Целюлiтнi препарати
Информация - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие материалы по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
ультивування. Великий вплив на бiосинтез целюлаз чинять умови культивування. Вiдмiнна особливiсть бiльшостi продуцентiв целюлаз це велика тривалiсть культивування. Зазвичай максимум активностi припадаСФ на 4-8 добу. Аналiз даних показуСФ, що в культуральнiй рiдинi за оптимальних умов вирощування може накопичуватися вiд 2 до 22 од. АФБ/мл та вiд 200 до 500 од. КМЦ/мл.
Видiлення ферменту. На основi глибинноi культури можна отримати технiчнi препарати целюлаз та очищенi целюлолiтичнi препарати. Технiчнi препарати отримують шляхом висушування розпилюванням концентратiв культури без вiддiлення твердоi фази або випаровування ii рiдкоi фази. Для зниження втрат при сушцi в культуральну рiдину вводять стабiлiзатори, частiше за все невелику кiлькiсть деяких солей. Комплекснi очищенi целюлолiтичнi препарати, наприклад iз Т. viride, можна отримати осадженням органiчними розчинниками та висолюванням сульфатом амонiю.
Якiсний та кiлькiсний склад целюлозних комплексiв варiюСФ в широких межах в залежностi вiд способу видiлення окремих компонентiв.
Для отримання очищених препаратiв целюлаз використовують комбiнацiю найрiзноманiтнiших заходiв: осадження та фракцiонування органiчними розчинниками, солями, хроматографiю, електрофорез та iн..
Афiнна хроматографiя. Ще в 1973 роцi РЖ. Н. Канфером була проведена афiнна хроматографiя целюлаз, в результатi чого на сефарозi 4В з звязаним бензидином в якостi носiя та ?-глюконолактоном в якостi лiгiнда була видiлена целобiоза. Найбiльшу цiкавiсть являють собою дослiдження по афiннiй хроматографii целюлаз на мiкрокристалiчнiй целюлозi або целюлозi у виглядi подрiбненого порошкоподiбного фiльтрувального паперу. Використання целюлози дозволяСФ роздiлити целюлозний комплекс на основi рiзного ступеня спорiдненостi компонентiв до субстрату.
Афiнна хроматографiя дозволяСФ отримувати високо очищенi целюлознi комплекснi препарати з виходом активностi до 50% безпосередньо з фiльтрату культуральноi рiдини.
Для спiвставлення препаратiв, що очищенi за допомогою афiнноi хроматографii, з препаратами, отриманими осадженням етиловим спиртом, була проведена iх гель фiльтрацiя на ультра гелi АсА 54 (рис. 3). На рисунку 3а видно, що препарат з iндексом Г10Х мiстить значну кiлькiсть баластного бiлку та пiгменту. Препарат, очищений афiнною хроматографiСФю (рис. 3б), не мiстить пiгментiв i мiстить тiльки двi групи бiлкiв, одна iз яких (високомолекулярна) не володiСФ активнiстю, але доля ii не велика.
Таким чином, експерементально показано,що афiнною хроматографiСФю на целюлозi можна селективно видiлити iз неочищених препаратiв i культуральноi рiдини целюлози при незначнiй кiлькостi супутнiх неактивних бiлкiв. Можна з достатньою впевненiстю сказать, що цей спосiб очистки досить перспективний та рентабельний.