Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии
На правах рукописи
КАТАРЖНОВА ЮЛИЯ ВЯЧЕСЛАВОВНА
ВЛИЯНИЕ СИНТЕТИЧЕСКОГО ТИМОГЕНА
НА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ И МОРФОБИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ОРГАНИЗМА ПОРОСЯТ НА ПОДСОСЕ
03.03.01 - физиология
АВТОРЕФЕРАТ
на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Курск - 2012
Работа выполнена в ФГБОУ ВПО Белгородская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Я. Горина
Научный руководитель: | доктор биологических наук, профессор, Заслуженный ветеринарный врач РФ Безбородов Николай Васильевич |
Официальные оппоненты: | Еременко Виктор Иванович, доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. проф. И.И.аИванова, зав.кафедрой радиобиологии, гистологии и фармакологии, профессор; |
Федорова Марина Зотовна, доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО Белгородский государственный университет, зав. кафедрой, анатомии и физиологии живых организмов, профессор | |
Ведущая организация: | ФГБОУ ВПО Орловский государственный аграрный университет |
Защита состоится л_____ _______________ 2012 года в ______ часов на заседании диссертационного совета Д 220.040.03 при ФГБОУаВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И.Иванова по адресу: Россия, 305021 г. Курск, ул. К.Маркса, 70. Тел. (4712) 53-13-30, факс (4712) 53-84-36.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова.
Автореферат разослан л______ _________________2012г.
Ученый секретарь
диссертационного совета Рыжкова Г.Ф.
- ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Промышленное свиноводство, как основная отрасль скороспелого животноводства, играет большую роль в обеспечении населения продуктами питания и сырьем для легкой промышленности.Высокая плодовитость, небольшой период плодоношения и скороспелость свиней способствует при наименьших затратах труда и средств в короткие сроки получить значительное количество продукции (Антонец Г., 1975; Квасницкий А.В., 1980; Гильман З.Д., 1982; Герасимов В.И. с соавт., 1995; Походня Г.С., 1994, 1996; Бузлама В.С., 2000; Гамко Л., 2008; Дарьин А., 2008). Вместе с тем, во многих свиноводческих фермах и комплексах фактическая плодовитость свиноматок часто не превышает 70% от потенциально возможной за счет малоплодия, прохолост (бесплодие) маток составляет в среднем 20% основного маточного поголовья, а снижение сохранности и продуктивных показателей поросят приводит к потере рентабельности хозяйства за счет недополучения и удорожания продукции.
В настоящее время, биотехнологические методы повышения сохранности и продуктивных показателей поросят в различные периоды выращивания включают применение различных биологически активных средств активизации обменных процессов, но в то же время, как показывают результаты исследований и производственные показатели хозяйств, вопрос остается весьма актуальным и требует дальнейшего изучения и совершенствования (Пивовар Л.М., 1984; Кануте М., 1993; Кошелева Г., 2004; Малинин В.В., 2004; Найденский М., 2006; Юдин М., 2008).
Цель и задачи исследований. Целью исследований было определение адаптационно-метаболических изменений и эффективности влияния синтетического иммуномодулятора тимогена на продуктивные показатели организма поросят на подсосе при промышленном выращивании.
В задачи исследований входило:
- определение гормональных изменений в крови у поросят подсосного периода;
- исследование морфологических и биохимических показателей в крови поросят опытных групп;
- исследование гистоструктурных изменений в тканях вторичных иммунокомпетентных органов и органов пищеварения у поросят;
- определение эффективности применения иммуномодулятора тимогена для повышения сохранности и продуктивных показателей поросят на подсосе и в раннем периоде доращивания.
Научная новизна. Комплексно изучены особенности механизмов активизации обменных процессов, повышения продуктивных показателей и сохранности поросят на подсосе, после применения синтетического иммуномодулятора тимогена. Проведенными исследованиями определены физиолого-биохимические и гистоструктурные изменения в тканях организма поросят после применения тимогена.
Практическая значимость работы. На основании полученных результатов эффективности применения синтетического иммуномодулятора тимогена дано научное обоснование к его практическому применению в промышленном свиноводстве, в качестве средства стимуляции прироста живой массы, повышения сохранности и предупреждения расстройств желудочно-кишечного тракта поросят на подсосе.
Положения, выносимые на защиту.
- Применение синтетического тимогена поросятам-сосунам стимулирует формирование защитно-приспособительных реакций.
- Глутамил-триптофановый комплекс тимогена проявляет гормонокорригирующее действие, при введении его поросятам.
- Применение иммуномодулятора тимогена поросятам на подсосе, активизирует морфобиохимические показатели крови.
- Гистоморфологические изменения в тканях вторичных иммунокомпетентных органов и органов пищеварения у поросят на подсосе после применения тимогена, характеризуют биокорригирующие свойства препарата.
- Применение тимогена поросятам до отъема повышает их продуктивные показатели и сохранность.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на международных научно-производственных конференциях Белгородской ГСХА, 2010; Пермской ГСХА, 2010; ежегодных отчетах аспирантов факультета ветеринарной медицины Белгородской ГСХА (2008-2011 г.г.).
Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 5 статей, в том числе одна из перечня изданий рек. ВАК РФ.
Объем и структура диссертации.. Диссертация изложена по стандартной схеме на 143 страницах компьютерного текста. Список литературы включает 297 отечественных и 80 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 31 рисунком..
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Исследования по определению эффективности применения синтетического иммуномодулятора тимогена были проведены в условиях промышленного комплекса ( 80 тыс. гол. свиней), на поросятах породы крупная белая ЗАО Троицкое Губкинского района Белгородской области. Содержание животных и рацион кормления соответствовали предъявляемым требованиям в промышленном свиноводстве. Хозяйство благополучно по инфекционным и инвазионным заболеваниям. В опытные группы после клинического обследования подбирали здоровых новорожденных поросят по принципу пар-аналогов, у которых после рождения живая масса составляла 1080-1150 грамм. У поросят отмечали хорошо выраженный сосательный рефлекс и подвижность.Для определения влияния синтетического тимогена на поросят в подсосный период и при доращивании (отъем в хозяйстве на 21-е сутки) было сформировано три группы.
Первой группе (n=50) поросят в возрасте с 4-х по 9-е сутки вводили внутримышечно 0,01% раствор тимогена в дозе 3 мл/гол/сут. Второй группе (n=50) поросят тимоген вводили в возрасте с 14-х по 19-е сутки в аналогичной дозе. Третья группа (n=50) поросят - контрольная (интактные животные).
Ранее проведенные исследования эффективности действия тимогена на животных (Глазунова Н.М., 2006; Жукова Е.С., 2007; Черепченко Е.О., 2007; Беляева С.Н., 2008; Найденов Е.А., 2008; Попов Д.В., 2008; Пензева М.Н., 2009; Бондаренко Е.М., 2009) показали, что механизмы его действия в организме, основываются на индукции глутамил-триптофановым комплексом препарата последующих биохимических реакций и процессов, возможно через систему вторичных посредников, часть которых очевидно также имеет пептидную природу. В 1991 году утверждены Технические условия и наставление на применение тимогена в ветеринарии (ТУ 10.07.169-91). Тимоген, представляет собой дипептид, являющийся индивидуальным иммуноактивным аналогом препаратов приготовляемых из тканей тимуса. В его состав входят глутаминовая кислота и триптофан (рис. 1).
|
NH
Рис. 1. Структурная формула тимогена
Для проведения исследований крови, ее взятие у поросят исследуемых групп, осуществляли из орбитального венозного синуса на 10-е, 14-е, 21-е (в течение 6 часов после отъема) и 30-е сутки.
В сыворотке крови исследовали содержание тироксина, кортизола, общего белка, альбуминов, глобулинов - , , , ААТ (аланинаминотрансферазу), АсАТ (аспартатаминотрансферазу), ЩФ (щелочную фосфатазу), Аа (альфа-амилазу), триглицериды, холестерин, креатинин, билирубин (общий), гемоглобин, эритроциты, СОЭ, лейкоциты, лейкограмму, лизоцимную (ЛАСК), бактерицидную (БАСК) и фагоцитарную (ФАСК) активности крови.
Определение биохимических показателей крови подопытных поросят проводили согласно общепринятых методик исследований (Воронин Е.С., 2002; Кондрахин И.П., 2004).
Определение тироксина и кортизола в сыворотке крови осуществляли по методике ферментного иммуноанализа, в основе которого лежит конкуренция немеченых и меченных ферментом антигенов за определенное количество антигенсвязывающих участков антител. Измерения по данным гормонам основаны на показаниях спектрофотометра оптической плотности, который измеряет оптическую плотность связанных гормонов с антителами, а концентрацию их в дальнейшем вычисляют по калибровочной кривой (Меньшиков В.В., с соавт., 1987; Инстр. Деп. гос, контроля качества, МЗ РФ, 2001; Кондрахин И.П., 2004).
Исследования по определению содержания общего белка проводили при помощи рефрактометрического метода, где по определению коэффициента преломления исследуемого вещества можно определить его количество (Титов В.Н., 1995). Изучение содержания альбумина в сыворотке крови проводили согласно методики с бромкрезоловым зеленым (Лукачева Т.И., 1977), которая основана на определении учета реакции по изменению окраски раствора и расчета показателей по калибровочной кривой. Определение белковых фракций в сыворотке крови осуществляли при помощи электрофореза на бумаге (Сентебова Н.А., с соавт., 1978; Меньшиков В.В., с соавт., 1987; Титов В.Н., 1995).Для определения ферментов ААТ, АсАТ использовали методику (Reitman S., et al., 1957), принцип действия которой основан на реакции переаминирования, где под влиянием АсАТ и ААТ образуются щавелевоуксусная и пировиноградные кислоты.
Определение -амилазы (Аа) осуществляли при помощи метода Каравея, по которому Аа гидролизует расщепление крахмала с последующим образованием конечных продуктов, которые не дают цветной реакции с йодом. По интенсивности окраски судят об активности фермента (Caraway W.T., 1959). Активность ЩФ определяли с помощью унифицированного метода гидролиза nЦнитрофенилфосфата натрия с образованием nЦнитрофенола, дающего в щелочной среде желтое окрашивание и последующим расчетам активности по калибровочному графику (Lowzy O.A., 1940; Меньшиков В.В., 1987). Содержание в крови триглицеридов определяли путем применения модифицированного метода Ван-Ханделя и Зильверсмита (1957) согласно которому, глицерол освобожденный омылением окисляется до формальдегида, а концентрация последнего определяется колометрически (Архипов А.В., 1979).
Для определения в сыворотке крови содержания холестерина использовали метод Илька (Кондрахин И.П., 2004). По этому методу окрашивание раствора испытуемой сыворотки, ледяной уксусной кислотой, уксусным ангидридом и концентрированной серной кислотой с последующим колориметрированием на ФЭКе, дает показатели при расчете которых на калибровочном графике определяют количество холестерина (Trinder P., 1969).Определение креатинина в сыворотке крови проводили по методу Лоппера, по которому креатинин реагирует с пикриновой кислотой в щелочной среде давая окрашенное соединение. Интенсивность окраски свидетельствует о концентрации креатинина (Меньшиков В.В., 1987). Исследования по определению количества билирубина (общего) в сыворотке крови проводили по методике Ендрассика - Клеггорна - Грофа (Меньшиков В.В., 1987).
Изучение содержания гемоглобина в крови осуществляли при помощи гемоглобинцианидного метода (Грибова И.А., 1979). Метод основан на принципе окисления гемоглобина в метгемоглобин железосинеродистым калием, а образующийся при этом с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин определяли колориметрически.
Лизоцимную активность сыворотки крови определяли фотоэлектроколориметрическим методом в модификации отдела зоогигиены УНИИЭВ (1979, Украина) с применением суточной культуры Мicrococcus lysodeiticus, которая содержала 500 млн. микробных клеток в 1 мл. Определяли непрямую количественную реакцию лизоцима по вызыванию лизиса бактерий ( путем микроскопии).
Бактерицидную активность сыворотки крови определяли фотонефелометрическим методом по методике отдела зоогигиены УНИИЭВ (1979) с использованием суточной агаровой культуры E.Coli, содержащей 2 млрд. микробных тел в 1 мл. Метод основан на учете изменений оптической плотности среды, содержащей микробную взвесь и сыворотку крови из-за подавления размножения тест-микроба испытуемой сыворотки животных (Воронин Е.С., 2002).
Определение фагоцитарной активности нейтрофилов проводили под микроскопической оценкой учета числа бактерий, захваченных нейтрофилами в процессе их совместного инкубирования в термостате.
Определение содержания эритроцитов, лейкоцитов (камера Горяева), СОЭ (микрометод Панченкова) и отдельных видов лейкоцитов, осуществляли согласно общепринятых методов клинической лабораторной диагностики (Кондрахин И.П., 2004). У животных отбирали участки тканей из иммунокомпетентных органов и органов пищеварения. Гистоморфологические исследования по определению степени изменений в тканях отобранных органов у поросят, были проведены на животных первой, второй и третьей групп (n=3). В каждой группе проводили убой поросят, на 21-е сутки в течение 6 часов после отъема. Исследовали: лимфоузел (предлопаточный); тимус; печень; селезенку; желудок; двенадцатиперстную кишку; брыжейку кишечника. Отобранный материал для проведения гистологических исследований фиксировали в 10% растворе формалина с последующим приготовлением гистопрепаратов согасно общепринятых методик классической гистотехники (Канцельсон З.С., 1979; Гуков Д.Д., 2001). При проведении исследований в условиях производства, учитывали прирост живой массы наличие расстройств желудочно-кишечного тракта и сохранность поросят в группах. Основные лабораторные исследования проведены в клинико-диагностической ветеринарной лаборатории УНИ - Агротехнопарк Белгородской ГСХА, Вирусологической лаборатории Центра Госсанэпиднадзора Белгородской области и Патологоанатомической лаборатории гор. Больницы №2 г. Белгорода.. Всего в исследованиях использовано 170 здоровых поросят подсосного периода, на которых были проведены исследования по изучению эффективности применения тимогена, с целью выявления возможных механизмов действия по повышению естественной резистентности и продуктивных показателей животных (рис. 2).
Полученные результаты исследований обработаны статистически. Для определения достоверности разницы показателей у поросят между взятиями крови в исследуемых группах, применяли аргумент Стъюдента. Результаты считались достоверными начиная со значения р<0,05.
Рис. 2. Алгоритм исследований
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Гормональные изменения
Динамика содержания гормонов тироксина и кортизола в крови поросят исследуемых групп до и после применения тимогена представлена в таблице 1.
Динамика изменения уровня гормонов в сыворотке крови поросят исследуемых групп, с возрастом имела в основном одинаковую направленность изменений к моменту отъема, но наиболее значимой она была во 2-й группе. Так, у поросят этой группы к 21-му дню отмечено снижение катаболического гормона тироксина на 35,2% с сохранением этого уровня к 30-м суткам. В контрольной группе снижение составило 34,2%, но к 30-м суткам содержание тироксина не было стабильным у всех животных.
Таблица 1 - Содержание гормонов в крови поросят исследуемых групп
Группа | Исследуемые показатели, (n=5) | Возраст животных, (дни) | |||
10 | 14 | 21 | 30 | ||
1 | Тироксин, нмоль/л Кортизол, нмоль/л | 92,045,95 51,708,58 | 79,275,81 50,4528,76 | 79,726,75 46,1023,15 | 74,294,95 62,5517,30 |
2 | Тироксин, нмоль/л Кортизол, нмоль/л | 100,399,47 37,053,70 | 75,424,35* 41,198,70 | 65,081,50* 81,7323,31 | 65,776,43* 98,0913,42* |
3 | Тироксин, нмоль/л Кортизол, нмоль/л | 84,0510,63 71,7922,29 | 76,278,35 86,7626,22 | 55,325,13* 78,6821,49 | 64,723,84 79,3921,97 |
Примечание: * - р< 0,05; ** - р< 0,001
Концентрация кортизола у поросят 2-й группы имела тенденцию повышения к моменту отъема в 2,2 раза от состояния на 10-е сутки, а к 30-му дню достоверно повысилась от изначального в 2,6 раза. В контрольной группе содержание кортизола не имело значимых изменений.
Полученные данные содержания гормонов в крови животных исследуемых групп показали, что применение тимогена новорожденным поросятам с 14-х по 19-е сутки жизни имеет наиболее лучшую биокорригирующую направленность действия, способствующую снижению степени проявления второго физиологического иммунодефицита. Снижение содержания тироксина к 21-м суткам у поросят 1-й и 2-й групп по отношению к уровню на 10-е сутки составило соответственно 13,4 и 35,0%. В 3-й (контрольной) группе - 34,2%. Учитывая то, что тироксин влияет на интенсивность метаболизма углеводов, белков, жиров, воды и электролитов, снижение его уровня во 2-й и 3-й (контроль) группах замедляет процессы метаболизма за счет пониженного катаболического воздействия от этого гормона. Следует также считать, что у поросят 2-й и 3-й (контрольной) групп уменьшена кишечная абсорбция глюкозы, а сниженный уровень тироксина вызывает задержку воды и электролитов в организме поросят этих групп. Кроме того, исходя из данных многочисленных исследований, можно заключить, что в организме поросят 2-й группы тироксин более сильнее влияет на стимуляцию функции коры надпочечников, что отмечено нами при исследовании кортизола в сыворотке крови животных опытных групп.
Отмеченная картина динамики тироксина за период исследований свидетельствует о более интенсивных процессах поглощения кислорода клетками организма поросят 1-й группы, где за счет активизации клеток щитовидной железы, усиленно извлекаются из крови неорганические иодиды, поступающие в организм поросят с молозивом. Этот механизм связан (Teррermen Dж. с соавт., 1989; Рудаков В.В., 1990; Roskoski R., 1996; Лавин Н., 1999; Браверманн У.М., 2000 и др.) с процессом активного транспорта и активностью Na+, K+-АтФазы. Большая часть энергии, используемой клеткой, тратится на Na+, - K+ - АтФазный насос. Учитывая то, что функция щитовидной железы контролируется ретикулярной фармацией, гипоталамусом, гипофизом и эфферентными нервными волокнами, то следует предполагать инициацию глутамил-триптофановым комплексом препарата тимогена высших отделов ЦНС, откуда активизируется нейроэндокринная регуляция функции щитовидной железы.
Исследования динамики кортизола в сыворотке крови поросят опытных групп показали, что к моменту отъема и в первые десять дней после него наиболее значимыми, от изначального уровня, были повышения (в 2,6 раза) этого гормона у поросят 2-й группы (которые достоверно сохранялись до 30-дневного возраста), против практически неизменного его состояния в контроле и у поросят 1-й группы.
Полученные результаты подтверждают стимулирующий гомеостаз характер действия пептидов тимогена у поросят 2-й группы, а также гормонокорригирующие свойства глутамил-триптофанового комплекса препарата при становлении общего адаптационного синдрома.
3.2 Содержание белка
Полученные результаты содержания общего белка в крови поросят исследуемых групп показывают, что их уровень в начале исследований (10-е сут) находился в пределах физиологически нормальных значений (Николадзе М.Г., 2002). В последующем к 30-дневному возрасту отмечено снижение их уровня во всех группах: 1-я - на 16,6; 2-я - на 18,5 и 3-0я - на 22,1%. Учитывая то, что при голодании организма в первую очередь расходуются белки крови и отмечается снижение массы мышц и печени, чтобы обеспечить нормальное функционирование прежде всего сердца, мозга и других органов, отмеченные наименьшие изменения общего белка в крови поросят 1-й и 2-й групп свидетельствуют о биокорригирующих свойствах тимогена. Общая тенденция (во всех группах) снижения общего белка к моменту отъема, свидетельствует о возникновении второго физиологического (возрастного) иммунодефицитного состояния у поросят , который характеризуется прежде всего распадом колостральных иммуноглобулинов и несовершенством иммунной системы, что способствует снижению уровня иммуноглобулинов в крови. В 1-й группе поросят к 21-м суткам отмечено снижение -глобулинов от состояния на 10-е сутки в 2,3 раза, во 2-й группе - 2,2 раза и 3-й (контроль) группе - 3,2 раза. Поскольку развитие второго иммунодефицитного состояния начинается с резкого снижения содержания иммуноглобулинов, то применение тимогена поросятам 1-й и 2-й групп снижает интенсивность этого процесса. Следует также отметить, что превышение на 39,1% уровня снижения -глобулинов у поросят контрольной группы по отношению к снижению этого показателя в 1-й и 2-й группах, очевидно свидетельствует об усилении факторов подавления возможных воспалительных процессов в организме животных, получавших тимоген, так как повышение -глобулинов в основном происходит за счет увеличения белков-парапротеинов, появляющихся в ответ на возникновение воспалительной реакции. Во всех трех группах поросят отмечено повышение к моменту отъема уровня содержания альбуминов в сыворотке крови по отношению к исходному состоянию: в 1-й группе - на 22,3%; во 2-й группе - 28,5% и 3-й (контроль) группе - 1,9 раза. Поскольку увеличение содержания альбуминов часто происходит из-за процессов дегидратации организма, результаты динамики этих белков в крови поросят получавших тимоген, показали его биокорригирующую направленность действия. Содержание -глобулинов имело значимые изменения от начала исследований к 30-м суткам, у поросят 1-й и 3-й (контроль) групп. Повышение этих белков за это время соответственно составило в 2,3 и 1,5 раза. Учитывая то, что -глобулины содержат белок трансферин, который участвует в транспорте трехвалентного железа в различные ткани, наибольшее его повышение у поросят получавших тимоген характеризует положительное стимулирующее обменные процессы действие глутамил-триптофанового комплекса препарата. Динамика содержания -глобулинов имеет сходные изменения по группам поросят, уменьшаясь к времени отъема поросят и в ранний период доращивания. Снижение от уровня на 10-е сутки, к 21 суткам составило: в 1-й группе - 43,7%, 2-й группе - без изменений и 3-й (контроль) группе - 37,6% (тенденция снижения). Исходя из того, что -глобулины состоят из двух фракций 1- 2-глобулинов и последних в крови здоровых животных имеется крайне малое количество, то здесь очевидно следует иметь ввиду состояние 1-глобулинов в состав которых входят два белка 1-антитрипсин и 1-гликопротеин. Содержание обоих этих белков возрастает при возникновении воспалительных процессов.
Таким образом, у поросят 1-й группы проявился положительный, биокорригирующий характер действия тимогена по предотвращению возможного развития воспалительных процессов, скорее всего в органах связанных с функцией желудочно-кишечного тракта.
3.3. Показатели ипидного обмена в крови поросят
Содержание липидных компонентов в крови поросят исследуемых групп отражено в таблице 2.
Таблица 2 - Содержание липидов в крови поросят
Группа | Исследуемые показатели, (n=5) | Возраст животных, (дни) | |||
10 | 14 | 21 | 30 | ||
1 | Триглицериды, ммоль/л Холестерин, ммоль/л | 0,980,15 6,601,17 | 0,810,15 4,930,36 | 0,640,07 4,960,48 | 0,400,11* 2,050,07* |
2 | Триглицериды, ммоль/л Холестерин, ммоль/л | 0,980,19 5,560,78 | 1,060,08 5,040,44 | 0,570,04 5,131,04 | 0,310,03* 2,030,14* |
3 | Триглицериды, ммоль/л Холестерин, ммоль/л | 1,130,14 7,110,33 | 1,080,27 4,390,46* | 0,680,13* 5,411,39 | 0,310,11* 1,600,11** |
Изначальный уровень липидных показателей в крови (на 10-е сут) находился в пределах физиологической нормы. Полученные результаты содержания липидных компонентов в крови поросят исследуемых групп показали, что характер их изменения к 21-му дню и после отъема одинаков. В 1-й группе уровень триглицеридов снижался к моменту отъема, по сравнению с изначальным, на 34,7, во 2-й - 41,9 и 3-й - 38,2%, а холестерина соответственно: на 25,0; 7,8; 77,5%. А снижение по группам к 30-му дню, по сравнению с 21-м, составило соответственно: по триглицеридам - 37,5; 45,7; 54,5%, а холестерину - 58,7; 60,5; 70,5% (в пределах физиологически нормальных значений).
3.4 Показатели общего гематологического анализа
Для иммунологической оценки возникновения иммунодефицитного состояния и степени его влияния следует учитывать показатели клеточного иммунитета и общего гематологического анализа (Натвиг Д. и др., 1980). Динамика содержания эритроцитов в крови поросят опытных групп за период исследований характеризовалась одинаковой степенью физиологически нормального изменения в сторону увеличения к 30-м суткам по отношению к изначальному значению (10-е сут): 1-я группа - на 22,5%; 2-я группа - 49,6%; 3-я (контроль) группа - 43,8%. Наилучшие показатели получены у животных 2-й группы, где превышение от контроля составило 13,2%. СОЭ у поросят 3-й (контроль) группы имела большую (на 51,7%) тенденцию повышения к 21-м суткам, чем у поросят 2-й группы и в 2,1 раза, чем у поросят 1-й группы, что очевидно связано с увеличением в крови доли фибриногена и мукополисахаридов, содержание которых повышается при возникновении факторов приводящих к анемии.
3.5. Содержание креатинина и билирубина в крови поросят
исследуемых групп
Уровень креатинина и билирубина в крови характеризует возможность как появления мышечной дистрофии и почечной недостаточности за подсосный период, так и детоксикационные свойства печени у поросят исследуемых групп.
У поросят 1-й группы содержание исследуемых показателей за период исследований составило: на 10-е сутки - креатинин - 141,562,14 мкмоль/л; билирубин - 5,082,16 мкмоль/л; на 14-е - креатинин - 164,847,17 мкмоль/л (превышение на 16,4%), р< 0,02; билирубин - 18,072,65 мкмоль/л (увеличение в 3,6 раза); на 21-е - креатинин - 123,74,94 мкмоль/л; билирубин - 9,142,04 мкмоль/л; на 30-е - креатинин - 134,6810,5 мкмоль/л; билирубин - 0,640,27 мкмоль/л.
У поросят 2-й группы были отмечены аналогичные, но малодостоверные изменения: на 10-е сутки - креатинин - 153,663,82 мкмоль/л; билирубин - 9,85,26 мкмоль/л; на 14-е - креатинин - 165,186,48 мкмоль/л; билирубин - 6,792,33 мкмоль/л; на 21-е - креатинин - 140,4812,35 мкмоль/л; билирубин - 9,851,65 мкмоль/л; на 30-е - креатинин - 151,544.4 мкмоль/л; билирубин - 0,420,28 мкмоль/л.
У животных 3-й (контроль) группы отмечена следующая малозначимая динамика изменений: на 10-е сутки - креатинин - 130,266,0 мкмоль/л; билирубин - 12,108,01 мкмоль/л; на 14-е - креатинин - 147,686,81 мкмоль/л; билирубин - 6,813,82 мкмоль/л; на 21-е - креатинин - 132,6811,93 мкмоль/л; билирубин - 11,424,2 мкмоль/л; на 30-е - креатинин - 141,184,09 мкмоль/л; билирубин - 0,140,09 мкмоль/л.
3.6 Активность ферментов в крови поросят
Физиологически нормальное состояние органов и тканей животного является, как известно, результатам координированного действия всех ферментных систем организма и изменение активности одного фермента или его отсутствие вызывает нарушения метаболизма.
Изменения ферментативной активности находились в пределах физиологической нормы.
В крови поросят 1-й группы были в основном малозначимыми: на 10-е сутки - ААТ - 0,2040,097 мкмоль/сл; АсАТ - 0,3520,112 мкмоль/сл; ЩФ - 4058,80641,52 нмоль/сл; Аа - 12,01,86 мг/сл; на 14-е сутки - ААТ - 0,1970,050 мкмоль/сл; АсАТ - 0,1890,042 мкмоль/сл; ЩФ - 3500,40661,88 нмоль/сл; Аа - 41,92,75мг/сл; на 21-е сутки - ААТ - 0,090,007 мкмоль/сл; АсАТ - 0,0850,018 мкмоль/сл; ЩФ - 2542,0564,92 нмоль/сл; Аа - 54,198,14 мг/сл, р< 0,001; на 30-е сутки - ААТ - 0,2270,04 мкмоль/сл; АсАТ - 0,2220,016 мкмоль/сл; ЩФ - 1673,80234,71 нмоль/сл, р< 0,001 (снижение от предыдущего значения на 34,2%, а от изначального в 2,4 раза); Аа - 42,913,37 мг/сл, р< 0,001. Повышение от первоначального значения (на 10-е сут) было в 3,5 раза.
У поросят 2-й группы, на 10-е сутки исследований активность ААТ была 0,1400,023 мкмоль/сл; АсАТ - 0,2950,109 мкмоль/сл; ЩФ - 4859,8525,37 нмоль/сл и Аа - 8,520,77 мг/сл. После применения тимогена, изменения активности ферментов были следующими: на 14-е сутки - ААТ - 0,1950,015 мкмоль/сл; АсАТ - 0,1450,02 мкмоль/сл; ЩФ - 3879,0433,6 нмоль/сл; Аа - 43,85,51 мг/сл, р< 0,001; на 21-е сутки - ААТ - 0,0920,012 мкмоль/сл; АсАТ - 0,0820,011 мкмоль/сл; ЩФ - 2412,2322,3 нмоль/сл, снижение от первоначального значения было в 2 раза, р< 0,01; Аа - 49,791,88 мг/сл, р< 0,001, что превысило уровень на 10-е сут в 6 раз; на 30-е сутки - ААТ - 0,1910,032 мкмоль/сл; АсАТ - 0,1940,015 мкмоль/сл; активность ЩФ продолжала снижаться и была меньше изначального уровня в 2,8 раза - 1686,0109,8 нмоль/сл, р< 0,001; Аа - без изменений - 48,72,7 мг/сл, р< 0,001.
В контрольной группе поросят характер изменений ферментативной активности не превышал физиологической нормы и за период исследований был следующим: на 10-е сутки - ААТ - 0,1840,055 мкмоль/сл; АсАТ - 0,2480,122 мкмоль/сл; ЩФ - 4947,0767,62 нмоль/сл; Аа - 7,371,64 мг/сл; на 14-е сутки - ААТ - 0,1360,039 мкмоль/сл; АсАТ - 0,1910,038 мкмоль/сл; ЩФ - 3474,80427,12 нмоль/сл; Аа - 49,671,86 мг/сл, р< 0,001. На 21-е сутки - ААТ - 0,1360,022 мкмоль/сл; АсАТ - 0,1090,01 мкмоль/сл; ЩФ - 2496,0143,23 нмоль/сл, р< 0,02, снижение от изначального значения было в 2 раза; Аа - 59,093,09, р< 0,001, превышение от значения на 10-е сутки было в 8,4 раза; на 30-е сутки - ААТ - 0,1640,031 мкмоль/сл; АсАТ - 0,2010,023 мкмоль/сл; отмечено дальнейшее снижение ЩФ, активность которой от первоначальной была меньше в 2,8 раза. ЩФ - 1760,2216,45 нмоль/сл, р< 0,01; Аа без изменений - 52,513,93 мг/сл, р< 0,001.
3.7 Показатели естественной резистентности
Результаты исследований естественной резистентности в крови поросят представлены в таблицах 3-5.
Таблица 3 - Естественная резистентность в крови поросят 1-й группы
Исследуемые показатели (n=5) | Время исследования, сут. | |||
10 | 14 | 21 | 30 | |
1. Бактерицидная активность, % | 56,61,3 | 58,93,0 | 69,31,4 | 70,11,9 |
2. Лизоцимная активность, % | 12,70,8 | 19,90,8 | 21,40,6* | 23,91,2 |
3. Фагоцитарная активность, % | 23,31,7 | 29,50,6* | 28,90,9 | 31,61,3 |
4. Фагоцитарный индекс, ед. | 2,50,3 | 2,70,2 | 2,90,1* | 2,90,2 |
Уровень показателей естественной резистентности на 10-е сут. во 2 группе составил (табл. 4).
Таблица 4 - Естественная резистентность в крови поросят 2-й группы
Исследуемые показатели (n=5) | Время исследования, сут. | |||
10 | 14 | 21 | 30 | |
1. Бактерицидная активность, % | 53,11,2 | 56,62,4 | 70,11,1 | 69,91,0 |
2. Лизоцимная активность, % | 13,30,9 | 20,80,3* | 21,70,3* | 26,61,4 |
3. Фагоцитарная активность, % | 24,81,5 | 27,20,8 | 29,90,6* | 30,31,5 |
4. Фагоцитарный индекс, ед. | 2,30,4 | 2,70,2 | 2,90,1* | 2,90,2 |
У поросят третьей (контроль) группы (табл. 5) были отмечены следующие изменения показателей.
Таблица 5 - Естественная резистентность в крови поросят 3-й (контроль) группы
Исследуемые показатели (n=5) | Время исследования, сут. | |||
10 | 14 | 21 | 30 | |
1. Бактерицидная активность, % | 40,51,9 | 48,42,1 | 53,31,4 | 66,81,6 |
2. Лизоцимная активность, % | 14,21,1 | 18,90,8 | 19,71,2 | 23,02,0 |
3. Фагоцитарная активность, % | 22,31,7 | 23,61,9 | 24,40,7 | 27,30,3* |
4. Фагоцитарный индекс, ед. | 2,00,5 | 2,30,3* | 2,40,8 | 2,30,8 |
Полученные результаты изучения показателей естественной резистентности у поросят на подсосе показали, что наиболее выраженными следует считать изменения в 1-й и 2-й группах, где к моменту отъема значимыми были повышения лизоцимной и фагоцитарной активностей сыворотки крови поросят от состояния на 10-е сут соответственно по ЛАСК в 1,7 и 1,8 раза (в 3-й контроль группе - 1,4 раза); по ФАСК соответственно в 1,2 и 1,2 раза против 9,4% в контрольной группе. Фагоцитарный индекс повысился к 21-м сут по отношению к 10-м сут в 1-й группе на 16,0%, во 2-й группе - 26,0% и 3-й (контроль) группе - 20,0%. Отмеченные изменения в целом характеризуют иммуномодулирующий характер действия глутамил-триптофанового комплекса препарата тимогена.
Полученные результаты исследований по из учению показателей естественной резистентности крови поросят опытных групп свидетельствуют о наличии стимулирующего иммунобиологические процессы характера действия тимогена.
Установленная динамика изменений показателей ЛАСК, БАСК и ФАСК в крови поросят опытных групп показывает, что с увеличением возраста поросят повышается процент их активности. По сравнению с уровнем на 10-е сутки тенденция повышения бактерицидной активности в период отъема составила: 1-я группа - 22,4%; 2-я группа - 31,8% и 3-я (контроль) группа - 33,2%. Повышение лизоцимной активности на 21-е сутки было следующим: 1-я группа - на 68,5%; 2-я группа - 63,1%; 3-я (контроль) группа - 38,7%. Фагоцитарная активность характеризовалась следующими показателями увеличения: 1-я группа - на 28,3%; 2-я группа - 20,5%; 3-я (контроль) группа - 9,4%. Таким образом, среднее суммарное превышение активностей по группам, во время отъема, по отношению к 10-м суткам составило: 1-я группа - 39,7%; 2-я группа - 38,4% и 3-я (контроль) группа - 27,1%.
Ранее проведенные исследования по определению механизмов действия и стимулирующих процессы естественной резистентности свойств тимогена, как препарата пептидной природы показали, что он обладает способностью активизировать выработку иммунокомпетентных клеток (Т- и В-лимфоцитов), а также дополнительных факторов иммунитета (фагоцитоз, лизоцим и т.д.), что и определяет его отношение к категории иммуномодуляторов (Хохлов А.В., 2004; Лопина Е.О., 2007; Пензева М.Н., 2009; Беляева С.Н., 2009).
Полученные результаты превышения лизоцимной активности во время отъема у поросят 1-й группы над контролем на 29,8% показывают, что активизация выработки лизоцима после введения тимогена на 4-9-е сутки после рождения способствует повышению устойчивости организма поросят к микробным факторам, ко времени наступления второго физиологического иммунодефицита. Воздействие лизоцима на микроорганизмы может осуществляться путем нарушения мукополисахаридной структуры бактериальной стенки, что приводит к ее лизису. Активизация выработки лизоцима тимогеном, кроме того, способствует очевидно через комплемент повышать активность комплекса сывороточных белков, которые после ряда протеолитических реакций способны дополнительно воздействовать на мембраны микроорганизмов, разрушая их.
3.8 Гистоморфологические изменения в тканях поросят
Из результатов гистоморфологичесикх исследований, полученных при оценке гистопрепаратов иммунокомпетентных органов и органов пищеварения, следует выделить основные морфофункциональные изменения у животных контрольной группы, которые отсутствуют у поросят после применения тимогена: 1) в тимусе стерта граница между корковым и мозговым веществами и тельца Гассаля отсутствуют; 2) рисунок лимфатического узла стерт, корковое и мозговое вещества плохо различимы, лимфатические фолликулы отсутствуют; 3) в 12-перстной кишке отсутствуют лимфатические фолликулы и агрегаты фолликулов.
3.9 Эффективность применения тимогена для повышения
продуктивных показателей поросят
Результаты эффективности применения тимогена поросятам разного возраста в подсосный период, представлены в таблице 6.
Таблица 6 - Показатели продуктивности поросят
Группа | Показатели | Возраст поросят, дней | ||||
4 | 9 | 14 | 20 | 30 | ||
1 | Введение тимогена с 4 по 9-е сут | |||||
Общий вес 50 гол, кг Средний вес 1 гол, кг Прирост живой массы, кг/гол Диарея, гол. Пало, гол. | 118,55 2,371 - 2 - | 195,15 8,07 3,903 0,33 1,532 0,10 - - | 255,90 9,45 5,118 0,20 2,747 0,13 2 - | 313,70 7,78 6,274 0,49 3,903 0,14 3 - | 361,00 9,66 7,220 0,22 4,849 0,10 2 - | |
2 | Введение тимогена с 14 по 19-е сут | |||||
Общий вес 50 гол, кг Средний вес 1 гол, кг Прирост живой массы, кг/гол Диарея, гол. Пало, гол. | 124,50 2,490 - 1 - | 205,80 7,12 4,116 0,32 1,626 0,13 2 - | 271,10 8,30 5,422 0,51 2,932 0,11 3 - | 353,75 7,36 7,075 0,30 4,585 0,10 2 - | 397,90 7,43 7,958 0,24 5,468 0,12 1 - | |
3 | Контроль | |||||
Общий вес 50 гол, кг Средний вес 1 гол, кг Прирост живой массы, кг/гол Диарея, гол. Пало, гол. | 140,15 2,803 - 4 - | 212,70 8,12 4,254 0,46 1,510 0,12 4 - | 278,45 9,24 5,683 0,34 2,880 0,10 8 1 | 339,55 10,11 6,929 0,30 4,286 0,15 8 - | 392,35 7,847 0,27 5,204 0,11 8 - | |
К моменту отъема поросят (21-е сут), наилучший показатель среднесуточного прироста живой массы отмечен у поросят 2-й группы - 286,0 грамм, что на 14,8% превышает аналогичный показатель у поросят 1-й группы (243,9 грамм) и на 9,9% больше прироста живой массы у поросят 3-й группы (257,8 грамм). Прирост живой массы одного поросенка за период после отъема и до 30-х суток (доращивание) составил: 1-я группа - 946 грамм; 2-я группа - 883 грамма; 3-я группа - 918 грамм. Средний вес 1-й головы на 30-е сутки во второй группе поросят превышал данный показатель в 1-й группе на 10,2%, а в 3-й (контроль) группе всего на 1,4%. К 21-м суткам в 1-й группе 6,0% поросят болело диареей, во 2-й группе - 4,0% и в 3-й (контроль) - 16,0%. В 1-й и 2-й группах падежа поросят не было за исследуемый период, а в 3-й группе пал один (2,0%) поросенок.
3.10 Экономическая эффективность от применения синтетического тимогена