Химические методы определения сахаров
Контрольная работа - Химия
Другие контрольные работы по предмету Химия
?ивой: Концентрацию исходного раствора глюкозы устанавливают по методу Бертрана. Для этого берут три пробы по 5 см3 1 %-ного раствора глюкозы, добавляют к каждой пробе по 15 см3 воды и 40 см3 реактива Феллинга. Концентрацию исходного раствора глюкозы рассчитывают как среднее значение из трех параллельных определений. Точную концентрацию рабочих растворов глюкозы рассчитывают по данным анализа исходного раствора. Сухие конические колбочки на 100 см3 заполняют согласно табл. 2.
В заполненных колбочках проводят определение содержания глюкозы колориметрическим методом и строят калибровочную кривую в координатах оптическая плотность количество глюкозы, мг.
Определение восстанавливающих сахаров методом Шомадьи Нельсона (предшественник метода Фолина-Ву)
Колориметрический метод Шомадьи Нельсона основан на реакции восстанавливающих сахаров с реактивом Шомадьи Нельсона, в результате которой образуется окрашенное соединение молибденова синь общего состава MonO3n-x голубого цвета. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию восстанавливающих углеводов, которые определяют по величинам оптических плотностей при 508 нм, по калибровочной кривой, составленной с применением модельных растворов. Метод неспецифичен, трудоемок.
Реактивы и материалы: а) Реактив Шомадьи.
a 24 г карбоната натрия и 12 г тартрата калия натрия (калий натрий виннокислый средний) помещают в коническую колбу вместимостью 500 см3 и добавляют 250 см3 дистиллированной воды. Затем приливают 40 см310 % раствора сульфата меди, перемешивают и добавляют 16 г гидрокарбоната натрия.
b.18 г Na2SO4 растворяют в 500 см3 горячей дистиллированной воды. Раствор кипятят в течение 40 минут для удаления СО2, затем охлаждают.
Cмешивают (a+b) в мерной колбе на 1 дм3, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. В течение первых двух-трех суток хранения реактива Шомадьи оседает небольшое количество меди с примесями. Этот осадок отфильтровывают, готовый раствор хранят в темной склянке.
б) Реактив Нельсона.
a 25 г модибдата аммония помещают в мерную колбу на 500 см3 и растворяют в 150 см3 Н2О. Раствор перемешивают, к нему осторожно небольшими порциями добавляют 21 см3 концентрированной H2SO4 (х. ч.) при непрерывном перемешивании.
b 3 г гептагидрата гидроортоарсената натрия (Na2HAsO4 7Н2О) растворяют отдельно в химическом стаканчике в 50 см3 Н2О
(a+b). Получается прозрачный раствор светло-желтого цвета, его доводят до метки водой и выдерживают в термостате при 37 "С в течение 2 суток. После выдержки раствор готов к употреблению.
Ход работы.
1.Проведение анализа: К 1 см3 испытуемого раствора добавляют 1 см3 реактива Шомадьи, перемешивают и выдерживают на кипящей водяной бане в течение 15 минут:
СuSO4 + 2NaOH [гидролитический] Cu(OH)2 + Na2SO4
Затем к охлажденной смеси добавляют 1 см3 реактива Нельсона и доводят объем до 10 см3 дистиллированной водой:
Na2HAsO4 + 15H2SO4 + 12(NH4)2MoO4 [в реактиве Нельсона] (NH4)3H4[As(Mo2O7)6] + 21(NH4)2SO4 + Na2SO4 + 10H2O
2(NH4)3H4[As(Mo2O7)6] + Cu2O 4Mo6O17 + 2CuO +(NH4)2SO4 + 2(NH4)2HAsO4 + 3H2O
Оптическую плотность полученного раствора измеряют при 590 нм с использованием кюветы с шириной грани 5 мм.
2.Построение калибровочной кривой. Калибровочную кривую строят после проведения колориметрической реакции модельных растворов глюкозы с концентрацией от 0,02 до 0,14 мг/см3. Изучаемая зависимость выражается прямой линией, выходящей из начала координат.
Определение фруктозы и других кетосахаров (по Мак-Рери и Слаттери)
Определение основано на способности кетосахаров давать вишневую окраску с резорцином в кислой среде:
Реактивы и материалы: а) Спиртовой раствор резорцина
1 г резорцина растворить в 1 дм3 95%-ного этанола.
б) 30 %-ный раствор НС1 (не должен давать окраску с резорцином).
в) Стандартный раствор фруктозы
100 мг фруктозы растворяют в 100 см3 насыщенного водяного раствора бензойной кислоты.
г) Рабочий раствор фруктозы
1 см3 стандартного раствора фруктозы разводят в мерной колбе на 100 см3
Ход работы. В пробирку вносят 5 см3 испытуемого раствора (содержащего от 1 до 8 мг фруктозы в 100 см3 раствора), 5 см3 спиртового раствора резорцина и 15 см3 30 %-ного раствора НСI. Содержимое пробирки перемешивают и помещают на 20 минут в водяную баню при температуре 80 С. Затем содержимое пробирки охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность на ФЭКе при 540 нм (зеленый светофильтр). В качестве контроля используют раствор, в котором вместо 5 см3 испытуемого раствора берется 5 см3 Н2О. Количество фруктозы определяют по калибровочной кривой. Для этого готовят серию разведений рабочего раствора фруктозы, в каждом из которых проводят определение фруктозы по описанной выше методике. Калибровочную кривую строят в координатах: оптическая плотность количество фруктозы, мг.
Газохроматографическое определение отдельных сахаров
Метод основан на переводе углеводов типа глюкозы, фруктозы, арабинозы, ксилозы, галактозы, сахарозы, мальтозы, лактозы, раффинозы, а также полиолов сорбита и инозита в пищевых продуктах в триметилсилильные производные с последующей их идентификацией на газовом хроматографе.
Аппаратура, реактивы и материалы: а) Газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором и устройством для программирования температуры. б) Стек