Классификация изменчивости генетического материала
Дипломная работа - Биология
Другие дипломы по предмету Биология
?ие процесса репликации в мутагенезе было открытие мутагенного эффекта аналогов оснований ДНК: тимидина 5-бромурацил, и 2-аминопурина, вызывающих мутации у бактериофагов и бактерий.
-бромурацил включается в ДНК вместо тимина и образует пары с тимином. При этом возможно ошибочное спаривание с гуанином при репликации ДНК, уже включившей 5-бромурацил (ошибка репликации), а возможна ошибка при включении аналога в ДНК (ошибка включения)
Большинство мутаций со сдвигом рамки считывания обнаружено в участках ДНК, состоящих из одинаковых нуклеотидов. Существует гипотеза возникновения этих мутаций вследствие диссоциации и неправильного восстановления нитей в данных участках. В первом случае в результате ошибки репликации происходят транзиции, а во втором - в результате ошибки включения - трансверсии. Аналогичны ошибки включения и ошибки репликации и при действии другого аналога оснований - 2-аминопурина.
Изучение мутационного процесса в связи с репликацией ДНК позволило выявить некоторые высокоэффективные мутагены, действующие непосредственно в репликативной вилке. К их числу относится N-метил-N-нитро-N-нитрозогуанидин (МННГ), который взаимодействует с одноцепочечными участками в вилке репликации или действует непосредственно на ферменты реплисомы [8, 10].
Репарация и мутационный процесс.
Выявляемая частота мутаций не отражает величину потенциальных повреждений ДНК. Повреждения ДНК сводятся к минимуму благодаря наличию в клетке особых систем репарации, которые узнают эти повреждения и справляют их. Системы репарации возникли в процессе эволюции для поддержания стабильности геномов. Некоторые рапаративные системы обладают специфичностью, другие не специфичны в отношении каких-то определенных типов повреждений - они узнают изменения в структуре ДНК как сигналы к действию. Рапаративные системы представляют собой ферментативные механизмы, обнаруженные в клетках самых различных организмов [10].
Мутации некоторых генов, ответственных за репарацию у E. Coli, бактериофага Т4, дрожжей, а также в клетках высших эукариот, проявляют мутаторный или антимутаторный эффект, подобно мутациям в генах, ответственных за репликативный комплекс.
Изучение генетического контроля репарации (а также рекомбинации) позволило доказать участие некоторых нормальных процессов, происходящих в клетке, в превращении предмутационных изменений ДНК в мутации. В частности, оказалось, что процесс становления мутаций может быть генетически блокирован так же, как и любой другой физиологический процесс. Так, изменение генов lex A или rec A ведет к частичному или полному подавлению мутационного процесса под воздействием ультрафиолетового света, ионизирующих излучений и некоторых химических мутагенов.
Наиболее подробно участие процессов репарации в возникновении мутаций исследовано у бактерии E. Coli. Показано, что мутация в гене uvr E, контролирующем ликвидацию однонитевых разрывов после ультрафиолетового (но не ионизирующего) облучения, повышает спонтанное возникновении транзиций AT - GC в 350-400 раз, а трансверсий GC - AT в 150-200 раз. Она также повышает частоту мутаций, индуцированных ультрафиолетовым светом и метилметансульфонатом.
Э. Виткин обратила внимание на связь нескольких явлений, для которых общей причиной служит облучение клеток ультрафиолетовым светом:
) индукция профага;
) повышение выживаемости облученного бактериофага при заражении им предварительно облученных клеток E. Coli по сравнению с выживаемостью в необлученных клетках - так называемая W-реактивация, открытая Дж. Уэйглом;
) блокирование клеточных делений у некоторых мутантов E. Coli, в результате чего клетки приобретают нитевидную форму;
) повышение частоты рекомбинации;
) повышение частоты мутаций.
Рекомбинация и мутационный процесс. Связь между мутационным процессом и рекомбинацией следует из общности некоторых ферментативных этапов репликации, репарации и кроссинговера. Кроме того, источником мутаций могут быть ошибки рекомбинации, приводящие к появлению новых аллелей.
На связь самого процесса рекомбинации с возникновением мутаций указывает корреляция обменов гомологичных участков хромосом с изменениями генов в непосредственной близости к ним. Так, у Bacillus subtilis трансформация сопровождается повышением мутабельности. Известно, что мутаген профлавин (диаминоакридин) вызывает вставки и выпадения оснований у бактериофагов, но он практически не мутагенен для бактерий. Тем не менее, с его помощью удалось получить мутантов у E. Coli в процессе конъюгации. Такой результат согласуется с точкой зрения о мутагенном действии акридинов в процессе рекомбинации.
Наиболее подробно охарактеризован мутагенный эффект рекомбинации у дрожжей. В начале 60-х годов К. Маньи и Р. фон Борстел описали у Sacch. cerevisia так называемый мейотический эффект, который заключается в том, что некоторые типы спонтанных мутаций возникают в мейозе чаще, чем в митозе. Это касалось появления и ревертирования мутаций-вставок или выпадений пар оснований. У другого вида дрожжей - Schizosaccharomyces pombe У. Лойпольд с сотрудниками среди 118 спонтанных мутантов по локусу ade 1, полученных в митозе, не нашли ни одного, ревертирующего под действием производного акридин-иприта - ICR-170, способного вызывать вставки и выпадения оснований, в то время как среди 59 мутантов, полученных в мейозе, 7 ревертировали под действием этого соединения. Следовательно, ?/p>