Е. В. Зинченко Всоздании данного справочник

Вид материала

Справочник

Содержание Часть12 ПРИЛОЖЕНИЯ 1.СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ЛЕЧЕНИЮ, ПРОФИЛАКТИКЕ И ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Клицунова Н.В., Гостева В.В. Метод электронной микроскопии 1.2. Основные механизмы противовирусного действия фоспренила : принципы профилактики и лечения вирусных инфекций Действие фоспренила как иммунокорректора вторичных иммунодефицитов Фоспренил – неспецифический иммуномодулятор при вирусных инфекциях Прямое противовирусное действие фоспренила Таблица 26. Противовирусная активность фоспренила Особенности применения фоспренила (и некоторых других препаратов производства ЗАО “Микро-плюс”) для лечения и профилактики вирус Болезнь Ауески Инфекционная панлейкопения Инфекционный ринотрахеит

Подобный материал:

• Е. В. Зинченко Всоздании данного справочник, 9726.47kb.
• П. И. Зинченко непроизвольное запоминание и деятельность, 148.57kb.
• Зинченко П. И. Непроизвольное запоминание / Под редакцией В. П. Зинченко и Б. Г. Мещерякова, 260.23kb.
• Productive thinking, 4226.18kb.
• В. В. Красник справочник москва энергосервис 2002 Автор: Доктор технических наук, профессор, 3548.17kb.
• Д. Б. Кабалевский нотографический и библиографический справочник, 2044.39kb.
• Справочник состоит из следующих разделов, 2077.26kb.
• Афанасьев Павел Александрович Разработка электронного справочник, 545.37kb.
• Телефонный справочник составлен и подготовлен, 1866.24kb.
• Справочник школьника Справочник «Математика. 5-11 классы», 26.04kb.

Часть12 ПРИЛОЖЕНИЯ

1.СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ЛЕЧЕНИЮ, ПРОФИЛАКТИКЕ И ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

1.1. Новое в диагностике вирусных заболеваний кошек

Клицунова Н.В., Гостева В.В.


В настоящее время успешно развиваются и внедряются в ветеринарные клиники ультрасовременные методы терапии домашних животных. Практикующие врачи используют не только последние достижения ветеринарной науки, но и широко применяют такие новейшие методы современной медицины, как лазерная терапия, иммунотерапия, акупунктура и акупрессура и другие.

В то же время спектр диагностических методов, позволяющих быстро и точно поставить диагноз заболевшему животному буквально до последних лет оставался достаточно узким и консервативным.

Традиционно применяли: прямую микроскопию при исследованиях кожных заболеваний (клещи и фитопаразиты кожи), овогельминтоскопические исследования, анализ крови на гемобартонеллез и лептоспироз. Также существуют методы иммунодиагностики, позволяющие выявлять вирусные антигены и противовирусные антитела при вирусных заболеваниях кошек. Однако с развитием современной науки усовершенствовались и методы диагностики.


МЕТОД ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ

Самый современный - это метод электронной микроскопии, позволяющий наиболее точно идентифицировать вирусный патоген, вызвавший заболевание, на основе его ультраструктурных свойств. Это позволяет быстро и наиболее точно подбирать лекарственные средства и тактику лечения.

Рассмотрим вкратце некоторые особенности морфологии вирусов, вызывающих основные инфекционные заболевания у кошек, ведь именно благодаря этим отличительным признакам вирионов оказывается возможной ультраструктурная индикация вирусов, вызвавших заболевание.

ПАРВОВИРУСЫ. Парвовирусы являются одними из самых мелких ДНК-содержащих вирусов животных. Их вирионы имеют диаметр от 18 до 26 нм и состоят только из белка и ДНК. Для ветеринарии имеют значение парвовирусы собак, кошек и два вируса норок (алеутской болезни и энтерита). Парвовирусы способны длительно персистировать в организме. С парвовирусной инфекцией связано одно из самых опасных и контагиозных заболеваний кошек: панлейкопения. Кроме того, парвовирусы могут вызывать и синдром внезапной смерти котят.

КАЛИЦИВИРУСЫ. Калицивирусы это маленькие РНК-содержащие безоболочечные вирусы, относящиеся к роду Calicivirus семейства Caliciviridae. Название получили из-за характерных чашевидных выемок (от "calices" (лат.) – "чашечка"). Благодаря этим выемкам калицивирусы несложно опознать под электронным микроскопом.

РЕОВИРУСЫ. Реовирусы были выделены в последние годы в ряде стран из собачьих фекалий. В природе реовирусы существуют в первую очередь как кишечные вирусы. Их патогенностью определяется способность вирусных частиц выдерживать химические (кислоты, желчь, пищеварительные ферменты) и иммунологические (секреторные иммуноглобулины А) воздействия желудочно-кишечного тракта. Эти вирусы поистине вездесущи. Они могут поражать любых животных. Это оболочечные, РНК-содержащие вирусы диаметром около 75 нм, икосаэдрической формы с плотным ядром.

КОРОНАВИРУСЫ. Коронавирусы относятся к агентам, вызывающим у кошек кишечные инфекции. Это крупные (диаметр 80-160 нм) РНК-содержащие вирусы, которые имеют липопротеиновую оболочку. На поверхности их оболочки располагаются большие, далеко отстоящие друг от друга гликопротеиновые выступы в форме булав. Свое название коронавирусы получили благодаря сходству этих отростков с corona sрinarum - терновым венцом вокруг головы Христа на средневековых изображениях.

АДЕНОВИРУСЫ. Аденовирусы являются этиологическими агентами широко распространенного инфекционного гепатита собак кошек. По морфологическим параметрам аденовирусы представляют собой довольно крупные (диаметр от 65 до 80 нм) частицы икосаэдрической формы, лишенные липопротеиновой оболочки. Есть сведения, что аденовирусы могут также вызывать синдром внезапной смерти, наступающей вскоре после развития диареи.

Таким образом, благодаря описанным выше отличительным признакам вирионов, возможно эффективно выполнять ультраструктурную индикацию данных патогенных вирусов с помощью метода электронной микроскопии.


1.2. Основные механизмы противовирусного действия фоспренила : принципы профилактики и лечения вирусных инфекций


Ожерелков С.В.


Действующим началом препарата фоспренил, который обладает широким спектром биологической активности (гепатопротекторной, ранозаживляющей, антидиабетической и др.), являются фосфаты полипренолов (ФП). Одной из наиболее привлекательных и актуальных для практической ветеринарии (и медицины) сторон является противовирусная активность фоспренила. Другим перспективным для лечебной практики направлением является иммуномодулирующая активность фоспренила, применение ФП в качестве адъюванта для противовирусных вакцин. Механизмы противовирусного действия фоспренила окончательно не изучены. Это объясняется полифункциональной активностью и комплексным действием фоспренила при вирусной инфекции, как на организм в целом (включая клетки иммунной системы), так и на клеточном уровне, включая: 1) клетки иммунной системы, 2) клетки-мишени для вирусов. В настоящем разделе мы хотели бы обратить внимание специалистов на целесообразность использования фоспренила в качестве профилактического и лечебного противовирусного средства, и обобщить имеющиеся данные, касающиеся механизмов его действия как иммуномодулятора, так и препарата, обладающего, по-видимому, прямым противовирусным эффектом.


ДЕЙСТВИЕ ФОСПРЕНИЛА КАК ИММУНОКОРРЕКТОРА ВТОРИЧНЫХ ИММУНОДЕФИЦИТОВ

К числу ведущих факторов, вызывающих в организме животных вторичный иммунодефицит (невозможность или снижение способности иммунной системы адекватно отвечать на инфицирование организма патогенами различной природы, в том числе и вирусами или, например, сформировать вакцинальный иммунитет), относится стресс. Известно, что при современной жизни, животные постоянно подвергаются воздействию множества стресс-факторов (стрессоров), как физических (климатические условия, изменения экологической обстановки, загрязнение окружающей среды, антигенная нагрузка, состав воды и пищи, транспортировка, тренировочные нагрузки, травмы и др.), так и психогенных (смена или потеря хозяина, скученность при содержании на ограниченной площади и др.).

В многочисленных клинических и экспериментальных исследованиях, начиная с 60-х годов и кончая современными было показано, что стресс вызывает в организме человека и животных иммуносупрессию: 1) снижает количество циркулирующих Т- и В-лимфоцитов, антигенпрезентирующих клеток, иммуноглобулинов; 2) подавляет первичный и вторичный иммунный ответ к различным антигенам; значительно снижает абсолютное число и фагоцитирующую активность макрофагов селезенки; 3) снижает цитотоксическую активность естественных киллеров и макрофагов; 4) подавляет способность клеток продуцировать -, - и -интерферон и, напротив, способствует увеличению продукции некоторых цитокинов (ИЛ-1, ФНО-). На фоне стресс-индуцированного иммунодефицита в организме животных наблюдаются возникновение и отягощение течения целого ряда вирусных инфекций, активация латентных вирусных инфекций, а также подавление развития специфического иммунного ответа при вакцинации. При этом сама по себе перенесенная или латентная вирусная инфекция является фактором, вызывающим формирование иммунодефицитных состояний, на фоне которых могут развиваться осложнения в виде секундарных и оппортунистических инфекций, ослабленная реакция на вакцинацию. Вторичный иммунодефицит могут вызывать многие вирусы, в т.ч. вирусы, играющие важную роль в инфекционной патологии животных (парвовирусы, герпесвирусы, ретровирусы, реовирусы и др.)

Действие вышеперечисленных факторов объясняет пониженную сопротивляемость животных к вирусным инфекциям и снижение эффективности вакцинации. Все это обосновывает целесообразность разработки и внедрения высокоэффективных иммунокорректоров. Несмотря на то, что в современной клинической и экспериментальной практике широко используются десятки природных и синтетических иммуномодуляторов (олексин, ридостин, иммунофан, полиоксидоний, неовир, лейкинферон, циклоферон, ронколейкин – рекомбинантный ИЛ-2, беталейкин – рекомбинантный ИЛ-1, гликопин, вилон, тимоген. и др.), их применение ограничивается рядом факторов, и лишь крайне немногие из них обладают прямым противовирусным эффектом.

В экспериментах, проведенных А.В.Саниным и соавторами, убедительно показано, что фоспренил, зарегистрированный в РФ как противовирусный препарат (А.В.Санин и др., 1991), является эффективным иммунокорректором вторичных иммунодефицитов, индуцированных различными внешними факторами: вирусной инфекцией, стрессом, радиацией. Согласно данным Л.Л.Данилова и соавт. (1999), однократное внутримышечное введение фоспренила мышам в дозе 5 мкг за короткий срок полностью восстанавливает специализированные функции антителообразующих В-клеток (АОК), значительно сниженные вследствие вирус- или стресс-индуцированного иммунодефицита.

В экспериментах на мышах, подвергавшихся радиационному воздействию в дозе 900 рад, выявлена эффективность применения фоспренила в качестве корректора функций стволовых клеток костного мозга (СККМ). У облученных контрольных животных отмечали полное подавление пролиферации СККМ, тогда как у облученных мышей, которым однократно перорально или внутримышечно вводили ФП в дозе 0,4 мкг регистрировали значительное увеличение способности СККМ к пролиферации.

Исходя из накопленных фактов, можно предположить, что механизм иммунокорригирующей способности фоспренила, по-видимому, состоит в следующем. Эндогенные фосфаты полипренолов участвуют в биосинтезе N-гликановых цепей гликопротеинов, к которым относятся, в частности, все виды иммуноглобулинов (IgA, IgG, IgM), - и - интерфероны, поверхностные антигены и практически все рецепторы клеточной поверхности. Вполне вероятно, что при вторичных иммунодефицитах в клетках наблюдается недостаток эндогенных фосфатов полипренолов, поэтому введение в организм дополнительных ФП нормализует физиологию и функции иммунокомпетентных клеток, в том числе АОК. Одним из возможных механизмов устранения с помощью фоспренила клеточного дисбаланса, наблюдаемого при вторичном иммунодефиците, по-видимому, является выброс в кровь СККМ при инъекциях животным фоспренила. С другой стороны, известно, что ФП являются интегральным компонентами клеточных мембран и влияют на многие их свойства (текучесть, проницаемость и т.д.). Логично предположить, что введение в организм экзогенных ФП способствует восстановлению как структур клеток (нарушенных в результате цитотоксического действия гормонов стресса и глюкокортикоидов или при других неблагоприятных воздействиях, например, при вирусных инфекциях), так и их способности к пролиферации.

Таким образом, фоспренил может быть использован в ветеринарной практике в качестве высокоэффективного антистрессорного препарата и иммунокорректора. Важно отметить, что фоспренил имеет целый ряд преимуществ по сравнению с другими препаратами: 1) не является ксенобиотиком; 2) не является антигеном; 3)действует на организм комплексно: не стимулируя избирательно какое-либо одно из звеньев гуморального или клеточного иммунитета, а способствует нормальному функционированию клеток иммунной системы организма в целом; 4) фоспренил может использоваться в качестве неспецифического профилактического противовирусного средства и при этом, в отличие от специфических сывороток и иммуноглобулинов, не имеет ограничений во времени применения. Здесь уместно подчеркнуть, что использование сывороток и иммуноглобулинов высокоэффективно лишь на ранних стадиях инфекционного вирусного процесса. Сыворотки эффективно работают против вируса тогда, когда вирус находится в крови. Это продолжается примерно 5-7 дней после начала заболевания. Когда вирус "уходит" в ткани, эффективность применения сывороток резко падает. На поздних сроках применение таких препаратов может вызвать развитие ряда иммунопатологических реакций и осложнить течение инфекции. Например, при экспериментальном клещевом энцефалите было установлено, что антитела (в определенных титрах) могут индуцировать повреждающее действие макрофагов во второй половине инкубационного периода.

Фоспренил, кроме того, зарекомендовал себя как высокоэффективный адъювант. Например, в опытах с инактивированной коммерческой вакциной против клещевого энцефалита автором было показано, что вакцина, непосредственно разведенная не обычным растворителем, а фоспренилом, увеличивает свою специфическую активность в 8-10 раз. Использование фоспренила как адъюванта противовирусных вакцин значительно повысит эффективность вакцинации, особенно в тех случаях, когда у животного выявлен или подозревается вторичный иммунодефицит.


ФОСПРЕНИЛ – НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЙ ИММУНОМОДУЛЯТОР ПРИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЯХ

В экспериментальных исследованиях, проведенных А.В.Саниным, А.Н.Наровлянским, О.Ю.Сосновской, А.В.Прониным, А.В.Деевой и др. в опытах in vivo и in vitro удалось убедительно доказать, что фоспренил обладает широким спектром биологической активности, в частности влияет на функционирование иммунной системы, гемопоэтической и системы естественной резистентности (A.V.Sanin, e.a.,1992, A.V.Sanin, e.a.,1993; L.L.Danilov e.a., 1997). Одним из механизмов стимуляции фоспренилом системы естественной резистентности организма является индукция выработки эндогенных интерферонов (ИФН). Например, в опытах на мышах линии СВА показано, что при внутрибрюшинном однократном введении фоспренила в дозах 40 и 200 мкг/мышь регистрировалась индукция ИФН в сыворотке крови через 2 часа, причем уровень ИФН сохранялся повышенным до 72 часов после введения препарата, достигая 256 ЕД , в то время как у контрольных животных – 0 ЕД. В опытах in vitro было исследовано влияние ФП на действие стандартных индукторов ИФН: ридостина, неовира – камедона (индукторов ИФН- и ИФН-), стафиллококкового энтеротоксина А (СЭА), определяющего способость клеток к синтезу ИФН-. Эксперименты на мышах показали, что предварительное введение фоспренила в дозе 5 мкг/ мышь приводит к усилению активности применяемых впоследствии ридостина и неовира. В опытах на клетках мышиных фибробластов L929 было установлено, что фоспренил увеличивает неовир- и ридостин- индуцированную продукцию ИФН-/. Кроме того, показано, что фоспренил модулирует активность иммукомпетентных клеток тимуса, селезенки, стимулируя ИФН-ответ на стандартные индукторы ИФН и способствуя повышению ИФН-активирующей способности сыворотки и плазмы крови.

Показано, что фоспренил способен стимулировать в организме животных продукцию некоторых цитокинов, играющих ключевую роль в развитии гуморального и клеточного иммунного ответа при вирусной инфекции. Так, на мышах линии С57Вl/6 установлено, что фоспренил, введенный животным однократно в дозах 1 или 4 мкг, внутримышечно или перорально, индуцирует продукцию ФНО до уровня 30-50 ЕД. При внутримышечном введении фоспренила мышам линии BALB/c отмечали 3-6-кратную стимуляцию ИЛ-1 через 24 часа. Пероральное введение препарата животным приводило к стимуляции ИЛ-1 в 1,6 раза по сравнению с контролем через 7 суток. Все эти данные были получены на незараженных вирусами животных. Возникает вопрос: как реализуется механизм противовирусного действия фоспренила в организме инфицированного вирусом животного? Для ответа на этот вопрос мы провели серию опытов, моделируя у мышей инфекцию, вызываемую вирусом клещевого энцефалита. Нам удалось установить, что при одновременном введении в организм животных вируса и препарата, выживает до 60% мышей, тогда как зараженные вирусом не обработанные фоспренилом мыши заболевают и гибнут в 100 % случаев через 7-9 суток после заражения вирусом. Мы провели обследование сывороток крови животных, которым вводили фоспренил и вирус, а также зараженных мышей, которым фоспренил не вводили. С помощью иммуноферментного метода определяли уровни цитокинов ИЛ-6, ФНО-, ИФН- и ИЛ-2 на 1-е, 2-е, 3-и, 4-е, 5-е, 6-е и 7-е сутки после заражения, т.е. в течение всего инкубационного периода до начала проявления клинических признаков клещевого энцефалита (парезов и параличей с последующей гибелью). В те же сроки определяли уровни цитокинов у мышей, которым вводили только препарат без вируса. Результаты исследования показали, что в сыворотках крови животных, которым вводили вирус и фоспренил, уровень ИЛ-6 значительно повышался уже на 1-е сутки, а стимуляция ФНО-, ИФН- регистрировалась на 3-и сутки. Такую раннюю стимуляцию не наблюдали ни у животных, которым вводили только препарат, ни у мышей, которых заражали вирусом. Полученные данные, на наш взгляд, свидетельствуют о том, что при попадании в организм патогена (в данном случае вируса) фоспренил стимулирует моноциты и макрофаги, которые продуцируют цитокины, стимулирующие дифференцировку (ИЛ-6) и пролиферацию (ФНО- ), В-клеток и секрецию антител к вирусу. Кроме того ФНО- обладает цитотоксичностью по отношению к инфицированным вирусами клеткам. Аналогичной способностью обладает и ИФН-.Так в общих чертах выглядит механизм антивирусной активности фоспренила, реализующийся посредством его иммуномодулирующей активности.

Полученные нами данные на модели инфекции, вызываемой вирусом клещевого энцефалита, согласуются с результатами Iida J. et.al. (1990), которые показали, что химически синтезированный полипренол – дегидрогептапренол (ДГП) в дозе 200 мкг, введенный интраназально дважды – за 3 дня и за 1 день до заражения, значительно повышает устойчивость мышей к инфекции, вызываемой вирусом Сендай. При этом у животных, обработанных ДГП и зараженных вирусом, отмечали значительное повышение продукции интерферона и ФНО по сравнению с мышами, которым вводили только препарат или только вирус.

Таким образом, фоспренил проявляет себя как один из оптимальных для ветеринарной практики иммуномодуляторов: введенный в организм при отсутствии патогена (например, вируса), этот препарат, по-видимому, не вызывает гиперстимуляции иммунной системы, которая, как известно, может приводить к развитию целого ряда патологических реакций и повредить организму. В случае угрозы развития вирусной инфекции применение фоспренил вызывает оптимальную "раннюю" стимуляцию гуморального и клеточного иммунитета, что и позволяет организму вовремя защититься от инфекции. Кроме того, препарат в силу своей химической природы обладает способностью восстановить структуру и функции клеток иммунной системы (и не только клеток иммунной системы), поврежденных в результате вирусной инфекции. Хорошо известно, что многие вирусы активно размножаются в иммунокомпетентных клетках и могут длительно сохраняться в них (персистировать). Некоторые вирусные гены, имея сходство с генами хозяина, облегчают репликацию вируса. Например, крупные ДНК-содержащие вирусы (герпесвирусы, аденовирусы, поксвирусы) имеют в своем геноме целый ряд генов, которые кодируют белки, используемые вирусами для противодействия иммунным реакциям организма (эти гены были, по-видимому, захвачены вирусами в процессе эволюции и модифицированы в пользу вирусов). Многие вирусы обладают способностью нейтрализовывать активность ряда цитокинов, играющих ключевую роль в развитии противовирусного иммунного ответа (ИФН, ФНО, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-2, ИЛ-4), и тем самым - вызывать в организме иммуносупрессию. Использование фоспренила в профилактических и лечебных целях при вирусных инфекциях позволяет, на наш взгляд, предотвращать развитие вирусиндуцированной иммуносупрессии.

Следует особо подчеркнуть, что успешное применение ФП (как и других иммуномодуляторов) зависит от целого ряда важных обстоятельств. Во-первых, от особенностей патогенеза той или иной вирусной инфекции. Роль клеточного и гуморального иммунитета, специфические формы взаимодействия вируса с клетками иммунной системы (как и с основными клетками-мишенями для вируса) при многих вирусных инфекциях остаются неизученными. Во-вторых, механизмы иммуномодулирующего действия фоспренила (учитывая широкий спектр биологической активности препарата) также находятся в процессе изучения.

Но даже в тех случаях, когда патогенез вирусных инфекций изучен достаточно детально (например, динамика размножения вируса в клетках-мишенях, особенности иммунного ответа, динамика появления противовирусных антител, в частности - IgM, IgG, IgA - в крови больных животных) и, казалось бы, можно смело рекомендовать применение тех или иных иммуномодуляторов в зависимости от направленности их действия на иммунную систему организма-хозяина, тем не менее, применять их необходимо с определенной осторожностью. В этом случае фоспренил не является исключением из правила.

Фоспренил определенно относится к комплексным иммуномодуляторам, поэтому следовало бы ожидать наибольшего успеха при лечении с его помощью парвовирусного энтерита собак или панлейкопении кошек (также вызываемой парвовирусом). И, в свою очередь - значительно меньшего эффекта при лечении чумы плотоядных. Однако широкая практика применения фоспренила в качестве средства этиотропной терапии вирусных инфекций собак и кошек показала, что наилучший результат лечения достигается как раз при чуме плотоядных у собак.

Почему это происходит? Прежде всего, это можно объяснить особенностями патогенеза каждой вирусной инфекции. Так, парвовирусный энтерит характеризуется быстрым течением инфекции: максимальные титры вируса в крови и фекалиях обнаруживаются уже на 3-4-е сутки после инфицирования, а противовирусные антитела - лишь на 5-7-е сутки. При этом задолго до того, как успевает сформироваться адекватный иммунный ответ, у больного животного оказываются пораженными вирусом жизненно важные органы: обширно поражаются уже на 2-й день после экспериментального заражения лимфоузлы, тимус, селезенка, тонкий отдел кишечника. Поэтому лечебный иммуномодулирующий эффект фоспренила (как и многих других препаратов, за исключением специфических сывороток) может попросту не успеть вовремя реализоваться. Иная картина наблюдается при инфицировании организма вирусом чумы плотоядных. Развитие специфического иммунного ответа регистрируется уже на 3-5-е сутки, при этом стимулируется Т- и В-система иммунитета. Течение этой инфекции характеризуется интенсивным размножением вируса в макрофагах, Т- и В-лимфоцитах и, как следствие этого – развитие в организме больного животного иммуносупрессии. В этой связи успешное лечение фоспренилом чумы плотоядных может объясняться предотвращением развития вирусиндуцированной иммуносупрессии или ее коррекцией при применении препарата.

Другим важным обстоятельством является тот факт, что фоспренил наряду с иммуномодулирующей активностью (ряд особенностей которой до сих пор интенсивно изучаются) обладает прямым противовирусным действием и эффект этого действия зависит от строения вируса. В наших экспериментальных исследованиях было четко показано, что фоспренил значительно подавляет размножение вируса чумы плотоядных в чувствительной культуре клеток СПЭВ и, напротив, не оказывает противовирусного действия in vitro в отношении парвовируса (по данным, полученным специалистами ВГНКИ А.А.Ольшанской и др.) и аденовируса (см. Таблицу 26).

Вероятно, при чуме плотоядных фоспренил действует двояко: с одной стороны как иммуномодулятор, а с другой – как препарат, способный напрямую подавлять размножение вируса в органах и тканях больного животного. Таким комплексным воздействием фоспренила на вирусную инфекцию можно объяснить успехи в лечении чумы плотоядных, и напротив - определенные трудности в лечении инфекций, вызываемых парво- и аденовирусами.


ПРЯМОЕ ПРОТИВОВИРУСНОЕ ДЕЙСТВИЕ ФОСПРЕНИЛА

Под прямым противовирусным действием фоспренила мы понимаем непосредственное нарушение препаратом одной или нескольких основных фаз жизненного цикла вирусов: неспецифическое связывание фоспренила с вирионами вне клетки, препятствие сорбции вируса на клетках (блокирование клеточных рецепторов на мембране), нарушение репликации и сборки вирусных частиц внутри клетки, препятствие выходу вирионов из клетки.

В экспериментальных исследований in vitro нам удалось выявить способность фоспренила подавлять размножение целого ряда ДНК- и РНК-содержащих вирусов, играющих важную роль в патогенезе животных и человека. Подробнее об этих экспериментах можно ознакомиться и в других публикациях данныго автора и соавторов.

В таблице 26 представлены данные о противовирусном действии ФП in vitro в отношении вирусов, играющих важную роль в инфекционной патологии домашних и сельскохозяйственных животных.

Таблица 26. Противовирусная активность фоспренила

Вирус	Нуклеиновая кислота	Наличие оболочки	Разница в титрах вирусов в контроле (без ФП) и опыте (в присутствии ФП), lg ЦПД50
чумы плотоядных	РНК	+	2,25
болезни Ауески	ДНК	+	1
диареи крупного рогатого скота	РНК	+	1,5
инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота	ДНК	+	2,25
аденовирус 1-го типа	ДНК	-	0
парвовирус	ДНК	-	0

 - регистрировалось даже некоторое незначительное усиление размножения вируса в присутствии фоспренила


Прежде всего отметим, что сам факт противовирусного действия ФП in vitro в отношении ДНК- и РНК-содержащих вирусов свидетельствует о наличии у фоспренила способности нарушать одну или несколько фаз жизненного цикла этих вирусов. Возникает вопрос: на каком этапе (или этапах) взаимодействия вирус-клетка проявляется антивирусное действие препарата? Необходимо отметить, что выявление этих этапов представляет достаточно сложную проблему.

Как видно из данных, приведенных в таблице, разница между титрами вирусов в контроле и опыте колеблется от сравнительно небольшой (10-кратное подавление размножения вируса болезни Ауески в чувствительной культуре клеток) до весьма значительной (фоспренил снижает титры вирусов чумы плотоядных и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота более чем в 100 раз). Заметим, что у вирусологов в таких опытах значительной считается разница от 1,5 lg (30-кратное подавление размножения вируса) и более.

В ходе экспериментов мы выявили следующую закономерность: если в культуру клеток сначала вносить необходимое количество ФП (как правило, 200 мкг/мл), затем оставлять клетки контактировать с препаратом в течение разных промежутков времени (1 час, 2 часа, 24 часа или 48 часов), а затем заражать вирусом, то никакой разницы в титрах вируса между контролем и опытом не выявляется. Логично предположить, что препарат не действует на этапе сорбции вируса на клетки и не блокирует специфические для вируса клеточные рецепторы. Противовирусный эффект препарата проявлялся лишь в тех случаях, когда вирус и ФП вносили в культуру одновременно (или предварительно в течение непродолжительного времени 0,5 часа инкубировали вирус с препаратом). Исходя из полученных результатов, нами была выдвинута гипотеза о том, что фоспренил взаимодействует с вирионами вне клетки. Для проверки этой гипотезы мы провели серию экспериментов, используя реакцию прямой гемагглютинации. Эта методика была выбрана нами, исходя из ряда соображений

Было обнаружено, что фоспренил обладает выраженной дозозависимой гемагглютинирующей активностью в отношении эритроцитов гуся (ЭГ) и не обладает таковой в отношении эритроцитов собаки или кошки. Хорошо известно, что вирус клещевого энцефалита агглютинирует ЭГ, поэтому реакция торможения гемагглютинации в присутствии противовирусных антител давно используется для определения титров антител к вирусу. В многократно повторенных экспериментах мы показали, что фоспренил блокирует гемагглютинирующую активность вируса (так и наоборот: вирус тормозит гемагглютинацию ЭГ фоспренилом). Полученные данные, на наш взгляд, подтвердили гипотезу о том, что фоспренил может взаимодействовать с вирионами вне клетки, по-видимому, образуя устойчивые комплексы фоспренил-вирус, и тем самым препятствовать заражению чувствительных клеток. Однако этот механизм прямого противовирусного действия фоспренил - не единственный.

Выявилась также и другая закономерность.

Во всех опытах (вне зависимости от того, какой вирус был объектом исследований, и какая культура клеток использовалась для размножения вирусов) проявление цитопатического действия вируса в культуре в присутствии фоспренила всегда регистрировалось на 24-48 часов позднее, чем в контрольных зараженных клетках даже при высоких дозах вируса. Нас заинтересовал вопрос: не изменяет ли препарат вирулентность урожая вируса? Для ответа на этот вопрос мы протитровали урожай вне- и внутриклеточного вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (относится к герпесвирусам): а) контрольный, то есть полученный без внесения фоспренила и б) экспериментальный, полученный на культуре, которую заражали вирусом в присутствии фоспренила на свежей культуре клеток. Оказалось, что титр урожая вируса во всех контрольных пробах значительно выше, чем в таковых, которые заражали вирусом в присутствии препарата. Причем эта разница отчетливо выявлялась как в пробах, исходно зараженных высокими дозами вируса, где первичное проявление ЦПД визуально в световом инвертированном микроскопе выглядело одинаково в контроле и опыте, так и в пробах, инфицированных более низкими дозами. Суммарно титры урожая вируса, полученного в клетках на фоне действия препарата, были на 3-4 lg меньше, чем урожай контрольного вируса. Этот факт свидетельствует о другом механизме прямого противовирусного эффекта препарата. Одним из объяснений этого факта может служить предположение, что на фоне действия фоспренила внутри клетки Часть вирионов формируются дефектными (не способными заражать другие клетки). Частичным подтверждением этого предположения могут быть предварительные данные исследования урожая вируса клещевого энцефалита, полученные методом электронной микроскопии. Так, было установлено, что среди вирусных частиц в урожае (после действия фоспренила) встречается множество вирионов с разрыхленной оболочкой и без оболочки. Почему же вирионы под воздействием фоспренила формируются дефектными? Точного ответа на этот вопрос пока нет. Однако существуют несколько гипотез, которые в данный момент находятся в стадии экспериментальной проверки.

Другим объяснением существенного снижения вирулентности урожая вируса при воздействии фоспренила является возможная (опосредованная вирусами) стимуляция препаратом интерферона (или других внутриклеточных вирусных ингибиторов). Здесь уместно напомнить данные, приведенные выше: при одновременном введении в организм животного вируса и фоспренила наблюдается значительная стимуляция ИФН. При этом реализация такого механизма противовирусного действия ФП зависит с одной стороны от культуры клеток, а с другой – от структуры и особенностей внутриклеточного цикла размножения вируса. Экспериментальное подтверждение существования такого механизма антивирусного действия ФП смогло бы объяснить некоторые на первый взгляд противоречия, полученные в опытах in vitro (см. таблицу 26):

Почему фоспренил в такой разной степени снижает размножение "близкородственных" (принадлежащих к одному и тому же семейству Herрesviridae) вирусов – вируса болезни Ауески в 10 раз, а вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота – более чем в 100 раз? В первом случае титрование вируса проводилось на первичной культуре куриных фибробластов, во втором – на перевиваемой культуре клеток почек теленка (Таурус 1). Если предположить, что фоспренил, внесенный в культуру вместе с вирусом, способен каким-то образом трансформировать клеточный метаболизм и стимулировать синтез интерферона, то разница в степени противовирусной активности ФП в отношении этих вирусов объяснялась бы различной способностью этих культур продуцировать интерферон. Аналогичным образом можно было бы объяснить существенные различия противовирусного действия препарата в отношении других вирусов, полученных на разных культурах клеток: каждая культура клеток в различной степени способна под влиянием препарата синтезировать интерферон. Здесь необходимо отметить следующий интересный факт: визуально культуры клеток после внесения фоспренила выглядят несколько иначе, чем контрольные, необработанные препаратом.

Еще одна особенность противовирусной активности препарата на этапах взаимодействия вирус-клетка отчетливо прослеживается в данных, приведенных в таблице 26: прямое противовирусное действие ФП проявляется только в отношении вирусов, содержащих внешнюю оболочку. Так, нами не было выявлено никакой противовирусной активности ФП в отношении аденовируса крупного рогатого скота (штамм В-10).Однако имеются данные, что фоспренил способен подавлять размножение аденовируса собак 2-го типа in vitro.

Чем можно объяснить различия в полученных данных? С одной стороны результаты были получены на разных культурах клеток, а это обстоятельство может иметь значение, если подтвердится гипотеза о способности ФП стимулировать интерферон в определенных культурах клеток. С другой стороны, в опытах с аденовирусом крупного рогатого скота мы определяли способность фоспренила предотвращать размножение вируса по проявлению ЦПД в культуре. В экспериментах с аденовирусом собак различия были выявлены по способности вируса образовывать в культуре бляшки, а данный метод включает нанесение на культуру агарового покрытия. Не исключено, что агаровое покрытие увеличило контакт фоспренила с культурой и тем самым усилило его действие. Подобное объяснение косвенно подтверждается данными, полученными в опытах in vivo: оказалось, что если ФП вводить вместе с желатином (примерным аналогом агара), противовирусное действие препарата значительно увеличивается.

Данные, приведенные в настоящем разделе, свидетельствуют о способности препарата комплексно действовать против вирусной инфекции, как на уровне целого организма (иммуномодуляция), так и на уровне взаимодействия вирусов с клетками-мишенями: связываться с вирусами вне клеток, препятствуя сорбции последних на клеточных рецепторах, стимулировать синтез интерферона внутри клеток, не исключено, что фоспренил нарушает сборку вирионов на уровне гликозилирования вирусных белков внутри клетки (прямое противовирусное действие). При этом, в зависимости от конкретной вирусной инфекции, в организме животных фоспренил может осуществлять защитное действие как оптимальный иммуномодулятор - в случаях инфекций, вызываемых безоболочечными вирусами, а в случаях инфицирования организма вирусами, содержащими внешнюю оболочку – двояко: и как иммуномодулятор, и как препарат прямого противовирусного действия. Какой из этих двух механизмов противовирусного действия ФП оказывается решающим – предстоит выяснить в ходе дальнейших экспериментальных и клинических исследований.


Особенности применения фоспренила (и некоторых других препаратов производства ЗАО “Микро-плюс”) для лечения и профилактики вирусных инфекций кошек

В разделе “Вирусные инфекции кошек” достаточно подробно описаны вирусные инфекции кошек: бешенство, болезнь Ауески, инфекционная панлейкопения, инфекционный ринотрахеит, калицивироз, коронавирусные инфекции, кошачий грипп, вирусная лейкемия кошек, кошачий иммунодефицит, герпес. В настоящем разделе мы рассмотрим некоторые аспекты применения ФП (а также препаратов максидин и гамавит) или возможности использования данных препаратов для лечения и профилактики некоторых из вышеперечисленных инфекций, используя (I) экспериментальные и (II) клинические данные.

Мы провели серия экспериментов по изучению комплексного действия препаратов фоспренила (ФП) и максидина (МД) при заражении мышей вирусно-клещевым энцефалитом для создания оптимальной схемы профилактики и лечения данного заболевания при сочетанном действии двух препаратов. Основной задачей исследований была отработка оптимальных доз указанных препаратов, обладающих при одновременном их применении максимальным протективным действием в инкубационном периоде. В опытах использовали ФП - 0,4% р-р серии № 1059 производства ЗАО “Микро-плюс” и МД - 0,4% р-р серии № 0028 производства ЗАО “Микро-плюс”.

Был сделан ряд выводов.

1.Препараты фоспренил и максидин в дозе 20 мкг/мышь при однократном раздельном введении обладают сравнительно невысокой протективной активностью - защищают от клещевого энцефалита не более 20-30% животных. Однако показатели средней продолжительности жизни животных (СПЖ), которым вводили фоспренил или максидин, все же увеличивались по сравнению с контролем.

(Средняя продолжительность жизни высчитывалась по формуле:

7S 0 (А)

СПЖ = ------------ , где

n

7S 0 (A) - количество живых мышей на каждый день инфекции в течение 14-и суток, n - общее число мышей в группе).


2.Совместное одновременное введение препаратов фоспренил и максидин в дозе 20 мкг/мышь значительно усиливает протективный эффект - число выживших мышей увеличивается до 60%, в то время как при использовании только фоспренила выживало лишь 20% животных, а только максидина - 30%. Показатель средней продолжительности жизни при совместном введении обоих препаратов значительно (на 5,1 сут.) превышает контрольный.

3. При использовании дозы 100 мкг/мышь, оба препарата обладают высокой протективной активностью - фоспренил защищает 50 % животных, а максидин - 70%. При этом эффект максидина более выражен: показатель средней продолжительности жизни мышей, получивших максидин, значительно превышает таковой у животных, которым вводили фоспренил (9,8 и 7,8 сут. соответственно).

4. При использовании обоих препаратов одновременно в дозе 100 мкг/мышь - противовирусный эффект значительно усиливается: процень выживших мышей увеличивается до 90%, а показатель средней продолжительности жизни - до 10,5 сут., в то время, как при раздельном использовании фоспренила или максидина данные показатели не превышали значений 50-70% и 7,8 - 9,8 сут. соответственно.

Результаты проведенных исследований выявили отчетливо выраженный взаимоусиливающий противовирусный эффект совместного применения фоспренила и максидина при экспериментальном клещевом энцефалите у мышей. Наблюдаемый эффект проявлялся, как при использовании дозы 20 мкг, так и при дозе 100 мкг/мышь.

Полученные данные убедительно свидетельствовали о перспективности совместного использования препаратов для усиления их противовирусной активности.

Бешенство

Учитывая экспериментальные данные, несомненно перспективно использовать ФП в качестве адъюванта инактивированной вакцины против бешенства, то есть вводить вакцину в организм животного одновременно с ФП (из расчета 0,2 мл ФП на 1 кг массы тела кошки). При этом возможны несколько вариантов использования препарата в зависимости от того, какая вакцина используется для прививки животного. Если вакцина моновалентная, то есть содержит только один вирусный антиген, ФП целесообразно вводить однократно одновременно с вакцинацией (возможно использовать препарат в качестве растворителя для вакцины и ввести препарат и вакцину в организм в одном шприце). В тех случаях, когда кошку прививают поливалентной вакциной, то есть, когда вакцина содержит несколько компонентов (в том числе живые аттенуированные вирусы), схема использования ФП рекомендуется следующая: кошка следует вводить препарат дважды: за 5-7 дней до вакцинации – однократно и за 24 часа до введения вакцины - однократно (из расчета 0,2 мл ФП на 1 кг массы тела кошки).

Болезнь Ауески

Экспериментально установлено, что ФП обладает способностью подавлять размножение герпесвируса – возбудителя болезни Ауески в чувствительной культуре клеток (см. таблицу 26). Аналогичной способностью обладает, согласно исследованиям Ильченко Е.Д. и соавт. (2001), препарат максидин обладает сходным действием. Экспериментальные данные, полученные на лабораторных животных, зараженных вирусом клещевого энцефалита, показали, что одновременное введение в организм животных фоспренила и максидина (МД), значительно усиливает противовирусный эффект обоих препаратов. Этот факт, по нашему мнению, обосновывает новый подход к лечению, заключающийся в комплексном использовании ФП и МД для лечения и профилактики вирусных инфекций. Особенно эффективен такой способ может быть на ранних стадиях инфекции, так как МД является мощным стимулятором ИФН-α-β-γ. Однако не исключено, что успешное лечение при одновременном использовании ФП и МД (в сочетании с гамавитом) будет достигнуто и на более поздних сроках клинически выраженной инфекции.

Инфекционная панлейкопения

В последнее время для лечения острой формы панлейкопении успешно применяют ФП (инъекции 0,5-0,6 мл/кг) ежедневно 2 раза в сутки с одновременным введением МД (инъекции 0,1-0,2 мл/кг) ежедневно 2 раза в сутки и гамавита (0,3 мл/кг) ежедневно 1 раз в сутки. При этом для поддержки деятельности сердца используется кокарбоксилаза, а для борьбы с обезвоживанием – раствор Рингера. Для профилактики осложнений используются антибиотики цефалоспоринового или пенициллинового ряда (цефа-куре, альбипен ЛА, неопен и др.). Такая схема лечения, по данным ветврача Е.Третьяковой, приводит к излечиванию 100% кошек в течение 3-5 суток.


Инфекционный ринотрахеит

В качестве средства этиотропной терапии инфекционного ринотрахеита достаточно успешно зарекомендовал себя максидин (Ильченко Е.Д. и соавт., 2001). Препарат применяют подкожно по 0,5 мл 2 раза в день в течение 5-и дней (поскольку препарат болезненный, котятам вводят его вместе с 0,5% новокаином). При таком методе лечения улучшение наступает уже на 3-ий день после начала лечения, а к 5-7-м суткам в 87% случаев наблюдается полное выздоровление. Однако при использовании в качестве средства этиотропной терапии только максидина в 13% случаев может наблюдаться хронизация вирусного инфекционного процесса, и выздоровление наступает лишь через 2-3 недели после начала лечения. Для повышения эффективности лечения в последнее время используют максидин в сочетании с фоспренилом. При этом схема применения максидина остается такой же, как описано выше, а фоспренил применяют перорально в дозе 0,5 – 1 мл 1 раз в день в течение 2-х дней с сочетании с ежедневной обработкой слизистой языка и неба (в случаях изъязвления), а также используют максидин в форме глазных капель в случаях гнойных истечений из глаз. Такая схема этиотропной терапии дает практически 100%-ное излечение уже на 4-5-й день, при этом не наблюдается случаев хронической инфекции. Повышение эффективности лечения с помощью одновременного применения обоих препаратов может, по нашему мнению, объясняться тем обстоятельством, что каждый из них в отдельности, согласно экспериментальным данным, обладает противирусным действием в отношении вируса герпеса. Логично предположить, что при применении максидина и фоспренила наблюдается синергистический ("удвоенный") противовирусный эффект.

Калицивироз

В качестве эффективных лечебных препаратов, прежде всего, можно рекомендовать максидин в сочетании с фоспренилом (по схеме, описанной выше для лечения инфекционного ринотрахеита). Однако механизм (или механизмы) лечебного и профилактического действия этих препаратов при калицивирозе, по-видимому, отличается от такового при инфекционном ринотрахеите. Возбудителем последнего являются калицивирусы, не содержащие оболочки. Как было отмечено выше, фоспренил не обладает прямым противовирусным действием (по крайней мере, в экспериментах in vitro) в отношении безоболочечных вирусов, таких, например, как аденовирусов и вируса полиомиелита. В тоже время в опытах in vivo показано, что фоспренил защищает от высоколетальной инфекции, вызываемой вирусом полиомиелита (представителем пикорнавирусов) до 50 % мышей в случае введения препарата в организм животных одновременно с вирусом. Не исключено, что лечебно-профилактический эффект препарата в случае калицивироза с одной стороны может быть обусловлен иммуностимулирующим его действием (описанным выше), так как мишенями для вируса являются иммунокомпетентные клетки подчелюстных лимфоузлов. С другой стороны, лечебное действие фоспренила может объясняться нормализацией структур и функций клеток, пораженных вирусом.

В заключение следует отметить, что препарат, безусловно, не является безразличным для организма: увеличивается нагрузка на сердце, у животных с повышенной склонностью к аллергии иногда могут наблюдаться аллергические реакции. Но поскольку препарат назначается в сочетании с симптоматической терапией, включающей препараты, увеличивающие оксигенацию сердечной мышцы и/или увеличивающие ее кровоснабжение, а также антигистаминные и гепатопротекторные препараты, то вероятность проявления побочных явлений резко снижается. При этом фоспренил является практически безвредным препаратом: острая токсичность (LD50) для мышей и крыс наблюдается лишь при введении препарата в дозе, в 25000 раз превышающей среднюю терапевтическую.