Geum.ru

Тезисы докладов

Вид материалаТезисы

Содержание


Разработка экспресс-теста для ранней диагностики болезни альцгеймера и других нейродегенеративных заболеваний
Иммунопротеосома как мишент для создания инновационных лекарственных препаратов для лечения нейродегенеративных заболеваний
Подобный материал:
1   ...   65   66   67   68   69   70   71   72   ...   96

РАЗРАБОТКА ЭКСПРЕСС-ТЕСТА ДЛЯ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА И ДРУГИХ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

В.В.Вознесенская 1) , А.В.Амбарян 1), А.Е.Вознесенская 2), Н.А.Вознесенский 3), М.А.Ключникова 1), Е.И.Родионова 2)



1) Институт проблем экологии и эволюции им. А.Н.Северцова РАН, Москва

2) Институт проблем передачи информации им. А.А.Харкевича РАН, Москва

3) Институт пульмонологии ФМБА РФ, Москва

Для ряда неврологических заболеваний, таких, как болезнь Альцгеймера (БА), болезнь Паркинсона (БП) характерны такие ранние симптомы, как резкое падение остроты обоняния. Было показано нарушение обонятельной памяти при БА. Расстройства обоняния при БА являются двухсторонними и прогрессируют по мере развития болезни. При БП нарушение обонятельной функции обнаруживают более 95 % больных уже на самых ранних стадиях течения заболевания. В противоположность БА при БП обонятельная чувствительность снижается на ранних стадиях заболевания и далее остается на том же уровне. В настоящее время в США в клинической практике широко используются стандартизированные методы тестирования обонятельной функции для дифференциальной диагностики при неврологических расстройствах. Самым распространенным является Smell Identification TestTM (Sensonics, Inc., Haddon Heights, NJ), разработанный в Пенсильванском университете (ТПУ). ТПУ позволяет выявить большинство нарушений обоняния и исключить симуляцию расстройств обоняния. Тест содержит 40 образцов различных запахов с вариантами ответа. Тест снабжен точным количественным расчетом показателей, свидетельствующих о развитии заболевания. Достоинством теста являются: надежность, низкая себестоимость, простота использования, возможность тестирования в любых условиях, даже самотестирования в домашних и полевых условиях. Тест отличает очень высокая воспроизводимость результатов (r=0.90-0.92). За высокой чувствительностью такого метода стоит патофизиология развития БА. Показано, что развитие болезни начинается именно со структур обонятельной системы: нейрофибриллярные клубки и бляшки появляются в энторинальной и трансэнторинальной областях мозга на самой ранней стадии. Разработка полного национального теста для оценки обонятельной функции населения значительным образом облегчила бы преклиническую диагностику нейродегенеративных заболеваний. Целью нашей работы являлась разработка российского варианта ольфакторного теста на основе ТПУ. Нами было протестировано 209 здоровых испытуемых, проживающих в мегаполисе и в сельской местности. В контрольную группу были включены здоровые испытуемые с известной историей болезней. Отсутствие аллергических воспалений контролировалось по уровню окиси азота, измеренному в носовой полости с помощью хемилюминесцентного анализатора (Logan Research-2149) . Не было обнаружено достоверных различий в ТПУ между городскими и сельскими жителями (33.85  0.24 и 33.59  0.74), испытуемыми со средним и высшим образованием (33.00 0.80 и 33.66  0.26), а также не выявлено влияния курения на показатели в тесте при сравнении соответствующих возрастных групп между собой. Полученные данные сопоставимы с таковыми для населения США. Причиной более низких значений в этом тесте для российского населения является использование малознакомых, а вследствие этого неузнаваемых запахов. При разработке теста одним из критериев включения в него того или иного одоранта был «процент узнаваемости» – 75 %. При адаптации мы пользовались той же условной границей. На основании этого произведена замена для 4 одорантов. Для этих целей фирмой Сенсоникс (США) предоставлены альтернативные образцы одорантов. Был доработан «ключ» теста с учетом произведенных замен. С разработчиками американского варианта теста достигнута договоренность о выпуске пробной партии российского варианта теста в 2012 году для тестирования в российских клиниках.

ИММУНОПРОТЕОСОМА КАК МИШЕНТ ДЛЯ СОЗДАНИЯ ИННОВАЦИОННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

А.Г.Габибов1, Н.А.Пономаренко1, В.Д.Кнорре1, А.А.Белогуров1, И.В.Смирнов1, И.Н.Куркова1, Д.Г.Илюшин1, Я.А.Ломакин1, А.В.Степанов1, А.А.Юдин2, А.И.Алехин2, О.П.Миронова2



1)Учреждение Российской академии наук институт биоорганической химии имени академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН

2) Центральная клиническая больница РАН


Нейродегенеративные аутоиммунные процессы относятся к малоизученным патологиям как в плане патогенеза, так и терапии. Они затрагивают достаточно широкую группу взрослого трудоспособного населения. Одним из наиболее значимых патологий этой группы является рассеянный склероз, характеризующийся разрушением миелиновой оболочки, что в свою очередь приводит к деградации нервных волокон. Это заболевание носит хронический характер и сопровождается глубокой нейродегенерацией. До сих пор неизвестен триггерный механизм его запуска.

Осуществлено выделение индивидуальных конститутивных 20S, 26S протеасом и иммунопротеосомы из тканей мышей хроматографическими методами: гель-фильтрация и ионообменная хроматография в режиме FPLC, аффинная хроматография на носителе с иммобилизованными антителами с применением ультрацентрифугирования на последних стадиях очистки. Разработанная методика не имеет аналогов в мировой литературе и позволяет достигать высоких степеней очистки протеасомы при минимальном числе стадий, что важно для нестабильного 26S комплекса.

Проведена характеризация протеолитических свойств протеасом по коммерческим низкомолекулярным флуорогенным субстратам (химотриптическая, триптическая и каспазоподобная активность). С помощью изотопно-меченых пептидов осуществлен анализ механизма деградации фрагментов основного белка миелина конститутивной и иммунопротеосомой, индуцированной в ходе развития аутоиммунного нейродегенеративного процесса экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЕАЕ). Осуществлено изучение кинетических характеристик протеасом. Проведена стандартизация кинетических данных. Проведен скрининг субстратов для селективного определения активности стандартной 26S и иммунопротеосомы из библиотеки веществ, синтезированных в лаборатории-заявителе. Исследована каталити-ческая активность конститутивной и иммунопротеосомы с использованием различных О18 меченых фрагментов основного белка миелина (ОБМ). Предложены способы получения новых субстратов, наиболее подходящих для селективного определения конститутивной и иммунопротеосомы. Получена характеристика протеолитических свойств всех протеасом по белковому субстрату – основному белку миелина. Проведено определение сайтов и скорости протеолиза белка протеасомами трех типов. В научной литературе нет данных о сайтах деградации ОБМ протеасомой, отсутствуют сведения и о сравнении скоростей протеолиза разными протеасомами. Демонстрация количественных данных по «выщеплению» фрагментов энцефалитогенных пептидов с помощью протеасомы и сравнение с таковыми для иммунопротеосомы. Проведено изучение влияния убиквитинили-рования основного белка миелина на скорость его протеолиза и на изменение положения сайтов протеолиза. Применение таких современных методов, как обращенно-фазовая ВЭЖХ и MALDI масс-спектрометрия, позволили впервые сравнить сайт-специфичность и скорость действия разных протеасом на убиквитинилированный и не убиквитинилированный ОБМ. Верификация полученных данных с помощью меченых фрагментов ОБМ. Продемонстрирована кроссреактивность антител, получен-ных из библиотеки генов иммуноглобулинов с нейроантигенами и вирусными белками. Высказана концепция индукции РС вирусными агентами. Представлены данные по дизайну генно-инженерных векторов, направленных на элиминацию аутореактивных В-клеток.