Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по ветеринарии

ПСЕВДОМОНОЗ ПРОДУКТИВНЫХ ЖИВОТНЫХ В РЕГИОНЕ СЕВЕРНОГО КАВКАЗА

Автореферат докторской диссертации по ветеринарии

СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА

Страницы: | 1 | 2 | 3 |

 

3.3. Экспериментальное воспроизведение псевдомоноза у поросят

Экспериментальное заражению поросят вирулентной культурой P.aeruginosa проводили в изоляторе Ильской участковой ветеринарной лечебнице Северского района. Для опыта завезли 20 здоровых поросят 1,5 месячного возраста со средним весом 10,5 кг., которых по апринципу аналогов разделили на 4 группы по 5 голов в каждой, поместили каждую группу в отдельный изолированный станок и оставили на 3 дня для адаптации и предварительных исследований, для чего на второй день у поросят взяли кровь.

Заражения поросят проводили культурой P. aeruginosa 6/2-9 выделенный из спермы хряка-производителя № 5682 агроплемзавода Индустриальный. Изолят 6/2-9 высоковирулентен для белых мышей LD100 составила 76 млн. мт/см3. аПоросят первой опытной группы внутрибрюшинно заражали смывом суточной агаровой культуры на стерильном физрастворе в дозе 80 млрд МТ/см 3 , второй опытной группы Ца в дозе 40 милр МТ/см 3 ав объеме 40,0 см 3 . Животным четвертой контрольной группы ав том же объеме вводили стерильный физиологический раствор. Поросят третьей группы (отмеченных) поместили совместно с поросятами первой группы для контактного заражения, а когда поросята первой группы пали, то поросят 3-й группы совместили с поросятами 2-ой группы. Результаты проведенных исследований отражены в таблице 1.

Таблица 1- Результаты экспериментального заражения поросят культуройа P. aeruginosa

№ пп	К-во поросят в группе	Метод заражения	Доза /объем млрд мт/ см3	Заболели		Пало
				сутки	поросят	сутки	поросят
1	5	Внутрибрюш.	80 /40,0	1-2	5	2-3	5
2	5	Внутрибрюш.	40 /40,0	6-13	5	13-15	5
3	5	контактный	-	14-17	5	21-24	4
4	5	контроль	Физ.раствор, 40,0	-	-	-	-

После внутрибрюшинного авведения микробной взвеси P.aeruginosa у всех поросят первой и второй групп, а также у 3-х поросят 4-ой группы через 4 часа поднялась температура тела на 0,3-0,5 0 С выше нормы.которая держалась а10-15 часов, а затем пришла в норму и только на вторые сутки после инфицирования у поросят 1-й группы, а у поросят 2-й группы на 6-й день температура стала стабильно повышаться на 0,5-1,00 выше нормы.

Клинические признаки болезни наиболее стремительно развивались у поросят первой группы, у них появилась вялость, понижение аппетита, а затем и полное его отсутствие, жажда. В это же время зарегистрирован понос, в каловых массах через 72 часа у 4-х поросят стали появляться сгустки крови и слизи. Через 72 часа после инфицирования отмечали сначала у одного, а затем у трех рвоту с кровью. Кашель и одышка стали развиваться после 48 часов. На четвертый день у одного поросенка кашель сопровождался пенистыми, розового цвета истечениями из носа. У других отмечали ринит, конъюнктивит. Таким образом инкубационный период продолжался 30-48 часов, заболевание длилось от 48 до 72 часов, после чего наступала стопроцентная гибель поросят.

Подобную клиническую картину мы наблюдали у поросят второй группы, которым вводили по 40 млрд. микробных тел взвеси P.aeruginosa. Признаки болезни были те же и развивались они в той же последовательности, но были более растянуты по времени.

У поросят второй группы растянутость признаков заболевания по сравнению с первой проявилось из-за более низкой дозы P. aeruginosa. Падеж поросят данной группы продолжался 3 суток.

У поросят третьей группы (контактной), инкубационный период составил 10 - 12 суток, клиническое проявление болезни продолжалось 10 - 13 суток, и пали они в течении 4-х суток.

При бактериологическом исследовании органов павших опытных поросят изоляты исходной культуры 6/2-9 серогруппы О6 выделены во всех случаях. Изолировать культуру удалось из сердца (крови), селезенки, печени, почек, лимфоузлов брыжеечных, паховых, средостенных, из легких, мышц, костного и головного мозга, кала, мочи, желчи, слюны и носовых истечений.

Культура P. aeruginosa из кала, мочи, слюны и носовых истечений высевалась на несколько дней раньше падежа поросят, одновременно с появлением явных клинических признаков заболевания. У опытных поросят при гематологических исследованиях отмечали с 12 и 21 дня снижение количества эритроцитов на 20%,а гемоглобина 26%,а цветного показателя 23%,а лейкоцитов на 16%. Снижалось количество сегментоядерных лейкоцитов,а а уровень палочкоядерных лейкоцитов незначительно увеличивался. Отмечено значительное достоверное увеличение лимфоцитов. Все эти изменения: повышенная проницаемость сосудов,а потери крови,а диарея со снижением функции кроветворных органов,а указывают на токсические процессы, имеющие место при данной инфекции. Отмечено значительное снижение общего белка сыворотки крови на 14,5 % и гамма-глобулинов на 17,5 %, относительное увеличение альбуминов и альфа глобулинов.Снижение белка, белковых фракций и глюкозы указывает на поражение органов синтезирующих белки, в основном печень.

У опытных поросят в сыворотке крови отмечено достоверное снижение глюкозы к 21 дню на 21,5%, цинка на 21%, кальция на 7%. Заметно увеличилось (на 14,2%) содержание фосфора и, следовательно, изменилось соотношение кальция и фосфора с 1,14:1,0 до 0,93:1,0.

Патологоанатомическое исследование трупов павших поросят опытных групп показало, что наиболее четкие и характерные изменения отмечены у тех, которые болели более продолжительное время, т.е. у поросят второй и особенно третьей групп. Четыре трупа поросят третьей группы были истощены, как бы усохшие, на лицо было явление эксикоза, слизистые оболочки и мышцы анемичны. У трех трупов на нежных участках кожи в области паха и брюшной полости небольшие кровоизлияния. У двух - пенистые массы заполняли трахею и бронхи. У двух поросят 3-й группы в легких гнойно-катаральное воспаление,а отек, на разрезе пенистые истечения. Гидроперикардит. По границе желудочков и предсердий мелкие кровоизлияния, мышца дряблая, кровь плохо свернувшаяся. Печень слегка увеличена, перерождена, дряблая серо-желтого цвета, кровоизлияния вокруг воротной вены,а желчный пузырь наполнен вязкой желчью. Селезенка увеличена, с редкими точечными кровоизлияниями. Слегка увеличены почки, светло-коричневого цвета с мелкими кровоизлияниями под капсулой. Граница коркового и мозгового слоев сглажена, кровоизлияния в корковом слое. Лоханка увеличена, у двух поросят лоханки почек со слизисто-гнойным содержимым. У двух трупов мелкие кровоизлияния на слизистой оболочке мочевого пузыря. Брыжеечные, паховые лимфоузлы увеличены, с кровоизлияниями, особенно средостенные. Слизистая оболочка всех отделов кишечника и желудка отечна,а катарально-геморрагически воспалена, с множественными кровоизлияниями. Содержимое желудка и кишечника небольшое, разжиженное, серо-зеленого цвета, со зловонным запахом, а в толстом отделе кишечника с редкими сгустками крови и слизи. В бедренных мышцах редкие, мелкие кровоизлияния. Вскрытие черепа показало, что оболочки головного мозга отечны, кровеносные сосуды сильно инъецированы. Костный мозг с кровоизлияниями. Регистрируемые кровоизлияния в подкожную клетчатку, мышцы, в слизистые оболочки желудка, кишечника и мочевого пузыря, почки и др. указывают об увеличении порозности кровеносных сосудов,а пониженной свертываемости крови.

3.4. Разработка и конструирование средств специфической профилактики и терапии псевдомоноза

3.4.1. Изучение штаммов P.aeruginosa и отбор их для приготовления вакцины против псевдомоноза

Работу проводили в лаборатории КНИВИ, межобластной и некотрых районных ветеринарных лаборатриях путем бактериологических, серологических исследований в 2004 - 2009 годы.

Руководствуясь результатами исследований для конструирования поливалентных вакцин и поливалентных сывороток использовали изоляты P.aeruginosa сергрупп наиболее широко распространеные, а именно, для крупного рогатого скота: О1, О3, О6, О13, О19; для свиней: О2, О3, О4, О6, О10, О11, О13, О18, О19.

Из выделенных культур P.aeruginosa было отобрано200 изолятов наиболее типичных, и в лабораторных условиях их подвергли всесторонним исследованиям. По морфологическим и тинкториальным свойствам культуры, выделенные из различным объектов отличительных признаков не имели. При микроскопии мазков было установлено, что бактериальные клетки P.aeruginosa представляли собой короткие, прямые с закругленными концами грамотрицательные палочки, расположенные одиночно, иногда парами, а изредка короткими цепочками. В раздавленной капле установлена подвижность данныхаа микроорганизмов. Изолированные культуры спор и капсул не образовывали, но активно продуцировали слизь, которая тонким слоем окружала каждую бактериальную клетку и четко выявлялась при окраске по Гинсу. Наибольший процент пигментообразующих изолятов выделено от свиней, затем от крупного рогатого скота, от изолированных из кормова 15 культур только 12 (83,3 %) обладали пигментообразованием.

Одними из характерных для P.aeruginosa являются гемолитические свойства. Причем гемолиз как правило отмечался двух видов, в нашем конкретном случае 187 культуры (88.6%) обладали ? - гемолизом и только 13 культур (11.4%) обладали ? - гемолизом.

Вирулентность выделенных изолятов P. aeruginosa определяли на беспородных белых мышах по 18 - 20 грамм. Вначале определяли летальную дозу возбудителя. Брали дозы в 125, 250, и 500миллионов микробных тел. Вводили каждую дозу трем мышам и в случае их гибели в течении 18 - 24 часов от дозы 125 миллионов микробных тел - культуру считали высоковирулентной. При гибели мышей от дозы 250 миллионов микробных тел считали вирулентной, а при гибели мышей от 500 миллионов микробных тел - слабовирулентной. Если же гибель мышей от дозыа 500миллионов микробных тел не наступала - культуру считали авирулентной.

Не все изоляты P. aeruginosa обладали одинаковой вирулентностью, больше того 9 из 105 (8,6%) вообще были авирулентны. По степени вирулентности отмечено, что высоковирулентных изолятов, т. е. вызывающих гибель белых мышей ота 125 миллионов микробных тел, было 54,3%, вирулентных - 21% и слабовирулентных - 16,1%. Преобладали изоляты с высокой вирулентностью. Вирулентность изолятов зависит от объекта его выделения: наибольшее количество вирулентных изолятов получено из патологического материала ота свиней - 95,9%, на втором месте изоляты из патологического материала от крупного рогатогоа скота - 94,4%. При сопоставлении данных по серологическим исследованиям и вирулентностью не отмечено четкой корреляции между серогрупповой принадлежностью и уровнем вирулентности выделенных изолятов.

Изменения вирулентности культур P. aeruginosa выращенных на различных средах ( бульон Хоттингера, ЦПХ, среда с ацетамидом, Кинг А и Б) не было отмечено снижения исходной вирулентности. Кроме того не отмечено снижения вирулентности у культур при длительном хранении на мясо - пептоном агаре и бульоне в течение года. При хранении же в замороженном физиологическом растворе в морозилке бытового холодильника исходная вирулентность в течение года снижалась в два раза.

Для определения иммуногенности подобранных 10 культур P. aeruginosa из каждого изолята готовили моноантигена с накоплением 1 миллиарда микробных тел на см3 на стерильном физиологическом растворе, инактивировали 0,3% формалина в течение 14 суток. Затема данным антигеном иммунизировали дозой по 0,3 см3 внутримышечно по 20 белых мышей массой 18 - 20 грамм. Напряженность иммунитета проверяли путем заражения опытных мышей LD100 исходными монокультурами через 21 день после иммунизации.

Результаты опыта показали, что все испытуемые культуры P. aeruginosa оказались достаточно иммуногенными, создавали строго специфическую протективную защиту в 85 - 95% опытных животных.

3.4.2. Изготовление опытных серий поливалентной вакцины против псевдомоноза животных.

Для изготовления поливалентной вакцины против псевдомоноза использовали изоляты 10 серологических групп (О1, О2, О3, О4, О6, О10, О11, О13, О18, О19) возбудителя наиболее часто выделяемых при бактериологических исследованиях патматериала от свиней и крупного рогатого скота в крае.

С целью усиления иммуногенных свойств к вакцине в качестве адъюванта добавляли стерильную 6% гидроокись алюминия (ГОА). Вначале провели предварительные опыты по определению оптимальной дозы гидроокиси с целью усиления иммуногенных свойств вакцины. В опыте использовано 80 белых мышей, которых по группам иммунизировали вакцинами с разным содержанием гидроокиси аллюминия. Установлено, что 20% ГОА усиливает иммуногенность вакцины на 15% - а добавление 15-20%.ГОА на 20%.

Для определения иммуногенности вакцины предварительно в лабораторных условиях готовили микросерии поливалентной вакцины. Отобранные 10 изолятов после культивирования на МПБ пересевали на чашки Петри, выращивали культуры, делали смывы физраствором, доводили концентрацию до 10млрд микробных клеток в 1 см3, добавляли формалин 0,3 % к объёму. Инактивировали 48 часов при комнатной температуре и постоянном встряхивании, а затем в равных количествах (по 1/10) смешивали в общей ёмкости, добавляли 15% стерильного 6% гидроокисиа алюминия, выдерживали 24 часа, проверяли на стерильность и фасовали во флаконы и этикетировали. Готовую вакцину проверяли на безвредность, активность, по разработанной методике, хранили в бытовом холодильнике до использования для определения активности.

В дальнейшем готовили и испытывали микросерии поливалентной вакцины против псевдомоноза в лабораторных и промышленных условиях и испытывали на поросятах, телятах и свиноматках.

3.4.3. Разработка промышленной технологии приготовления поливалентной вакцины против псевдомоноза

Для широкого испытания опытной поливалентной вакцины против псевдомоноза и для внедрения в практику данного препарата была разработана технология промышленного производства данного препарата.

Отработка технологических приемов и тонкостей производства в промышленных условиях проводили на Армавирской биофабрике. Придерживаясь общепринятых схем, свои исследования мы начали с работы с производственными штаммами.

Вакцина против псевдомоноза сельскохозяйственных животных представляет собой серо-зеленоватого цвета жидкость с бело-сероватым рыхлым осадком, образующимся на дне флакона при хранении, легкоразбивающимся при встряхивании в гомогенную взвесь.

Вакцину применяют с профилактической целью в хозяйствах неблагополучных по заболеванию псевдомонозом свиней и крупного рогатого скота, где возбудителем инфекции установлена синегнойная палочка P.aeruginosa входящих в состав серогрупп.

Вакцинировали всех клинически здоровых телят и поросят в возрасте 15 - 17 дней в неблагополучных или угрожаемых по заболеванию псевдомонозом хозяйствах. Вакцину вводят двукратно через 12 - 14 дней в дозе 1+1 см3 внутримышечно поросятам в область бедра с внутренней стороны и 2+2 см3 телятам в область верхней трети шеи. Ревакцинацию проводили однократно в дозе 2 и 3 см3 через 3 - 4 месяца. Иммунизацию поросят и телят с профилактической целью проводили в период массовых растелов и опоросов. Коровам и свиноматкам вакцину вводили за 1 - 1,5 месяца до родов двукратно с интервалом 12 - 14 дней в дозе 5+5 см3, с осторожностью, чтобы не вызвать травматических повреждений. Хряков и быков-производителей вакцинировали дважды по 5+5 см3 через каждые 6 месяцев.

Иммунитет наступал через 12-14 суток и сохранялся в течение 6 месяцев.

На поливалентную вакцину против псевдомоноза сельскохозяйственных животных разработана нормативная документация, которая представлена в Россельхознадзор МСХ России для государственной регистрации. На поливалентную вакцину против псевдомоноза сельскохозяйственных животных получен патент № 2308288 от 20.03.2006 г.

3.4.4. Производственные испытания опытных серий поливалентной вакцины против псевдомоноза.

В начале опытные серии вакцины готовили в лабораторных условиях КНИВИ, а затем в производственных условиях Армавирской биофабрики и испытывали в неблагополучных по псевдомонозу хозяйствах.

В СПК "Кавказ" Старо-Минского района в 2008 году по клиническим признакам и бактериологически у поросят и телят было диагностировано заболевание псевдомонозом. Во всех случаях в 100% из патматериала выделяли Р. аеruginоsа (О6) и в 36 % Е. соli. На СТФ №1 отобрали 264 здоровых поросенка 18-20 дневного возраста, где шло занболевание, и вакцинировали их опытной вакциной, приготовленной из десяти серогрупп. Опытную вакцину вводили дважды через 12 дней, внутримышечно по 1+1 см3 в области внутренней поверхности бедра с соблюдением правил асептики и антисептики. 76 поросят были контрольными, их не вакцинировали. На МТФ № 2 этого же хозяйства регистрировали заболевание телят с признаками псевдомоноза, что подтверждали и бактериологически (О19), отобрали 48 здоровых телят 40-35 дневного возраста и ввели им дважды по 2+2 см3 через 12 дней внутримышечно указанной вакцины. 16 телят не вакцинировали, они были контрольными и содержались отдельно.За животными вели наблюдения, через каждый месяц после вакцинации ( по 10 голов) брали кровь для исследований.

Результаты наблюдений за 3 месяца сведены в таблицу № 2

Установлено что, вакцина не вызвала местных и общего характера осложнений у опытных животных, создавала у 18-30 дневных поросят иммунитет и сокращала заболеваемость и падеж их на 25-26%. Вакцинаа также создавала иммунитет у 35-40 дневных телят, сокращала заболеваемость и отход на 10-25%, причем введение вакцины в дозе 2+2 мл предохраняло телят от падежа в 2,5 раза больше. Иммунизация супоросных свиноматок в дозе 5+5 мл в 2,5-3 месячной супоросности создавало у них иммунитет, который с молозивом передавался новорожденным поросятам, создавая у них колостральный иммунитет. За счет колострального иммунитета у поросят на 12,8% сокращалась заболеваемость и на 5,4% падеж от псевдомоноза.

В ЗАО "Колос" Усть - Лабинского района регистрировали заболевание и падеж поросят с признаками псевдомоноза, при бактериологическом исследовании выделена культура Р. аеruginоsа серогруппы О13. В хозяйстве было отобрано 66 свиноматок 2,5-3 месячного срока супоросности, которых вакцинировали внутримышечно, дважды, по 5см3 через 10 дней. 18 свиноматок такого же срока супоросности составили контрольную группу, их не вакцинировали и содержали отдельно. За свиноматками вели наблюдение до опороса и 30 дней после опороса. Вели учет народившихся поросят, их заболевание и падеж.

Таблица 2- Эффективность применения аопытной серии поливалентной вакцины против псевдомоноза на поросятах и телятах

	Кол-во животных в группе
		Пало	Живые		% эффективности
1 . Поросята опытной гр.	264	24	240	90,91
2. Поросята контр. гр.	76	26	50	65,79
1. Телята опытной гр.	48	3	45	93,75
2. Телята контр. Гр.	16	5	11	68,75

Как видно из результатов опыта, вакцинация свиноматок значительно повышала выход поросят (на 15%) и снижала на 12,8% заболеваемость и на 5,4% отход от псевдомоноза народившегося молодняка. Опытные серии поливалентной вакцины против псевдомоноза готовили на Армавирской биофабрике и испытывали в неблагополучных хозяйствах края.

Исследуя реакции организма телят и поросят на введение поливалентной вакцины против псевдомоноза кроме превентивных свойств нам интересно было знать ответную реакцию со стороны выше указанных объектов. Для этой цели мы в хозяйствах в опытных группах отбирали по 12 животных и брали у них кровь до вакцинации и через 15, 30 и 60 дней после первой вакцинации поливалентной вакциной и исследовали морфологические показатели крови, а в полученной сыворотке определяли уровень специфических антител, содержание общего белка и белковых фракций.

Таблица №3 - Динамика титров антител к Р. аеruginоsа ау животных иммунизированных поливалентной вакциной против псевдомоноза.

Доза вакцины

Возраст ж-х

После вакц ч/з дней

РА С АНТИГЕНАМИ Р. аеruginоsа

К-во исс-ха ж-х

О1

О2

О3

О4

О6

О10

О11

О 13

О18

О19

сред титр

СПК"Кавказ" поросята

12

1+1

20

30

1:16

-

1:4

1:18

1:22

1:10

1:8

1:14

1:8

1:18

1:11

12

1+1

20

60

1:8

-

1:4

1:10

1:12

-

1:4

1:9

-

1:16

1:6,3

СПК"Кавказ" телята

12

2+2

30

30

1:26

-

1:20

-

1:18

1:18

1:24

1:22

1:8

1:24

1:15,2

12а

2+2

30

60

1:8

-

1:10

-

1:9

-

1:10

1:12

-

1:10

1:4,1

СПК"Кавказ" поросята

12

1+1

20

30

1:18

1:10

1:10

1:9

1:26

1:18

1:24

1:20

-

1:18

1:15,3

СПК"Кавказ" телята

12

1+1

35-40

30

1:25

1:12

1:14

1:16

1:22

1:16

1:24

1:18

1:20

1:20

1:18,7

ЗАО "Колос" Усть- Лабинского р-на поросята

12

5+5

24

30

1:20

1:8

1:25

-

1:28

1:20

1:10

1:24

1:10

1:24

1:16,9

Уровень специфических антител у животных определялиа в реакции агглютинации на стекле, а при необходимости и в пробирках, с 10-ти антигенами, входящими в поливалентную вакцину. Результаты исследований сведены в таблицу 3.

Как видно из результатов серологических исследований, поливалентная вакцина против псевдомоноза вызывала образование специфических антител ко всем серогруппами возбудителейа входящих в вакцину. Средний уровень антител у поросят через месяц послеа вакцинации был не очень высокий и регистрировался в титрах 1:11,5 - 1:15,3 и сохранялись они 1-2 месяца. Через 60 дней после вакцинации они регистрировались в титрах 1:6,3. У свиноматок титры антител были на 30% выше чем у поросят но регистрировали их в течение 30 дней.а У телят специфические антитела регистрировали в титрах повыше, чем у поросят 1:15,6-1:18,7. А в тех группах, где вакцины применяли по 2см3 дважды они были на 30% выше.

Как видно из результатов исследования у опытных поросят к 60 дню после иммунизации отмечено незначительное увеличение гемоглобина и эритроцитов. Значительные изменения произошли в лейкоцитарной формуле, общее количество лейкоцитов увеличилось на 15%. И особенно заметно увеличилось количество нейтрофилов сегментоядерных - на 17,5 % и палочкоядерных на 16,1 % в основном участвующих в фагоцитозе. Отмечено незначительное снижение эозинофилов, лимфоцитов и моноцитов. Эти изменения регистрировали не только в сравнении с начальным фоном, но и по прошествии 30 и 60 дней у контрольных поросят после начала опыта.

У опытных поросят через 2 месяца после вакцинации отмечено увеличение общего белка на 10 %. Произошел определенный сдвиг в содержании белковых фракций. Так содержание альбуминов уменьшилось на 5,7%, а глобулиновая фракция возросла на такое же количество. Причем неравномерное процентное увеличение отмечено во фракциях глобулинов. Наиболее значительное увеличение (на 14,5 %) отметили у фракции гамма-глобулинов.

Аналогичные исследования по динамике морфологических изменений крови и биохимических показателей сыворотки мы провели и у телят, при иммунизации их поливалентной вакциной против псевдомоноза.

У опытных телят отмечено увеличение гемоглобина, а следовательно и эритроцитов. Увеличилось общее количество лейкоцитов и произошел довольно значительный сдвиг в лейкоцитарной формуле. Значительно увеличилось количество палочкоядерных (на 37 %) и сегментоядерных (на 33,3 %) нейтрофилов, которые в организме в основном обеспечивают фагоцитоз инородных тел. Отмечено незначительное снижение эозинофилов, лимфоцитов и моноцитов. При исследовании общего белка и белковых фракций у опытных животных установлены колебания и довольно существенные в глобулиновой фракции. Отмечалось заметное увеличение (10 - 12 %) общего белка сыворотки крови. В фракционном сотаве белка заметные изменения отмечены в глобулиновой фракции. Прежде всего заметно уменьшилось (на 7 - 8 %) количество альбуминов. В глобулиновой фракции отмечено увеличение гаммаглобулинов на 14 - 15 %. Остальные фракции незначительно уменьшились или остались в пределах фоновых показателей. Заметное увеличение гаммаглобулинов в сыворотке крови телят, иммунизированных поливалентной вакциной против псевдомоноза показывает существенную иммунологическую перестройку в организме. Эти иммунологические сдвиги были также доказаны серологическими исследованиями и изучением защитных свойств биопрепарата.

Всего опытными сериями поливакцины против псевдомоноза в 23 хозяйствах края иммунизировано 26570 поросят, 3720 телят, 4560 свиноматок, 430 хряков-производителей, 8600 коров и 38 быков-производителей. Во всех случаях вакцина не вызывала местных и общего характера осложнений, значительно сокращала отход у молодняка.

3.5. Получение и исследование поливалентной сыворотки в лабораторных и производственных условиях

В лабораторных условиях для получения поливалентной сыворотки против псевдомоноза использовали кроликов которым в качестве антигена вводили смыв односуточной агаровой культуры каждой из 10 серогрупп P. aeruginosa. Смыв культуры с МПА дважды промывали стерильным физиологическим раствором с последующим центрифугированием при 3,5 - 4 тысяч оборотов в минуту. Готовые моноантигены имели концентрациюа 1 миллиард микробных тел в 1 см3. В последующем к культурам добавляли 0,3 % формалина и инактивировали 14 суток.

В опыте было использовано 26 кроликов весом по 3,0 - 3,5 килограмма. В первых четырех группах кроликам вводили моноантиген. Первая группа - 4 кролика вводили моноантиген 1 миллиард микробных тел на 1 см3 внутримышечно серогруппы О2 штамма №47. Четырем кроликам второй группы вводили в той же дозе моноантиген серогруппы О4 штамма №19. Четырем кроликам третьей группы вводили моноантиген серогруппы О13 штамма №66,а и четырем кроликам четвертой группы также вводили моноантиген серогруппы О13 штамма №66, но две последние инъекции делали с иммуностимулятором - левамизолом по 0,3 см3а подкожно.

В последних двух группах использовали 10 кроликов по 5 в каждой группе. Кроликам пятой группы вводили полиантиген состоящий из 10 моноантигенов десяти различных серогрупп: О1, О2, О3, О4, О6, О10, О11, О,13, О18, О19 с конечным содержанием 1 миллиард микробных тел на 1 см3 каждый из серогрупп.

Кроликам шестой группы вводили такой же полиантиген, но во время двух последних (6 Цйа и 7 - й) инъекций вводили еще и левамизол по 0,3 см3 на кролика.

Кроликам всех шести групп антиген вводили по одной схеме: первые две инъекции через 4 дня по 1 миллиарду микробных тел, третью и четвертую по 2 миллиарда микробных тел, а пятую, шестую и седьмую по 3 миллиарда микробных тел каждой серогруппы. Начиная с 3-й инъекции введение антигена повторяли через каждые 3 дня.

Во время опыта кровь брали после третьего, пятого введения антигена. Третий раз кровь брали при тотальном обескровливании через семь дней после последнего введения антигена.

Результаты исследований (Таблица 4) показали, что специфические антитела в РА у кроликов на введение антигенов формировались активно и уже после третьей иммунизации достигали средних титров 1:213 - 1:312. После пятого введения антигенов титры антител удвоились и достигали уровня 1:522 - 1:650. После семикратной инъекции антигенов титры антител утроились по сравнению с предыдущим исследованием, а у кроликов, которым вводили антигены с левамизолом - титры возросли в четыре раза. Они были на 32 - 40% выше, чема титры у кроликов на эту же дату, которым левамизол не вводили, что было достоверно при математической обработке.

Таблица 4 - аДинамика накопления антител у кроликов в процессе гипериммунизации культурами P. aeruginosa.

	Вид анитигена	Доза в млрд. МТ/ см3	к-во кроликов	Средние титры антител в РА
				3 -х раз	5 Цти раз	7-ми раз
1	О2 (47)	1-3	4	1:21338	1:53452	1:174886
2	О4 (19)	1-3	4	1:26256	1:64624	1:188082
3	О13 (66)	1-3	4	1:23046	1:56146	1:191076*
4	О13 (66)аа с левамизолом	1-3	4	1:31054	1:65032	1:2490115
5	10 серогрупп	10-30	5	1:25448	1:52238	1:210688
6	10 серогрупп с левамизолом	10-30	5	1:256 48	1:63863	1:2796132

Примечание: для данных со знаком * p <0,05

В опыте исследовали динамику формирования защитных свойств у опытных белых мышей на введение опытных сывороток, полученных от кроликов после трех, пяти и семикратного введения им антигена, с левамизолом и без левамизола. Сыворотку, полученную от опытных кроликов каждой группы, смешивали в равных количествах и вводили мышама внутрибрюшинно в разных дозах по группам, и через одни сутки их заражали гомологичными культурами в дозе LD100, с помощью которых получали сыворотки.

Уровень защитных свойств сывороток, полученных уже через три инъекции антигена кроликам интенсивно формировался. Дозы сыворотки в 0,2 см3 уже защищали 36 - 60% мышей от гибели. А дозы сыворотки 0,5см3 защищали все 100% мышей при их экспериментальном заражении, при полной гибели контрольных животных.

В дальнейшем на белых мышах провели исследования превентивных свойств сывороток, полученных после пяти и семикратного введения антигенов кроликам.

Защитные свойства сывороток, иммунизированных кроликов продолжали нарастать. Даже после пятикратного введения антигена защитные свойства в дозе 0,1 см3 стали выше в 2 - 4 раза по сравнению с первым исследованием. Доза 0,2 см3 предохраняла все 100% мышей от заражения кроме серогруппы О2, где защита составила 80%. У кроликов после семикратного введения антигенов защитные свойства в дозе 0,1 см3 выражались 80 - 100%, а у тех которым вводили левамизол, они были 100%, что было достоверным. Сыворотки кроликов всех групп после семикратного введения антигенов в дозе 0,2 см3 защищали всех мышей взятыха в опыт, при полной гибели в контрольной группе.

СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА

Страницы: | 1 | 2 | 3 |

     Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по ветеринарии