Тезисы докладов

Вид материала

Тезисы

Содержание 5. Лекарственные препараты МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НИТРОЗИЛЬНЫХ КОМПЛЕКСОВ ЖЕЛЕЗА Поиск новых высокоэффективных низкомолекулярных синтетических прямых ингибиторов тромбина

Подобный материал:

• Тезисы докладов, 3726.96kb.
• Тезисы докладов, 1225.64kb.
• Правила оформления тезисов докладов Тезисы докладов предоставляются в электронном виде, 22.59kb.
• «Симпозиум по ядерной химии высоких энергий», 1692.86kb.
• Требования к тезисам докладов, 16.83kb.
• Тезисы докладов научно-практической, 6653.64kb.
• Тезисы докладов 1 Межвузовская научно -практическая конференция студентов и молодых, 100.64kb.
• Тезисы докладов и заявки на участие, 104.97kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 788.61kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 1066kb.

5. Лекарственные препараты

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НИТРОЗИЛЬНЫХ КОМПЛЕКСОВ ЖЕЛЕЗА

С S-ЛИГАНДАМИ – СТРУКТУРНЫМИ АНАЛОГАМИ ПИРИДИНОВЫХ ОСНОВАНИЙ ДНК

С.М.Алдошин¹⁾, Н.А.Санина¹⁾, О.С.Жукова²⁾, А.А.Терентьев¹⁾

¹⁾Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка

²⁾РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва


Поиск новых эффективных доноров монооксида азота (NO) класса сера-нитрозильных комплексов железа (СНКЖ) и изучение молекулярно-генетических механизмов их действия на расширенной панели линий опухолевых клеток человека и экспериментальных животных являются необходимыми этапами создания перспективных инновационных NO-препаратов для химиотерапии злокачественных образований.

В ИПХФ РАН cинтезированы и охарактеризованы физико-химическими методами новые нитрозильные комплексы железа cостава [Fe₂(SR)₂(NO)₄] с R-тиолилами – структурными аналогами пиридиновых оснований ДНК ряда фенола, тиопиридина, тиопиримидина и их аминопроизводных.

Выполнено тестирование цитоксической активности синтези-рованных комплексов стандартным МТТ-тестом на опухолевых клетках человека различного генеза: линии A549 (немелкохклеточный рак легкого), SCOV-3 (карцинома яичника), LS-174T (карцинома толстого кишечника), H1299 (немелкоклеточная карцинома легкого человека), MCF7 (аденокарцинома молочной железы человека) и HeLa (аденокарцинома шейки матки человека). Нитрозильные комплексы железа с различными функциональными лигандами-анти-метаболитами пиридиновых оснований ДНК продемонстрировали различный антипролиферативный эффект, при этом наиболее широкий спектр цитотоксической активности выявлен для комплекса с R=2-аминофенолилом (значения IC₅₀, мкМ составляют 27 (SCOV3), 37 (LS174T), 74 (MCF7) и 25 (A549)).

Цитотоксичность СНКЖ может определяться NO, генерируе-мым ими при гидролизе, а также серосодержащими тиолилами, входящими в состав комплексов и образующимися при их распаде. Для выявления роли лигандов в общей цитотоксичности СНКЖ проведен сравнительный анализ цитотоксичности синтезированных комплексов и потенциальных продуктов их распада. Комплексы с 2-аминотиофенолом и тиофенолом обладают сходной цитотоксичностью, при этом дозы IC₅₀ для этих комплексов вдвое превышает цитотоксичность соответствующих лигандов. По данным масс-спектрометрии, в водных растворах происходит полный распад комплексов: из 1 моля комплекса высвобождается 2 моля соответствующего лиганда. Двукратное превышение цитотоксичности СНКЖ над цитотоксичностью их лигандов хорошо согласуется с моделью полного распада комплексов до цитотоксичных лигандов. С другой стороны, обнаружены существенные (более чем в 5 раз) различия в цитотоксичности нитрозильного комплекса железа с 4-аминотиофенолом и его лигандом. Комплекс проявляет высокую активность на клетках HeLa. Предположительно, основным активным веществом при действии на опухолевые клетки является генерируемый комплексом NO. По данным окрашивания клеток FITC-меченным аннексином V и йодистым пропидием с использованием проточной цитофлуо-риметрии установлено, что комплекс с 4-аминотиофенолом вызывает апоптотическую гибель клеток.

Работа выполнена при финансовой поддержке Программы Президиума РАН “ Фундаментальные науки – медицине”.

ПОИСК НОВЫХ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНЫХ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПРЯМЫХ ИНГИБИТОРОВ ТРОМБИНА

Ф.И.Атауллаханов^1,2), Е.И.Синауридзе^1,2), И.В.Грибкова^1,2), А.С.Горбатенко¹⁾

1. Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН, Москва; ²⁾ ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздравсоцразвития РФ, Москва
   

Цель и задачи работы:

Целью работы является разработка новых прямых низкомоле-кулярных ингибиторов тромбина для создания отечественных анти-тромботических препаратов и улучшения антитромботической тера-пии. Ранее нами были сконструированы, синтезированы и протес-тированы на способность прямо ингибировать тромбин в чистом буферном растворе новые низкомолекулярные лиганды нескольких классов. Были отобраны соединения, имеющие максимальную ингибирующую активность. Однако способность того или иного соединения ингибировать работу системы свертывания в плазме (т.е. его антикоагулянтная активность, непосредственно связанная с антитромботическими свойствами) определяется не только его способностью прямо ингибировать тромбин, но также возможными взаимодействиями этого соединения с другими факторами свертывания и белками плазмы. В задачи данной работы входило тестирование антикоагулянтной активности лучших из ранее синтезированных нами ингибиторов тромбина in vitro.


Методы: состояние системы свертывания при определении антикоагулянтного действия исследуемых соединений оценивали, используя тест генерации тромбина и измеряя тромбодинамику (т.е. скорость роста сгустка в пространстве) в присутствии различных концентраций данных соединений. Активацию свертывания в обоих тестах проводили по внешнему пути с помощью тканевого тромбопластина: либо добавленного в гомогенную систему (тест генерации тромбина), либо иммобилизованного на поверхности неподвижного локального активатора при измерении тромбодинамики.


Результаты:

1) Тест генерации тромбина позволяет оценить суммарное количество активного тромбина, образующегося в образце плазмы в ответ на стандартную активацию. В качестве параметра для оценки этого количества была выбрана площадь под кривой зависимости концентрации тромбина в пробе от времени (эндогенный тромбино-вый потенциал (ЭТП)). Генерацию тромбина измеряли в образцах нормальной плазмы, а также в той же плазме в присутствии различ-ных концентраций исследуемых ингибиторов. Эффективность анти-коагулянтного действия определяется эффективностью снижения ЭТП в присутствии ингибитора. Для характеристики этой эффек-тивности были определены концентрации ингибиторов, вызываю-щие 50 % снижение ЭТП (IC_{50 ЭТП}). Для лучших из исследованных соединений эти величины оказались лежащими в интервале 0.1– 0.26 мкМ и были ниже, чем аналогичная величина у единственного, применяемого в клинике для внутривенных инъекций, низкомо-лекулярного ингибитора тромбина – аргатробана (0.65 мкМ).

2) По результатам измерения влияния новых ингибиторов на ЭТП было отобрано 8 наиболее эффективных соединений. Затем было подробно исследовано влияния этих соединений на пространственную динамику свертывания крови. Измерения были проведены на оригинальной установке, сконструированной в лаборатории физической биохимии Гематологического научного центра. Концентрации различных ингибиторов, вызывающие снижение стационарной скорости роста сгустка в 2 раза (IC_{50 сгустка}), находились в интервале 7.5–100 мкМ (аналогичная величина для аргатробана составляет 9.0 мкМ).


Выводы: Полученные результаты показали, что лучшие из новых прямых ингибиторов тромбина являются высоко-эффективными антикоагулянтами в плазме, сравнимыми или превосходящими по показателям применяемый в клинике аргатробан.

Работа выполнена в рамках проекта «Фундаментальные науки – медицине».