Высокоэффективная жидкостная хроматография
Информация - Химия
Другие материалы по предмету Химия
?матографию. Подвижная фаза содержит 0-50 % органического растворителя (метанол, ацетонитрил) в воде. Соединения выходят из колонки в порядке убывания полярности. Если сорбаты ионизированы в водных растворах, с целью улучшения формы пика и воспроизводимости результатов в подвижную фазу добавляют соли, кислоты, буферные растворы для поддержания необходимой ионной силы и рН.
Применение обращено-фазных сорбентов в ВЭЖХ
Одна из причин, способствующих быстрому росту применения обращёно-фазных сорбентов в ВЭЖХ, - это их способность четко разделять серии гомологов в порядке возрастания их молекулярной массы, делающая их в этом чем-то сходными с популярными в ГЖХ полиметилсилоксановыми фазами. При этом гомологи могут, в отличие от разделенных методами адсорбционной или нормально-фазной хроматографии, не иметь функциональных групп - обращёно-фазный сорбент может так же четко разделить гексан и гептан, бензол и толуол. Это вовлекает в область анализа методом ВЭЖХ такие важные объекты, как углеводороды нефти, продукты нефтепереработки. Если нужно разделить вещества неполярные или малополярные, практически любой обращёно-фазный сорбент может при относительно простом подборе растворителя обеспечить почти идентичное разделение. Наряду с неполярными привитыми фазами, выпускаемыми специально для обращёно-фазной хроматографии, в обращёно-фазном варианте часто используют нитрильную и аминную привитые фазы, а иногда и диольную. В этом случае они работают и разделяют вещества в основном по обращено-фазному механизму, как имеющие короткий привитой алкилсилан, а поляризованные группы или не участвуют в разделении, или играют второстепенную роль, несколько меняя селективность для ряда веществ определенной химической структуры. В качестве растворителей спирты используют редко, так как их вязкость большая и при работе возникает слишком большое давление, а эффективность падает вследствие затруднений диффузий в подвижной фазе. Тетрагидрофуран также используется значительно реже, во-первых, из-за стабильности при хранении, во-вторых, из-за трудности очистки перегонкой. Ацетонитрил имеет ряд преимуществ перед метанолом. При хорошей очистке он лучше пропускает в ближнем УФ диапазоне и позволяет работать в смеси вода - ацетонитрил при 200 и даже 190 нм. Он обычно обладает лучшими растворяющими свойствами для проб, чем метанол. При использовании смесей метанол - вода вязкость такой смеси не является аддитивной величиной и при 250С меняется от 0,89 и 0,57 МПа*с до 1,4. Большая вязкость смесей метанол - вода по сравнениями со смесями ацетонитрил - вода затрудняет использование колонок, заполненных частицами сорбента размеров 3 и 5 мкм, при использовании водно-метанольных смесей.
. Растворители
Общая характеристика
Подвижная фаза в жидкостных хроматографических системах выполняет двоякую функцию. С одной стороны, она (подобно подвижной фазе в газовой хроматографии) служит для транспорта десорбированных молекул по колонке. С этой точки зрения химические свойства подвижной фазы не играют существенной роли, более важны их физические параметры: вязкость, летучесть и т.д. С другой стороны, в отличие от газохроматографических систем, подвижная фаза в жидкостной хроматографии играет активную, химическую по существу роль. Молекулы подвижной фазы взаимодействуют с другими компонентами системы: молекулами разделяемых веществ и молекулами неподвижной фазы. Фактически константы сорбционного равновесия в системе определяются характером подвижной фазы ничуть не менее, чем характером сорбента. Более того, во многих случаях компоненты подвижной фазы способны к прочной сорбции, что приводит к образованию на поверхности слоя, существенно изменяющего свойства неподвижной фазы. Поэтому вторая, и более важная, функция подвижной фазы сводится к регулированию констант равновесия, величин удерживания.
Определенные требования к растворителям предъявляет используемый метод детектирования. При применении детекторов, основанных на поглощении света, подвижная фаза должна быть прозрачной в избранной спектральной области. Набор растворителей, прозрачных для УФ-света вплоть до 190-220 нм, довольно велик. Однако в каждом конкретном случае этот показатель определяется не столько физическими свойствами основного вещества, сколько содержанием УФ-поглощающих примесей. Поскольку содержание таких примесей часто не нормируется даже для растворителей квалификации химически чистый, рекомендуется применять растворители специальных квалификаций - для жидкостной хроматографии или для спектроскопии. При отсутствии готовых растворителей необходимого качества их следует тщательно очистить в лаборатории с помощью подходящих методов.
Особая шкала элюируюшей силы предложена для обращено-фазовой хроматографии
Она основана на том, что для этого режима характерна зависимость
(25)
где kw - коэффициент емкости, если элюентом является чистая вода;
ФВ - объемная доля органического растворителя в подвижной фазе;- коэффициент, характеризующий элюирующую силу органического растворителя.
Набор значений S для некоторых растворителей, применяемых в обращено-фазовой хроматографии, приведен в табл. 1. Здесь же для сопоставления указана полярность P по Снайдеру для тех же веществ.
Таблица 1
Элюирующая сила (параметры S и P) растворителей, используемых в обращено-фазовой хроматографии