Физиолого-биохимическая характеристика вида Pseudomonas corrugata
Курсовой проект - Сельское хозяйство
Другие курсовые по предмету Сельское хозяйство
ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
ВИДА PSEUDOMONAS CORRUGATA
Оглавление
Введение
1. Обзор литературы
1.1 Характеристика вида
1.2 Внутривидовая гетерогенность
1.2.1 Серологическая гетерогенность
1.2.2 Выделение Ps. mediterranea
1.3 Некротические поражения сердцевины стебля томата, их характеристика
1.4 Антагонизм по отношению к другим микроорганизмам
1.4.1 Биологически активные соединения
2. Материалы и методы
2.1 Объекты исследования
2.2 Среды и растворы
2.3 Методы исследования
3. Результаты исследований и их обсуждение
Выводы
Список литературы
Введение
Pseudomonas corrugata - опасный фитопатоген, прежде всего томата. Вызываемые им заболевания наносят серьёзный ущерб сельскому хозяйству. Встречается по всему миру. Распространённости патогена способствует способность сохраняться в почве и воде. Диагностику затрудняет высокая внутривидовая гетерогенность и, как следствие, неприменимость серологического анализа. Важным инструментом видового определения является ПЦР анализ.
В данной работе предпринята попытка применить ПЦР-анализ к выделенным из заражённых растений и коллекционных штаммам, ранее отнесённым к Ps. Сorrugata на основе определения нуклеотидной последовательности генов рибосомальной РНК.
1. Обзор литературы
1.1 Характеристика вида
Pseudomonas corrugata впервые описаны в 1978 как фитопатоген, ответственный за некроз сердцевины томата в Великобритании. Систематическое положение: царство Bacteria; группа Proteobacteria, ?-секция; порядок Pseudomonadales; семейство Pseudomonadaceae; род Pseudomonas. Сообщения о выделении поступали из множества государств, включая США, Канаду, страны Европы, Южную Африку, Новую Зеландию, Израиль, Китай и Россию. Также идентифицируется в качестве возбудителя некроза сердцевины перца, стеблевой гнили хризантем и некроза сердцевины герани. Бактерии встречаются повсеместно, выделяются из почвы и воды, а также в отсутствие симптомов заболевания из ризосферы пшеницы, корней люцерны и различных частей других растений (табл.1) (Catara et al., 2002; Guo et al., 2007).
Таблица 1
Источники выделения Ps. corrugata, не проявляющие симптомов заболеваний (Catara, 2007)
ИсточникЛокализацияУпоминаниетысячелистниккорниPicard and Bosco (2003) брокколикочанPagada et al. (2000) рапс-канолакончики корнейFernando et al. (2005) огурецризосфераPaulitz et al. (1992) виноградлистьяBell et al. (1995) люцернакорни/листьяLukezic (1979) фасоль золотистаяпроросткиBennik et al. (1998) картофельклубниGarbeva et al. (2001) дуб черешчатыйкончики микоризных корнейSbrana et al. (2002) рисзёрнаCottyn et al. (1996) земляникаусыTanprasert and Reed (1997) чайризосфераPandey et al. (2000) трюфель беловатыйспорокарпBedini et al. (1999) пшеницаризосфераRyder and Borret (1990)
Бактерии Ps. corrugata представляют собой неспороносные подвижные (полярное жгутикование) клетки. Грамотрицательны. На картофельном агаре образуют кремово-коричневые колонии, проявляющие специфический рост: их поверхность складчатая, а края неровные, морщинистые (с этим и связывают видовое название: "corrugata" означает "морщинистый") (рис.1). Иногда в центре колоний отмечают зелёную окраску. На пептонном агаре с добавлением глюкозы (УДС) бактерии образуют голубой, диффундирующий в среду пигмент. На среде Кинга Б не производят флюоресцирующий пигмент. На глюкозо-дрожжевом агаре колонии плоские желтовато-зелёного цвета и также с неровной поверхностью. Бактерии выделяют в среду желтовато-зелёный нефлюорисцирующий пигмент. Оптимальная температура для роста колоний 26-28C. Рост колоний прекращается при температуре более 41C. Бактерии характеризуются относительно быстрым развитием на питательных средах: так, на картофельном и пептонном агаре на 4-5 сутки роста колонии достигают размера 2,4-3 и 3,5-4 мм соответственно.
Рисунок 1. Колонии Ps. Corrugate на питательной среде содержащей глюкозу (Catara, 2007).
Разжижают желатин (не все штаммы), не гидролизуют крахмал и L-аргинин, не образуют леван, оксидазо- и лецитиназоположительные. Продуцируют кислоту из галактозы, ксилозы, маннозы, мелибиозы, рибозы, трегалозы, сахарозы, фруктозы, глицерина, инозита, маннита, но не утилизируют лактозу, мальтозу, раффинозу, рамнозу, сорбозу, сорбит, инулит, эритрин, адонит, декстрин, дульцит, целлобиозу. Патоген усваивает из аминокислот и аминов - аргинин, аспарагин, глютамин, гистидин. Не усваивает из солей органических кислот - глюконат. Отмечается вариабельность в отношении ацетата, цитрата, формиата, фумарата, гиппурата, лактата, малата, оксалата, пропионата. Бактерии растут при температуре 37C, рост отсутствует при 41C (Прищепа, Вабищев, 2008).
Ps. corrugata не продуцирует флюорисцирующих пигментов, однако на основе анализа нуклеотидных последовательностей генов 16s РНК относится к группе флюорисцирующих псевдомонад (группа Ps. fluorescens) (Anzai, et al., 2000).
Полное определение нуклеотидной последовательности генома Ps. corrugata на данный момент не произведён (Catara, 2007).
.2 Внутривидовая гетерогенность
1.2.1 Серологическая гетерогенность
Эксперименты со 128 штаммами из различных стран показали высокую серологическую гетерогенность вида. Против типового и двух выделенных в Испании из томата и перца штаммов были получены три типа антител.83 штамма прореагировали с одним, 6 с двумя и н