Лабораторная диагностика риккетсиозов сельскохозяйственных животных
Курсовой проект - Сельское хозяйство
Другие курсовые по предмету Сельское хозяйство
?ватой окраски.
Гистопатологически обнаруживают увелечение содержания гемосидерина в Купферовских клетках печени, а также в клетках сетчато-клетчатого слоя желудка.
Характеристика возбудителя
Морфология и тинкториальные свойства.
Возбудитель эперитрозооноза полиморфен, может иметь округлую, овальную, палочковидную, гантелевидную, кольцевидную формы, могут встречаться в виде запятой и иметь зернистость. Размер от 0,2 до 2 мкм, у скоплений от 1,0 до 2,5 мкм. В препаратах из крови лежат индивидуально или цепочкой на внешней оболочке эритроцита и могут находиться внутри эритроцита. При лихорадочном состоянии можно обнаружить свободно лежащие бактерии.
Эперитрозооны паразитируют на эритроцитах, тромбоцитах, лейкоцитах и имеют в мазках крови окрашенных по Романовскому - Гимзе вид нежных розоватых или розовато-фиолетовых полиморфных образований. По Здродовскому эперитрозооны окрашиваются в розово-красный цвет.
Лабораторная диагностика.
Для лабораторной диагностики нужна сыворотка крови, или цельная кровь стабилизированная гепарином или другим антикоагулянтом.
Диагноз на Eperythrozoon suis ставится комплексно на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений. Решающим в постановке диагноза является лабораторная диагностика. Лабораторная диагностика включает:
Микроскопический метод - приготовление мазков крови, окраска по Романовскому - Гимзе и Здродовскому, микроскопия с целью обнаружения эперитрозоонов;
Серологический метод - обнаружение специфических антител в сыворотке крови с помощью РСК, ИФА, идентификация антигена в ИФА;
Молекулярно-генетический метод - полимеразная цепная реакция (ПЦР);
Биологический метод - заражение восприимчивых к эперитрозоонозу животных;
Гематологические исследования - выведение лейкограммы, определение гемоглобина, количества эритроцитов, уровня гематокрита и железа в крови.
Гистологический метод - проводят гистологическое исследование печени, почек и селезенки с целью установления скоплений гемосидерина.
Микроскопический метод.
У больных и подозрительных по заболеванию животных берут кровь из периферических сосудов (ухо, кончик хвоста, иногда глазной синус), не допуская гемолиза эритроцитов. Кровь стабилизируют Трилоном Б, гепарином, лимоннокислым натрием. Лучшие результаты животных получают при исследовании крови от животных с острым течением эперитрозооноза. Готовят мазки крови по общепринятой методике сразу после взятия крови. Предметные стекла должны быть идеально чистыми и обезжиренными. Температура крови должна быть 37 ?С, иначе эритроциты агглютинируются из-за холодной агглютинации, затрудняющей выявление Eperythrozoon suis в мазках. После приготовления мазков крови их высушивают и фиксируют химическим способом: метиловым спиртом - 5 минут, этиловым спиртом - 30 минут, жидкостью Никифорова (этиловый спирт ректификат 96? и эфир для наркоза в соотношении 1:1) - 30 минут.
Мазки окрашивают по Романовскому - Гимзе или Здродовскому.
Техника окраски по Романовскому - Гимзе.
На фиксированный мазок наносят краску разведенную дистиллированной водой (рН 7,0 - 7,2 ) в соотношении 3 капли краски на 2 мл воды, окрашивают в течение 30 - 45 минут. Промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и микроскопируют при общем увеличении в 900 - 1800 раз.suis окрашивается в голубой цвет с различными оттенками в виде полимофных микроорганизмов на мембране эритроцита. Эритроциты розовые.
Техника окраски по Здродовскому.
На фиксированный мазок наносят карболовый раствор Циля предварительно растворенный в бидистиллированной водой или фосфатным буфером при рН 7,4 в соотношении 10 - 15 капель краски на 10 мл воды или буфера на 5 минут. Затем быстро (1 - 3 секунды) дифференцируют в 0,5%-ной лимонной или 0,15%-ной уксусной кислоте путем погружения мазка в ванночку с кислотой. Промывают водой (обильно) и докрашивают 0,5%-ным раствором метиленовой сини 10 секунд. Промывают, высушивают на воздухе и микроскопируют.
Эперитрозооны окрашиваются в рубиново-красный цвет, клеточные элемнты в голубой (протоплазма) или синий (ядра) цвет.
При остром течении риккетсии в виде зерен поражают 80 - 100% эритроцитов; при хронической и субклинической - 10 - 30% эритроцитов с единичными зернами; в латентной форме не обнаруживаются.
Обнаружение микроорганизмов с характерной морфологией и тинкториальными свойствами является основанием для постановки диагноза на эперитрозооноз.
Серологический метод
Включает исследование сыворотки крови в РСК и ИФА с целью выявления антител. ИФА может быть использована для идентификации возбудителя. Постановка серологических реакций проводится согласно наставлению по применению тест-систем.
Молекулярно-генетический метод.
Предусматривает постановку ПЦР. Данный метод является наиболее чувствительным и специфичным в идентификации Eperythrozoon suis.
Биологический метод.
Проводится на поросятах 2 - 4 месячного возраста. Поросят инфицируют кровью или переливанием крови от больного животного здоровому. Клинические признаки заболевания проявляются через 3 максимум 4 недели. Биопробу считают положительной при характерной клинической картине и обнаружении возбудителя микроскопическим методом.
Гематологические исследования.
Кровь, взятая непосредственно в течении лихорадки, имеет блестящую поверхность и не осаждается на стенках пробирки, а агглютинируется при комнатной температуре. Микроаг