Тезисы докладов

Вид материала

Тезисы

Содержание Разработка методики скрининга агентов для фотодинамической терапии рака in vivo с использованием цветных флуоресцирующих белков Разработка новых подходов к проведению лазерной терапии 1) Институт общей физики им. А.М.Прохорова РАН, Москва 2)

Подобный материал:

• Тезисы докладов, 3726.96kb.
• Тезисы докладов, 1225.64kb.
• Правила оформления тезисов докладов Тезисы докладов предоставляются в электронном виде, 22.59kb.
• «Симпозиум по ядерной химии высоких энергий», 1692.86kb.
• Требования к тезисам докладов, 16.83kb.
• Тезисы докладов научно-практической, 6653.64kb.
• Тезисы докладов 1 Межвузовская научно -практическая конференция студентов и молодых, 100.64kb.
• Тезисы докладов и заявки на участие, 104.97kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 788.61kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 1066kb.

РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ СКРИНИНГА АГЕНТОВ ДЛЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ РАКА IN VIVO

С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЦВЕТНЫХ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ БЕЛКОВ

А.П.Савицкий¹⁾, И.Г.Меерович¹⁾, Н.И.Казачкина¹⁾, А.В.Закладная²⁾, Е.М.Трещалина³⁾, А.Ю.Барышников³⁾

¹⁾ Учреждение Российской академии наук Институт биохимии

им. А.Н.Баха РАН, Москва

²⁾ МИТХТ им. М.В.Ломоносова, Москва

³⁾ ЭДиТО ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина, Москва


Для достижения цели проекта решалась задача разработки методики скрининга фотосенсибилизаторов для ФДТ рака, характеризующихся интенсивным поглощением в области длин волн > 700 нм, высоким квантовым выходом синглетного кислорода и низкой флуоресценцией (например, окта-4,5-децилтио-окта-3,6-хлорофталоцианин цинка (“Октасенс”), метилового эфира O-этилоксима N-этоксициклоимида бактериохлорина p), in vivo с использованием цветных флуоресцирующих белков.

Предварительно проводился in vitro скрининг фототоксического действия исследуемых ФС на используемые для создания опухолевых моделей флуоресцирующие клетки mel Kor-TurboRFP. Было показано, что вышеупомянутые ФС в липосомальной форме проявляют эффективное фототоксическое действие по отношению к флуоресцирующим клеткам mel Kor-TurboRFP при времени инкубации 20-24 часа.

Для выбора оптимального времени для облучения сен-сибилизированных опухолей изучалась фармакокинетика фото-сенсибилизаторов в организме мышей линии BalbC/Nu (ЭДиТО ГУ РОНЦ) с перевитыми флуоресцирующими опухолями при помощи волоконного спектроанализатора Lesa-01-Biospec. Для мышей с опухолями mel Kor-TurboRFP было показано, что накопление липосомальной формы метилового эфира O-этилоксима N-этоксициклоимида бактериохлорина p в опухоли mel Kor-TurboRFP является максимальным в интервале 2,5-5 часов после введения, при этом максимальный контраст накопления по сравнению со здоровыми тканями наблюдается примерно через 3,5 часа после введения и достигает 5; накопление липосомального “Октасенса” в опухоли достигает максимума через сутки после внутривенного введения ФС, в этот момент удается достичь контраста накопления, равного 5. После введения мыши с опухолью A549-TagRFP липосомального “Октасенса” максимум накопления наблюдается после суток с момента введения.

Путем диффузной флуоресцентной томографии было показано уменьшение объема опухоли после ФДТ опухоли mel Kor-TurboRFP, сенсибилизированной липосомальным “Октасенсом”.

При использовании нефлуоресцирующих фотосенсибилиза-торов флуоресцентные изображения флуоресцирующей опухоли позволяют рационально выбрать границы зоны облучения опухоли.

В ходе проекта были получены клеточные линии, экспрессирующие дальнекрасный флуоресцирующий белок mKate2. C этой целью клетки различных опухолевых клеточных линий (человеческие mel Kor, Hep2, A549 и мышиная меланома B16) подвергались липосомальной трансфекции соответствующей эукариотической плазмидой с последущей селекцией и клонированием. Были получены два клона на основе mel Kor, которые сохраняли экспрессию mKate2 в течение 10 пассажей без селектирующего антибиотика G-418, и один клон на основе Hep-2, сохранявший экспрессию mKate2 в течение 8 пассажей без G-418. Для животного с перевитой флуоресцирующей опухолью Hep2-mKate2 была получена зависимость накопления липосомального “Октасенса” в опухоли и нормальной ткани.

РАЗРАБОТКА НОВЫХ ПОДХОДОВ К ПРОВЕДЕНИЮ ЛАЗЕРНОЙ ТЕРАПИИ

В.В.Смирнов ¹⁾, Т.В.Мачнева ²⁾, Е.А.Буравлев ²⁾, Н.Н.Булгакова¹⁾, А.Н.Осипов ²⁾

¹⁾ Институт общей физики им. А.М.Прохорова РАН, Москва

²⁾ Российский Государственный медицинский университет, Москва


В последние десятилетия лазерная терапия ран и воспалитель-ных процессов различных локализаций широко применяется в практическом здравоохранении [1]. Однако корректное применение лазерного излучения в клинике часто сопряжено с трудностями выбора индивидуальной дозы, мощности и способа облучения, т.к. до настоящего времени не разработано научно обоснованной стратегии применения данного метода. В 1994 году была сформулирована гипотеза о трех основных механизмах действия низкоинтенсивного лазерного излучения [2]. Один из них предполагает, что лазерное излучение красного диапазона спектра (632.8 нм) обладает фотодинамическим действием на мембраны фагоцитов и что первичными акцепторами излучения в этом случае могут выступать эндогенные порфирины.

В рамках выполнения проекта была разработана методика определения и проведены измерения наномольных концентраций эндогенных порфиринов в биологических жидкостях. Для проведения измерений был использован обладающий высокой чувствительностью волоконно-оптический спектрометр FS-003V (ООО «Кластер», Москва). Для возбуждения флуоресценции использовали излучение диодного лазера с длиной волны 407 нм вблизи максимума поглощения порфиринов. Применение разработанной методики и аппаратуры позволило получить данные [3, 4], подтверждающие гипотезу о роли эндогенных порфиринов как первичных акцепторов в эффектах низкоинтенсивного лазерного облучения красного диапазона спектра.

С учетом полученных результатов была проведена модификация спектрометра FS-003V, которая позволяет создать прототип специализированного медицинского прибора для определения и контроля световой дозы. Мониторинг с помощью такого прибора эндогенных порфиринов в малых объемах биологических жидкостей, включая плазму крови, и в раневых поверхностях пациентов in vivo открывает принципиально новые возможности повышения эффективности фототерапии на основании определения индивидуальной чувствительности пациентов к терапевтическому действию лазерного излучения.

Таким образом, результаты, полученные в рамках выполнения проекта, позволяют разработать и реализовать в клинической прак-тике научно обоснованный алгоритм проведения низкоинтенсивной лазерной терапии с учетом индивидуального подхода, основанного на оценке содержания эндогенных порфиринов в крови пациентов.

1. В.Т.Пальчун, А.С.Лапченко и А.Г.Кучеров, Лечебное дело, № 2, 20(2005).
   
2. Ю.А.Владимиров. М., Институт биомедицинской химии РАМН, 1994, 66 c.
   
3. Т.В.Мачнева, Н.Н.Булгакова, Ю.А.Владимиров, А.Н.Осипов, Биофизика, 2010, том. 55, вып. 3, с. 467-472 .
   
4. Т.В.Мачнева, Е.А.Буравлев, Н.Н.Булгакова, Ю.А.Владимиров, А.Н.Осипов. Биофизика, 2011, том. 56, вып.4, с. 705-713.