Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по ветеринарии

Комплексная оценка факторов, влияющих на особенности проявления и распространения лейкоза крупного рогатого скота, и совершенствование системы, обеспечивающей эпизоотическое благополучие

Автореферат докторской диссертации по ветеринарии

СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА

Страницы: | 1 | 2 | 3 |

 

3.4. Иммунобиохимические показатели крупного рогатого скота,

спонтанно инфицированного вирусом инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и вирусом лейкоза крупного рогатого скота

в моновариантах и при сочетанном течении инфекции ВЛКРС и ИРТ

Работа по оценке иммунобиохимического статуса крупного рогатого скота, инфицированного ИРТ, ВД и при сочетанном течении ВЛКРС и ИРТ, представлена в табл. 4.

Таблица 4 - Результаты иммунобиохимического исследования крупного рогатого скота,

инфицированного вирусом инфекционного ринотрахеита, вирусом диареи

и при сочетанном течении инфекции ВЛКРС и ИРТ

Показатель	1 группа (ИРТ)			2 группа (ВД)			3 группа (ВЛКРС)			4 группа (ВЛКРС+ИРТ)
	M1		M1	M2		M2	M3		M3	M4		M4
1		2			3			4			5
Гемоглобин, г%	6,4		0,3	6,3		0,3	6,4		0,2	6,0		0,3
Эритроциты, млн/мкл	4,2		0,4	3,8		0,2	4,8		0,3	3,6		0,6
Сахар, мг%	96,8		4,4	84,8		5,2	87,5		6,5	93,4		7,5
ипиды, мг%	342,1		7,7	366,7		11,3	341,3		16,2	354,8		9,7
Холестерин, мг%	168,1		0,7	167,5		0,6	168,3		0,7	167,0		0,7
Гематокрит, %	28,8		0,7	30,5		0,5	28,5		0,7	30,6		0,5
Аланин, %	0,400		0,002	0,396		0,002	0,393		0,002	0,397		0,002
Аргинин, %	0,208		0,002	0,209		0,002	0,211		0,002	0,209		0,001
Аспарагин, %	0,738		0,001	0,736		0,001	0,737		0,001	0,737		0,001
Глицин, %	0,227		0,001	0,230		0,002	0,227		0,002	0,229		0,001
Глутамин, %	0,985		0,001	0,984		0,002	0,987		0,002	0,983		0,001

Окончание табл. 4

1		2			3			4			5
Гистидин, %	0,458		0,002	0,459		0,001	0,460		0,001	0,457		0,002
Изолейцин, %	0,225		0,001	0,227		0,001	0,227		0,001	0,226		0,002
ейцин, %	0,723		0,004	0,727		0,004	0,734		0,002	0,722		0,003
изин, %	0,414		0,003	0,406		0,004	0,417		0,005	0,403		0,003
Метионин, %	0,056		0,0002	0,057		0,0005	0,057		0,001	0,056		0,0005
Фенилаланин, %	0,331		0,006	0,321		0,008	0,318		0,005	0,338		0,008
Пролин, %	0,546		0,002	0,543		0,003	0,540		0,002	0,541		0,004
Серин, %	0,261		0,012	0,205		0,012	0,222		0,017	0,219		0,011
Тирозин, %	0,154		0,003	0,152		0,003	0,149		0,003	0,149		0,005
Треонин, %	0,254		0,000	0,253		0,001	0,253		0,001	0,253		0,001
Валин, %	0,575		0,003	0,563		0,002	0,576		0,004	0,567		0,003
Витамин А, мкг/кг	28,7		0,2	28,7		0,2	28,9		0,3	28,7		0,2
Витамин Е, мг/кг	0,345		0,017	0,361		0,010	0,309		0,026	0,369		0,008
Натрий, г/л	2,438		0,047	2,403		0,043	2,493		0,085	2,437		0,047
Калий, г/л	0,477		0,001	0,477		0,001	0,477		0,002	0,477		0,001
Магний, г/л	0,033		0,002	0,037		0,002	0,038		0,003	0,038		0,003
Железо, мг/кг	253,2		5,0	250,8		9,4	247,0		5,7	241,2		5,5
Медь, мг/кг	0,494		0,044	0,477		0,031	0,476		0,054	0,521		0,053
Марганец, мг/кг	0,030		0,001	0,030		0,001	0,030		0,001	0,031		0,001
Цинк, мг/кг	1,739		0,053	1,883		0,070	1,768		0,050	1,746		0,055

В таблице 5 представлена достоверность разницы иммунобиохимических показателей у инфицированных в моновариантах ИРТ, ВД и при сочетанном течении ВЛКРС и ИРТ.

Таблица 5 - Достоверность разницы сопоставляемых показателей

Показатель	P1ЦР2	Р1ЦР3	P4ЦР2	P4ЦР3	P1ЦР4
1	2	3	4	5	6
Гемоглобин, г%	0,828	0,906	0,638	0,396	0,486
Эритроциты, млн/мкл	0,432	0,288	0,777	0,131	0,450
Сахар, мг%	0,096	0,266	0,371	0,568	0,700
ипиды, мг%	0,097	0,967	0,440	0,501	0,328
Холестерин, мг%	0,471	0,886	0,550	0,212	0,225
Гематокрит, %	0,059	0,773	0,833	0,041*	0,048*
Аланин, %	0,284	0,053	0,946	0,285	0,336
Аргинин, %	0,591	0,319	0,966	0,559	0,545
Аспарагин, %	0,340	0,502	0,711	0,924	0,490
Глицин, %	0,172	0,971	0,611	0,380	0,297
Глутамин, %	0,857	0,358	0,507	0,149	0,358
Гистидин, %	0,820	0,321	0,453	0,177	0,612
Изолейцин, %	0,215	0,182	0,663	0,506	0,677
ейцин, %	0,468	0,033	0,279	0,008	0,830
изин, %	0,114	0,640*	0,531	0,057*	0,007
Метионин, %	0,558	0,607	0,737	0,683	0,882*
Фенилаланин, %	0,389	0,124	0,176	0,065	0,457
Пролин, %	0,451	0,125	0,611	0,921	0,264
Серин, %	0,004	0,102	0,400	0,867	0,020
Тирозин, %	0,679*	0,222	0,596	0,972	0,408
Треонин, %	0,353	0,237	0,773	0,549	0,479

Окончание табл. 5

1	2	3	4	5	6
Валин, %	0,004	0,920	0,401	0,120	0,045
Витамин А, мкг/кг	0,937*	0,655	0,956	0,637	0,978
Витамин Е, мг/кг	0,417	0,280	0,558	0,081	0,225
Натрий, г/л	0,600	0,590	0,608	0,585	0,992
Калий, г/л	0,898	0,981	0,808	0,889	0,898
Магний, г/л	0,284	0,205	0,681	0,924	0,190
Железо, мг/кг	0,823	0,432	0,400	0,480	0,130
Медь, мг/кг	0,759	0,812	0,494	0,574	0,702
Марганец, мг/кг	0,759	0,904	0,604	0,509	0,394
Цинк, мг/кг	0,125	0,700	0,151	0,776	0,930

* Разница достоверна.

Достоверная разница установлена по уровню гематокрита при сопоставлении животных, инфицированных вирусом инфекционного ринотрахеита, и животных, инфицированных ВЛКРС; лизина (инфекция ВД и ВЛКРС), метионина (ВЛКРС+ИРТ) при сопоставлении с другими опытными группами, а также группе животных, спонтанно инфицированных вирусом инфекционного ринотрахеита.

По другим сопоставляемым показателям разница была недостоверной.

Механизм возникновения иммунодефицитного состояния у крупного рогатого скота, вызванного вирусом лейкоза, требуета дополнительного изучения. Отечественными исследователями (О.В. Иванов, А.Е. Верховский, О.Ю. Иванова, Ю.Н. Федоров и др., 2009) были изучены особенности влияния живых вакцин против респираторных и генитальных вирусных инфекций крупного рогатого скота на показатели иммунитета и эффективность серологической диагностики инфекции ВЛКРС у телят. Установлено, что иммунизация живой вакциной стимулировала гуморальный иммунный ответ у подопытных животных, который характеризовался достоверным увеличением титра антител к вирусам, входящим в ее состав. Однако уровень антител ко всем трем вирусам ИРТ (РН), ПГ-3 (РТГА) и ВД(РН) в сыворотке крови серопозитивных телят был существенно ниже в сравнении с аналогичными показателями, полученными на серонегативном поголовье.

Через месяц после иммунизации уровень антител снизился у всех серопозитивных животных, однако только на стадии раннего инфицирования. То есть положительно реагирующих в ИФА и отрицательно в РИД. Через месяц после вакцинации 5 из 6 телят с низким уровнем антител к ВЛКРС реагировали отрицательно. Таким образом, делается вывод, что иммунизация серопозитивных телят живой вакциной оказала иммуносупрессивное действие на синтез антител к ВЛКРС и появлению ложноотрицательных результатов в ИФА у ранее положительных животных с низким содержанием антител. Таким образом, есть основания предполагать по результатам представленных и ранее проведенных исследований (А.П. Горбунов, 2004, А.В Кононова и др.), что возможна интерференция между ВЛКРС и вирусами ИРТ ВД в организме восприимчивых животных, что приводит к взаимному ингибированию специфического ответа и иммуносупрессии. Это особенно важно на начальной стадии антителообразования, при низком уровне антител к ВЛКРС.

3.5. Показатель относительного количества антител

у инфицированного крупного рогатого скота

разных возрастных групп, в том числе пренатально

инфицированных телят, а также до и после введения

животным ППД туберкулина

Ряд исследователей высказывают предположение о том, что определенное влияние на результаты диагностических исследований оказывают индивидуальные особенности организма, воздействие факторов биотического и абиотического происхождения. Однако опубликованные данные крайне немногочисленны и противоречивы.

С целью изучения данного феномена нами были проведены исследования по определению в ИФА относительного количества антител у инфицированных ВЛКРС коров в возрасте от 2 до 8 лет (табл. 6).

Таблица 6 - Относительное содержание антител (EU) в сыворотке крови

инфицированных ВЛКРС коров разных возрастных групп

№ группы животных	Возраст животных	Максимальное значение в группе	Минимальное значение в группе	Среднее значение в группе
1	8 лет (n=50)	109,70	103,55	105,67
2	5Ц7 лет (n=50)	102,81	99,39	101,19
3	3Ц4 года (n=50)	109,07	100,22	104,67
4	2 года (n=50)	109,50	100,00	104,1

Максимальные средние значения определены у животных в возрасте 8 лет - 109,70 EU; далее у животных в возрасте 2 лет - 109,50; 3Ц4 лет - 109,07 и 5Ц7 - 102,81 EU.

Наибольшая вариабельность максимальных и минимальных показателей оптической плотности зарегистрирована у животных 3Ц4 лет - 100,22 и 109,07. Минимальный - у коров а5Ц7 лет - 99,39 аи 102,81 EU соответственно.

Таким образом, разница показателей относительного содержания антител у инфицированных ВЛКРС взрослых животных разных возрастных групп несущественна и не влияет на специфичность и чувствительность диагностических исследований в РИД и ИФА, и не требует дифференцированного подхода в интерпретации результатов исследований с учетом возраста.

Далее, до первой выпойки молозива, были исследованы в ИФА телята, полученные от больных лейкозом коров-матерей. Они представляли научный интерес, как иммунотолерантные. Результаты исследований были суммированы и определены средние значения относительного количества антител по каждой группе телят в возрасте от 1 до 6 мес (табл. 7).

Таблица 7 - Результаты диагностических исследований в ИФА (в динамике)

телят в возрасте 1Ц6 мес, пренатально инфицированных ВЛКРС

Животные, возраст	Количество животных	Показатель ИФА (средний по группе), EU	Диагноз
Телята 1 мес	10	18,08+4,6	Инфекция ВЛКРС
Телята 2 мес	10	16,42+3,9	Инфекция ВЛКРС
Телята 3 мес	19	19,30+4,2	Инфекция ВЛКРС
Телята 4 мес	19	20,12+5,1	Инфекция ВЛКРС
Телята 5 мес	18	16,92+4,3	Инфекция ВЛКРС
Телята 6 мес	18	22,10+4,8	Инфекция ВЛКРС
М+м		18,82+4,4
Телята, спонтанно инфицированные ВЛКРС (n=контроль) М+м	20	67,31+2,4	Инфекция ВЛКРС

Результаты ежемесячных диагностических исследований пренатально инфицированных ВЛКРС телята показали, что уровень относительного количества антител у животныха в возрасте от 1 до 6 мес варьировал незначительно, находясь в пределах 16,42+4,6 - 22,10+4,8 EU, и по результатам шестикратных исследований в среднем составляла 18,82+4,4 EU.

При исследовании в динамике у трех телят в возрасте 2 мес, у двух - в возрасте 5 мес и у двух - в возрасте 6 мес, средние по группам значения показателей оптической плотности, оценивались как отрицательные на инфекцию ВЛКРС и находились ниже уровня 10Ц12 EU. Эти телята представляли наибольший интерес, как иммунотолерантные.

Относительное количество антител у животных, используемых в эксперименте, было существенно ниже, чем у телят в возрасте 6 мес, спонтанно инфицированных ВЛКРС. Так, относительное количество антител спонтанно инфицированных телят в возрасте 6 мес более чем в 3 раза превосходило показатель по группе телят, пренатально инфицированных ВЛКРС

Полученные данные даюта основание рекомендовать для первичного исследования телят возрасте 6 мес тест-систему ИФА, обладающую высокой чувствительностью.

Подтвержден феномен выпадения (нереагирования) в ИФА у 7 телят в возрасте 2, 5, 6 мес. Исследования методом ПЦР подтвердили наличие вируса в биоматериале исследуемых животных.

Проблема, связанная с изучением влияния на результаты диагностических исследований живых вакцин из слабо агглютиногенного штамма B. abortus, сывороток, лекарственных препаратов, остается дискуссионной. Предполагают, что применение ППД туберкулина, как иммунопровокатора, может влиять на особенности реагирования животных при диагностических исследованиях, в том числе на инфекцию ВЛКРС. В таблицах 8, 9 приведены результаты диагностических исследований животных, инфицированных ВЛКРС, до и после введения ППД туберкулина.

Таблица 8 - Результаты диагностических исследований в РИД

и ИФА и относительное количество антител к ВЛКРС

у животных до введения ППД туберкулина

№ животных п/п	Результат РИД	Результат ИФА	Относительное количество антител, EU
1	Ц	+	36,02
2	+	+	127,53
3	Ц	+	21,394
4	+	+	123,79
5	+	+	119,00
6	+	+	100,67
7	Ц	+	18,24
8	Ц	Ц	14,07
9	+	+	133,17
10	+	+	128,73
11	+	+	112,56
12	+	+	138,14
13	+	+	104,32
14	+	+	32,28
15	Ц	+	17,36
16	Ц	+	18,00
17	+	+	106,48
18	Ц	+	74,32
19	Ц	+	99,32
20	+	+	117,10
	12(+)	19(+)	а

Результаты исследований сыворотки крови животных в РИД и ИФА до введения туберкулина показали, что у 12 из 20 животных, исследованных в РИД и ИФА, результаты совпали. В тест-системе ИФА антитела к ВЛКРС выявлены у 19 животных. Таким образом, у 8 животных (№ пп. 1, 3, 7, 8, 15, 16, 18 и 19) установлено выпадение реакции иммунодиффузионной преципитации. Следует отметить, что относительное количества антител к ВЛКРС у таких животных не превышало значений 14,0774,32EU. Максимальные значения относительного количество антител (более 100 EU) определены у коров (№ п.п. 2, 4, 5, 9, 10, 11, 12, 13, 17, 20). Минимальные показатели менее 100 EU определены у животных (№ 8, 15, 16, 7, 3, 1, 18, 19), до 104,32 EU (№ 1930). Минимальные показатели (менее 100 EU) определены у животных № 2153, 2150, 1900, 2152, 2162, 2159, 1953, 2121 и варьировали от 1734 (инв. № 15) до 18,24 EU (№ 19).

Результаты повторного исследования крупного рогатого скота в РИД и ИФА, проведенного через 4 дня после обработки ППД туберкулином, представлены в табл. 9.

Результаты диагностических исследований, проведенных после введения туберкулина, показывают, что из 20 исследованных в РИД реагировало 11, в ИФА - 19 животных. аУ 5 животных асодержание антител аа возросло от

Таблица 9 - Результаты диагностических исследований в РИД и ИФА и относительное

количество антител к ВЛКРС у животных после введения ППД туберкулина

№ животных п.п.	РИД	ИФА	Относительное количество антител, EU
1	Ц	+	17,50*
2	+	+	130,53
3	Ц	+	17,41*
4	Ц	+	19,80*
5	+	+	119,00
6	+	+	29,61*
7	Ц	+	16,99
8	Ц	Ц	8,01*
9	Ц	+	29,60*
10	+	+	120,730
11	+	+	124,31
12	+	+	124,31
13	Ц	+	36,21
14	+	+	29,45
15	Ц	+	12,90*
16	+	+	18,11
17	+	+	105,32
18	+	+	76,24
19	Ц	+	101,23
20	+	+	118,22
	11(+)	19(+)	М+

74,52 до 130,53 EU. У 7 животных зарегистрировано понижение количества антител от 16,99 до 29,60 EU. У других животных двух опытных групп показатели оставались на относительно равном уровне. Однако следует отметить определенную вариабельность (как повышение, так и понижение) уровня антител у некоторых животных после введения ППД туберкулина.

Таким образом, полученные данные не позволяют утверждать о каком-либо иммуностимулирующем или ингибирующем эффекте ППД туберкунлина и влиянии его на результаты диагностических исследований ва РИД и ИФА.

Далее определяли относительные пределы чувствительности РИД в сопоставлении с ИФА с учетом относительного количества антител к вирусу лейкоза. При этом исследовали животных условно благополучной группы, подвергнутых однократному серологическому исследованию в РИД (табл. 10).

Установлено, что 16 животных из 20, сыворотка которых содержала количество антител от 8,61 до 35,73 EU, реагировали положительно только в ИФА.

Другая группа животных (4 из 20 голов), сыворотка которых содержала количество антител от 53,59 EU, реагировала только в тест-системе РИД.

У животных, имеющих показатели выше представленных значений, результатыа диагностических исследований в двух сопоставляемых тест-системах совпали.

Таблица 10 - Результаты исследований животных на предмет инфекции ВЛКРС

в ИФА и РИД с учетом относительного содержания антител (EU)

№ п/п	Инв. №	ИФА	Диагноз	РИД
1	318	9,77	Отрицательный	Ц
2	361	8,61	Отрицательный	Ц
3	422	13,54	Отрицательный	Ц
4	428	13,40	Отрицательный	Ц
5	614	114,58	Положительный	+
6	588	9,25	Отрицательный	Ц
7	431	13,54	Отрицательный	Ц
8	373	35,73	Положительный	Ц
9	456	115,00	Положительный	+
10	557	88,76	Положительный	+
11	699	16,47	Положительный
12	428	21,07	Положительный	Ц
13	660	53,59	Положительный	+
14	553	12,42	Отрицательный	Ц
15	671	10,89	Отрицательный	Ц
16	339	11,58	Отрицательный	Ц
17	312	13,54	Отрицательный	Ц
18	547	12,84	Отрицательный	Ц
19	590	11,17	Отрицательно	Ц
20	624	9,07	Отрицательный	Ц

Таким образом, РИД не выявляет, прежде всего, инфицированных животных, имеющих низкое содержание антител к ВЛКРС, что следует учитывать при сомнительных реакциях в РИД.

Для оценки целесообразности применения имеющихся диагностических тест-систем были определены по относительному количеству антител к вирусу лейкоза пределы чувствительности РИД с гликопротеидным антигеном в сопоставлении с показателями, полученными методом ИФА (табл. 11).

Таблица 11 - Сопоставление результатов гематологических и серологических

исследований на лейкоз и инфекцию ВЛКРС и определение относительного

содержания антител к вирусу лейкоза в сыворотке крови инфицированных

и больных лейкозом животных

Инв. № животных	Возраст, лет	ейкоциты	имфоциты	Результат диагностических исследований
				Гематология	РИД	ИФА
						Значения EU	Диагноз
1	2	3	4	5	6	7	8
1264	6	14,80	11,60	+	+	121,17	ейкоз (+)
1280	5	13,80	10,20	+	+	117,22	+
1230	5	23,2	13,6	+	+	114,84	+
1300	6	14,2	8	+	+	136,58	+
12340	3	17,2	10,4	+	+	113,06	+
1401	4	20,4	12,2	+	+	112,25	+
1056	6	22,8	15,6	+	+	141,44	+
1206	4	15,8	10,4	+	+	121,17	+

Окончание табл. 11

1	2	3	4	5	6	7	8
1209	6	25,6	18	+	+	124,25	+
1142	7	20	13,2	+	+	117,27	+
1200	7	19,4	9,2	+	+	113,22	+
1121	6	27	17,6	+	+	105,92	+
1314	7	23	14,6	+	+	126,20	+
1321	7	14,4	8,6	+	+	111,11	+
1289	8	21,4	12,4	+	+	118,09	+
1011	4	12,8	6,8	+	+	125,71	+
121	4	29,8	18,8	+	+	146,15	+
1216	5	20,60	15,40	+	+	122,83	+
1307	7	18,80	12,60	+	+	128,67	+
1344	8	32,80	27,40	+	+	129,53	+
1245	8	37,00	30,20	+	+	126,72	+
1197	5	18,80	12,80	+	+	130,72	+
1350	4	20,80	15,20	+	+	131,56	+
1466	4	15,80	13,40	+	+	120,39	+
1471	4	21,60	14,20	+	+	117,44	+
1210	5	15,80	12,40	+	+	125,44	+

3.6. Регламент диагностических исследований в хозяйствах

в зависимости от сложности эпизоотической

ситуации по инфекции ВЛКРС

Было установлено, что независимо от уровня вирусоносительства, максимальное количество инфицированных животных выявляется при проведении первых трех диагностических исследований в ИФА с интервалом не менее 1Ц2 мес и при исследовании в РИД с интервалом в 6 мес.

Так, из 200 животных при уровне инфицированности 10%, первое исследование позволило выявить 13,5%, второе - 8,6 и третье - 3,1%, (табл. 12).

Таблица 12 - Результаты трехкратных серологических исследованийа животных

в ИФА с интервалом 1Ц2 мес, при уровне инфицированности 10, 30 и 60%

Средний (по группе) уровень инфицированности животных ВЛКРС - 10%
Коровы (n=200)	Первое исследование	РИД (+)	%		Второе исследование	РИД (+)	%	Третье исследование	%	РИД (+)
		27	13,5		173	15	8,6	158	5	3,1
Средний (по группе) уровень инфицированности животных ВЛКРС - 30%
	Первое исследование				Второе исследование			Третье исследование
Коровы (n=200)	исследовано	РИД (+)			исследовано	РИДа (+)	%	исследовано	РИД (+)	%
	200	58		29	142	15	14,1	127	13	10,2
Средний (по группе) уровень инфицированности животных - 60%
Коровы (n=150)	Первое исследование	РИД (+)		%	Второе исследование	РИДа (+)	%	Третье исследование	РИД (+)	%
	150	87		58	63	25	39,6	38	12	31,5

По результатам четвертого исследования был получен первый лотрицательный результат, позволяющий объявить стадо (двор) условно благополучным. Возможность исследования методов ИФА пробы молока, делает этот тест более технологичным.

Вариант оздоровления аналогичных групп животных с использованием РИД позволил подтвердить условное благополучие через 18 мес. Частое (с интервалом в 1 мес) исследование в РИД животных с низким уровнем инфицированности не дает, при соответствующих вынужденных затратах, должного эффекта Полученные данные согласуются с результатами проведенных ранее исследований (А.А. Русинович, 1998).

Как видно из табл. 12, динамика выявления вирусоносителей с более высоким уровнем инфицированности закономерно соотносится с полученными данными по первой группе.

СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА

Страницы: | 1 | 2 | 3 |

     Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по ветеринарии