся объем распределения 3,5 л/кг Метаболизм Степень метаболизма Около 99% 17 (9 из Иммуносупрессивные эффекты in vivo Количество компонентов них характеризуются как метаболиты) Гуморальный иммунный ответ Элиминация Около 2 ч (а-фаза) Около 24 ч (Р-фаза) ЦС-А сильно подавляет гуморальную иммун Время полувыведения 0,66 л/мин ную реакцию, которая заключается в синтезе Полный клиренс антител в ответ на антигены. Так, подавляется Циклоспорин образование В-лимфоцитами антител к Т-за- жения трансплантата. Препарат был исследован висимым антигенам, например эритроцитам с хорошими результатами на огромном барана или гемоцианину моллюсков. Однако количестве экспериментальных моделей ал образование антител к Т-независимым анти- лотрансплантатов, а также при трансплантации генам, таким как липополисахариды, наруша- у человека (табл. 33).

ется лишь в небольшой степени. С помощью Благодаря его избирательным фармаколо метода оценки бляшкообразующих клеток у гическим эффектам, включая подавление раз мышей, иммунизированных эритроцитами личных функций фагоцитов, были успешно вы барана, можно выявить подавление как IgM-, полнены некоторые типы трансплантаций, ранее так и IgG-бляшек. Более того, подавляется как считавшиеся нереализуемыми. К ним относится первичный, так и вторичный ответ. Однако трансплантация легких у собак в связи с вторичный ответ угнетается в большей степени, нормальным заживлением анастомозов трахеи, а чем первичный, для подавления которого также трансплантация тонкого кишечника у необходимы более высокие дозы препарата;

свиней и собак, которые часто дополнительно причем время его введения становится более осложнялись местными реакциями критическим. При прекращении введения пре- трансплантат против хозяина (ТПХ). Со парата иммунодепрессивный эффект быстро общалось и о пересадке аллогенной роговицы у исчезает (рис. 111). кроликов, при этом отмечено, что для уве ЦС-А наиболее эффективен при его введе- личения выживаемости трансплантата вполне нии во время иммунизации (рис. 112), что достаточно одной местной аппликации пре указывает на раннее вмешательство препарата в парата. Осуществлялась пересадка (с после антигенный запуск лимфоцитов;

при этом его дующим нормальным функционированием) действие можно легко отличить от действия таких необычных трансплантатов, как скелет антимитотических (азатиоприн) или алкилиру- ные мышцы и нервные клетки. Не меньший ющих препаратов (циклофосфамид) (см. главу интерес представляет пересадка конкордант-ных 27). ксенотрансплантатов, таких как почки и сердце.

Особый случай трансплантации представ ляет собой пересадка костного мозга для вос Клеточно-опосредованный иммунный ответ становления гемопоэтических органов. Без ЦС-А сильно угнетает клеточный иммунитет, иммунодепрессивной терапии даже хорошо который играет главную роль в отторжении подобранные трансплантаты у людей, как пра аллотрансплантата и гиперсенситивности за- вило, вызывают реакцию ТПХ, которую, од медленного типа. Так называемые сенсибили- нако, можно предотвратить или подавить с зированные лимфоциты образуются в ответ на помощью ЦС-А. Аплазия костного мозга у крыс различные антигенные стимулы. может быть вызвана бусульфаном, цик- ЦС-А эффективен в предупреждении оттор- Рис. 111. Продолжительность иммуносупрессивного влияния ЦС-А на образование гемагтлютининов у мышей.

Группам мышей вводили ЦС-А в течение 5 дней подряд. Осуществлялась предварительная иммунизация (0 на шкале Дни);

титры в сыворотке каждой мыши определялись на 9-й день (ОТГ определение титра гемагтлютининов). ИИ - иммуносупрессивный индекс, выражающий отношение среднего значения титра (Ч log2) в группах мышей, получивших препарат, к контролю.

272 Глава Рис. 112. Зависимость иммунодепрессивного действия от времени введения препарата с учетом иммунизации.

Мышам однократно перорально давали циклоспорин или внутрибрюшинно вводили эквипотентную дозу азатиоприна или циклофосфамида (от Ч 2-го до + 3-го дня).

Иммунизация производилась в нулевой день, а прямое определение бляшкообразующих клеток - на 4-й день.

Таблица 33. Объединенные данные об успешно проведен- лофосфамидом или облучением. ЦС-А не ных аллогенных и ксеногенных трансплантациях органов с только предупреждает развитие реакции ТПХ, использованием циклоспорина но и не препятствует репопуляции лимфоид Вид Органы ных органов и восстановлению Т-зависимых иммунных функций в значительно более ранние Мыши Кожа, костный мозг, мышечные клетки сроки по сравнению с наблюдаемыми у Крысы1 Кожа, сердце, костный мозг, тонкий ки- животных, не леченных этим препаратом. Ус шечник, поджелудочная железа, островки тановленная острая реакция ТПХ у крыс эф Лангерганса, нервные клетки, конечности фективно устраняется терапевтическими дозами Кролики1 Кожа, почки, костный мозг, роговица, яич ЦС-А, введение которого начинают через 2 нед ники и маточные трубы конечности Кошки Кожа, костный мозг после пересадки. По мере продолжения лечения Козы1 Сердце животные выздоравливают и остаются Собаки1 Кожа, почки, поджелудочная железа, кост нормальными. Этот терапевтический эффект ный мозг, кишечник, легкое, участки вен.

препарата при острой реакции ТПХ под опухоли Свиньи Кожа, печень, поджелудочная железа, тон- твержден у человека.

кии кишечник На модели клеточно-опосредованного ци Обезьяны Кожа, почки, поджелудочная железа, серд толиза in vivo у мышей, в которой специ це, легкое, сердце и легкое, яичники, ко фическая сенсибилизация лимфоцитов индуци нечности руется к клеткам-мишеням мастоцитомы, ЦС-А Человек Почки, костный мозг, поджелудочная же леза, сердце, легкое, сердце и легкое, пе- нарушает только фазу сенсибилизации, не влияя чень, кожа, роговица на цитолитические клетки-эффекторы.

Вторичный ответ также чувствителен к дейст Виды, у которых, помимо аллотрансплантации, проведена вию ЦС-А. Таким образом, in vivo подавляется ксенотрансплантация органов (выделено курсивом).

Циклоспорин развитие цитолитических клеток, сами же эф- Таблица 34. Результаты, полученные при профилактиче ском (профил) или терапевтическом (терап) применении фекторные клетки резистентны к действию циклоспорина при экспериментальных аутоиммунных (аи) препарата. Однако если фаза сенсибилизации в заболеваниях (заболевания человека, соответствующие модели аллогенного трансплантата предва экспериментальным моделям, указаны в скобках) рительно подавляется ЦС-А, после отмены которого происходит отторжение, то оно вполне контролируется последующим лечением ЦС-А.

Некоторые модели повышенной чувстви тельности замедленного типа, такие как кожная реакция на оксазолон у мышей или кожная реакция морских свинок на ДНХБ (1-хлор-0-2,3 динитробензол), подавляются ЦС-А, введенным в фазу сенсибилизации. Первичный и вторичный иммунные ответы подавляются дозозависимо. Однако в модели кожной кон тактной повышенной чувствительности к ту беркулину у морских свинок введение ЦС-А одновременно с разрешающей дозой антигена (т.е. полностью сенсибилизированным живот ным) эффективно подавляет реакцию.

Экспериментальные аутоиммунные заболевания В табл. 34 приведены результаты, полученные при профилактическом или терапевтическом применении ЦС-А на экспериментальных мо делях аутоиммунных заболеваний.

В верхней части табл. 35 перечислено шесть моделей, в которых для увеличения иммуно генности антигена использовался полный адъювант Фрейнда. При профилактическом применении ЦС-А (т. е. при его введении перед сенсибилизацией) наблюдалось подавление на Восстановление симптомов после прекращения лечения чальных симптомов. Даже когда лечение не циклоспорином.

начинали до появления первых патологических симптомов (терапевтическое применение), вве- Нд-нет данных.

дение ЦС-А успешно излечивало животных в большинстве моделей. Однако при прекра ЦС-А эффективен в профилактике аутоим щении лечения происходил рецидив экспери мунных заболеваний. При экспериментальном ментального аллергического энцефаломиелита, аллергическом энцефаломиелите (ЭАЭ) пато аллергического неврита и миастении гравис.

логическая картина демиелинизации напоми Это связано главным образом с длительным нает таковую при постинфекционном энцефа медленным высвобождением антигена, ломиелите или при рассеянном склерозе у смешанного с полным адъювантом Фрейнда.

человека. ЦС-А предупреждает развитие ЭАЭ у Возможно, подобное действие обусловлено крыс, морских свинок и макак резусов при его невозможностью развития супрессорных меха введении в фазу сенсибилизации. ЦС-А также низмов после начала заболевания, поскольку обладает заметным терапевтическим эффектом ЦС-А предупреждает начальные этапы анти у сенсибилизированных животных (т.е. когда генной сенсибилизации в данных моделях. Ос введение препарата начинают при первых тальные модели в нижней половине табл. симптомах паралича). Животные вскоре связаны с использованием методов сенсиби выздоравливают, но рецидивы ЭАЭ часто лизации без применения полного адъюванта возникают при прекращении лечения. Если до Фрейнда.

норские клетки активируются in vitro специ фическим антигеном или митогеном, то ЭАЭ 274 Глава может быть перенесен от сенсибилизированных животных изологичным реципиентам. Если ЦС А присутствует в течение всего 72-часового инкубационного периода, то пролиферация донорских клеток значительно подавляется и пассивный перенос ЭАЭ такими клетками у крыс невозможен. Более того, ЦС-А эффективен и при сверхострой форме ЭАЭ у крыс.

Сходные положительные результаты при менения ЦС-А получены у крыс с аутоиммун ным увеитом, индуцированным очищенным антигеном сетчатки млекопитающих. Кроме того, препарат оказался эффективным при экс периментальном аллергическом неврите у мор ских свинок, при нефрите Heymann и артритах, 0,01 0,1 1,0 10,0 100, индуцированных адъювантом Фрейнда и кол ЦС-А, мкг/мл культуральной жидкости лагеном II типа. В отличие от хронического воспаления, в котором участвуют лимфоциты, Рис. 113. Дозовая зависимость ингибиторного влияния при острых воспалительных процессах ЦС-А ЦС-А на пролиферативный ответ лимфоцитов человека при различных стимулах.

полностью неактивен.

При экспериментальных аутоиммунных ти- Темные кружки-первичная реакция смешанных лимфоцитов;

светлые кружки-вторичная реакция реоидитах, индуцированных у крыс тимэкто смешанных лимфоцитов;

светлые треугольники мией и облучением, лечение ЦС-А приводит к конканавалин-А;

темные треугольники значительному улучшению состояния забо фитогемагглютинин;

темные квадраты - клеточно левших животных, что подтверждается паде- опосредованный лимфоцитолиз.

нием уровня антитиреоглобулиновых антител и ассоциированной нормализацией отношения Тп:Тс (Т4:Т8) в ходе лечения. Прекращение многими антигенами. Поликлональная акти введения препарата приводит к рецидиву. С вация лектинами, такими как конканавалин А, другой стороны, попытки предупреждения фитогемагглютинин и митоген лаконоса, а развития спонтанных аутоиммунных тиреоиди также антигенспецифическая активация (на тов у цыплят тучной породы оканчиваются пример, эритроцитами барана в системе Mishell неудачей, а раннее лечение эмбрионов усугуб Dutton или аллоантигенными стимулирующими ляет заболевание.

клетками в реакции смешанных лимфоцитов) Недавно получены убедительные результаты почти полностью подавляются профилактического и терапевтического соответствующими концентрациями ЦС-А. 50% применения ЦС-А у мышей (NZB/NZW)F1 со подавляющая концентрация (IС50) варьирует от спонтанным развитием аутоиммунного забо 20 до 500 нг/мл в зависимости от используемых левания, проявляющегося гемолитической ане митогенов и видов животных. На рис. мией, появлением антител к ДНК и протеину показано дозозависимое ингиби-торное влияние рией, которое напоминает системную красную ЦС-А на пролиферативную реакцию волчанку у людей.

человеческих лимфоцитов в ответ на различные стимулы. Ингибируется как первичная, так и вторичная реакция смешанных лимфоцитов, а Супрессивные эффекты in vivo также индукция цитолитиче-ских лимфоцитов;

однако на клеточно-опосре-дованный Все доступные экспериментальные данные ука лимфоцитолиз и индукцию активности зывают на то, что ЦС-А действует специфи супрессорных клеток препарат не влияет чески и обратимо именно на лимфоциты, по (частично показано на рис. 113).

скольку до сих пор не обнаружено функцио В отличие от других супрессивных препара нального влияния этого препарата на гемо тов, таких как азатиоприн и колхицин, ЦС-А поэтические, фагоцитарные и опухолевые клет угнетает преимущественно Т-клетки, хотя в ки. ЦС-А подавляет пролиферативный ответ более высоких концентрациях он может также лимфоидных клеток, активированных in vivo подавлять функции В-клеток. Так, активация В клеток липополисахаридными антигенами Циклоспорин (Т-независимый митоген) слабо нарушается шает ранние этапы, следующие напосредствен концентрациями препарата, которые блокируют но за распознаванием антигена или митогена. В стимуляцию Т-клеток конканавалином А (Т- результате этого Т-клетки остаются в состоянии зависимый митоген). Более того, ЦС-А покоя и неспособны к трансформации и отменяет выделение лимфокинов (таких как у- выделению лимфокинов, а следовательно, к интерферон), фактора активации макрофагов и индукции и поддержанию иммунного ответа.

ростового фактора Т-клеток - интерлейки-на-2.

Кроме того, доказано, что ЦС-А может столь же Ингибирующий эффект в значительной сте- эффективно подавлять начавшиеся иммунные пени зависит от времени: процент подавления реакции, например криз отторжения или уменьшается пропорционально увеличению аутоиммунный рецидив. Этот терапевтический промежутка времени между внесением мито- (в противоположность профилактическому) гена и ЦС-А в культуру. Таким образом, пре- эффект может объясняться тем, что ЦС-А парат влияет на ранние клеточные события, подавляет запускаемое антигенами выделение происходящие в иммунокомпетентных лимфо- лимфокинов активированными клетками, а цитах в ответ на митогенные стимулы, оста- также вмешивается в активацию и рекруитмент навливая лимфоциты в фазе G0 или в ранней других эффекторных клеток.

фазе G1 клеточного цикла. Более того, эффект препарата полностью обратим. ЦС-А сам по Иммунофармакология in vitro себе не обладает агглютинирующим, цитоли тическим или стимулирующим действием на Уже в ранних исследованиях отмечалось слабое лимфоциты.

влияние ЦС-А на гемопоэтические ткани и функции лейкоцитов (кроме лимфоцитов).

Обнаружение in vivo и in vitro обратимости его Механизм действия иммунодепрессивной активности показало, что влияние на лимфоциты не связано с лимфо ЦС-А подавляет широкий спектр реакций, в токсическим действием, например с антими которых критическую роль играют имму- тотическим эффектом. Известно, что соедине нокомпетентные клетки. Характер событий, ние главным образом подавляет хелперную происходящих в лимфоцитах при контакте с функцию, т.е. способность Т-клеток синтези ЦС-А, остается не вполне ясным. Все доступные ровать и выделять ИЛ-2 (рис. 114). Хотя ЦС-А экспериментальные данные свидетельствуют о нарушает синтез и некоторых других лимфо том, что соединение обладает специфическим и кинов, он не изменяет их действия на лимфо обратимым действием на лимфоциты. Какова циты-мишени, например на ИЛ-2-зависимую же основа специфичности действия ЦС-А на пролиферацию Т-клеток или на миграционную лимфоидные клетки?

активность гранулоцитов или макрофагов и На основании множества данных, получен- выделение монокинов.

ных как in vitro, так и in vivo, было сделано Стадии трансформации покоящихся Т-кле предположение, что препарат обратимо нару- ток (Т) в активированные Т-клетки (Т), имею щие рецепторы к ИЛ-2, и функции этих Т'-кле- Рис. 114. Активация Т-клеток.

Связывание антигена с Т-клетками не приводит к их активации. Она наблюдается только при передаче двух сигналов реактивным Т-клеткам. Связывание рецепторов Т-клеток с антигеном представляет антигенный сигнал, а макрофаг (МФ) продуцирует индуктивную молекулу, МФ-костимулирующую активность, которая является вторым сигналом (интерлейкин-1, ИЛ-1) для Т-клеточной активации.

Взаимодействие с регуляторными структурами на поверхности антигенпрезентирующих клеток обусловливает начало выделения ИЛ-1.

276 Глава Таблица 35. Этапы перехода покоящихся Т-клеток (Т) Сигнальная модель предполагает, что все Т в активированные Т-клетки (Т') клетки физиологически одинаковы и обладают сходным эффекторным потенциалом. Согласно этой гипотезе, ЦС-А повреждает все Т-клетки в одинаковой степени, а проявление разных функций клеток регулируется различной рецепторной чувствительностью к препарату.

Субпопуляционная теория постулирует, что ЦС-А различает две субпопуляции Т-клеток:

чувствительные (среди них хелпер-ные клетки и предшественники цитотоксиче-ских клеток) и нечувствительные (некоторые супрессорные и все цитотоксические клетки) к препарату.

В настоящее время на основании имею щихся знаний нельзя отвергнуть какую-либо из этих моделей, поэтому для окончательного выбора между ними необходима дальнейшая экспериментальная работа. Наконец, предпо лагается, что ЦС-А может изменять функцию В-клеток таким же образом, как и в случае Т клеток. Согласно сигнальной модели, ЦС-А различает В-клетки на разных стадиях диффе ренциации на пути к синтезу иммуноглобу ток, такие как образование лимфокинов, обла линов, а по субпопуляционной теории, к пре дают различной чувствительностью к ЦС-А парату чувствительны В-клетки только одной (табл. 35).

из нескольких физиологически различных суб В этих реакциях сигнал 1 обеспечивается популяций.

антигеном или митогеном, связывающимся с рецептором на поверхности Т-клеток, а сигнал 2-костимулирующей активностью, например Действие ЦС-А на молекулярном уровне ИЛ-1 или другими постулируемыми продуктами Выдвижение предположений относительно ме антигенпредставляющих клеток. Реакция Б ханизма действия ЦС-А, который, несмотря на опосредуется продуктом Т-клеток- ИЛ-2 или значительный прогресс, остается в значитель ростовым фактором Т-клеток. ЦС-А оказывает ной степени гипотетическим, представляется влияние на реакцию В при концентрации 5- нам рискованным, хотя и заманчивым. Более нг/мл, но не влияет на реакцию Б при того, молекулярная биология активации лим концентрации ниже 5-10 мкг/мл. Ци фоцитов, пролиферации и созревания сама по толитическая эффекторная функция цитоток себе еще далека от полного понимания. Ввиду сических Т-клеток (Т'ц) полностью резистентна бесспорной селективной активности ЦС-А в к ЦС-А (реакция Г).

отношении лимфоцитов наиболее обнадежи Реакцию А анализировать трудно ввиду ее вающим подходом к открытию механизма его многофакторности. Несовпадение результатов, действия является изучение клеточных функ полученных в разных лабораториях, может ций, которые специфичны для лимфоцитов и отчасти объясняться вовлечением множества отличаются от других, более общих событий, взаимодействий в процесс превращения Т в Т'.

происходящих при активации клеток (рис. 115).

В настоящее время наиболее привлекательным Современные теории, касающиеся объяснением является то, что ЦС-А и про биологии Т-клеток лактин связываются с одним и тем же (пока не идентифицированным) белком, который опре В настоящее время достигнуто полное согласие деленно отличается от структур, распознающих относительно активации, клональнои про антиген, или от рецептора Т-клеток. После лиферации и запуска Т-клеток, обладающих связывания ЦС-А интернализируется и кон хелперной функцией, однако взгляды на реак центрируется в цитоплазме, где он связывается цию других клеток на ЦС-А расходятся. Эти расхождения привели к созданию двух теорий биологии Т-клеток.

Циклоспорин Рис. 115. Предполагаемый механизм действия ЦС-А.

с циклофилином. Этот процесс несколько на- дующая трансляция, как и синтез белка (лим поминает реакции в случае стероидных гор- фокина), протекает нормально. Достоинствами монов. Оба соединения, по-видимому, распо- этой гипотезы являются ее простота и сов лагают рецепторами в цитозоле и способны местимость с рядом результатов in vivo, по проникать в ядро, где ЦС-А, в частности, казывающих, что ЦС-А не только предупреж специфически подавляет транскрипцию иРНК, дает первичную иммунизацию, но и способен кодирующую лимфокины, но не иРНК для остановить начавшуюся иммунную реакцию.

других белков. Этот процесс представляется Наиболее легко можно наблюдать при по критическим этапом в чувствительности клеток давлении длительного выделения лимфо-кинов, к ЦС-А, поскольку добавление препарата позже а также при супрессии дальнейшей активации и данной стадии (т.е. через 2-4 ч после рекрутирования эффекторных клеток.

стимуляции) является неэффективным и после- 19 278 Глава Другие фармакологические эффекты висимы и обратимы (при снижении дозы или отмене препарата).

Побочные эффекты Лимфомы В связи с относительно небольшой разницей между эффективной и токсической дозами Лимфомы диагностированы у 50 из большинства иммунодепрессантов необходимо больных, перенесших трансплантацию почек отметить, что по этому отношению между до 1985 г. Однако их частота остается на дозами ЦС-А значительно превосходит другие уровне 0,4%;

в большинстве случаев, помимо препараты. Соответственно этому, побочные ЦС-А, использовались другие иммунодепрес эффекты у животных минимальны в иммуно- санты. Согласно длительным токсикологиче депрессивном диапазоне доз. ским исследованиям на разных видах живот ных и другим специальным исследованиям, ЦС-А не обнаруживает канцерогенности и не Нефротоксичность способствует метастазированию опухолей. В В клинической практике описан ряд побочных большинстве случаев (если не во всех) наличие эффектов разной степени тяжести и частоты. злокачественных новообразований коррелирует Нефротоксичность в большинстве случаев яв- с чрезмерным иммунодепрессивным режимом ляется дозозависимой. В том случае, когда ЦС- лечения, который, как известно, нарушает А назначается в низких дозах и его уровень механизмы иммунного надзора. Так, показано, постоянно контролируется, нефротоксичность что индуцированная вирусом Эпш-тейна-Барра не является лимитирующим фактором цикло- пролиферация В-клеток усиливается в спориновой иммунодепрессии. Острая токсич- присутствии ЦС-А, возможно, в результате ность характеризуется дозозависимым быстрым подавления Т-клеток, осуществляющих повышением уровня креатинина в сыворотке и контроль пролиферации В-клеток.

снижением скорости клубочковой фильтрации (СКФ). Уменьшение СКФ, вероятно, связано с преклубочковой вазоконстрик-цией. Заключение Характерных морфологических нарушений не обнаруживается. Тубулярные изменения, ЦС-А является прототипом нового поколения включая тельца и вакуоляризацию, на- иммунодепрессантов. Это, в частности, связано блюдаются только при токсических концент- с уникальной природой его механизма рациях препарата. действия. Препарат не влияет на созревание Хроническая токсичность может развиваться стволовых клеток до состояния антигенчувст при длительном введении низких доз ЦС-А, а вительных клеток-предшественников. И только также при его комбинации со стероидами. СКФ когда зрелые иммунокомпетентные Т-клет-ки снижается примерно на одну треть, даль- получают активирующий их сигнал от антигена нейшего ухудшения почечной функции не про- на антигенпредставляющей клетке, ЦС-А исходит. Однако в некоторых случаях наблю- блокирует последующие этапы активации, дается прогрессивное течение циклоспорино- такие как транскрипция иРНК, кодирующей вой нефротоксичности, которая сопровождается лимфокины, секреция лимфокинов, про изменениями в артериолах и наличием полосок лиферация и созревание. В результате этого фиброза в биоптатах почек. Если уменьшение эффекторные клетки не образуются. Более того, доз ЦС-А не приводит к улучшению функции ЦС-А влияет на функции некоторых почек, следует перейти к обычной активированных или эффекторных клеток.

иммунодепрессии. Следует избегать введения Ингибирующий эффект препарата обратим.

потенциально нефротоксичных препаратов;

ЦС-А подавляет гуморальный и клеточный необходимо также учитывать взаимодействие иммунитет и эффективен при хроническом вос лекарств. палении. Препарат наиболее активен при его Меньшее значение имеют легкая гепатоток- введении во время индуктивной фазы иммун сичность и такие симптомы, как анорексия, ного ответа (сенсибилизация). Кроме того, ЦС летаргия, гирсутизм, тремор, гипертрофия де- А подавляет эффекторную фазу при кризе сен, тошнота и диарея. Побочные эффекты, отторжения, при реакции трансплантат против наблюдаемые достаточно редко при исполь- хозяина и экспериментальных аутоим- зовании ЦС-А, в большинстве своем дозоза- Циклоспорин мунных заболеваниях. Его действие специфич- N. В. Циклоспорин известен в Европе и но и не распространяется на функции макро- США как cyclosporins фагов и гемопоэтических органов.

Этот новый механизм действия позволяет ЦС-А заполнить важный терапевтический про бел в области трансплантации органов. Однако потенциал препарата может быть полностью оценен только при исследовании возможностей его применения при аутоиммунных заболеваниях.

Интересно то, что ЦС-А необходим не только как лекарственный препарат, но и как весьма важный инструмент фундаментальных иммунологических исследований.

27 Иммуносупрессивные препараты Дж. Л. Турк (J. L. Turk) ставлялось изучение их действия на эквива Введение лентных пролиферативных процессах иммун ного ответа. Многие исследователи предпо Широкий класс веществ был исследован с целью выявления и оценки иммуносупрессив- лагали, что действие таких соединений на опухолевые и иммунокомпетентные клетки ной активности. Главным стимулом в этой работе явилась необходимость подбора опти- идентично. В других исследованиях действие мальной схемы подавления отторжения транс- подобных агентов на пролиферирующие опу холевые клетки даже не исследовалось, а изу плантата, а также приживления пересаженного чалось на таких обычных биохимических мо костного мозга. Кроме того, как было отмечено делях, как крысиная печень или костный мозг ранее, основным побочным эффектом цыплят. Действие препаратов на такие нор противоопухолевой терапии является снижение мальные непролиферирующие ткани затем сопротивляемости организма инфекциям. Таким образом, большое число препаратов, пер- экстраполировалось для объяснения влияния на воначально использовавшихся как противо- ферментативные системы пролиферирую-щих опухолевые, были исследованы как потенци- раковых клеток и, в конце концов, на альные иммунодепрессанты и в качестве та- иммунный ответ. Многие из изученных соеди ковых применены в клинике. Препарат, кли- нений влияют одновременно на ряд различных нически используемый для подавления иммун- биохимических обменных процессов. Особым примером может служить ситуация, когда пре ных реакций, в идеале должен отвечать пяти парат оказывает центральное влияние на про требованиям.

1. Интервал между токсическим и терапев- лиферацию лимфоцитов, одновременно обла дая противовоспалительными эффектами в от тическим эффектом препарата должен быть ношении периферических проявлений иммун достаточно большим.

2. Препарат должен обладать избиратель- ных реакций. Такие периферические противо воспалительные эффекты отмечены не только ным действием на лимфоциты и не вызывать для алкилирующих препаратов и тиопуринов, повреждения других клеток организма.

но и для антилимфоцитарного глобулина 3. Действие препарата (если возможно) (АЛГ).

должно быть направлено только на клетки, В настоящее время иммуносупрессанты принимающие специфическое участие в кон разделяют на следующие группы: а) алкили кретном иммунном процессе.

рующие агенты;

б) тиопурины;

в) антимета 4. Препарат должен вводиться в течение болиты;

г) продукты грибков, включая цик ограниченного периода времени до тех пор, лоспорин;

д) кортикостероиды;

е) АЛГ. Кор пока иммунные процессы не воспримут чуже тикостероиды и циклоспорин детально описаны родный антиген как часть своего. После этого в главах 24 и 26. В данной главе основное возможно уменьшение дозы, а затем и отмена внимание уделено различным аспектам дейст препарата, если организм способен вия алкилирующих агентов и тиопуринов. Од поддерживать собственную иммунную защиту ним из недавних достижений является обна от инфекций.

ружение того, что супрессия одной субпопу 5. Он должен быть эффективным и против ляции лимфоцитов может привести к общему уже развившихся иммунных процессов.

усилению иммунного ответа. В связи с э.им в Внедрение цитотоксических препаратов и данной главе рассматривается и ряд соеди антиметаболитов в 50-х годах привело к ряду нений, проявляющих чрезвычайную активность исследований их влияния на иммунный ответ.

в повышении противоопухолевого иммунитета Поскольку многие из этих препаратов внедря и называющихся модификаторами лись с целью контроля пролиферации неоплас биологического ответа.

тических клеток, наиболее разумным пред- Иммуносупрессивные препараты Алкилирующие агенты Циклофосфамид Действие алкилирующих агентов заключается в Циклофосфамид (ЦФ) сам по себе in vitro не замещении химических групп в биологически обладает цитотоксическим действием, но его активных молекулах, особенно в нуклеиновых метаболиты, образующиеся в печени (альдо кислотах и ферментах. При замещении ал- фосфамид и карбоксифосфамид) принадлежат к кильными группами в молекуле ДНК действие главным алкилирующим и цитотоксическим алкилирующих агентов проявляется как анти- веществам. Время полураспада ЦФ в плазме митотическое. При этом они нарушают порядок человека составляет менее 6,5 ч, а у крыс расположения оснований в молекуле ДНК, элиминация происходит еще быстрее;

однако образуя мостики вдоль различных участков ее коренных различий в процессе активации пре спирали или разрушая молекулу. В этом случае парата у человека и некоторых видов животных повреждается матрица для репликации ДНК и не обнаруживается. В крови крыс алки формирования информационной РНК.

лирующее действие ЦФ достигает своего мак Простейшим по химической структуре симума через 30 мин после введения препарата, представителем группы препаратов является а через 4 ч оно возвращается к нулевому азотистый иприт (рис. 116), который имеет две значению.

реакционноспособные боковые цепи, со- Хотя ЦФ неактивен in vitro, его можно держащие атомы хлора. Сходные структуры активировать в присутствии микросом печени.

имеют и другие биологически активные агенты:

Одним из его наиболее активных метаболитов а) мелфалан, L-фенилаланин-иприт;

б) хлор- является 4-гидропероксициклофосфамид (4-ГЦ).

амбуцил, аминофенилбутировая кислота ип- В настоящее время многие исследователи рита;

в) бусульфан, метансульфоновая кислота.

используют 4-Г - для изучения механизма Циклофосфамид, наиболее активное соеди- действия ЦФ in vitro.

нение в этой серии, является диамидным эфи- Исследование механизмов действия ЦФ in ром фосфорной кислоты (рис. 117). vivo ограничено и осуществляется главным Циклофосфамид- наиболее исследованный образом на экспериментальных моделях (мыши модификатор биологических ответов;

его раз- и морские свинки). Однако в связи с уве личные влияния на субпопуляции лимфоцитов личением доступности 4-Г - стало возможным являются основой для дальнейшего изучения распространение таких исследований на ткани ряда других соединений. человека. Первоначально предполагалось, что действие ЦФ обусловлено сильной антипро лиферативной активностью препарата. Это подтверждалось исследованиями, показавшими мощное подавление продукции антител и нарушение функции Т-клеток при введении ЦФ в пролиферативную фазу иммунного ответа.

Продукция антител подавлялась и в случае введения ЦФ перед сенсибилизацией. Предпо лагалось, что предшественники клеток, про дуцирующих антитела, чувствительны к ЦФ, поскольку они являются быстропролифери рующей клеточной популяцией, тогда как предшественники Т-клеток относятся к дол гоживущей и медленно обновляющейся попу ляции. Эта концепция подтверждена исследо ваниями с использованием маркеров Т-клеток у мышей и гистологическим анализом лим фоидной ткани. После введения ЦФ увели чивалось относительное количество Т-клеток;

исчезновение В-клеток на срезах лимфати ческих узлов и селезенки определялось визу ально.

Исходя из этих наблюдений, ЦФ в одно- 282 Глава кратной большой дозе (300 мг/кг) был ис- циации В-клеток полностью отменяется одно пользован для изучения регуляции Т-клеток in часовой обработкой Т-клеток низкими кон vivo. Обнаружено, что многие функции Т-кле- центрациями 4-Г - (0,01-20 мкМ). При таких ток могут быть усилены предварительным концентрациях перекрестные сшивки ДНК введением ЦФ. К ним относятся аллергическая имеются лишь в незначительном количестве контактная чувствительность к простым гап- или вовсе отсутствуют, а бластогенез не умень тенам и повышенная чувствительность замед- шается.

ленного типа Jones-Mote у морских свинок и Функции регуляторных Т-клеток (индукто мышей. В опытах с морскими свинками ров и супрессоров), которые являются CD4 получены доказательства существования В-кле- положительными и СD8-отрицательными, бо ток-супрессоров, регулирующих реакции, чув- лее чувствительны к ингибиторным эффектам ствительные к ЦФ. У мышей препарат по- 4-ГЦ, чем функции цитотоксических эффектор вреждает как Т-, так и В-супрессорные клетки. ных предшественников. Наибольшей чувстви Однако у мышей усиливающие эффекты ЦФ тельностью к 4-Г - (<=20 мкМ) обладают ин наблюдаются при значительно более низкой дуцированные конканавалином А предшест дозе (50 мг/кг), при которой функция В-клеток венники супрессорных клеток, тогда как ин не нарушается. Более того, установлено, что дукторы первичных и вторичных цитотокси влияние предварительного введения ЦФ на ческих Т-лимфоцитов чувствительны только к гиперсенситивность замедленного типа (ГЗТ) у концентрациям в диапазоне 20-40 мкМ, а мышей зависит прежде всего от уровня ин- супрессорные эффекторы резистентны к инги дуцированного иммунного ответа и в меньшей биторным эффектам вплоть до 100 мкМ 4-ГЦ.

степени-от типа антигена или дозы ЦФ. Так, Поскольку перекрестное сшивание ДНК не сильные реакции ГЗТ на эритроциты барана и наблюдается при концентрациях 4-Г - ниже на антиген главного комплекса гистосов- мкМ, для объяснения влияния препарата на местимости подавляются, тогда как слабые предшественники супрессорных клеток пред усиливаются предварительным введением ЦФ. полагается наличие иного механизма. Более Возможно, это связано с тем, что слабые того, предполагается даже отсутствие связи реакции в процессе развития подвергаются иммуномодулирующих эффектов ЦФ с дейст сильной регуляции, а ЦФ снимает регуляцию. вием препарата на нуклеиновые кислоты. Ве Во многих изученных системах ответ ан- роятно, что ЦФ индуцируют появление новых тител подавляется предварительным введением антигенных структур, обусловливающих гене ЦФ. Однако описан ряд систем, в которых рирование аутореактивных цитолитических уровень антител повышается параллельно ГЗТ. клеток. Эти неоантигены могут быть продук ЦФ также облегчает продукцию антител в тами реактивированных вирусов или антиге моделях с полным подавлением клеточно- нами, найденными на более примитивных опосредованного иммунитета. В этих моделях клетках-предшественниках.

антитела в норме не продуцируются на несущий Теория модификации клеточной поверхнос белок, когда его поверхностные рецепторы ти (независимо от предполагаемого механизма) полностью замещены гаптеном. Тем не менее должна получить экспериментальное под антитела к носителю могут обнаруживаться в тверждение.

этой модели, если животному предварительно Хотя ЦФ и 4-Г - были внедрены и изучены вводится ЦФ. В дальнейшем ЦФ может благодаря их способности уменьшать интен полностью отменить иммунологическую сивность антителообразования, только иссле толерантность, если она индуцирована Т- дования, выявившие усиление под их действием клетками-супрессорами. Однако этот эффект Т-клеточных ответов, продемонстрировали является временным и толерантность ценность этих препаратов как модификаторов восстанавливается по мере регенерации биологических ответов. Как показывают супрессорных клеток. исследования двух последних десятилетий, Внедрение и использование 4-Г - in vitro данные препараты служат мощным инст позволили провести более точный анализ дей- рументом изучения механизмов иммунорегу ствия ЦФ. Очень скоро выяснилось, что дейст- ляции.

вие 4-Г - особенно сильно отражается на по- Никакие другие алкилирующие агенты не пуляции клеток Т-супрессоров. Индуцированная обладают столь сильным действием, как ЦФ. У конканавалином А Т-супрессия дифферен- морских свинок аналогичное, но менее сильное действие проявляет мелфалан. Рядом ав- Иммуносупреесивные препараты торов было изучено (главным образом на мышах) модифицирующее влияние ЦФ на про тивоопухолевые ответы. В некоторых моделях ЦФ, введенный перед трансплантацией опухоли, приводит к более сильному и длительному цитотоксическому эффекту и повышению противоопухолевого иммунитета. Мыши, неспособные к какому-либо опухоль нейтрализующему ответу, приобретали эту способность в результате предварительного введения ЦФ. Такой результат достигался однократным введением низкой дозы препарата (50-100 мг/кг). Эффективные дозы в данном случае были значительно ниже тех, которые обладают каким-либо прямым действием на пролиферирующие опухоли и схемы введения которых не обеспечивают эффективного уровня препарата к моменту трансплантации опухоли.

В одном из исследований мыши Рис. 118. Гуанин-6-меркаптопурин.

опухоленосители, получившие лечение низкими дозами препарата, были способны отторгать трансплантат с 300 минимальными летальными дозами опухолевых клеток вплоть до 31-го дня после введения ЦФ.

Тиопурины Основными из используемых тиопуринов яв ляются 6-меркаптопурин (6-МП) (рис. 118) и азатиоприн (A3) (рис. 119). Эти соединения относятся к аналогам пурина (гуанина). Ранее предполагалось, что они действуют как лож ные основания, включающиеся в ДНК. В дей ствительности они влияют на синтез нуклеино Рис. 119. Азатиоприн.

вых кислот через анаболические ферменты пу рина. На клеточном уровне эти вещества по давляют синтез белка. Многие исследования дается подавлением пролиферации Т-клеток в посвящены влиянию 6-МП и A3 на Т-кле- дренирующих лимфатических узлах. Они также точный иммунитет in vivo и in vitro. Тиопурины активны в отношении гуморального ответа. Так, относятся к сильнодействующим про- 6-МП, введенный одновременно с тивовоспалительным препаратам. Предпола- иммунизацией кроликов бычьим альбумином, гается, что их противовоспалительное действие подавляет антителообразование с фор связано с подавлением медиаторов, в норме мированием иммунологической толерантности.

выделяемых гранулоцитами. В то же время ряд A3 и 6-МП in vitro подавляют в лимфоцитах экспериментальных работ, выполненных in vitro, синтез белка, ДНК и РНК. In vivo оба препарата свидетельствует о подавление этими пре- уменьшают содержание ДНК и РНК в тимусе и паратами пролиферации лимфоцитов в ответ на селезенке, снижают скорость синтеза IgG и IgM, специфический антиген (туберкулиновый ППД) вызывая падение общего уровня или в реакции смешанных лимфоцитов.

иммуноглобулина. В то же время препараты Тиопурины изучены на мышах и кроликах, у оказывают лишь слабое влияние на уровень которых они увеличивают время приживления лимфоцитов периферической крови. A кожного трансплантата, что сопровож- подавляет ФГА-индуцированную транс формацию лимфоцитов, а также реакцию смешанных лимфоцитов. Однако подавление 284 Глава ими антигениндуцированной трансформации Антифолаты лимфоцитов происходит нерегулярно;

резуль таты, получаемые в разных лабораториях, Наиболее широко используемым антифолатом различны.

является метотрексат (МТ). Он связывается с Тиопурины в низких концентрациях (около ферментом редуктазой фолиевой кислоты, мкг/мл) подавляют Т-розеткообразова-ние с который превращает дигидрофолиевую кислоту эритроцитами барана. АЗ-чувствитель-ные в тетрагидрофолиевую. Тетрагидрофолие-вая розеткообразующие клетки отсутствуют в кислота в качестве кофермента участвует в селезенке мышей-nude или у неонатально превращении урацилдезоксирибозида в ти тимэктомированных мышей;

эти клетки исче мидин;

кроме того, она необходима для других зают из селезенки в течение 5 дней после ферментов, активно участвующих в обмене тимэктомии взрослых особей. Приведенные пурина и пиримидина.

результаты свидетельствуют о различной Показано, что МТ подавляет образование чувствительности субпопуляций Т-клеток к A3.

антител и клеточно-опосредованного иммуни При повышенной чувствительности замед тета, включая туберкулиновую реакцию и кон ленного типа и отторжении трансплантата тактную чувствительность у некоторых видов функция Т-клеток подавлена. До открытия животных.

циклоспорина A3 был основным препаратом, У морских свинок используется ежедневная используемым для предотвращения отторжения доза 12,5 мг/кг. Летальные дозы МТ (24 мг/кг) трансплантата. Однако терапевтический индекс могут использоваться у морских свинок, если препарата в отношении доз, применяемых при спустя 24 ч животным вводится 18 мг/кг фо кризе отторжения, и доз, при которых лиевой кислоты. В этих условиях возможно возникают инфекционные осложнения, очень увеличение выживаемости кожного трансплан мал, поэтому риск инфекции оп тата.

портунистическими микроорганизмами, такими Для тех же целей у мышей применяется как Candida, цитомегаловирус и Pneumocystis цитроворум-фактор (ЦФр) (М5-формилтетра carinii, значителен. Следует отметить, однако, гидрофолат). Введение ЦФр используется для что риск тяжелой оппортунистической спасения аллогенного опухолевого иммунитета инфекции существует у всех больных, у ко у мышей, получавших метотрексат. Однако в торых клеточно-опосредованный иммунитет других моделях продукция антител была подавлен любой формой иммунодепрессивной спасена с помощью ЦФр, введенного через 12 ч терапии.

после МТ.

У больных с почечной трансплантацией, У морских свинок in vivo МТ не нарушает которые получали A3 одновременно со сте дифференциации Т-клеток в бласты, как, на роидами, а иногда и антилимфоцитарный пример, ЦФ или 6-МП, но избирательно бло иммуноглобулин, лимфомы возникали чаще, кирует развитие популяции небольших лим чем в общей популяции. Частота возникновения фоцитов, присутствующих в дренирующих опухолей у больных, получавших им лимфатических узлах у сенсибилизированных мунодепрессивную терапию, включая A3, после животных. МТ in vivo не блокирует синтеза трансплантации составляет 2-13%. В 60% ДНК, но нарушает синтез РНК и белка, а также случаев опухоли представлены не ходжкин ингибирует глюкозу-6-фосфатдегидро-геназу, скими лимфомами, что в 45- 60 раз превышает АТФазу и щелочную фосфатазу. Пред их уровень в нормальной популяции. В одном полагается, что эти эффекты могут быть выз из исследований обнаружена лимфома, состо ваны МТ как хелатным агентом, способным к явшая преимущественно из пролиферирующих связыванию цинка, который необходим для поликлональных В-клеток. Отмечается также действия ряда ферментов, включая дегидро повышение частоты саркомы Капоши: 0,6% геназы.

всех злокачественных новообразований в нор мальной популяции и 4,8%-у больных после Антибиотики с иммунодепрессивными трансплантации. Рак кожи встречается также часто, составляя 39% наблюдаемых злокачест- свойствами венных опухолей, среди которых с разной частотой отмечаются карциномы шейки матки, Антибиотики грибкового или бактериального желудка и мочевого пузыря.

происхождения обладают антибактериальным эффектом, нередко связанным с угнетением Иммуносупрессивные препараты синтеза нуклеиновых кислот или белка бакте- агенты определяются как вещества, способные рий. Такой эффект часто не представляется изменять биологические реакции на опухолевые специфичным для бактерий, а является общим клетки, что обусловливает терапевтически биологическим феноменом. Некоторые анти- благоприятный исход. Отдел по лечению рака биотики, сильные бактериостатические агенты, НРИ разработал программу развития МБО.

не стали лекарственными препаратами ввиду их К биологическим ответам, подлежащим токсичности. Часто эти соединения оказывались модификации, относятся защитные реакции высокоактивными в отношении тканей с организма, которые могут быть изменены быстрым делением клеток у млекопитающих посредством усиления эффекторных механиз (таких как гемопоэтические или лимфоид-ные, мов или медиаторов. Ниже перечислены группы которые пролиферируют в ответ на антигенный препаратов, которые включены в данную стимул), а также были способны подавлять программу.

неопластическую пролиферацию. I. Препараты, повышающие противоопу К этим препаратам относятся актиноми- холевый иммунитет, модулирующие компо цины, получаемые из культур Streptomyces ненты иммунного ответа, индуцирующие или antibioticus. Актиномицин С применялся в кли- восстанавливающие эффекторы иммунитета.

нических исследованиях как иммуносупрессив- II. Интерфероны и цитокины.

ный препарат при трансплантации. Предпо- III. Тимические гормоны и факторы.

лагается, что актиномицины избирательно об- IV. Опухолеспецифические вакцины.

разуют комплексы с ДНК, подавляя таким V. Иммунные эффекторы в виде клеток образом синтез РНК и белка. Аналогичным или антител.

препаратом является митомицин С, полученный В следующую группу МБО входят вещества, из Streptomyces caespitosus;

он подавляет ДНК- специфически влияющие на регуляцию им зависимый синтез РНК. Этот препарат, также мунного ответа, особенно те, которые имеют использовавшийся в клинике при зло- отношение к супрессорным механизмам, дей качественных новообразованиях, блокирует ствующим по типу обратной связи. Ряд пре функции Т-клеток в реакциях клеточно-опо- паратов в настоящее время находится в стадии средованного иммунитета. Обнаружено, что исследований, проводящихся во всем мире с митомицин С усиливает резистентность в не- целью оценки способности тех или иных аген которых опухолевых моделях, причем эта ус- тов усиливать иммунный ответ, причем многие тойчивость связана с проявлением неспеци- из них относятся к антибиотикам, получаемым фически индуцированных Т-супрессорных из Streptomyces spp.

клеток.

Хорошо известным антибиотиком, приме няемым при инфекциях у людей, является хлор Противоопухолевые препараты, амфеникол. Препарат, первоначально выде усиливающие иммунный ответ ленный из Streptomyces venezuelae, в настоящее время производится синтетически. Он останав Адриамицин ливает синтез белка, блокируя присоединение РНК-матрицы к рибосомам. У эксперимен Адриамицин (доксорубицин) является амино тальных животных хлорамфеникол (в доста гликозидным антибиотиком, первоначально точно высоких дозах) подавляет первичный выделенным из грибов Streptomyces peucetius гуморальный ответ. Кроме того, он блокирует var. caesius. При исследовании реакций орга вторичный ответ (даже при нормальном раз низма на опухоли обнаружено, что адриамицин витии первичного) и увеличивает время жизни (AM) селективно модулирует иммунный ответ.

кожного трансплантата.

В ранних исследованиях показано, что AM имеет большую эффективность в моделях с антигенными опухолями по сравнению с не Модификаторы биологического антигенными моделями у мышей, а лечение ответа антибиотиком приводит к значительному по вышению клеточно-опосредованных цитото Национальный раковый институт (НРИ) США в ксических ответов, что связано с усилением 1978 г. ввел в употребление термин моди- активности Т-клеток и макрофагов. В то же фикаторы биологического ответа (МБО). Эти время выявлено подавление антителообразо вания и естественных клеток-киллеров (ЕКК).

284 Глава ими антигениндуцированной трансформации Антифолаты лимфоцитов происходит нерегулярно;

резуль таты, получаемые в разных лабораториях, Наиболее широко используемым антифолатом различны.

является метотрексат (МТ). Он связывается с Тиопурины в низких концентрациях (около ферментом редуктазой фолиевой кислоты, мкг/мл) подавляют Т-розеткообразова-ние с который превращает дигидрофолиевую кисло эритроцитами барана. АЗ-чувствитель-ные ту в тетрагидрофолиевую. Тетрагидрофолие розеткообразующие клетки отсутствуют в вая кислота в качестве кофермента участвует в селезенке мышей-nude или у неонатально превращении урацилдезоксирибозида в ти тимэктомированных мышей;

эти клетки исче мидин;

кроме того, она необходима для других зают из селезенки в течение 5 дней после ферментов, активно участвующих в обмене тимэктомии взрослых особей. Приведенные пурина и пиримидина.

результаты свидетельствуют о различной Показано, что МТ подавляет образование чувствительности субпопуляций Т-клеток к A3.

антител и клеточно-опосредованного иммуни При повышенной чувствительности замед тета, включая туберкулиновую реакцию и кон ленного типа и отторжении трансплантата тактную чувствительность у некоторых видов функция Т-клеток подавлена. До открытия животных.

циклоспорина A3 был основным препаратом, У морских свинок используется ежедневная используемым для предотвращения отторжения доза 12,5 мг/кг. Летальные дозы МТ (24 мг/кг) трансплантата. Однако терапевтический индекс могут использоваться у морских свинок, если препарата в отношении доз, применяемых при спустя 24 ч животным вводится 18 мг/кг фо кризе отторжения, и доз, при которых лиевой кислоты. В этих условиях возможно возникают инфекционные осложнения, очень увеличение выживаемости кожного трансплан мал, поэтому риск инфекции оп тата.

портунистическими микроорганизмами, такими Для тех же целей у мышей применяется как Candida, цитомегаловирус и Pneumocystis цитроворум-фактор (ЦФр) (N5-формилтетра carinii, значителен. Следует отметить, однако, гидрофолат). Введение ЦФр используется для что риск тяжелой оппортунистической спасения аллогенного опухолевого иммунитета инфекции существует у всех больных, у ко у мышей, получавших метотрексат. Однако в торых клеточно-опосредованный иммунитет других моделях продукция антител была подавлен любой формой иммунодепрессивной спасена с помощью ЦФр, введенного через 12 ч терапии.

после МТ.

У больных с почечной трансплантацией, У морских свинок in vivo МТ не нарушает которые получали A3 одновременно со сте дифференциации Т-клеток в бласты, как, на роидами, а иногда и антилимфоцитарный пример, ЦФ или 6-МП, но избирательно бло иммуноглобулин, лимфомы возникали чаще, кирует развитие популяции небольших лим чем в общей популяции. Частота возникновения фоцитов, присутствующих в дренирующих опухолей у больных, получавших им лимфатических узлах у сенсибилизированных мунодепрессивную терапию, включая A3, после животных. МТ in vivo не блокирует синтеза трансплантации составляет 2-13%. В 60% ДНК, но нарушает синтез РНК и белка, а также случаев опухоли представлены не ходжкин ингибирует глюкозу-6-фосфатдегидро-геназу, скими лимфомами, что в 45-60 раз превышает АТФазу и щелочную фосфатазу. Пред их уровень в нормальной популяции. В одном полагается, что эти эффекты могут быть выз из исследований обнаружена лимфома, состо ваны МТ как хелатным агентом, способным к явшая преимущественно из пролиферирующих связыванию цинка, который необходим для поликлональных В-клеток. Отмечается также действия ряда ферментов, включая дегидро повышение частоты саркомы Капоши: 0,6% геназы.

всех злокачественных новообразований в нор мальной популяции и 4,8%-у больных после Антибиотики с иммунодепрессивными трансплантации. Рак кожи встречается также часто, составляя 39% наблюдаемых злокачест- свойствами венных опухолей, среди которых с разной частотой отмечаются карциномы шейки матки, Антибиотики грибкового или бактериального желудка и мочевого пузыря.

происхождения обладают антибактериальным эффектом, нередко связанным с угнетением Иммуносупрессивные препараты синтеза нуклеиновых кислот или белка бакте- агенты определяются как вещества, способные рий. Такой эффект часто не представляется изменять биологические реакции на опухолевые специфичным для бактерий, а является общим клетки, что обусловливает терапевтически биологическим феноменом. Некоторые анти- благоприятный исход. Отдел по лечению рака биотики, сильные бактериостатические агенты, НРИ разработал программу развития МБО.

не стали лекарственными препаратами ввиду их К биологическим ответам, подлежащим токсичности. Часто эти соединения оказы- модификации, относятся защитные реакции вались высокоактивными в отношении тканей с организма, которые могут быть изменены быстрым делением клеток у млекопитающих посредством усиления эффекторных механиз (таких как гемопоэтические или лимфоид-ные, мов или медиаторов. Ниже перечислены группы которые пролиферируют в ответ на антигенный препаратов, которые включены в данную стимул), а также были способны подавлять программу.

неопластическую пролиферацию. I. Препараты, повышающие противоопу К этим препаратам относятся актиноми- холевый иммунитет, модулирующие компо цины, получаемые из культур Streptomyces ненты иммунного ответа, индуцирующие или antibioticus. Актиномицин С применялся в кли- восстанавливающие эффекторы иммунитета.

нических исследованиях как иммуносупрессив- II. Интерфероны и цитокины.

ный препарат при трансплантации. Предпо- III. Тимические гормоны и факторы.

лагается, что актиномицины избирательно об- IV. Опухолеспецифические вакцины.

разуют комплексы с ДНК, подавляя таким V. Иммунные эффекторы в виде клеток образом синтез РНК и белка. Аналогичным или антител.

препаратом является митомицин С, полученный В следующую группу МБО входят вещества, из Streptomyces caespitosus;

он подавляет ДНК- специфически влияющие на регуляцию им зависимый синтез РНК. Этот препарат, также мунного ответа, особенно те, которые имеют использовавшийся в клинике при зло- отношение к супрессорным механизмам, дей качественных новообразованиях, блокирует ствующим по типу обратной связи. Ряд пре функции Т-клеток в реакциях клеточно-опо- паратов в настоящее время находится в стадии средованного иммунитета. Обнаружено, что исследований, проводящихся во всем мире с митомицин С усиливает резистентность в не- целью оценки способности тех или иных аген которых опухолевых моделях, причем эта ус- тов усиливать иммунный ответ, причем многие тойчивость связана с проявлением неспеци- из них относятся к антибиотикам, получаемым фически индуцированных Т-супрессорных из Streptomyces spp.

клеток.

Хорошо известным антибиотиком, приме няемым при инфекциях у людей, является хлор Противоопухолевые препараты, амфеникол. Препарат, первоначально выде усиливающие иммунный ответ ленный из Streptomyces venezuelae, в настоящее время производится синтетически. Он останав Адриамицин ливает синтез белка, блокируя присоединение РНК-матрицы к рибосомам. У эксперимен Адриамицин (доксорубицин) является амино тальных животных хлорамфеникол (в доста гликозидным антибиотиком, первоначально точно высоких дозах) подавляет первичный выделенным из грибов Streptomyces peucetius гуморальный ответ. Кроме того, он блокирует var. caesius. При исследовании реакций орга вторичный ответ (даже при нормальном раз низма на опухоли обнаружено, что адриамицин витии первичного) и увеличивает время жизни (AM) селективно модулирует иммунный ответ.

кожного трансплантата.

В ранних исследованиях показано, что AM имеет большую эффективность в моделях с антигенными опухолями по сравнению с не Модификаторы биологического антигенными моделями у мышей, а лечение ответа антибиотиком приводит к значительному по вышению клеточно-опосредованных цитото Национальный раковый институт (НРИ) США ксических ответов, что связано с усилением в 1978 г. ввел в употребление термин моди активности Т-клеток и макрофагов. В то же фикаторы биологического ответа (МБО). Эти время выявлено подавление антителообразо вания и естественных клеток-киллеров (ЕКК).

286 Глава Цитолитический ответ не развивается при уда- рующие свойства в опухолевых и неопухоле лении Thy 1,2 (с клетками), что указывает на вых моделях.

участие Т-клеток в усилении ответа. Роль мо- Спорамицин. Это вещество получено из ноцитов и (или) макрофагов определяется в ис- фильтрата культуры Streptosporangium pseudo следовании, в котором терапевтическая эффек- vulgare. Антибиотик усиливает противоопухо тивность AM снижается после введения крем- левый иммунитет у мышей, активируя Т-клет ния или каррагенана. Зрелые макрофаги от- ки. Нейтрализующая активность Т-клеток носительно нечувствительны к AM в отличие от уменьшается при обработке анти-Thy 1,2 анти незрелых моноцитов, количество которых телами.

избирательно увеличивается. Под действием Макромицин. Это полипептид, выделенный AM повышаются ПГЕЮ и интерлейкин-2. Пока из фильтратов культуры Streptomyces maero неясно, является ли повышение ИЛ-2 пер- momycetiaus;

он повышает резистентность вичным эффектом AM или же оно связано с мышей к опухоли, действуя на макрофаги и Т увеличением образования ИЛ-1 моноцитами клетки.

и(или) макрофагами. Аклациномицин А. Аклациномицин А явля ется антрациклином, выделенным из фильтрата культуры Streptomyces galilaeus. Он пре Блеомицин дотвращает синтез РНК, подавляя РНК-по Блеомицин, полученный из Streptomyces verti- лимеразу.

cillus, является гликопептидным противоопу- Показано, что препарат усиливает антите холевым веществом, эффективным при забо- лообразование и повышенную чувствитель леваниях человека. По своему действию блео- ность замедленного типа. Антибиотик обладает мицин отличается от других противоопухоле- высокой цитотоксичностью по отношению к вых антибиотиков. Так, при взаимодействии лимфоцитам, индуцированным Кон-А, ФГА и блеомицина с очищенной ДНК происходит Л ПС. Аклациномицин А избирательно выделение свободных оснований из ДНК;

кроме угнетает образование супрессорных клеток при того, препарат вызывает высвобождение выработке антител и повышенной чувстви нуклеосом из хроматина и хромосом. Действие тельности замедленного типа.

блеомицина характеризуется невысокой кост- Оксанозин. Оксанозин представляет собой номозговой токсичностью или же ее отсутст- нуклеозид, обнаруженный в фильтрате культу вием. ры Streptomyces capreolus. Это соединение У морских свинок, получавших 125 мг/кг обладает низкой токсичностью, а в дозах 25- блеомицина через 2- 3 дня после сенсибили- мг/кг усиливает повышенную чувствительность зации, усиливается реакция повышенной чув- замедленного типа к эритроцитам барана у ствительности замедленного типа, особенно мышей. Он также замедляет рост опухолевых контактная чувствительность. Кроме того, у них клеток, одновременно подавляя супрессорную после антигенной стимуляции усиливается активность клеток. Данные экспериментов на пролиферация Т-клеток в дренирующих клеточных популяциях селезенки лимфатических узлах. Как и в случае с адреа- предполагают, что под действием оксано-зина мицином, предполагается, что подобный эффект эффекторные клетки, отличные от Т-клеток обусловлен повышенным образованием ИЛ-2, (возможно, макрофаги), активируются и поскольку ИЛ-2 увеличивает пролиферацию становятся цитотоксичными.

только после связывания антигена или митогена Неотрамицин. Антибиотик выделен из с клеточной мембраной. Недавно было фильтрата культуры Streptomyces thiolutheus.

показано, что блеомицин активирует макрофаги, Он ковалентно связывается с пуриновыми ос повышая их цитотоксичность в отношении нованиями ДНК, вызывая подавление синтеза опухолевых клеток. ДНК в клетке. Неотрамицин не подавляет иммунного ответа;

более того, он повышает образование IgM-антител и гиперсенситив Другие противоопухолевые антибиотики ность замедленного типа. Он также увеличивает В то время как адриамицин и блеомицин уже образование перекисей макрофагами, которые применяются в качестве противоопухолевых стимулируются форбол-миристил-аце-татом.

препаратов, существует ряд недавно получен- Кроме того, неотрамицин активирует ных (в основном в Японии) антибиотиков, цитотоксичность, опосредованную макрофага- обнаруживающих интересные иммуномодули- Иммуносупрессивные препараты В настоящее время предполагается сущест вование двух механизмов, посредством которых модификаторы биологического ответа могут усиливать иммунитет. Первый связан с угнетением образования супрессорных клеток, что приводит к повышению активности эффекторных Т-клеток.

Второй механизм обеспечивает увеличение продукции ИЛ-2, который эффективно уси ливает пролиферацию Т-клеток-эффекторов.

Данный механизм может быть связан как с прямым влиянием на образование ИЛ-2 лим фоцитами, так и с действием модификаторов на макрофаги, что обусловливает увеличение продукции ИЛ-1.

28 Иммунологические адъюванты Р. Бомфорд (R. Bomford) Адъюванты-это вещества, которые добавляются Эмульсия типа вода в масле к вакцинам или антигенам, используемым при Этот тип адъюванта был разработан Фрейн-дом экспериментальной иммунизации, с целью в 40-х годах нашего века. Водный раствор усиления иммунного ответа. Они часто антигена эмульгируется в очищенном мине обозначаются термином лиммуностимуляторы.

ральном масле с помощью эмульгатора для Данный термин имеет более широкое значение образования водно-масляной эмульсии. Таким и относится к веществам, которые при введении образом, антиген физически включается в ка сами вызывают состояние неспецифического пельки воды в масляной фазе. Масляные иммунитета, характеризующегося повышенной эмульсии используются в ветеринарных вак резистентностью к инфекции или опухолевому цинах;

от их применения у людей в настоящее росту. Многие вещества могут действовать и как время отказались, поскольку у небольшого адъюванты, и как иммуностимуляторы, поэтому числа реципиентов в местах инъекций образу различия между этими категориями являются ются стерильные абсцессы.

скорее операционными, нежели Масляную эмульсию адъюванта иногда на принципиальными в отношении понимания их зывают неполным адъювантом Фрейнда в от фармакологического действия. В этой главе личие от полного адъюванта Фрейнда, который основное внимание уделено стимуляции содержит убитые микобактерии, суспен адъювантами специфического иммунного зированные в масле. Полный адъювант Фрейн ответа.

да обладает воспалительными свойствами, поэтому он неприменим даже для ветеринарных Типы адъювантов целей;

однако при использовании для по вышения титра антител у экспериментальных Многообразие веществ, действующих как животных он наиболее эффективен.

адъюванты (от кремния до патоки), поражает.

Адъюванты, используемые в эксперименталь Липофильные соединения ных исследованиях или приготовлении вакцин, могут быть разделены на четыре категории.

Широкий ряд липофильных соединений обла дает адъювантной активностью. Сапонин, ге молитический и поверхностно-активный гли Неорганические гели козид, экстрагированный из коры южноаме В 1926 г. Glenny, выделяя дифтерийный ана риканского дерева Quillaia saponaria, исполь токсин, смешивал его с квасцами [KA1(S04)2 зуется в вакцинах при заболеваниях ног и по 12Н20], в результате чего образовывались лости рта, а также как пенообразующий агент в преципитаты, которые оказались более имму безалкогольных напитках. Витамин А и али ногенными, чем растворимый анатоксин. Вак- фатические амины являются другими предста цины, преципитированные квасцами, стали вителями этого типа адъювантов.

широко использоваться для иммунизации че ловека и животных. Для замены квасцов ана Бактерии токсины иногда смешивают с преформирован ным гелем А1(ОН)3 или А1Ро4, с которым Bordetella pertussis-микроорганизмы, вызыва анатоксины связываются посредством ионов, ющие коклюш и обладающие выраженной образуя абсорбированные вакцины. В настоящее адъювантной активностью. Одним из преиму время соли алюминия или кальция остаются ществ тройной дифтерийно-коклюшно-столб единственными адъювантами, приемлемыми нячной вакцины является стимуляция микро для приготовления человеческих вакцин.

организмами Bordetella ответа антител к двум Иммунологические адьюванты бактериальным токсинам. Адъювантная ак- Механизм действия адъювантов тивность В. pertussis, по крайней мере частично, связана с их эндотоксином, который сам яв- В понимании механизма действия адъювантов ляется адъювантом. есть два сложных момента. Во-первых, многие Добавление убитых микобактерий к непол- адъюванты, такие как бактерии, сложны и ге ному адъюванту Фрейнда приводит к обра- терогенны по своему составу, поэтому не все из зованию уже упомянутого полного адъюванта вызываемых ими многочисленных реакций в Фрейнда. Последний, помимо мощного уси- организме могут быть связаны с адъювант-ной ления ответа антител, селективно повышает активностью. Открытие химически опре гиперсенситивность замедленного типа по от- деленных низкомолекулярных адъювантов типа ношению к белковым антигенам у морских МДП снимает это затруднение. Во-вторых, свинок. Эта реакция использовалась для раз- иммунный ответ представляет собой много деления компонентов стенки микобактерий с стадийный процесс межклеточной кооперации, целью определения тех из них, которые опо- которые, несмотря на последние достижения в средуют стимуляцию повышенной чувстви- клеточной иммунологии, остается еще не тельности. Установлено, что минимальной вполне ясным. Это вносит определенные огра структурой является участок полимерной пеп- ничения в понимание действия адъювантов на тидогликановой основы клеточной стенки, ко- иммунную систему. Тем не менее существует торый представлен мономерной единицей, со- ряд гипотез относительно механизма действия стоящей из сахара и трех аминокислот. Синте- адъювантов, которые получили эксперимен тический аналог этого участка-N-ацетил-му- тальное подтверждение и вполне применимы ко рамил-L-аланин-D-изоглутамин, или мура- многим самым разным адъювантам.

милдипептид (МДП, рис. 120), обладает всеми свойствами полного адъюванта Фрейнда при Медленное высвобождение антигена условии его эмульгирования в минеральном масле. Однако наиболее важным представляется Антигены, адсорбированные на геле А1(ОН) то, что он стимулирует ответ антител и в или заключенные в водную фазу эмульсии типа водном растворе без масла. МДП как масло в воде, могут медленно доставляться в растворимое химически определенное вещество иммунную систему, что имитирует с низкой молекулярной массой обладает множественные инъекции антигена и стиму огромными преимуществами перед другими лирует реакцию антител вторичного типа. Хотя агентами при исследовании фармакологичес- это объяснение представляется чисто ме кого действия адъювантов. ханистическим, оно способствует пониманию активности вышеупомянутых адъювантов.

Однако непонятно, как оно может быть при менимо к низкомолекулярным веществам типа МДП.

- Аккумуляция и активация макрофагов Адъюванты, такие как А1(ОН)3 или адъювант Фрейнда, вызывают накопление мононуклеар ных клеток, особенно макрофагов, в месте введения, что представляет собой гранулема тозную реакцию. Макрофаги участвуют в пер вой стадии иммунного ответа в качестве так называемых антигенпредставляющих клеток (рис. 121). Белковые антигены, захваченные антигенпредставляющими клетками, расщеп ляются на пептидные фрагменты (для обозна чения этого еще недостаточно понятого явления используется термин процессинг), которые затем экспрессируются на клеточной по верхности, где они физически связываются с антигенами гистосовместимости II класса Рис. 120. Структура мурамиддипептида (МДП).

Глава Рис. 121. Взаимодействие антигенпредставляющей клетки и Т-клетки-помощника.

Белковые антигены захватываются антигенпредставляющей клеткой (макрофагом) и разрушаются (лпроцессируются) до пептидов, которые вместе с антигенами II класса комплекса гистосовместимости (антиген 1а у мышей) экспрессируются на клеточной мембране, где в виде комплекса распознаются рецепторами Т-клеток. Антигенпредставляющие клетки секретируют интерлейкин-1 (ИЛ-1), который стимулирует Т-клетки к продукции ростового фактора Т-клеток интерлейкина-2 (ИЛ-2). Адъюванты стимулируют выделение ИЛ-1.

(Ia-антигены у мышей или антигены HLA-DR у человека). Т-клетки-хелперы могут распозна- медиатору пирогенности, эндогенному пиро вать только процессированные антигены, ас- гену. В настоящее время известно, однако, что социированные с антигенами гистосовмести- ИЛ-1 является представителем семейства бел мости II класса, и неспособны распознавать ков, причем гены для двух из них клонированы свободный недеградированный белок. Макро- и определена их нуклеотидная последователь фаги выделяют монокин, интерлейкин-1, ко- ность. Предполагается, что избирательные торый стимулирует Т-хелперы к секреции фармакологические эффекты производных лимфокина-интерлейкина-2, ростового фактора МДП вполне объяснимы в свете селективной Т-клеток. Следствием совместного действия стимуляции секреции разных типов ИЛ-1 и, ИЛ-1 и ИЛ-2 является клональная экспансия Т- возможно, других медиаторов.

клеток-хелперов (см. главу 14). Адъюванты Поскольку ИЛ-1 и ИЛ-2, как уже упоми связывают с началом цепи этих событий, так налось, участвуют в запуске и росте Т-хел как все исследованные адъюванты (эндотоксин, перных клеток, то справедлив вопрос: не обла МДП, А1(ОН)3) вызывают выделение ИЛ- дают ли они сами свойствами адъювантов. Пока макрофагами in vitro, хотя требуется слишком рано давать ответ в отношении всего подтверждение причинной роли данного про- семейства ИЛ-1, так как эти вещества только цесса в адъювантном действии in vivo.

сейчас становятся доступными в чистой форме в Влияние МДП на секрецию медиаторов качестве белков, полученных методами генной макрофагами в настоящее время является об- инженерии. Кроме того, следует отметить, что ластью исключительно активных исследований.

они могут принимать участие в этиологии Это связано с разнообразными фарма- ревматоидного артрита (см. главу 14). Как кологическими эффектами МДП. Помимо показывает ряд работ, выполненных с ИЛ-2, адъювантного действия, он обладает пироген- проблемой здесь является его очень короткий ным и сомногенным эффектами, включая ин- период полураспада в плазме. Однако в дукцию медленноволнового сна. Синтезированы некоторых исследованиях обнаружено аналоги МДП, которые различаются по своим адъювантное действие, например, преодоле фармакологическим характеристикам. Так, два вающее генетическую нереактивность по от аналога (мурабутид, п-бутиловый эфир МДП, и ношению к антигену в адъюванте Фрейнда при треонил-МДП, в котором фе-нилаланин введении ИЛ-2. Можно надеяться на открытие в замещен треонином) сохраняют адъювантную будущем иммуностимулирующих препаратов, активность, но больше не являются действующих как агонисты ИЛ-1 и ИЛ-2, или, пирогенными. Совершенно очевидно, что это напротив, иммуносупрессивных препаратов, имеет жизненно важное значение для будущего действующих как их антагонисты.

клинического применения подобных соединений. Вместе с тем это ставит вопрос о Действие адъювантов на В-лимфоциты специфичности их действия на макрофаги, поскольку предполагается, что ИЛ-1 идентичен Клональная экспансия Т-клеток-хелперов сме няется их взаимодействием с В-клетками, ко- Иммунологические адъюванты торые в свою очередь секретируют антитела. в свете современных иммунологических от Как Т-, так и В-клетки являются возможными крытий, таких как роль ИЛ-1 и ИЛ-2 в запуске и мишенями для действия адъювантов, хотя в росте Т-клеток.

настоящее время имеется немало доказательств Другими важнейшими участниками в раз в пользу предположения о макрофагах как о рабатываемых вакцинах вместо целых вирусов мишенях для большинства адъювантов. Однако или бактерий являются очищенные белковые обнаружено, что некоторые адъюванты субъединицы, полученные методами генной действуют как заместители Т-клеток, т. е. они инженерии, или даже синтетические пептиды.

делают В-клетки способными к ответу на Вероятно, это расширяет область поиска новых антиген и в отсутствие Т-клеток. Среди таких иммунологических адъювантов для низ адъювантов особенно хорошо известен эндо- комолекулярных антигенов. Например, МДП токсин, являющийся митогеном В-клеток, а является эффективным адъювантом для син также недавно полученные 8-замещенные про- тетических пептидов, особенно если они кова изводные гуанозина, которые действуют таким лентно связаны с МДП. Все это делает вполне же образом. возможным создание вакцин, в которых ком поненты адъюванта и антигена будут полностью синтетическими и химически чистыми.

Заключение С практической точки зрения область иссле дования адъювантов представляется достаточно статичной, поскольку неорганические гели [А1(ОН)3], открытые в 20-х годах, остаются единственными адъювантами, используемыми в человеческих вакцинах. Данная глава должна показать, что основные достижения здесь будут получены в результате разработки низ комолекулярных соединений типа МДП, ме ханизм действия которых может быть понят 29 Интерфероны М. Мур, М. М. Даусон (М. Moore, M. M. Dawson) Введение и терминология бенно иммунный ИФН, возможно, в большей степени относится к цитокинам с плейотроп Интерфероны (ИФН)-семейство индуцируемых ным влиянием на клеточную активность.

секреторных белков, вырабатываемых клетками Предполагается, что антивирусный эффект эукариотов в ответ на вирусы и другие стимулы. иммунного ИФН является полезным побочным Термин линтерферон был введен в 1957 г. действием в отношении других функций, Isaacs и Lindenman, которые показали, что среда контролирующих различную клеточную ак культур аллантоисной мембраны цыплят, тивность.

зараженных вирусом гриппа, инакти вированного прогреванием, может изменять способность к репликации другого вируса. С тех Таблица 36. Биологические эффекты интерферонов пор механизм противовирусного действия интенсивно изучается, и в настоящее время Эффекты интерферона принято считать, что ИФН не обладают прямым противовирусным действием, а действуют профилактически, индуцируя противовирусные белки, которые защищают клетки от вирусных инфекций, подавляя трансляцию и транскрипцию, вызываемую вирусом.

Через 8 лет после открытия интерферона Wheelock описал антивирусное вещество в су пернатантах культур человеческих лейкоцитов, стимулированных фитогемагглютинином. Это вещество, первоначально названное лиммунным ИФН, обладает биологическими и физико химическими свойствами, присущими классическому ИФН, хотя последний лабилен при рН < 2 или > 10 и при нагревании (70 С в течение часа).

Вскоре после его открытия в качестве про тивовирусного агента было обнаружено, что ИФН обладают множеством эффектов в от ношении других клеток (табл. 36). Например, они являются мощными ингибиторами кле точной пролиферации и сильными иммуномо дуляторами, активность которых включает влияние на антителообразование, на естест венную цитотоксичность и экспрессию анти генов клеточной поверхности. Таким образом, хотя, по официальному определению, ИФН является белком, проявляющим неспецифи ческую противовирусную активность в отно шении гомологичных клеток посредством кле точных обменных процессов, вовлекающих синтез РНК и белка (Номенклатура интер феронов, 1980), это семейство молекул, осо- Интерфероны Клеточные источники и индукторы если они только временно продуцируются в течение репликативного цикла ДНК- и РНК Недавно интерфероны были разделены на три вирусов. В общем случае ИФН продуцируются основных семейства: а, Р и у. Хотя класси- при единичной экспозиции с индуктором in vivo фикация интерферонов первоначально была и in vitro. Их действие специфично (хотя и не основана на антигенных различиях, определя- абсолютно) для всех видов. ИФН-у, имеющий емых нейтрализующими гетерологическими наибольшую видовую специфичность (из трех антисыворотками, а позже и моноклональ-ными ИФН), обладает и межвидовой гомологией в антителами, в последнее время она была аминокислотной последовательности. Уровень подтверждена исследованиями аминокислотной индукции может также зависеть от последовательности. Они показали, что, эффективности генов ИФН после индукции;

так, несмотря на отчетливые различия этих трех у мышей существует несколько классов, ИФН-а и ИФН-Р в эволюционном интерфероновых генов, контролирующих уро плане более близки друг к другу, чем к ИФН-у. вень продукции ИФН.

Эта гипотеза подтверждается исследованиями Иммунный ИФН (ИФН-у) является доми генов ИФН при их клонировании. Хотя любая нирующей формой, образуемой Т-лимфоци клетка, вероятно, способна к их образованию, тами, стимулированными специфическими ан ИФН-а и ИФН-Р являются доминирующими тигенами, митогенами (ФГА, Кон-А) или ал формами интерферона (образуемых лейкоци- лоантигенами в реакции смешанных лимфо тами и фибробластами соответственно) после цитов. Стафилококковый энтеротоксин А и индукции вирусами и другими агентами (см. другие бактериальные продукты Streptococcus ниже). Перечень индукторов ИФН дан в табл. pyogenes также являются сильными индукто 37. Вирусы и dsPHK являются сильными рами. Наиболее вероятным продуцентом ИФН индукторами in vivo и in vitro;

наиболее мощ- представляется Т-клетка-помощник, хотя группа ным индуктором представляются РНК-вирусы цитотоксических/супрессорных Т-клеток, а миксо- и парамиксовирусных групп. Данные также В-лимфоциты могут образовывать ИФН-у ряда исследований указывают на то, что dsPHK in vivo при соответствующих условиях.

Pages:     | 1 |   ...   | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |    Книги, научные публикации