Geum.ru
Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по биологии  

На правах рукописи

Ильяшенко Надежда Владимировна

Влияние антропогенного фактора на химический состав лекарственного и кормового растительного сырья

03.01.04 - Биохимия

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени

кандидата биологических наук

Тверь - 2012

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО Тверской государственный университет на кафедре физической химии

Научный руководитель

доктор химических наук, профессор

Пахомов Павел Михайлович

Официальные оппоненты:

Базанов Геннадий Александрович, доктор медицинских наук, профессор кафедры фундаментальной и клинической фармакологии ГБОУ ВПО Тверская государственная медицинская академия

Карцова Софья Владимировна, кандидат биологических наук, доцент кафедры биотехнологии и химии ФГБОУ ВПО Тверской государственный технический университет

Ведущая организация

Институт биохимической физики им.аН.М.аЭмануэля РАН

Защита состоится л24 мая 2012 г. в 1400 на заседании диссертационного совета ДМ 212.263.08 в Тверском государственном университете по адресу: 170002, г. Тверь, пр. Чайковского 70/1Б, корп. 5, ауд.а318.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Тверского государственного университета по адресу: 170100, г. Тверь, ул.аВолодарского, 44 а.

Автореферат разослан л___ апреля 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета                                                Костюк Н.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Эксплуатация промышленных предприятий и автотранспорта привели к серьёзным нарушениям природных ландшафтов, загрязнению почвы, воды, воздуха различными отходами. Поллютанты постоянно попадают в окружающую среду и поглощаются растениями, многие из которых используются человеком в приготовлении лекарственных препаратов, а также кормов для сельскохозяйственных животных [Государственный доклад О состоянии и об охране окружающей среды Российской Федерации в 2009 году, 2009]. Поэтому проведение исследований по изучению биохимического состава и химических превращений растительного сырья под влиянием факторов окружающей среды и технологических воздействий является актуальной задачей и играет важнейшую роль для улучшения качества и повышения выхода производимых целевых лекарственных и кормовых продуктов [Алексеев В.А., 1990; Ефимов С.Н., 2004; Иванов А.Ф., 1996].

Одними из наиболее распространённых и ценных источников лекарственного растительного сырья, как в РФ, так и в Тверской области, являются лапчатка прямостоячая, череда трехраздельная, зверобой продырявленный [Турова А.Д., 1982], заготовки которых ведутся в промышленных масштабах.

Особое место среди растительных объектов-гидрофитов Тверского региона занимают ряска малая и роголистник темно-зелёный, которые помимо обладания биондикационными свойствами, являются источником ценного кормового растительного сырья [Садчиков А.П., 2005; ИвановаА.Ф., 1996; Куриленко В.В., 2003; Чукина Н.В., 2010; ЦаценкоаЛ.В., 1998].

Кроме того, актуальность работы определяется тенденциями при решении проблем биомониторинга, а также улучшения качества лекарственного и кормового растительного сырья, включающими такие аспекты, как анализ воздействия зон экологической напряжённости на сырье с использованием ряда современных точных комплексных методов [Pathan A.K., 2009; Duraees N., 2008; Garty P., 2011; Лобанова А.А., 2004].

Цель исследования - изучить особенности влияния различных антропогенных факторов на химический состав лекарственного растительного сырья и биоиндикационные, кормовые растения-гидрофиты Тверского региона.

Задачи исследования:

  1. Изучить влияние различной антропогенной нагрузки на содержание и состав фенольных соединений в образцах растительного сырья, полученного из лекарственных растений: лапчатка прямостоячая (Potentilla erecta (L.) Raeusch.), череда трёхраздельная (Bidens tripartita L.), зверобой продырявленный (Hypericum рerforatum L.) по сравнению с фоновой зоной природного биосферного заповедника.
  2. Исследовать химический состав контрольных и опытных образцов растительного сырья (Bidens tripartita, Hypericum рerforatum и Potentilla erecta) и установить специфику его изменения в зависимости от узла экологической напряжённости.
  3. Выявить особенности воздействия антропогенной нагрузки на содержание фенольных соединений, химический и элементный состав образцов биоиндикационных и кормовых растений-гидрофитов: ряска малая (Lеmna mnor L.) и роголистник темно-зелёный (Ceratophyllum demersum L.). Осуществить модельный эксперимент по изучению влияния солей аммония и металлов на данные растительные объекты.
  4. Изучить воздействие ряда поллютантов на эпидермальный слой листовых пластинок растений-гидрофитов Ceratophyllum demersum и Lеmna mnor, как в природной популяции, так и модельном эксперименте.

Научная новизна

Впервые проведено комплексное исследование влияния различных видов антропогенной нагрузки на химический состав ряда растительных объектов, используемых в качестве лекарственного и кормового сырья, а также обладающих биоиндикационными функциями, с использованием широкого спектра современных методов исследования. Установлено наличие сложных и неоднотипных изменений фенольной компоненты, элементного и химического состава растительного сырья в зависимости, как от степени антропогенного воздействия, так и от индивидуальных особенностей изученных объектов.

Теоретическая значимость работы

Теоретическое значение работы связано с выяснением специфики влияния различных видов антропогенной нагрузки на ряд химических параметров, как лекарственного, так и кормового растительного сырья, что позволяет глубже проанализировать проявление защитных механизмов растительных объектов, подвергающихся воздействию поллютантов.

Выявлена связь между характером загрязнения водоёма и химическим составом листовой пластинки растений-биоиндикаторов.

Полученные данные могут быть заложены в основу разработки нового алгоритма оценки воздействия факторов окружающей среды на некоторых представителей лекарственных, кормовых и биоиндикационных растений.

Практическая значимость работы

Разработаны практические рекомендации, касающиеся путей оптимизации контроля биохимического состава лекарственного и кормового растительного сырья с использованием современных комплексных методов химического анализа. Проведённые исследования могут иметь большое прикладное значение в области внедрения новых подходов в экологическом мониторинге. При этом значительно расширяются возможности использования роголистника темно-зелененого и ряски малой в мониторинге гидросферы.

Полученные экспериментальные данные используются автором на кафедре физической химии ФГБОУ ВПО Тверской государственный университет при проведении лекционных и лабораторных занятий по курсу Физико-химические методы исследования, а также при выполнении курсовых и дипломных работ студентами кафедры. Также результаты работы могут быть рекомендованы для обучения студентов биологических и медицинских специальностей.

Результаты диссертационного исследования вошли в ряд научно-исследовательских работ: 1) Гранты Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере по программе Участник Молодёжного Научно-инновационного Конкурса (У.М.Н.И.К.), ГКа№а8754р/14008, 2011-2012 г.; 2) ГК № 14.740.11.1281 по теме: Разработка методики биомониторинга состояния атмосферы и гидросферы с использованием Фурье-ИК спектроскопии в рамках Федеральной Целевой Программы Научные и научно-педагогические кадры инновационной России на 2009-2013 годы, 3) Договор № 09-08-09 от 01.10.2009 Эколого-фитоценотический анализ, численность и биомасса фитопланктона водных экосистем региона Калининской АЭС (в озёрах Песьво, Удомля, Наволок и Кезадра).

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. Изменение состава и содержания фенольных соединений в образцах растительного сырья, полученного из лекарственных растений: лапчатка прямостоячая (Potentilla erecta (L.) Raeusch.), череда трехраздельная (Bidens tripartita L.) и зверобой продырявленный (Hypericum рerforatum L.) зависит от места их произрастания и соответствующей антропогенной нагрузки.
  2. Антропогенная нагрузка не оказывает существенного влияния на содержание фенольных соединений в образцах биоиндикационных и кормовых растений-гидрофитов: ряска малая (Lеmna mnor L.) и роголистник темно-зелёный (Ceratophyllum demersum L.).
  3. Изменение интенсивности полос поглощения в ИК-спектрах практически во всех образцах изученного лекарственного, биоиндикационного и кормового растительного сырья вызвано воздействием ряда узлов экологической напряжённости.
  4. Наибольшие изменения элементного состава, выражающиеся в увеличении концентрации металлов (железо, марганец и барий) и неметаллов (сера, хлор и кремний), характерны для Ceratophyllum demersum и в меньшей степени для Lеmna mnor. При этом значительное увеличение кремния объясняется обрастанием листовых пластинок диатомовыми водорослями. Соли металлов и соли аммония могут разрушать эпидермальный слой, а также откладываться в виде конкреций на листовой части растений, особенно в образцах Ceratophyllum demersum.

Соответствие диссертации Паспорту научной специальности

Полученные результаты соответствуют пунктам 3, 16 паспорта специальности 03.01.04 Биохимия (биологические науки).

Апробация и реализация результатов исследования: материалы диссертационного исследования докладывались и обсуждались на VI, VII научных конференциях студентов и аспирантов (Тверь, 2008, 2009); XVЦXIX Региональных Каргинских чтениях (Областная научно-техническая конференция молодых учёных Физика, химия и новые технологии) (Тверь, 2008-2012); Международной научно-практической конференции Вопросы дальнейшего развития регионов России в условиях мирового финансового кризиса (Шарья, 2009); Международной научно-практической конференции Регионы в условиях неустойчивого развития (Кострома, 2010); III Всероссийском с международным участием конгрессе студентов и аспирантов-биологов Симбиоз-Россия 2010 и школе-конференции Инновационные подходы в изучении биосистем в рамках конгресса (Нижний Новгород, 2010); X, XI ежегодной международной молодёжной конференции ИБХФ РАН-Вузы Биохимическая физика (Москва, 2010, 2011); Международной междисциплинарной научной конференции с элементами научной школы для молодёжи 7-ые Курдюмовские чтения: Синергетика в естественных науках (Тверь, 2011); Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных Ломоносов-2011 и Ломоносов-2012 (Москва, 2011, 2012); IV Всероссийском с международным участием конгрессе студентов и аспирантов-биологов Симбиоз России 2011 (Воронеж, 2011); Международной конференции УRenewable Wood and Plant Resources: Chemistry, Technology, Pharmacology, MedicineФ (Санкт-Петербург, 2011); Ежегодной студенческой научно-технической школе Кадры будущего (Дубна, 2011); 4-ом Всероссийском фестивале науки Научно-популярная лекция: О контроле качества лекарственного сырья (Москва, 2011); VI Всероссийской конференции молодых учёных, аспирантов и студентов с международным участием Менделеев-2012 (Санкт-Петербург, 2012).

Публикации. Результаты исследования отражены в 25 публикациях, 3 из которых в рецензируемых научных журналах, включённых в перечень ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 151 источник, приложения. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 37 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования являлись фармакологически значимые части растений: корневище лапчатки прямостоячей (Potentilla erecta (L.) Raeusch), цветы череды трехраздельной (Bidens tripartite L.), цветы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) и кормовые биоиндикационные растения-гидрофиты: листец (тело) ряски малой (Lеmna mnor L.), листья и стебли роголистника темно-зеленого (Ceratophyllum demersum L.), собранные в г.аТвери и Тверской области в период цветения 2009-2011 гг. в фоновых зонах, относящихся к ООПТ (Особо охраняемая природная территория) - Центрально-лесной государственный природный биосферный заповедник (ЦЛГПБЗ) и оз. Сиг Осташковского р-на Тверской области, а также в местах с различным антропогенным воздействием: в окрестностях ТЭЦ-3 (0,5 и 30-40м) г.аТвери; АЗС Роснефть г. Твери; в зоне влияния предприятий Химволокно г. Твери - Хлебный ручей; ж/д ст. Чуприяновка, несколько точек вдоль трассы Москва - Санкт-Петербург (Московское шоссе в пос.аХиминститут и д.аГолениха); исторический центр г. Твери - р. Лазурь - район старого антропогенного освоения с интенсивным движением автотранспорта; в озере-охладителе Удомля г. Удомля Тверской области; в сточном канале ОАО Редкинский опытный завод, пос. Редкино Конаковского р-на Тверской обл.

Фенольные соединения исследуемых растений изучались с помощью качественных реакций на флавоноиды, катехины, сапонины и дубильные вещества [Ефимов С.Н., 2004; Запрометов М.Н., 1974; Красильникова Л.А., 2004], методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с помощью системы Alliance 2695 с 2996 PDA [Ефимов С.Н., 2004; Столяров Б.В., 1998], УФ-спектроскопии проводили на спектрофотометрах Specord M40 Carl Zeiss и Thermo Scientific Evolution Array UV-VIS [Лобанова А.А., 2004; Запрометов М.Н., 1974]; химический состав изучался методом Фурье-ИК спектроскопии на спектрометре Equinox 55 Bruker [Ramamurthy N., 2007; Schulz H., 2007; Socrates G.,1994; DeviаA.G., 2011; Komal Kumar J., 2011]; методом рентгеновского микроанализа исследовался элементный состав образцов растений на приставке INCA Energy350 X-Max 20 OXFORD INSTRUMENTS [Garty P., 2011; Stoltz E., 2002; Basile A., 2001]; морфо-анатомические изменения растительных объектов изучались с помощью растровой электронной микроскопии на растровом электронном микроскопе JEOL JSM-6610LV [Pathan A.K., 2009]; осуществлялось моделирование по изучению влияния ряда поллютантов (соли тяжелых металлов (Hg2SO4, NiSO4) и соли аммония ((NH4)2SO4, NH4NO3)) на растения-гидрофиты [Garty P., 2011; Duraees N., 2008; Wacawska I., 2011]; химический анализ проб воды в местах произрастания исследуемых растений-гидрофитов определялся методами спектрофлуориметрии и капиллярного электрофореза с помощью спектрофлуориметра Флюорат-02-панорама и системы капиллярного электрофореза Капель-105 Люмэкс [Каменцев Я.С., 2002; Гладилович Д.Б., 2001].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1.аИзменение состава и содержания фенольных соединений в образцах лекарственного и кормового растительного сырья под действием антропогенной нагрузки

Посредством качественных реакций в извлечениях лекарственных растений (лапчатки прямостоячей, череды трёхраздельной и зверобоя продырявленного) установлено наличие следующих фенольных соединений (ФС): гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества, сапонины, флавоноиды.

Качественный УФ-спектральный анализ всех образцов исследуемых растений подтверждает наличие в составе сырья ФС (простых фенолов, гликозидов и флавоноидов), так как в спектрах присутствуют полосы поглощения с максимумами в коротковолновой (255-280 нм) и длинноволновой (330-370 нм) областях, отвечающие поглощению бензольного кольца. Например, в УФ-спектрах извлечений из B. tripartita имеются полосы поглощения с максимумами на длинах волн max 1 ~ 258 нм, max 2  ~ 270 нм, max 3  ~ 330 нм (рис. 1)

Данные по количественному содержанию ФС в образцах растительного сырья определялись методом Фолина-Чокальтеу с помощью УФ-спектроскопии (табл. 1) [Запрометов М.Н., 1974; Лобанова А.А., 2004; Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище, 2003].

Общее содержание ФС, как правило, возрастало в 1,5-3 раза по отношению к фоновым значениям. Однако, для лапчатки, собранной в районе ТЭЦ-3, было характерно лишь незначительно увеличение этой группы веществ. Полученные результаты, свидетельствующие о нарастании концентрации ФС в растительных организмах, согласуются с литературными данными [Ефимов С.Н., 2004].

Таблица 1. Содержание ФС в изученных образцах растительного сырья в зависимости от их места сбора (по методу Фолина-Чокальтеу)

Растение

№ образца

Место сбора

С,

мг-экв галловой кислоты

P.erecta
I

Осташковский р-н Тверской обл., оз. Сиг, ООПТ (фоновый участок)

5,11

II

г. Тверь, в 0,5 м от канала ТЭЦ-3

3,11

III

г. Тверь, в 30-40 м от канала ТЭЦ-3

6,76

IV

г. Тверь, Московское шоссе, пос. Химинститута

4,90

B. tripartita
I

ЦЛГПБЗ, р. Межа, Тверской обл.

(фоновый участок)

7,29

II

г. Тверь, Химволокно, р. Хлебный Ручей

13,20

III

Центр г. Тверь, р. Лазурь

23,87

IV

г. Тверь, АЗС Роснефть

7,37

H. perforatum

I

ЦЛГПБЗ, фоновый участок

14,44

II

Ж/д. станция Чуприяновка

25,80

III

Центр г. Тверь, р. Лазурь

23,03

IV

Трасса Москва-С.Петербург (д. Голениха)

21,73

C. demersum

I

ЦЛГПБЗ, фоновый участок

3,08

II

Озеро-охладитель Удомля Калининской АЭС

1,87

III

Сточный канал Редкинский опытный завод,

п. Редкино Конаковского р-на Тверской обл.

2,25

L. minor

I

ЦЛГПБЗ, фоновый участок

1,37

II

Озеро-охладитель Удомля

2,29

III

Сточный канал Редкинский опытный завод

2,11

Как видно из табл. 1 для роголистника наблюдалось незначительное увеличение содержания ФС в узлах экологической напряжённости по сравнению с фоновой зоной. Образцы ряски, собранные в оз. Удомля и в канале ОАО Редкинский опытный завод, характеризовались снижением доли ФС. Это свидетельствует о том, что растения-гидрофиты в меньшей степени, чем изученные лекарственные растения, подвержены накоплению ФС.

Таким образом, повышенное содержание ФС в высушенном лекарственном сырье прямо связано с исходной антропогенной нагрузкой, что, в свою очередь, свидетельствует о защитной адаптационной способности лекарственных растений, в большей степени череды, и в меньшей степени зверобоя и лапчатки, накапливать в тканях ФС.

В экстрактах, выделенных из корневища P.аerecta идентифицирован целый ряд ФС (рис. 2). При этом преобладающими ФС в образцах I и III являлись гликозид диоксибензола (арбутин), в образце II - арбутин и фенолокислоты (галловая кислота), в образце IV - флавоноиды (рутин). Обнаружено сходство в хроматограммах образцов корневищ лапчатки прямостоячей, собранных в фоновой (образец I) и частично удаленной от экологического узла напряженности (образец III) зонах. Для образца II, собранного в непосредственной близости от крупного шоссе, было характерным отсутствие таких ФС, как гидрохинон и арбутин.

 

Рис. 2. Хроматограммы извлечений из корневища P.erecta для различных мест сбора: образец I - оз. Сиг - фоновая зона (1 - арбутин, 2 - рутин, а3 - гидрохинон); образец II - г. Тверь, в 0,5 м от канала ТЭЦ-3 (1 - арбутин, 2 - галловая кислота, 3 - рутин, 4 - гидрохинон); образец III -  г. Тверь, в 30-40 м от канала ТЭЦ-3 (1 - арбутин, 2 - рутин, 3 - гидрохинон); образец IV -  г. Тверь, Московское шоссе, пос. Химинститута (1 - галловая кислота, 2 - рутин).

В экстрактах образцов цветов B. tripartita обнаружены галловая кислота и арбутин, а также ряд не идентифицированных веществ, особенно в образцах, собранных в центре г. Тверь.

В экстрактах цветов H. perforatum также идентифицированы ФС, при этом в образцах, собранных в ЦЛГПБЗ (фоновая зона) и в центре города г.аТверь - арбутин, галловая кислота; в образце, полученном в окрестностях ж/д станции Чуприяновка - арбутин, галловая кислота, пирокатехин; а в образце, собранном вдоль трассы Москва-С. Петербург - арбутин, галловая кислота, резорцин и кофейная кислота. Обнаружено сходство состава ФС в образцах цветов H. perforatum, собранных в фоновой зоне и узлах экологического напряженности. Таким образом, наблюдались определённые перестройки, а, возможно, и химические превращения в качественном составе ФС, содержащихся в лекарственном растительном сырье. Наиболее лабильными были следующие фракции: простые ФС (резорцин, пирокатехин, гидрохинон), фенолгликозиды (арбутин), фенолокислоты (галловая кислота), оксикоричные кислоты (кофейная кислота).

2. Результаты исследования химического состава образцов лекарственных и кормовых растений с использованием
метода Фурье-ИК-спектроскопии

Изучение ИК-спектров лапчатки позволило выявить изменения химического состава исследованных образцов, обусловленные степенью загрязнения местообитаний. Это подтверждается появлением в ИК-спектрах полос поглощения групп сульфонов (aSO2 ~1317 и 778 смЦ1). Для образцов череды трехраздельной, произрастающей в районе предприятий Химволокно, центра города и АЗС (см. табл. 1) наблюдались и другие изменения в интенсивности ИК полос поглощения валентных колебаний карбонильной и эфирной групп (νС=О) ~1717 и 1741 смЦ1 и появление новой полосы валентных колебаний R-SO2-ОН группы ~1228смЦ1 (сульфокислоты) [Schulz H., 2007; Socrates G., 1994; Duraees N., 2008; Мейсурова А.Ф., 2011; Devi A.G., 2011], что может объясняться поглощением растением выбросов серосодержащих присадок автомобильного топлива в центре города. В образцах зверобоя продырявленного отмечено появление в спектрах ряда полос поглощения, отвечающих колебаниям сульфогрупп ~778 (δSO2) и алкилнитратов ~825асм-1 (ОЦNЦO) [Socrates G.,1994] (районы ж/д станции и федеральной трассы). Проявление таких изменений в растениях, собранных вдоль железной дороги и в населённом пункте на обочине федерального шоссе, свидетельствует о постоянной и сильной антропогенной нагрузки на биоту. Данные ИК-спектрального анализа согласуются не только с полученными результатами по показателям примесей в водоёмах произрастания растений, но и с указанным выше увеличением пула ФС.

В спектрах образцов ряски, собранной в оз. Удомля и канале п.аРедкино, появлялись полосы поглощения, отвечающие колебаниям сульфо- и нитрогрупп. Кроме того, в спектрах образцов, полученных из канала, добавлялись изменения полосы Амид II (изменение белков) [Ramamurthy N.,2007; Socrates G.,1994].

Наиболее сильные изменения в спектрах зафиксированы для образцов роголистника (рис.3).

Если в образцах, собранных в оз. Удомля, изменялась интенсивность полосы Амид II, то в спектрах образцов, полученных из канала, появлялись интенсивные полосы поглощения, отвечающие колебаниям сульфогрупп ~876 и 712 см-1, валентным колебаниям C=O, отмечена высокая интенсивность полосы 1431см-1 (аsSО2, N-H) [Schulz H., 2007; SocratesаG.,1994; Duraees N., 2008].

Сравнительный анализ спектров ряски и роголистника из разных мест обитания позволяет предположить, что рост интенсивности выше указанных полос поглощения в образцах, взятых из загрязнённых водоёмов, может быть связан с аккумуляцией и усвоением химических соединений, не свойственных растению, содержащих тиольные, углерод- и азотсодержащие группы.

3. Изменения в элементном составе и морфо-анатомическом строении растений-гидрофитов под воздействием антропогенных факторов

Методами растровой электронной микроскопии (РЭМ) и рентгеновского микроанализа (РМА) выявлены изменения в элементном составе, обнаружены деформация и разрушение клеток эпидермиса, зафиксированы конкреции и диатомовые водоросли (Diatomea sp.) на эпидермальном слое (рис. 4).

Большое количество кремния, обнаруженного в образцах ряски и, особенно, роголистника, связано с наличием кремнезёма в створках диатомовых водорослей. Однако, на наш взгляд, может происходить процесс взаимного обогащения кремнием, как листьев роголистника, так диатомовых водорослей [Белякова Г. А., 2006; Cattaneo A., 2011].

Обращает на себя внимание факт появления на листьях роголистника, собранного в промышленном канале, поверхностных конкреций солей бария и марганца, что также согласуется с полученными данными рентгеновского анализа (рис. 3). Такие химические образования на листьях водного растения свидетельствуют о высокой антропогенной нагрузке на растение и о проявлении его защитных адаптационных функций. Конкреции повреждают эпидермальный слой, а плазматическая мембрана служит селективным барьером на пути поступления металлов в клетку [Егорова И.Н., 2010; Титов А.Ф., 2007].

 

 

Рис. 4. Электронные микрофотографии и рентгеновские спектры образцов листьев С.аdemersum: II - оз. Удомля КАЭС; III - сточный канал п. Редкино

при увеличении (×500, 600)

Методом РМА определён элементный состав образцов. В спектрах образцов гидрофитов, собранных в водоёмах оз. Удомля и канале (п. Редкино), обнаружена высокая концентрация натрия, серы, хлора, железа, марганца и бария, не свойственных в таком количестве химическому составу растений.

Анализ накопления фитомассой гидрофитов техногенных элементов показал, что с учётом зональности наибольшей способностью к накоплению химических элементов отличаются погруженные гидрофиты (C. demersum).

4. Влияние ряда поллютантов на химический состав и морфо-анатомические характеристики Lеmna mnor L. и Ceratophyllum demersumаL. в условиях модельного эксперимента

В модельном эксперименте под действием солей тяжёлых металлов (Hg2SO4, NiSO4) и солей аммония ((NH4)2SO4, NH4NO3) на природную популяцию растений-гидрофитов (C. demersum и L. minor) из фоновой зоны в модельном эксперименте были обнаружены изменения в образцах, как на химическом, так и на морфо-анатомическом уровнях.

При воздействии сульфатсодержащих солей отмечены изменения в ИК-спектрах образцов растений для характеристических полос поглощения, содержащих сульфогруппы. При воздействии солей аммония на образцы ряски и роголистника, имеются различия в интенсивности полосы поглощения нитрогрупп 1384асмЦ1 (s-O-NO2), которая увеличивается со временем экспозиции солями аммония [Duraees N., 2008; Ramamurthy N.,2007; Schulz H., 2007].

ИК-спектральный анализ гидрофитов показал, что основные изменения в ИК-спектрах образцов, связанных с воздействием солей тяжёлых металлов Hg2SO4, NiSO4, проявляются в области низкочастотных колебаний, интенсивность которых также увеличивалась пропорционально времени проведения эксперимента.

При исследовании образцов ряски и роголистника методами РЭМ и РМА выявлены не только обрастание растений диатомовыми водорослями (Diatomeaаsp.), но и деструкция - изменения в эпидермальном слое, проявляющиеся в утолщении клеточных стенок в эпителии, очевидно, за счёт солей, использованных в моделировании. Кроме того на эпителиальной поверхности растений-гидрофитов обнаружены кристаллы и конкреции солей металлов и солей аммония.

Таким образом, сравнительный анализ собственных результатов натурного и модельного исследования накопительной способности гидрофитов C. demersum и L. minor, показал, что высшим водным растениям свойственна высокая избирательная способность в накоплении не только макро-, но и микроэлементов, а также солей тяжёлых металлов.

ВЫВОДЫ

  1. Выявлено существенное (в 1,5-3,0 раза) повышение содержания фенольных соединений в образцах растительного сырья, полученных из лекарственных растений: череда трехраздельная (Bidens tripartita L.), зверобой продырявленный (Hypericum рerforatum L.), собранных в местах с различной антропогенной нагрузкой (в районе ж/д станции, центра города, федеральной трассы, автозаправочной станции) по сравнению с фоновой зоной природного биосферного заповедника. Тогда как в образцах лапчатки прямостоячей (Potentilla erecta (L.) Raeusch.) такой зависимости не обнаружено.
  2. В опытных образцах Bidens tripartita, Hypericum рerforatum и Potentilla erecta отмечено появление арбутина, гидрохинона и рутина, а для образцов Potentilla erecta, собранных в районе ТЭЦ, было, в том числе, выявлено появление галловой кислоты. В ИК-спектрах образцов Bidens tripartita и Potentilla erecta обнаружено изменение интенсивности полосы валентных колебаний карбонильной и эфирной групп и появление полос поглощения, связанных с колебанием сульфогрупп. Тогда как в спектрах образцов Hypericum рerforatum изменения произошли ещё и в области полос поглощения алкинитратов и амидной группы (Амид II).
  3. Антропогенная нагрузка (сточный канал промышленного предприятия, озеро-охладитель АЭС) не оказывает существенного влияния на изменение содержания фенольных соединений в образцах биоиндикационных и кормовых растений-гидрофитов: ряска малая (Lеmna mnor L.) и роголистник темно-зелёный (Ceratophyllum demersum L.). В ИК-спектрах образцов Ceratophyllum demersum зарегистрированы интенсивные полосы поглощения, отвечающие колебаниям сульфогрупп, карбонильной и эфирной групп, а в спектрах образцов Lеmna mnor отмечено также появление характеристических полос амидной группы (Амид II) и нитрогрупп.
  4. Обнаружено повышение концентрации металлов (железо, марганец и барий), а также увеличение содержания серы, хлора и кремния в листовых пластинках Ceratophyllum demersum, произраставшего в сточном канале; при этом наблюдалось образование конкреций и появление колоний диатомовых водорослей (как одного из возможных источников возрастания концентрации кремния) на поверхности повреждённого эпидермального слоя. Для опытных образцов Lеmna mnor обнаружены сходные изменения, однако не происходило образование конкреций и накопление бария. Проведение модельного эксперимента по изучению влияния солей металлов - (Hg2SO4, NiSO4) и солей аммония ((NH4)2SO4, NH4NO3) на образцы исследованных растений-гидрофитов выявило сходные изменения в химическом составе образцов роголистника темно-зеленого и ряски малой.
  5. Повышение содержания фенольных соединений, серо- и азотсодержащих групп, металлов и неметаллов, обнаруженное в лекарственном и кормовом растительном сырье, связано не только с исходной антропогенной нагрузкой, но и с рядом индивидуальных особенностей изученных растительных объектов, проявляющихся, очевидно, в защитных адаптационных функциях растений по сохранению относительной устойчивости их химического состава.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

  1. С целью повышения качества производимых целевых лекарственных препаратов на основе растительного сырья рекомендуется проводить первоначальный, более углублённый химический анализ сырья (с использованием современных методов высокоэффективной жидкостной хроматографии, УФ- и ИК-спектроскопии).
  2. Для совершенствования методов контроля за химическим составом различных водных объектов естественного и искусственного происхождения рекомендуется внедрить в систему экологического мониторинга гидросферы изученные растения: ряска малая (Lеmna minorаL.) и роголистник темно-зелёный (Ceratophyllum demersum L.).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Рецензируемые научные журналы, включённые в перечень ВАК:

  1. Ильяшенко В.Д. Устойчивость химического состава надземных частей Hypericum рerforatum L. к антропогенному воздействию. Данные метода Фурье-ИК спектроскопии / В.Д. Ильяшенко, Н.В. Ильяшенко, С.М.аДементьева, С.Д. Хижняк, П.М. Пахомов // Вестник ТвГУ. Сер. Биология и экология, 2008. Вып. 8. С.71-76.
  2. Ильяшенко Н.В. Использование метода Фурье-ИК спектроскопии для изучения изменений химического состава Potentilla erecta (L.) Raeusch. под действием антропогенных факторов / Н.В. Ильяшенко, С.М.аДементьева, С.Д.аХижняк, П.М. Пахомов, В.Д. Ильяшенко // Вестник ТвГУ. Серия Биология и экология, 2009. Вып. 13. С. 211-220.
  3. Ильяшенко Н.В. Влияние факторов окружающей среды на изменения химического состава в листовых пластинках биоиндикационных растений-гидрофитов на примере роголистника темно-зеленого (Сeratophyllum demersumаL.) / Н.В. Ильяшенко, Ю.Г. Оленева, А.И.аИванова, С.Д. Хижняк, П.М.аПахомов // Современные проблемы науки и образования. 2012. № 2 URL:

Другие публикации:

  1. Ильяшенко Н.В. Устойчивость химического состава achillea millefolium L., hypericum perforatum L. методом фурье-ик спектроскопии / Н.В. Ильяшенко, В.Д.аИльяшенко // Материалы VI научной конференции студентов и аспирантов: Сб. ст. Тверь: Твер. гос. ун-т, 2008. С. 56Ц57.
  2. Ильяшенко Н.В. Изучение химического состава Achillea мillefolium L., Hypericum рerforatum L. методом Фурье-ИК спектроскопии / Н.В.аИльяшенко, В.Д.аИльяшенко // Тезисы докладов XV Региональных Каргинских чтений. Областная научно-техническая конференция молодых учёных Физика, химия и новые технологии. Тверь, 2008. С.а37.
  3. Ильяшенко Н.В. Использование метода Фурье-ИК спектроскопии в изучении изменений химического состава Bidens tripartita L. под действием антропогенных факторов / Н.В. Ильяшенко, С.М. Дементьева, С.Д. Хижняк, П.М. Пахомов, В.Д.аИльяшенко // Материалы Международной научно-практической конференции Вопросы дальнейшего развития регионов России в условиях мирового финансового кризиса. Шарья, 22-25 апр. 2009 г. / Сост. А.М.аБазанков, И.Г. Криницын, А.П.аЛипаев. Шарья, 2009. С. 87Ц90.
  4. Ильяшенко Н.В. Применение метода фурье-ик спектроскопии для изучения изменений химического состава Bidens Tripartita L. под действием антропогенных факторов / Н.В. Ильяшенко, В.Д. Ильяшенко // Тезисы докладов XVI Региональных Каргинских чтений. Областная научно-техническая конференция молодых учёных Физика, химия и новые технологии. Тверь, 2009. С. 42.
  5. Ильяшенко Н.В. Изменения в химическом составе Potentilla erecta (L.) Raeusch. под действием антропогенного фактора / В.Д. Ильяшенко // Материалы III Всероссийского с международным участием конгресса студентов и аспирантов-биологов "Симбиоз-Россия 2010". Нижний Новгород, 2010. С. 18Ц19.
  6. Ильяшенко Н.В. Изучение изменений химического состава Potentilla erecta L. под действием антропогенного фактора методами оптической спектроскопии / Н.В.аИльяшенко, С.Д. Хижняк, П.М. Пахомов, В.Д.аИльяшенко // Физико-химия полимеров: Синтез, свойства и применение: Сб. науч. Тр. Тверь: ТвГУ, 2010. Вып.а16. С. 266Ц272.
  7. Ильяшенко Н.В. Исследование изменений химического состава Potentilla erectaа(L.) Raeusch. под влиянием антропогенного воздействия / Н.В.аИльяшенко, Е.А.аРоговаа// Труды X Ежегодной Международной молодежной конференции ИБХФ РАН ВУЗы Биохимическая физика. 8-10 ноября 2010. Москва, 2010. С. 83Ц86.
  8. Ильяшенко Н.В. Изучение методами оптической спектроскопии изменений химического состава Potentilla erecta L. под действием антропогенного фактора // Тезисы докладов XVII Региональных Каргинских чтений. Областная научно-техническая конференция молодых учёных Физика, химия и новые технологии, Тверь, 2010. С.а37.
  9. Ильяшенко Н.В. Изучение фенольного состава зверобоя продырявленного спектральными методами / Н.В. Ильяшенко, Ю.Г. Оленева // Тезисы докладов XVIII Региональных Каргинских чтений. Областная научно-техническая конференция молодых учёных Физика, химия и новые технологии. Тверь, 2011. С. 34.
  10. Ильяшенко Н.В. Спектральные методы в изучении изменений химического состава Bidens tripartita L.под действием антропогенных факторов / Н.В. Ильяшенко, И.П. Шевчук, Г.С. Куликов // Тезисы докладов XVIII Региональных Каргинских чтений. Областная научно-техническая конференция молодых учёных Физика, химия и новые технологии. Тверь, 2011. С. 35.
  11. Ильяшенко Н.В. К изучению изменений химического состава Potentilla erectaаL. (Raeusch.) методами оптической спектроскопии / Н.В. Ильяшенко, В.Д.аИльяшенко, П.М. Пахомов // Материалы Международной научно-практической конференции Регионы в условиях неустойчивого развития, г. Кострома-Шарья, 28-30 апр. 2010 г. в 2 т. / Сост. А.М. Базанков, И.Г. Криницын, А.П. Липаев. Шарья, 2011. Т. 2. С.а117Ц123.
  12. Ильяшенко Н.В. Фурье-ИК спектроскопия в изучении изменений химического состава Bidens tripartita L. под действием антропогенных факторов / Н.В. Ильяшенко, С.Д. Хижняк, П.М. Пахомов // Материалы Международной междисциплинарной научной конференции с элементами научной школы для молодёжи Седьмые Курдюмовские чтения: Синергетика в естественных науках, 2011. С. 211Ц214.
  13. Ильяшенко Н.В. Изменение содержания фенольных соединений Potentilla erecta L. Raeusch. и Вidens tripartita L. в зависимости от влияния антропогенного воздействия / Н.В. Ильяшенко, В.Д. Ильяшенко, П.М. Пахомов, С.Д. Хижняк // Симбиоз России 2011: Материалы IV Всероссийского с международным участием конгресса студентов и аспирантов-биологов. Воронеж, 23-27 мая 2011аг., в 2 томах / Издательскийаполиграфический центраВГУ,а2011. Т.а1.аС.а17Ц19.
  14. Ильяшенко Н.В. Методы спектроскопии в изучении изменений химического состава Bidens tripartita L. под действием антропогенных факторов // Материалы Международного молодежного научного форума ЛОМОНОСОВ-2011 / Отв. ред. И.А. Алешковский, П.Н. Костылев, А.И. Андреев. [Электронный ресурс] М.: МАКС Пресс, 2011. Секция "Химия", подсекция Физическая химия-I, 2011.
  15. Ilyashenko N.V. Effect of anthropogenic factor on the content of biologically active compounds in Bidens tripartita L. And Potentilla erecta L. / N.V.аIlyashenko, S.D.аKhizhnyak, P.M. Pakhomov // Materials of International Conference УRenewable Wood and Plant Resources: Chemistry, Technology, Pharmacology, MedicineФ. Saint-Petersburg, June 21-24, 2011. P. 265Ц266.
  16. Ильяшенко Н.В. ИК спектральный анализ в биомониторинге окружающей среды на примере водных растений / Н.В. Ильяшенко, Ю.Г. Оленева, С.Д. Хижняк, П.М.аПахомов // Труды XI ежегодной международной молодежной конференции ИБХФ РАН-ВУЗы Биохимическая физика. 9Ц11 ноября 2011. Москва, 2011. С. 97Ц101.
  17. Ильяшенко Н.В. Изменения в химическом составе фенольных соединений корневища Potentilla erecta (L.) под действием антропогенного фактора/ Н.В.аИльяшенко, Е.А. Рогова, С.Д. Хижняк, П.М. Пахомов // Физико-химия полимеров: Синтез, свойства и применение: Сб. науч. Тр. Тверь: ТвГУ, 2011. Вып.а17. С. 195Ц203.
  18. Ильяшенко Н.В. Изучение влияния солей тяжелых металлов на химический состав ряски малой методом ИК спектроскопии / Н.В.аИльяшенко, Ю.Г. Оленева // Тезисы докладов XIX Региональных Каргинских чтений. Областная научно-техническая конференция молодых учёных Физика, химия и новые технологии. Тверь, 2012. С. 36
  19. Ильяшенко Н.В. ИК спектральный анализ в биомониторинге гидросферы на примере растений-гидрофитов / Н.В. Ильяшенко, Ю.Г. Оленева, С.Д.аХижняк, П.М.аПахомов // Физико-химия полимеров: Синтез, свойства и применение: Сб. науч. Тр. Тверь: ТвГУ, 2012. Вып. 18. С. 214Ц220.
  20. Ильяшенко Н.В. Изучение влияния солей тяжелых металлов на химический состав и морфологические особенности ряски малой физико-химическими методамиа/ Н.В. Ильяшенко, Ю.Г. Оленева // Тезисы докладов VI Всероссийской конференции молодых ученых, аспирантов и студентов с международным участием Менделеев-2012, Т. 4, С. 451
  21. Ильяшенко Н.В. Изменение химического состава череды трехраздельной под действием атмосферного загрязнения / Н.В. Ильяшенко, Ю.Г. Оленева, Н.А.аСоловьева, С.Д. Хижняк, П.М. Пахомов // Физико-химия полимеров: Синтез, свойства и применение: Сб. науч. Тр. Тверь: ТвГУ, 2012. Вып. 18. С.а227Ц234.
  1. Ильяшенко Н.В. Изучение воздействия солей тяжелых металлов на химический состав и морфологию роголистника темно-зеленого физико-химическими методами / Н.В. Ильяшенко, Ю.Г. Оленева // Материалы Международного молодежного научного форума ЛОМОНОСОВ-2012 / Отв. ред. И.А. Андреев, А.В. Андриянов, Е.А. Антипов, М.В Чистякова. [Электронный ресурс] М.: МАКС Пресс, 2012. Секция "Химия", подсекция Химия живых систем, нанобиоматериалы и нанобиотехнологии, 2012.

Технический редактор А.В. Жильцов

Подписано в печать 18.04.2012. Формат 60x84 1/16.

Усл. печ. л. 1,1. Тираж 100 экз. Заказ № 196.

Тверской государственный университет

Редакционно-издательское управление

Адрес: 170100, г. Тверь, ул. Желябова, 33.

Тел. РИУ: (4822) 35-60-63

Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по биологии