Эколого-генетический мониторинг водоемов вблизи биостанции Ажендарово
Курсовой проект - Экология
Другие курсовые по предмету Экология
тинное микроядро должно быть видно в эритроците, обычно ближе к периферии и находиться в фокусе, когда чётко виден контур эритроцита. (Кассирский, Алексеев, 1970). При смещении объектива микроскопа истинные микроядра не должны сдвигаться относительно контура эритроцита. Если в поле зрения между эритроцитами много осажденных гранул красителя, то такой препарат нельзя использовать для микроядерного анализа. Окрашивание препаратов проводили в течение 15 мин. 5% раствором красителя Гимза (Merk), приготовленного на фосфатном буфере pH - 6,8. Окрашенные препараты промывали дистиллированной водой и сушили на воздухе. Цитогенетический анализ проводили под световым микроскопом Nikon eclipse - E200 с использованием увеличения х 1000. От каждого экземпляра анализировали по 1000 полихроматофильных эритроцитов. Оценку достоверности различий по изучаемым цитогенетическим параметрам проводили непараметрическим методом с использованием критерия Манна-Уитни
Рисунок 2. Микрофотография препарата цельной крови Серебряного карася (х 400)
Рисунок 3. Микроядро в эритроците Серебряного карася (х 1000)
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение
В табл. представлены результаты цитогенетического анализа микроядер в эритроцитах сибирского хариуса, полученные ко времени подготовки отчета для двух точек контрольного отлова: р.Томь (Затон) и оз. Ажендарово. Как следует из данных табл.1, доля клеток, содержащих в своем составе мутации хромосом (микроядра) в выборке серебряного карася обитающего в р.Томь составила в среднем 0.570.30‰. Это значение оказалось достоверно (р = 0,007) ниже аналогичного показателя (1.330.71‰), выявленного в выборке карася обитающего в оз. Ажендарово (группа сравнения).
Таблица
Фоновый уровень микроядер в эритроцитах Серебряного карася, обитающего на территории биостанции Ажендарово
Исследуемая выборкаЧисло экземпляровЧисло клетокДоля клеток с микроядрами, ‰, M mДоля клеток с мостом, ‰, M mр. Томь (Затон)660000.570.300.140.14оз. Ажендарово770001.330.710.170.17
Доля клеток с мостом, которая оценивалась в сравниваемых выборках в качестве дополнительного цитогенетического показателя, также оказалась ниже в популяции серебряного карася обитающего в р. Томь (0.140.14 ‰ и 0.17 0.17‰ соответственно), однако эти различия оказались недостоверны (р>0,05).
Выводы
1.Микроядерный тест в эритроцитах серебряного карася оказывается достаточно чувствительным для проведения биологического мониторинга за генотоксическими параметрами водной среды.
2.Уровень микроядер в эритроцитах серебряного карася, обитающего в озере Ажендарово, достоверно превышает аналогичный показатель для выборки из Ажендаровского затона р. Томь.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Воробьев, А.И. Руководство по гематологии / А.И. Воробьев, Ю.И. Лорие. - М.: Медицина, 1985. - 367 с.
2.Воронов, А.П. О морфологических изменениях крови в кроветворных органах под влиянием бензола и его производных / А.П. Воронов // Тр. X съезда терапевтов СССР. - М., 1929. - С.12-20.
.Выскубенко, И.Ф. Применение микроядерного теста для выявления органоспецифичности потенциальных канцерогенов / И.Ф. Выскубенко // Всесоюз. симпоз. Объем и методы генотоксической оценки и побочных эффектов биологически активных веществ. - Л., 1989. - 25 с.
.Гаврилов, O.K. Клетки костного мозга и периферической крови / О.К. Гаврилов, Г.И. Козинец, И.Б. Черняк. - М.: Медицина, 1985. - 281 с.
.Гольдберг, Д.И. Метод обогащения препаратов базофильно-зернистыми эритроцитами / Д.И. Гольдберг. - М., 1937. - С. 102-104.
.Гольдберг, Д.И. О так называемой зернистой дегенерации гемоглобина, обнаруживаемой при суправитальной окраске / Д.И. Гольдберг. - М., 1938. - С. 125-127.
.Гончарова, Р.И. Мутагенная активность диметилтерефталата при использовании микроядерного теста на мышах / Р.И. Гончаров // XIV ежегодная конференция Европейского общества по мутагенам внешней среды. - М., 1984. - 199 с.
.Джикидзе, Э.К. Морфологические и цитогенетические изменения в костном мозге обезьян в отдаленные сроки после хронического облучения в малых дозах / Э.К. Джикидзе, Л.П. Косиченко, М.И. Куксова // Радиобиология. - Томск, 1990. - С. 281-285.
.Журков, B.C. Анализ частоты нормохромных эритроцитов с микроядрами в периферической крови мышей как метод выявления мутагенов / В.С. Журков, П. Реснер, А. Басторнова, Е.Г. Фельдт // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1986. - № 8. - С. 222-224.
.Журков, B.C. Метод учета полихроматофильных эритроцитов с микроядрами в костном мозге млекопитающих / В.С. Журков, Е.Г. Фельдт // Статистическая обработка данных тестирования на мутагенность: Методические указания. - Вильнюс, 1989. - С. 29-31.
.Ильинских, Н.Н. Биологические факторы мутагенеза у человека / Н.Н. Ильинских // Генетика человека и патология. - Томск, 1989. - 68 с.
.Ильинских, Н.Н. Физиологические факторы мутагенеза в связи с изменением иммунореактивности организма / Н.Н. Ильинских // III школа-семинар по генетике и селекции животных. II научные чтения памяти академика Д.К. Беляева. - Новосибирск, 1989. - 47 с.
.Ильинских, Н.Н. Использование микроядерного теста в скрининге имониторинге мутагенов / Н.Н. Ильинских, И.Н. Ильинских, В.Н. Некрасов // Цитология и генетика. - 2001. - Т. 22, № 1. - С. 67-72.
.Кассирский, И.А. Клиническая гематология / И.А. Кассирский, Г.А. Алексеев. - М.: Медицина, 1970. - 999с.
.Кемеровская область. // Большая Энциклопедия Кирилла и Мефодия. Электронная версия. - М., 2004
.Козаченко, В.И. Возможности метода учета микроядер в эритроцитах печени эмбрионов мьш