Лимфосаркомы плисса
| Вид материала | Автореферат диссертации |
1 2
Характеристика системы гемостаза при развитии лимфосаркомы Плисса
Перевивка ЛФС и последующий рост опухоли вызывает выраженное нарушение функционирования сосудистого компонента системы гемостаза, что проявляется увеличением концентрации циркулирующих эндотелиоцитов (ЦЭЦ) в крови подопытных животных (табл. 3). На 3 сутки эксперимента уровень ЦЭЦ оказался повышенным в сравнении с контрольной группой и в группе «ЛФС» (на 16 клеток/мл, р < 0,001), и в группе «Воспаление» (на 11 клеток/мл, р < 0,001). При этом отличий между группами «ЛФС» и «Воспаление» не установлено (р = 0,158). Высокая концентрация ЦЭЦ в группе «ЛФС», регистрируемая на 15 сутки эксперимента, превышает уровень ЦЭЦ не только в контрольной группе (на 64 клетки/мл, р < 0,001), но и в группе «Воспаление» (на 59 клеток/мл, р < 0,001). При этом отличий между группами «Контроль» и «Воспаление» не отмечено (р = 0,111). Анализ состояния клеточного компонента системы гемостаза установил значительное усиление функциональной активности тромбоцитов при развитии ЛФС
Высокий уровень различий между всеми группами животных показан при сравнении концентрации фибриногена (табл. 3). При этом максимальная концентрация отмечена у крыс группы «ЛФС» - отличие от контроля на 3 сутки наблюдений составило 2,8 г/л (р < 0,001), а на 15 сутки – 3,8 г/л (р < 0,001).
Таблица 3.
Состояние системы гемостаза у крыс с перевиваемой ЛФС (M ± SD)
| Тест | Сутки наблюдения | Контроль | Воспаление | ЛФС | |
| Циркулирующие эндотелиоциты (клетки/мл) | 3 | 47,0±7,42 | 58,1±8,6 | 62,9±12,21 | |
| 15 | 45,1±11,32 | 50,3±9,02 | 109,3±12,01,3 | ||
| Тромбоциты, клетки х 109/л | 3 | 675±70,12,3 | 613±60,21 | 621±52,21 | |
| 15 | 710±97,92 | 653±85,0 | 629±81,01 | ||
| Адгезивная активность тромбоцитов, % | 3 | 33±5,02,3 | 43±5,41,2 | 55±6,31,3 | |
| 15 | 31±4,72 | 38±1,61,2 | 56±5,11,3 | ||
| Агрегационная способность тромбоцитов | МА, % | 3 | 37,5±10,72,3 | 56,4±9,11,2 | 68,9±8,21,3 |
| 15 | 40,1±15,62 | 49,6±8,22 | 65,3±10,01,3 | ||
| ВМА, секунды | 3 | 133,0±37,0 | 116,5±31,1 | 117,0±24,6 | |
| 15 | 152,9±45,6 | 135,9±25,5 | 124,0±21,9 | ||
| АЧТВ, секунды | 3 | 70±152,3 | 51±111 | 50±101 | |
| 15 | 66±13 | 62±10 | 55±16 | ||
| ПВ, секунды | 3 | 26±42 | 18±6 | 17±31 | |
| 15 | 28±52 | 25±32 | 19±31,3 | ||
| Время рекальцификации плазмы, секунды | 3 | 98±152,3 | 81±91 | 72±191 | |
| 15 | 103±172,3 | 79±111 | 70±151 | ||
| Фибриноген, г/л | 3 | 3,8±0,82,3 | 5,4±1,21,2 | 6,6±1,41,3 | |
| 15 | 4,0±0,92,3 | 5,0±1,01,2 | 7,8±1,11,3 | ||
| 1 – отличия от «Контроль» - р < 0,05; 2 – отличия от «ЛФС» - р < 0,05; 3 – отличия от «Воспаление» - р < 0,05. |
Повышенный синтез полимерного фибрина при развитии опухоли закономерно вызывает появление растворимых комплексов мономерного фибрина (РКМФ) в крови подопытных животных, чего не наблюдается по результатам качественного этанолового теста в крови крыс контрольной группы. На 3 сутки эксперимента РКМФ обнаруживаются в плазме крови у 40% крыс группы «ЛФС» и у 50% крыс группы «Воспаление»; на 15 сутки только у 25% крыс группы «Воспаление» регистрируется наличие РКМФ, тогда как у крыс группы «ЛФС» этот показатель достигает 85%.
Анализ полученных в ходе исследования данных о состоянии системы гемостаза крыс при развитии ЛФС позволяет сделать вывод о выраженной дисфункции гемостатических механизмов, усугубляющейся по мере развития опухоли. Нарушения затрагивают все компоненты гемостаза, направлены в сторону активации процессов тромбообразования и свертывания крови.
^ Развитие лимфосаркомы Плисса при коррекции системы гемостаза антикоагулянтами прямого действия
Коррекция системы гемостаза крыс на фоне роста опухоли с помощью СМГ и НМГ выявила различия в подопытных группах по показателям развития перевиваемой ЛФС. Прививаемость в группе «ЛФС» составила 80%, в группе «Физ. Раствор» – 73%, в группе «Клексан» - 93%, в группе «Гепарин» – 100%. Введение антикоагулянтов привело к значительному уменьшению времени, предшествующему появлению опухолевого узла от момента перевивки ЛФС. Данный показатель составил в группе «ЛФС» 16,9±1,4 суток, в группах «Физ. раствор» - 17,7±1,6 суток, «Клексан» - 15,1±2,0 суток, «Гепарин» - 14,4±0,9. Антикоагулянты, сокращая интервал времени предшествующего появлению пальпируемого узла лимфосаркомы от момента перевивки, способствуют более ранней гибели животных-опухоленосителей.
Анализ динамики роста ЛФС выявил более выраженный рост в подопытных группах на поздних стадиях (13–15 сутки от момента установления факта прививаемости), статистически значимо отличающийся от показателей группы «ЛФС». На 13 сутки объем лимфосаркомы у крыс группы «Клексан» превышал объем опухоли у крыс группы «ЛФС» (109,0±8,10 см3) на 40 см3 (р < 0,001), а на 15 сутки (133,5±7,87) – на 18 см3 (р < 0,001). Гепарин-натрий ещё более ускорял развитие опухоли. На 13 сутки объем ЛФС у крыс группы «Гепарин» превышал на 43 см3 (р < 0,001) показатель у животных группы «ЛФС», а на 15 сутки скорость роста ЛФС у крыс получивших гепарин-натрий была выше по сравнению и с группой «ЛФС» (на 40 см3, р < 0,001), и с группой «Клексан» (на 23 см3, р = 0,001). Введение физиологического раствора не оказывало влияния на рост ЛФС. Применение антикоагулянтов приводило к коррекции гемостатических механизмов. Гепарины снижают активность сосудистого и клеточного компонентов системы гемостаза, что проявляется уменьшением количества циркулирующих эндотелиоцитов (ЦЭЦ) в крови у крыс с перевиваемой ЛФС, восстановлением концентрации тромбоцитов до физиологического уровня, регистрируемого у контрольных крыс. При этом более выраженный эффект наблюдается при применении клексана. Анализ результатов исследования адгезивных и агрегационных свойств тромбоцитов не выявил способности гепаринов оказывать влияние на эти показатели.
У крыс с перевиваемой ЛФС выявлена тенденция к снижению активности факторов свертывания крови при действии антикоагулянтов (табл. 4). По большинству исследуемых показателей отличия между группой «ЛФС» и группами крыс получивших НМГ и СМГ отмечены уже на 3 сутки эксперимента. Наибольший эффект удалось получить в группе «Гепарин».
Таблица 4.
Состояние плазменного компонента системы гемостаза у крыс с перевиваемой ЛФС при применении антикоагулянтов прямого действия (M ± SD)
| Тест | Сутки | Контроль | ЛФС | Клексан | Гепарин |
| АЧТВ, секунды | 3 | 70±152 | 50±101,4 | 51±151 | 78±102,3 |
| 15 | 66±134 | 55±164 | 59±184 | 83±141,2,3 | |
| ПВ, секунды | 3 | 26,0±3,52,3 | 17,4±3,91,4 | 20,0±2,41,4 | 28,6±4,62,3 |
| 15 | 27,5±3,32,3 | 18,8±4,11,3,4 | 22,6±2,61,2,4 | 30,1±2,52,3 | |
| ВРП, секунды | 3 | 98±152,4 | 72±191,3,4 | 93±152,4 | 111±201,2,3 |
| 15 | 103±172 | 70±151,3,4 | 99±132 | 105±322 | |
| Фибриноген, г/л | 3 | 3,8±0,82,3,4 | 6,6±1,41,3,4 | 5,2±1,71,2 | 5,1±0,91,2 |
| 15 | 4,0±0,92,3.4 | 7,8±1,11,3,4 | 6,5±1,31,2 | 6,2±0,71,2 | |
| 1 – отличия от «Контроль» - р < 0,05; 2 - отличия от «ЛФС» - р < 0,05; 3 - отличия от «Клексан» - р < 0,05; 4 - отличия от «Гепарин» - р < 0,05. |
Снижение уровня фибриногена в крови крыс с развивающейся ЛФС под действием антикоагулянтов приводит к уменьшению частоты обнаружения положительных проб на РКМФ у подопытных животных. Нарастание концентрации фибриногена, обусловленное прекращением действия препаратов, напротив, приводит к увеличению положительных проб на РКМФ. На 3 сутки эксперимента РКМФ определяется у 40% крыс группы «Гепарин»; на 15 сутки этот показатель составляет 75%. Применение низкомолекулярных гепаринов (клексан) способствует удержанию уровня РКМФ даже через неделю после отмены препарата. На 3 сутки после перевивки ЛФС РКМФ регистрируется в плазме 35% крыс группы «Клексан»; на 15 сутки – у 40%.
^ Развитие лимфосаркомы Плисса
при коррекции системы гемостаза прокоагулянтами
В результате введения подопытным животным протамина сульфата на фоне роста опухоли отмечено достоверное снижение показателя прививаемости ЛФС. В группе «Протамин» прививаемость опухоли составила 60%, что на 20% ниже, чем в группе «ЛФС». Установлено увеличение интервала времени, прошедшего от момента перевивки до регистрации пальпируемого опухолевого узла. Выявление узла ЛФС в группе «Протамин» (20,0±1,2 суток)происходило в среднем на 3,1 дня позднее, чем в группе «ЛФС» (16,9±1,4 суток) (р = 0,032). Позднее развитие ЛФС способствует увеличению продолжительности жизни крыс. В группе «Протамин» этот показатель статистически не отличался от группы «ЛФС» (32,1±4,5 суток) и составил 36,2±4,9 суток. Динамика развития ЛФС у крыс, получивших протамина сульфат, значительно замедлена по сравнению с группой «ЛФС».
Снижение прививаемости и замедление развития ЛФС происходят на фоне дополнительной активации системы гемостаза, обусловленной введением прокоагулянта. Значительной коррекции подвергается плазменный компонент гемостаза на начальных этапах формирования опухоли (табл. 5).
Таблица 5.
Состояние плазменного компонента системы гемостаза у крыс с перевиваемой ЛФС при применении протамина сульфата (М±SD)
| Группа | Сутки | АЧТВ, секунды | ПВ, секунды | ВРП, секунды | Фибриноген, г/л |
| Контроль | 3 | 70±152,3 | 26,0±3,52,3 | 98±152,3 | 3,8±0,82,3 |
| 15 | 66±13 | 27,5±3,32,3 | 103±132,3 | 4,0±0,92,3 | |
| ЛФС | 3 | 50±101 | 17,4±3,91,3 | 72±191,3 | 6,6±1,41,3 |
| 15 | 55±16 | 18,8±4,11 | 70±151 | 7,8±1,11 | |
| Протамин | 3 | 43±91 | 14,6±2,51,2 | 54±111,2 | 8,6±1,01,2 |
| 15 | 54±12 | 16,8±2,71 | 70±101 | 8,0±0,81 | |
| 1 - отличия от «Контроль» - р < 0,05; 2 – отличия от «ЛФС» - р < 0,05; 3 – отличия от «Протамин» - р < 0,05. |
Высокий уровень фибриногена положительно коррелирует с частотой регистрации положительных проб на РКМФ (r = 0,630). Это объясняет большие значения уровня РКМФ в группе «Протамин», сохраняющиеся в течение всего периода наблюдений. На 3 сутки эксперимента РКМФ регистрируется у 60% крыс группы «Протамин», на 15 сутки – у 50%. Тесты, определяющие состояние сосудистого и клеточного компонентов системы гемостаза, в большинстве случаев не выявили достоверного уровня отличий между группами «Протамин» и «ЛФС».
^ Развитие лимфосаркомы Плисса при коррекции системы гемостаза препаратами, улучшающими микроциркуляцию
При введении крысам пентоксифиллина и ксантинола никотината выявлено их разнонаправленное влияние на перевиваемую опухоль. Применение ксантинола никотината привело к стимулированию развития ЛФС, для пентоксифиллина показано ингибирующее действие на опухоль.
В группе «Пентоксифиллин» прививаемость опухоли составляет 67%, что на 13% и 33% меньше, чем в группах «ЛФС» и «Ксантинол», соответственно. Применение ксантинола никотината значительно сократило время, предшествующее регистрации первичного опухолевого узла. Оно составило 13,1±1,6 дня, что на 3,8 дня меньше, чем аналогичный показатель в группе «ЛФС» (р = 0,017). Пентоксифиллин, напротив, способствовал увеличению этого времени и у крыс группы «Пентоксифиллин» узел ЛФС выявляется на 17,6±1,0 день, что в среднем на 0,9 дня позже, чем в группе «ЛФС». Более раннее возникновение узла ЛФС в группе «Ксантинол» закономерно сокращает длительность жизни крыс. Этот показатель составляет в группе «Ксантинол» 25,8±4,3 суток, что в среднем на 6,3 дня меньше, чем в группе «ЛФС» (р = 0,048). Продолжительность жизни крыс, получивших курс пентоксифиллина, составляет 34,0 ±3,9 суток.
Разнонаправленное действие на опухолевый процесс применяемых препаратов наиболее ярко прослеживается при анализе данных по динамике роста ЛФС в экспериментальных группах. Введение подопытным животным пентоксифиллина способствует замедлению развития ЛФС. На 9 день роста объем узла ЛФС у крыс в группе «Пентоксифиллин» был на 10,3 см3 меньше, чем в группе «ЛФС» (р = 0,019). На 13 сутки – на 12,1 см3 (р = 0,010), на 15 сутки – на 7,5 см3 (р = 0,038). Применение ксантинола никотината приводит к быстрому развитию ЛФС. Уже на 5 сутки проведения измерений объем опухолевого узла в группе «Ксантинол» превышал объем в группе «ЛФС» на 17 см3 (р < 0,001). На 9 сутки отличия по данному показателю между группами составили 19 см3 (р < 0,001), на 13 сутки – 57,5 см3 (р < 0,001), на 15 сутки – 56,5 см3 (р < 0,001).
Введение подопытным животным препаратов, улучшающих микроциркуляцию, приводит к коррекции нарушений системы гемостаза, сопровождающей развитие злокачественной опухоли.
Оба используемых препарата снижают уровень ЦЭЦ в группах «Пентоксифиллин» и «Ксантинол», по сравнению с группой «ЛФС». При этом большая коррекция этого показателя, достигающая значений, показанных для контрольной группы, установлена для пентоксифиллина.
Пентоксифиллин и ксантинола никотинат оказывают выраженное влияние на функциональную активность тромбоцитов крыс. Применяемые препараты увеличивают концентрацию тромбоцитов в крови крыс с ЛФС до величины сопоставимой с результатами контрольной группы, снижают показатели адгезивной и агрегационной активности тромбоцитов животных-опухоленосителей. При этом статистически значимого уровня различий между группами «Пентоксифиллин» и «Ксантинол» не установлено.
Исследование коагуляционного гемостаза в группах «Пентоксифиллин» и «Ксантинол» выявило незначительную способность применяемых препаратов снижать активность факторов плазменного компонента системы гемостаза крыс с перевиваемой ЛФС (табл. 6). Анализ показателей АЧТВ, ПВ и ВРП не показал наличия статистически значимых отличий между действием пентоксифиллина и ксантинола никотината. В тоже время продемонстрирована способность пентоксифиллина снижать уровень фибриногена в условиях экспериментального опухолевого роста. На 15 сутки концентрация фибриногена в крови крыс группы «Пентоксифиллин» была сопоставима с показателем в контрольной группе и значительно снижена по сравнению с группой «ЛФС» (на 3,3 г/л, р < 0,001). У крыс группы «Ксантинол» содержание фибриногена практически не изменилось в течение 15 суток от начала эксперимента. По мере снижения концентрации фибриногена в крови подопытных животных значительно реже регистрируются положительные пробы на РКМФ. В группе «Пентоксифиллин» на 3 сутки РКМФ зарегистрированы в плазме у 55% крыс; на 15 сутки – у 35%. В группе «Ксантинол» на 3 сутки РКМФ зарегистрированы у 60% крыс; на 15 сутки РКМФ – у 100%.
Таблица 6.
Состояние плазменного компонента гемостаза у крыс с перевиваемой ЛФС
при применении препаратов, улучшающих микроциркуляцию (M ± SD)
| Группа | Сутки | АЧТВ, секунды | ПВ, секунды | ВРП, секунды | Фибриноген, г/л |
| Контроль | 3 | 70±152 | 26,0±3,52 | 98±152 | 3,8±0,82,3 |
| 15 | 66±13 | 27,5±3,32 | 103±172 | 4,0±0,92,3 | |
| ЛФС | 3 | 50±101 | 17,4±3,91 | 72±191 | 6,6±1,41,3 |
| 15 | 55±16 | 18,8±4,11 | 70±151 | 7,8±1,11 | |
| Пентоксифиллин | 3 | 49±161 | 19,4±3,01 | 76±111 | 5,7±1,21 |
| 15 | 59±12 | 21,0±3,61 | 84±101,2 | 4,5±1,62 | |
| Ксантинол | 3 | 49±111 | 18,1±4,11 | 69±101 | 6,0±0,51 |
| 15 | 57±13 | 19,5±3,81 | 76±121 | 5,7±1,41 | |
| 1 – отличия от «Контроль» - р < 0,05; 2 – отличия от «ЛФС» - р < 0,05. |
Таким образом, нами выявлено разнонаправленное действие пентоксифиллина и ксантинола никотината, препаратов, обладающих сопоставимыми фармакологическими характеристиками, на развитие лимфосаркомы Плисса. Применение пентоксифиллина приводит к значительному снижению прививаемости ЛФС и замедлению всех параметров роста опухоли. Для ксантинола никотината, напротив, выявлена способность стимулировать развитие ЛФС. Для обоих используемых препаратов показана способность уменьшать активность гемостатических механизмов животных со злокачественной опухолью.
ВЫВОДЫ
- Введение крысам массой тела 185 – 200 г. взвеси клеток лимфосаркомы Плисса в дозе 550 клеток/животное вызывает рост опухоли с частотой 60 – 80%, что позволяет рассматривать эту дозу как оптимальную для исследования характеристик развития данного клона опухоли и влияния на них различных факторов.
- Развитие лимфосаркомы Плисса зависит от пола животного. Частота успешной перевивки («прививаемость») опухоли и темпы ее роста у самок крыс ниже, чем у самцов при одинаковой дозе перевиваемого материала.
- Развитие лимфосаркомы Плисса приводит к выраженным нарушениям всех компонентов системы гемостаза крыс, проявляющимся эндотелиальной дисфункцией, активацией клеточного компонента и гиперкоагуляцией. Степень дисфункции гемостатических механизмов нарастает по мере развития опухоли.
- Введение антикоагулянтов прямого действия и препаратов, улучшающих микроциркуляцию, вызывающих ослабление дисфункции гемостатических механизмов, приводят к повышению прививаемости и темпов роста лимфосаркомы Плисса.
- Усиление активации системы гемостаза крыс с развивающейся лимфосаркомой Плисса при введении протамина сульфата способствует снижению прививаемости опухоли и замедлению темпов ее роста.
- Применение пентоксифиллина вызывает коррекцию нарушений системы гемостаза и одновременно тормозит развитие лимфосаркомы Плисса.
^ ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
- Установленную дозу опухолевого материала лимфосаркомы Плисса 550 клеток/животное, вызывающую рост опухоли у 60 – 80% крыс, рекомендуется использовать для экспериментальной оценки эффекта различных факторов на рост опухоли.
- Выявленный в ходе исследований факт дисфункции компонентов системы гемостаза крыс при развитии лимфосаркомы Плисса позволяет рекомендовать использовать эту опухоль в качестве модели для изучения паранеопластического синдрома Труссо.
- Повышение частоты успешных перевивок лимфосаркомы Плисса при применении препаратов, улучшающих микроциркуляцию и ослабляющих прогемостатический потенциал крови, является первичным обоснованием проведения комплексного клинического и экспериментального исследования целесообразности широкого применения этих препаратов при лечении злокачественных опухолей различных локализаций и гистологического типа.
- Рекомендуется провести специальное исследование влияния пентоксифиллина на развитие злокачественных опухолей с учетом полученных данных об ингибирующей роли этого препарата на частоту возникновения и рост лимфосаркомы Плисса.
^ СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
- Трашков А.П. Исследование зависимости перевиваемости крысиной лимфосаркомы Плисса от прививаемой дозы / А.П. Трашков, В.С. Федоров // Актуальные проблемы патофизиологии / Под ред. проф. Н.А. Гавришевой, проф. В.И. Николаева – СПб.: 2007. – С. 126 – 128.
- Трашков А.П. Исследование зависимости перевиваемости лимфосаркомы Плисса от массы тела (возраста) и пола крысы / В.С. Федоров, А.П. Трашков // Актуальные проблемы патофизиологии / Под ред. проф. Н.А. Гавришевой, проф. В.И. Николаева – СПб.: 2007. – С. 129 – 130.
- Трашков А.П. Изменение показателя прививаемости лимфосаркомы Плисса в зависимости от дозы трансплантируемого опухолевого материала / А.П. Трашков, В.С. Федоров, М.А. Реутин // Актуальные проблемы патофизиологии / Под ред. проф. Т.Д. Власова, проф. В.И. Николаева – СПб.: СПбГМУ, 2008. – С. 98 – 99.
- Трашков А.П. Сравнительный анализ действия среднемолекулярных гепаринов и ангиопротекторов на развитие лимфосаркомы (лимфомы) Плисса / А.П. Трашков // Всероссийская научно-практическая конференция «Посттромботическая болезнь». Тезисы докладов. – СПб.: СПбГУ, 2009. – С. 104 – 106.
- Трашков А.П. Перспективы использования лимфосаркомы Плисса в изучении проблемы взаимоотношений беременности и злокачественных новообразований / М.А. Реутин, А.П. Трашков // Актуальные проблемы патофизиологии / Под ред. проф. Т.Д. Власова, проф. В.И. Николаева – СПб.: СПбГМУ, 2009. – С. 94 – 95.
- Трашков А.П. Развитие лимфосаркомы (лимфомы) Плисса при введении нефракционированных гепаринов / А.П. Трашков, М.А. Реутин // Актуальные проблемы патофизиологии / Под ред. проф. Т.Д. Власова, проф. В.И. Николаева – СПб.: СПбГМУ, 2009. – С. 112 – 113.
- Трашков А.П. Анемический синдром при развитии лимфосаркомы Плисса / А.П. Трашков, М.А. Реутин, Д.В. Струков // Актуальные проблемы патофизиологии / Под ред. проф. Т.Д. Власова, проф. В.И. Николаева – СПб.: СПбГМУ, 2009. – С. 113 – 114.
- Трашков А.П. Особенности развития лимфосаркомы Плисса у иммунизированных крыс при коррекции системы гемостаза среднемолекулярным гепарином / А.Г. Васильев, Н.В. Хайцев, А.П. Трашков, М.А. Реутин // Клиническая патофизиология. – 2009. – Вып. 1 – 2. – С. 62 – 67.
- Трашков А.П. Влияние пола животного и количества трансплантируемых опухолевых клеток на развитие Плисса / А.Г. Васильев, Н.В. Хайцев, А.П. Трашков, М.А. Реутин // Вестник Санкт-Петербургского университета. Сер. 11. Медицина. – 2009. – Вып. 2. – С. 135 – 142.