Книги по разным темам Pages:     | 1 |   ...   | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |   ...   | 26 |

Зарегистрированная электрокинетическая кривая оседания эритроцитов представлена на рис. 1.8. По оси абсцисс отложено время, по оси ординат - относительное значение измеряемого потенциала. Видно, что вся седиментационная характеристика промодулирована синусообразным сигналом с частотным диапазоном 0,02 - 0,07 Гц. По мере оседания эритроцитов амплитуда сигнала уменьшается. Исследования показали, что частота и амплитуда модулирующего сигнала зависит от состояния крови в целом. Согласно современным теоретическим и экспериментальным данным, потенциал Дорна определяется зарядом, концентрацией и скоростью оседания частиц, а также электропроводностью среды, поэтому кинетика электрокинетической кривой имеет сходство с кривой оседания эритроцитов.

Рис. 1.8. Электрокинетическая кривая оседания эритроцитов.

Таким образом, электрокинетические исследования эритроцитов при их седиментации являются косвенным методом оценки агрегационных свойств крови. Однако электрокинетический метод в настоящее время находится лишь на стадии исследования и еще не получены его количественные характеристики. Кроме этого, метод позволяет оценивать лишь один из факторов, влияющих на агрегационные свойства крови, - заряд мембраны эритроцитов и не учитывает вязкость крови и величину гематокрита.

Фотометрический метод регистрации СОЭ в динамике основан на измерении интенсивности светового потока, прошедшего через всю поверхность исследуемой пробы крови. Функциональная схема прибора изображена на рис. 1.9.

Рис. 1.9. Функциональная схема прибора.

Излучение от источника света 1 поступает на стандартную пробирку для определения СОЭ 3. В первоначальный момент времени она перекрывается столбиком крови 4. По мере оседания эритроцитов интенсивность излучения, прошедшего через исследуемую пробу, возрастает вследствие увеличения слоя плазмы, хорошо пропускающего излучение. Далее сигнал преобразуется к удобному для обработки и регистрации виду блоком 8 и поступает на самописец 9, который регистрирует кривую оседания эритроцитов. Данный метод является лишь простым способом регистрации фотометрических свойств крови и не позволяет адекватно оценивать размеры образующихся агрегатов эритроцитов.

Для оценки степени агрегации крови предложено устройство для графической регистрации фракционного состава эритроцитов, основанное на фотометрическом методе. Функциональная схема такого устройства приведена на рис. 1.10.

Рис. 1.10. Функциональная схема устройства для графической регистрации фракционного состава эритроцитов.

Пробирку с исследуемой пробой крови фиксируют неподвижно в вертикальном положении в специальном держателе. При перемещении каретки 3 с помощью передаточного механизма 6 пучок света 4 проходит через стеклянную пробирку 1, заполненную исследуемой жидкостью 2, содержащей эритроциты, и попадает на фотоэлемент 5. Оптическая плотность пробирки меняется в зависимости от характера распределения эритроцитов на фракции. Сигнал от фотоэлемента подается на регистрирующее устройство, на котором записывается кривая, характеризующая распределение эритроцитов на фракции. Данный метод позволяет изучать фракционный состав эритроцитов. При использовании этого метода в динамике в ходе седиментации эритроцитов возможно изучение кинетики агрегатообразования и оценка размеров микроагрегатов эритроцитов.

2.6.2. Оценка агрегационных свойств крови при прямом микроскопическом наблюдении Биомикроскопия является прижизненным исследованием и позволяет оценивать агрегатное состояние эритроцитов непосредственно в кровеносном русле. Основным преимуществом этого метода является его высокая чувствительность и информативность при нарушениях микроциркуляции.

Феномен внутрисосудистой агрегации эритроцитов имеет определенное диагностическое и прогностическое значение, поскольку связан с изменениями соотношения белковых фракций плазмы, фибриногена, липидов, нарушениями кровотока в микрососудах, электрического потенциала эритроцитов, появлениям в крови токсических веществ, метаболитов, непосредственно вызывающих агрегацию эритроцитов. Установлено, что агрегация эритроцитов в различных участках кровотока и в органах, особенно при патологии, выражена неодинаково и может иметь как местное, так и генерализованное распространение в организме. Одним из способов реализации таких исследований является применение микрофотографии и телевизионных систем анализа изображений. Наряду с несомненными достоинствами этот метод обладает рядом недостатков, к которым относятся незначительное число исследуемых структур, большая трудоемкость подсчета количества клеток и определения размеров эритроцитарных агрегатов, а также влияние неблагоприятных условий оперативного вмешательства. Этот метод больше относится к научноисследовательским методам и не может быть использован в амбулаторных условиях.

2.6.3. Фотометрические методы оценки агрегационных свойств крови Фотометрический метод является наиболее распространенным методом исследования агрегационных свойств эритроцитов. С помощью этого метода возможна количественная оценка агрегатного состояния крови - размеров и плотности микроагрегатов эритроцитов. Кроме этого, фотометрический анализ отличается от других методов (биомикроскопия, микрофотография) простотой и доступностью, что объясняет его широкое применение в клинической практике.

Все фотометрические методы можно классифицировать по характеристике регистрируемого светового потока:

1. Исследование в проходящем световом потоке.

2. Исследование в отраженном световом потоке.

Интенсивность света, прошедшего через слой суспензии эритроцитов, изменяется в соответствии с их агрегатным состоянием, которое характеризуется размерами и плотностью образующихся микроагрегатов.

Этот принцип используется в фотометре для количественной автоматической регистрации агрегации эритроцитов. Функциональная схема этого устройства приведена на рис. 1.11.

Рис. 1.11. Функциональная схема фотометр для количественной автоматической регистрации агрегации эритроцитов.

В качестве основы для фотометра использован микроскоп МИН - 4, установленный горизонтально. Капилляр с гепанизированной кровью помещают в термостатированную кювету 4. Изучаемый образец освещают лампой накаливания через поляризатор 2 и конденсорную линзу 3. Изображение клеток строится объективом микроскопа с 20-кратным увеличением 6 в плоскости регистрирующего устройства 7, размещенного в тубусе окуляра.

Для повышения контрастности изображения использованы поляризаторы 2, которые установлены так, что оси их практически перпендикулярны друг другу. Вращение второго поляризатора относительно первого позволяет также легко регулировать интенсивность прошедшего через образец света. Поскольку изменение сопротивления фоторезистора пропорционально интенсивности падающего света, показания самописца линейно связаны с интенсивностью прошедшего через образец света. Так как изображение капилляра (слоя с глубиной резкости 200 мкм) строится объективом в плоскости регистрирующего устройства, изменение интенсивности прошедшего через образец света определяется средними размерами образующихся агрегатов эритроцитов и скоростью их движения. В этом случае используют статическое исследование агрегации эритроцитов в определенной точке суспензии крови.

Возможности измерения прозрачности крови практически ограничены слоями толщиной 2..3 мм. Так как исследуемая проба крови представляет собой суспензию взвешенных эритроцитов, то на интенсивность прошедшего светового потока будут оказывать большое влияние рассеивающие свойства агрегатов эритроцитов. Кроме этого, при измерении в суспензии взвешенных эритроцитов интенсивность прошедшего светового потока зависит не только от размеров и формы эритроцитов, но и от их объемной концентрации и функционального состояния гемоглобина. В связи с этим более широкое применение получили методы исследования суспензии эритроцитов в отраженном световом потоке.

Для изучения агрегации эритроцитов применяют метод силлектрометрии, сущность которого состоит в уменьшении светорассеивания после прекращения перемешивания в процессе дезагрегации-агрегации клеток.

Этот принцип используется в устройстве Агрегатометр. Функциональная схема этого устройства приведена на рис. 1.12.

Рис. 1.12. Функциональная схема устройства Агрегатометр.

Агрегатометр является модификацией микроколориметра МКМФ-1. В заглушке 1, входящей в комплект микроколориметра, размещается лампа микронакаливания 2 таким образом, что свет от нее был направлен на стенку кюветы 3 и после отражения от содержимого кюветы попадал на фотоэлемент 5, пройдя предварительно через красный светофильтр 6. Дезагрегацию эритроцитов вызывали интенсивным перемешиванием мешалкой 7, насажанной на вал электродвигателя. Агрегация эритроцитов регистрируется на графопостроителе.

Разновидностью конструкции агрегатометра является пьезодинамический агрегатометр. В поле микроскопа со встроенным фоторезистором располагается предметное стекло с наклеенным на расстоянии 3 диаметров эритроцита покровным стеклом. На покровном стекле жестко закреплен пьезокристалл, питаемый от звукового генератора. В полость между стеклами вводится проба гепаринизированной цельной крови. По мере увеличения напряжения звукового генератора возрастает мощность колебания верхнего стекла, и агрегаты начинают разрушаться. Соответственно меняются экстинция и сигнал с фоторезистора. По достижении полной дезагрегации и выход кривой, регистрируемой самописцем, на плато, напряжение сбрасывается и регистрируется процесс спонтанной агрегации. Метод прост в техническом обеспечении, достаточно информативен, воспроизводим и очень чувствителен.

2.7. Методы измерения реологических свойств крови Исходя из исследования реологических характеристик крови и влияющих на них факторов можно заключить, что основное значение для оценки реологических свойств крови имеет ее агрегационное состояние. В настоящее время многие исследователи большее внимание уделяют изучению микрореологических свойств крови, хотя использование вискозиметрии не утратило своей актуальности. Рассмотрим основные методы измерения реологических свойств крови с помощью вискозиметрии.

Все существующие вискозиметры условно разделяются на 2 группы: с однородным полем напряжений и деформаций Ч ротационные реометры с различной геометрией рабочих частей (цилиндрические, дисковые, конусплоскость и др.) и относительно неоднородным полем напряжений и деформаций Ч капиллярные вискозиметры, приборы, работающие по методу Стокса, по принципу регистрации механических, электрических, акустических колебаний.

В настоящее время наибольшее распространение получили 2 типа вискозиметров - капиллярные и ротационные. В основу капиллярных вискозиметров положено плоское сдвиговое течение. В этих вискозиметрах жидкость протекает по трубке с точно известными размерами под действием заданной разницы давлений между концами трубки.

В ротационных вискозиметрах, или реометрах, сдвиговое течение осуществляется вращательным движением и рассчитывается по формулам, взятым из гидродинамики. Исследуемую жидкость помещают в зазор между двумя соосными цилиндрами или конусами (могут быть применены и другие поверхности вращения, располагаемые соосно). Один из цилиндров (чаще всего внутренний) укрепляют к динамометру, а другой приводят во вращение с определенной угловой скоростью. Вследствие вязкого сопротивления жидкости, заключенной между цилиндрами или конусами, возникает момент вращения. Вязкость оценивают по величине момента вращения. Применяют также вискозиметры, в которых внутренний цилиндр плавает в испытуемой жидкости. Вязкость в этом случае оценивают по угловой скорости свободно плавающего цилиндра, который может быть приведен во вращение магнитом, взаимодействующим с железным сердечником, помещаемым внутри цилиндра или роторной насадкой, погруженной в передаточную жидкость, заливаемую в полый цилиндр. В настоящее время предложены различные модификации ротационных реометров. Наиболее распространенные - промышленные вискозиметры фирмы Brookfield (США), Contraves (Швейцария). У нас широкое распространение получил вискозиметр со свободно плавающим цилиндром конструкции В.Н. Захарченко. Вязкость биологических жидкостей ньютоновского типа изучают с помощью вибрационных методов, основанных на возбуждении колебаний в жидкости и измерении скорости их затихания (к приборам такого типа относятся ультразвуковые вискозиметры), путем определения времени падения шарика между двумя отметками в трубке, заполненной исследуемой жидкостью (вискозиметр Гепплера) и др.

В заключении следует отметить, что несомненный прогресс в развитии реологической техники позволяет изучать биофизические и биохимические свойства крови для управления микрорегуляцией при гемодинамических и метаболических расстройствах. Вместе с этим, на сегодняшний день использование различных методов определения гемореологических параметров не позволяет найти стандарты количественного контроля, что необходимо для клинической практики.

Таким образом, несмотря на успехи в исследовании реологических свойств крови, достижения в применении гемореологических методов исследования в клинике и в приложении этих данных к диагностике, прогнозированию течения и исхода заболеваний, актуальной остается задача разработки методов анализа гемореологии, объективно отражающих агрегационные и реологические свойства крови.

2.8. Клинико-диагностическое значение теста СОЭ Изменения крови при заболеваниях крайне разнообразны и зависят от тяжести процесса, общей реактивности организма и сопутствующих осложнений. При анализе гематологических изменений необходимо учитывать, что существенное влияние могут оказывать различные лечебные и диагностические воздействия: медикоментозное лечение, оперативные вмешательства, физиотерапия, лучевая терапия, диагностические процедуры. При гематологической патологии исследования клеток крови приобретают первостепенное диагностическое значение.

абораторное обследование необходимо проводить с учетом клинических данных и состояния больного. С помощью показателей клеток крови проводится дифференциальная диагностика, выбирается схема лечения, наблюдаются результаты терапии и т. д. В сложившейся к настоящему времени системе клинического мышления гематологические данные имеют очень важное значение, так как являются одним из существенных элементов характеристики клинико-физиологического статуса больного и динамики развития болезни. Использование результатов исследования крови составляет неотъемлемое звено процесса диагностики и последующего наблюдения за результатами развития патологического процесса на фоне проводимых лечебных мероприятий.

Pages:     | 1 |   ...   | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |   ...   | 26 |    Книги по разным темам