Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации
| Вид материала | Документы |
Содержание8.2. Лабораторные штаммы 8.3. Приборы и оборудование 8.4. Материалы и реактивы 8.5. Приготовление препарата для метаболической активации |
- Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации, 794.61kb.
- Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации, 410.45kb.
- Проект Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации, 3649.85kb.
- Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации, 1424.69kb.
- Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации Государственные, 626.44kb.
- Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации, 1605.84kb.
- Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации, 642.07kb.
- Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации, 575.15kb.
- Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации, 348.1kb.
- Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование, 413.52kb.
8.2. Лабораторные штаммы
Исследования выполняют на бактериях ссылка скрыта, минимальный набор состоит из штаммов ТА 97, ТА 98 и ТА 100, сконструированных из исходного штамма S.typhimurium LT-2 дикого типа. Все эти штаммы содержат различного типа мутации в гистидиновом опероне, что приводит к их ауксотрофности по гистидину.
При необходимости могут использоваться другие виды и штаммы микроорганизмов.
Каждый штамм должен быть проверен на ауксотрофность по гистидину, чувствительность к кристаллическому фиолетовому и устойчивость к ампициллину. Тестерные штаммы должны иметь уровень спонтанных ревертантов в пределах ожидаемого на основании данных литературы.
8.3. Приборы и оборудование
Термостат, поддерживающий рабочую температуру 28-45оС с отклонением от заданной ± 10С по ТУ 64-1-1382-72
Морозильная камера, обеспечивающая температуру -200С или ниже
Ламинарный шкаф марки ЛШ1 фирмы «Вiokom» или аналогичный
Центрифуги со скоростью вращения ротора до 12000 об/мин для пробирок вместимостью 15 см3 и 1,5 см3
Встряхиватель вибрационный типа «Вортекс» со скоростью вращения до 3000 об/ мин
Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 26678-85
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности по ГОСТ 24104-2001
Мембранные установки для получения деионизованной воды по ОСТ 11-029.003-80
Анализатор потенциометрический, погрешность измерений рН ±0,01 по ГОСТ 27987-88
Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150
Дозаторы с переменным объёмом дозирования «Gilson» 0,2 – 2,0 мм³ с шагом 0,01 мм³, с точностью 1,2%; 2- 20 мм³ с шагом 0,01 мм³, с точностью 0,8%; 1 – 10 см³ с шагом 0,1 см³, с точностью 0,5%.
Дозаторы «Ленпипет» 0,5 – 10,0 мм³ с шагом 0,01 мм³, с точностью 0,8%; 20– 200 мм³ с шагом 0,1 мм³, с точностью 0,6%; 100 – 1000 мм³ с шагом 1 мм³, с точностью 3 % по ТУ 9452-002-33189998-2002
Пробирки стерильные типа «Эппендорф» объемом 1,5 см3
Пробирки стерильные с крышкой «Costar» вместимостью 15 см3 или аналогичные
Наконечники пластиковые объемом 1-200 мм3
Наконечники пластиковые объемом 200-1000 мм3
Перчатки резиновые по ГОСТ 3-88
Колбы плоскодонные конические разной вместимости по ГОСТ 1770-74
Цилиндры стеклянные мерные лабораторные вместимостью 25, 100, 1000 см³ по ГОСТ 1770-74
Воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82
Флаконы стерильные объемом 100 и 200 см3 «Costar» или аналогичные
Гомогенизатор Поттера с тефлоновым пестиком
Камера Горяева по ТУ 64-1-816-77
Чашки Петри пластиковые, диаметр 100 мм по ТУ 9453-010-00480201-95
8.4. Материалы и реактивы
Фенобарбитал
Хлорид калия, производства фирмы «Sigma»
Хлорид магния, производства фирмы«Sigma»
Хлорид натрия, производства фирмы «Sigma»
Нитрозометилмочевина, производства фирмы «Sigma»
2,7-диамино-4,9-диокси-5,10-диоксо-4,5,9,10-тетрагидро-4,9-диазопирен (ДДДТДП), производства фирмы «Sigma»
9-аминоакридин производства фирмы «Sigma»
Циклофосфан производства фирмы «Sigma»
Мясо-пептонный бульон
Мясо-пептонный агар
Фосфатный буфер,
Никотинамидадениндинуклеотидфосфат (НАДФ), производства фирмы «Sigma»
Глюкозо-6-фосфат, производства фирмы «Sigma»
L-гистидин, производства фирмы «Merck»
Ампициллин
Кристаллический фиолетовый
Допускаются к использованию реагенты и материалы аналогичного назначения других изготовителей, разрешенные к применению в установленном порядке и с характеристиками, обеспечивающими проведение исследований в соответствии с данными методическими указаниями.
8.5. Приготовление препарата для метаболической активации
В качестве системы экзогенной метаболической активации используется фракция S9 печени крыс, обработанных фенобарбиталом. Самцам крыс массой 200 г внутрибрюшинно вводят фенобарбитал в дозе 80 мг/кг (трехкратно, в течение 3-х суток до забоя). Крыс кормят по стандартному рациону вивария, позволяют свободно пить.
Перед забоем в течение 12 часов крысам не дают пищи, забивают животных оглушающим ударом по голове или декапитацией после цервикального смещения.
В асептических условиях извлекают из животных печени, взвешивают их, промывают стерильным раствором 0,1 М хлорида калия, охлаждённым до 0-2оС, измельчают стерильными ножницами, а затем в гомогенизаторе Поттера с тефлоновым пестиком. При гомогенизации на 1 г сырой массы печени берут 3 см3 0,15 М хлорида натрия, все операции проводят на льду. Центрифугируют гомогенат в центрифуге с охлаждением при 9000 g в течение 10 мин и разливают надосадочную жидкость (S9 фракция) на аликвоты, которые быстро замораживают с помощью смеси твёрдой углекислоты (сухой лёд) со спиртом или ацетоном или в жидком азоте и хранят в морозильной камере при -80°С (либо в жидком азоте) до момента использования.
При проведении эксперимента аликвоты S9 фракции размораживают на льду и используют в течение одного дня. Образцы следует проверить на бактериальное загрязнение, в случае необходимости смесь S9 перед использованием можно профильтровать через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.