Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по медицине
На правах рукописи
ПЕТРОВ ВАСИЛИЙ МИХАЙЛОВИЧ
ВЛИЯНИЕ АЛКОГОЛЯ НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНИЗМЕ И ИХ КОРРЕКЦИЯ В УСЛОВИЯХ НИЗКО- И ВЫСОКОГОРЬЯ (экспериментальное исследование)
14.03.03 - патологическая физиология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание учной степени кандидата медицинских наук
Бишкек 2012
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы Среди асоциальных явлений, присущих современному обществу, алкоголизм и пьянство занимают особое место, обусловленное масштабностью и разнообразием фактически причиняемого ими вреда.
Злоупотребление алкоголем - частая причина гибели людей, аварий, дорожных происшествий (Кулапина Т.И., 2001; Александрин А.Л. с соавт., 2003; Гречко Т.Ю., 2004; Спектор Ш.И., 2006; Ерохин Ю.А., 2009).
ечение больных алкоголизмом имеет своей конечной целью добиться наступления ремиссии, восстановить работоспособность, вернуть больного к общественно полезному труду (Карвасарский Б.Д., 2002; Иванец Н.Н., 2002;
Каплан Г. И. с соавт., 2002; Гофман А.Г., 2003; Bates M.E., 2002 и др.).
Поскольку 30% территории Кыргызстана расположены на высоте более 3000 метров, возникает необходимость изучения особенностей влияния алкоголя на организм в условиях высокогорья, а работы, рассматривающие эту проблему в горах весьма немногочисленны (Заречнова Н.Н. с соавт., 2009;
Великородова М.Я., 2010). Повышенное внимание к проблеме гор вызвано также тем, что в них проживает около 10% всего населения земного шара, и они занимают 1/5 поверхности суши, являясь крупнейшей экосистемой.
В горах на организм оказывает действие комплекс факторов, таких как пониженное атмосферное давление и недостаточное содержание кислорода в воздухе, резкие перепады суточных и сезонных температур, высокая концентрация ультрафиолетовых лучей и другие. Под их влиянием перестраивается функция кровообращения, дыхания, нервная и эндокринная система, газообмен, обмена веществ (Турусбеков Б.Т. с соавт., 1979;
Данияров С.Б., 1979; Агаджанян Н.А. с соавт., 1986; Закиров Дж.З., 1996;
Яковлев В.М. с соавт., 2003 и др.) и изменяется течение патологических процессов (Алиев М.А., 1978; Миррахимов М.М., 1978; Шидаков Ю.Х-М. с соавт., 2001; Захаров Г.А., 2005, 2011 и др.).
Несмотря на достижения в области горной физиологии и патофизиологии, раскрытие механизмов адаптационных и дизадаптационных реакций организма, разработка методов повышения резистентности организма и изучение особенностей течения патологических процессов в горах остается актуальной проблемой.
Оставалось не изученным влияние алкоголя на морфофункциональное состояние организма в условиях высокогорья, при возвращении в низкогорье и возможность коррекции выявленных нарушений в этих условиях.
Проблема фармкоррекции алкоголизма несмотря на многочисленные исследования до настоящего времени остается актуальной. Из современных препаратов с широким спектром действия наше внимание привлек милдронат. Механизм его действия определяет многообразие фармакологических эффектов: повышение работоспособности, уменьшение симптомов психического и физического перенапряжения, активация тканевого и гуморального иммунитета, кардиопротекторное действие (Калвиньеш И.Я., 2003).
В связи с вышеизложенным, целью работы являлась оценка функционально-морфологических изменений у крыс при принудительной алкоголизации в условиях низко- (760 м), высокогорья (3200 м), при реадаптации к низкогорью после пребывания в горах и возможность коррекции выявленных нарушений с помощью милдроната.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
1. Изучить изменение ЭКГ, поведенческих реакций, физической работоспособности, гемореологических показателей, электролитного баланса и морфологических изменений головного мозга, сердца, печени, почек, поджелудочной железы у крыс при принудительной алкоголизации в условиях низкогорья.
2. Изучить изменение этих показателей у крыс при принудительной алкоголизации в условиях высокогорья.
3. Изучить изменение показателей у крыс при принудительной алкоголизации при их возвращении в низкогорье после 60-ти дневного пребывания в высокогорье.
4. Определить эффективность влияния милдроната на выявленные при хронической алкоголизации изменения в низко-, высокогорье и у реадаптирующихся к низкогорью, после пребывания в высокогорье, крыс.
Научная новизна Выявлено, что при длительном употреблении алкоголя повышение его концентрации в крови и снижение под влиянием милдроната не зависит от высоты местности.
Впервые показано положительное влияние милдроната при принудительной алкоголизации на ЭКГ, ориентировочно-приспособительные реакции, физическую работоспособность, электролитный состав в крови и тканях, свертывающую систему крови в условиях низкогорья.
Получены новые данные о более выраженном отрицательном влиянии алкоголя на организм в условиях высокогорья (3200 м над ур. моря) и при реадаптации крыс к условиям низкогорья, после 60-ти дневного пребывания в горах. Действие препарата в горах и при реадаптации к условиям низкогорья снижалось.
Установлено, что при принудительной алкоголизации в морфологической картине у животных различных серий обнаруживаются однотипные изменения: в сердце дистрофические и атрофические изменения мышечных волокон; в печени - жировая дистрофия; в головном мозге признаки отека и кровоизлияния; в поджелудочной железе - острого панкреатита и липоматоза. Применение милдроната существенного влияния на морфологические изменения не оказало.
Практическая значимость Исследования функциональных, ионных, гемореологических и морфологических изменений под влиянием лекарственных препаратов при алкоголизме в условиях различных высот позволят определить их эффективность. Полученные данные могут быть использованы при выборе средств для комплексного лечения алкоголизма и в целях успешного приспособления и жизнедеятельности человека и животных к высокогорью.
Результаты работы внедрены в учебный процесс на кафедре нормальной и патологической физиологии медицинского факультета КРСУ при чтении лекций и проведении практических занятий для студентов и клинических ординаторов по курсу патологической физиологии.
Основные положения, выносимые на защиту 1. При длительном употреблении алкоголя в условиях низко-, высокогорья и при реадаптации в низкогорье его концентрация в крови повышалась практически одинаково, применение милдроната достоверно снижало е во всех группах.
2. При алкоголизации крыс в низко-, высокогорье и реадаптирующихся к низкогорью возникают нарушения процессов возбудимости и проводимости в сердечной мышце, физической работоспособности, ориентировочно-приспособительной активности, гемостаза, ионного состава, регистрируется морфологические изменения в органах.
3. Применение при принудительной алкоголизации в условиях низкогорья милдроната, обладающего широким спектром действия, способствовало восстановлению физической работоспособности и поведенческой активности, оказывало положительное влияние на электролитный баланс и гемокоагуляцию.
4. При сочетанном воздействии факторов высокогорья (3200 м) и при реадаптации к низкогорью, после пребывания в высокогорье, эффективность препарата снижалась или отсутствовала.
ичный вклад соискателя Автором диссертации проведен информационный поиск, выполнены все серии экспериментальных работ в условиях низко- и высокогорья, проведена статистическая обработка результатов, дана их интерпретация, сделаны выводы, написаны статьи.
Апробация диссертации Материалы работы были представлены на ежегодных научных конференциях медицинского факультета Кыргызско-Российского Славянского университета (г. Бишкек, 2010, 2011 г.г.); на XII ежегодной научно-практической конференции Актуальные вопросы кардиологии (г.
Тюмень 2011 г.); первом Форуме молодых учных Кыргызской Республики (г. Бишкек 2011 г.); Всероссийской 70 итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск 2011 г.); научно-практической конференции Актуальные проблемы патофизиологии (г. Бишкек 2011 г.);
научно-практической конференции с международным участием Патофизиологические проблемы современной медицины и биологии (г.
Бишкек 2011 г.); II Международной научно-практической конференции Достижения, инновационные направления, перспективы развития и проблемы современной медицинской науки, генетики и биотехнологий (г.
Екатеринбург 2011); Научном Совете медицинского факультета КыргызскоРоссийского Славянского университета (г. Бишкек 2011 г.).
Публикации По материалам диссертации опубликовано 18 научных работ, 4 принято в печать, из них 10 индивидуальных, из перечня, утвержденного ВАК РФ - 9.
Структура диссертации Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста и состоит из введения, шести глав: Обзор литературы, Материалы и методы, Результаты исследований (3 главы), Обсуждение результатов и Выводов. Список литературы включает 237 наименований, в том числе англоязычных.
Работа иллюстрирована схемой, 15 таблицами и рисунками.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Общий план и объем выполненных работ В связи с поставленными задачами нами выполнены 3 серии исследований.
Низкогорная (I) серия (Бишкек, 760 м над ур. моря):
1 контрольная группа - здоровые интактные крысы;
2 опытная группа - крысы с принудительной алкоголизацией (в течение 60 дней) без фармкоррекции;
3 опытная группа - крысы с принудительной алкоголизацией (в течение 60 дней) и фармкоррекцией (1 раз в сутки в дозе 15 мг/кг веса внутрибрюшинно в течение последних 20 дней опыта).
Высокогорная (II) серия (3200 м над ур. моря):
4 контрольная группа - здоровые крысы, находившиеся в течение дней в высокогорье (перевал Туя-Ашу, 3200 м над ур. моря);
5 опытная группа - крысы с принудительной алкоголизацией (в течение 60 дней) без фармкоррекции;
6 опытная группа - крысы с принудительной алкоголизацией (в течение 60 дней) и фармкоррекцией (1 раз в сутки в дозе 15 мг/кг веса внутрибрюшинно в течение последних 20 дней опыта).
Серия (III) с реадаптацией (опыты в низкогорье, после предварительной 60 дневной адаптации животных в высокогорье):
7 контрольная группа - здоровые крысы, исследовались на 10-й день после спуска с высокогорья в низкогорье (г. Бишкек, 760 м над ур. моря);
8 опытная группа - реадаптирующиеся крысы с принудительной алкоголизацией (в течение 60 дней) без фармкоррекции;
9 опытная группа - реадаптирующиеся крысы с принудительной алкоголизацией (в течение 60 дней) и фармкоррекцией (1 раз в сутки в дозе 15 мг/кг веса внутрибрюшинно в течение последних 20 дней опыта).
Эксперимент над животными проводился в соответствии с Европейской конвенцией о защите животных (директива 86/609 EEC).
Условия проведения опытов в низкогорье и высокогорье были однотипными и стандартными. Выведение животных из эксперимента осуществлялось передозировкой эфирного наркоза.
В опыт брались беспородные неполовозрелые (растущие) крысы с массой тела 100-120 г. Принудительную алкоголизацию проводили раствором этанола, который был единственным источником жидкости (Шабанов П.Д. с соавт., 2006). Использовали возрастающие концентрации (10 дней - 5% раствор этанола, 10 - 10%, 20 дней - 15% и в дальнейшем 20%).
Содержание этанола в крови определяли алкилнитритным газохроматографическим методом (Фартушный А.Ф. с соавт., 2002; Акимов П.А. с соавт., 2010) на 60 день опыта перед забоем.
ЭКГ регистрировалась на электрокардиографе ЭК1Т-03М (на 60 сутки эксперимента) в трех стандартных отведениях с помощью игольчатых электродов. Скорость протяжки ленты была 50 мм/сек, величина стандартного м/вольта - 10 мм.
Ориентировочно-исследовательское поведение и физическую работоспособность животных изучали на 10-е, 20-е, 40-е и 60-е сутки принудительной алкоголизации.
О функциональном состоянии животных судили по показателям поведения крыс в тесте лоткрытое поле. Проводили регистрацию двигательной активности (смена квадратов), ориентировочной реакции (вертикальные стойки), исследовательского поведения (обследование отверстий) (Захаров Г.А. с соавт., 2011).
Функциональный тест на физическую работоспособность крыс - поднятие и удержание груза - проводили по методике Сперанского С.В.
(Вишневский А.А., 2007).
Состояние свертывания крови изучалось на коагулографе Н-334. На коагулограмме определяли: начало, продолжительность, окончание свертывания крови, е вязкость и плотность кровяного сгустка.
Определение содержания электролитов (Na+, К+) проводилось на пламенном фотометре ПФМ-УХЛ 4.2. в крови по методу В.Н. Бриккера (1961), а в тканях (головного мозга, сердца, печени, почки и поджелудочной железы) - по методу А.Г. Руммель, А.Ф. Баженовой (1967).
Для гистоморфологического исследования тканей брали кусочки размерами 1,5х2х1 см. фиксировали в 10% р-ре формалина на фосфатном буфере рН 7,4 02М. С помощью санного микротома из парафиновых блоков готовились срезы. Препараты окрашивались гематоксилин-эозином (Меркулов Г.А., 1969). Описание препаратов и снимки сделаны ассистентом кафедры патологической анатомии Кыргызской Государственной Медицинской академии им. акад. И.К. Ахунбаева Козьминой Юлией Владимировной. За что выражаем ей благодарность.
Статистическую обработку материала проводили методом вариационной статистики. Вычисляли среднее значение (М), стандартное отклонение (), ошибку средней величины (m). Разницу средних величин оценивали по критерию Стьюдента и вероятности Р, которую признавали статистически значимой при Р <0,05. Графические иллюстрации построены при помощи компьютерных программных пакетов Excel.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ НИЗКОГОРНАЯ СЕРИЯ Изменение содержание алкоголя в крови Исследование алкоголя в крови показало (рис. 1), что у животных группы, не употреблявших алкоголь, его не обнаружено. Во 2 группе после принудительной алкоголизации концентрация алкоголя в крови составила 0,400,012Й. После введения милдроната его уровень снизился до 0,320,013Й (20%) (Р <0,05).
Рис. 1. Концентрации алкоголя в крови Примечания: * - изменения достоверные по сравнению с 1 группой; + - изменения достоверны по сравнению с 2 группой; х - изменения достоверны по сравнению с группой; # - изменения достоверны по сравнению с 8 группой, (P <0,05).
Изменение электрокардиограммы Исследование ЭКГ показали, что длительное употребление алкоголя ведет к нарушению процессов возбудимости и проводимости. В группе животных, получавших милдронат на фоне алкоголизации наблюдалась нормализация показателей. Это, вероятно, обусловлено улучшением метаболических процессов.
Изменение ориентировочно-приспособительной активности и физической работоспособности Принудительная алкоголизация в условиях низкогорья вызвала сдвиги в поведенческой активности крыс и физической работоспособности (табл. 1, рис. 2). Это проявилось статистически достоверным снижением показателей локомоции, ориентировочной реакции и исследовательского поведения животных при тестировании в лоткрытом поле.
Таблица Изменение поведенческих реакций (количество) у крыс при принудительной алкоголизации и фармкоррекции в условиях низкогорья (Мm) Наруж. Внутр.
Норки Стойки Груминг Дефекац. Мочеисп.
квадр. квадр Исходные 384 20,4 71 4,20,4 50,8 1,50,4 0,20,(n=6) 5% спирт 20,7 51,6 51,5 41,2 10,224* 00* (n=8) 10% спирт 10,6 60,7 51,4 30,8 10,6 0,60,152,4* (n=8) 15% спирт 10,11,41,3* 0,60,3* 30,6* 20,7* 2,40,6* 00* (n=8) 20% спирт 2,31,6 30,6 0,60,121,2* 30,4* 20,3* 00* (n=8) 20% спирт + 50,6 0,40,495*х 40,6* 121*х 131,5*х 0,10,1* милдронат (n=8) Примечание: * - изменения достоверны по сравнению с исходными данными;
х - изменения достоверны, по сравнению с 2 группой (Р <0,05).
Введение милдроната в течение 20-ти дней (табл. 1) способствовало достоверному увеличению пересеченных наружных квадратов в 4 раза (Р <0,001), вертикальных стоек - в 6,5 раза (Р <0,01) и обследование норок в в раза (Р <0,05). Количество дефекаций уменьшилось в 6 раз (Р <0,05).
Алкоголизация животных приводила к снижению физической работоспособности на 20-е сутки (на 22 г), на - 40-е на 43 г (Р <0,05), на 60-е на 69 г (Р <0,05), в то время как в 3-й опытной группе (с фармкоррекцией) отмечалось достоверное повышение работоспособности по сравнению как с контрольной (Р <0,05), так и с 2-й опытной группой (Р <0,05).
Таким образом, нами установлено корригирующее влияние милдроната на показатели поведения и физическую работоспособность крыс при принудительной алкоголизации в условиях низкогорья. Это скорее всего связано с его антистрессорным и метаболическим действием.
Контроль Алкоголь Алкоголь + милдронат Рис. 2. Изменение работоспособности крыс при принудительной алкоголизации и фармкоррекции Примечание:* - изменения достоверны по сравнению с исходными данными; х - изменения достоверны, по сравнению с 2 группой (Р <0,05).
Изменение реологических свойств крови Анализ коагулограммы у крыс с принудительной алкоголизацией в условиях низкогорья (табл. 2) выявил изменения, свидетельствующие о гипокоагуляции. Так, у крыс 2 группы отмечалось удлинение начала и окончания свертывании крови. При этом достоверно увеличивалась и продолжительность свертывания крови (до 1586 против исходной - 134сек., Р <0,05). Вязкость крови повышалась на 44% (Р <0,05), а плотность кровяного сгустка имела тенденцию к повышению.
В третьей группе животных с фармкоррекцией милдронатом время начала свертывания крови существенно не отличалась от второй группы (772 сек.), а время его окончания - от исходного, но было достоверно короче, чем во 2-ой группе. Продолжительность свертывания была тоже достоверно снижена по сравнению со 2-й группой и не отличалась от контрольной. Вязкость крови повышалась на 70% (P <0,05) по отношению к низкогорной группе. В тоже время не было достоверных изменений плотности кровяного сгустка.
Таким образом, изучение состояния свртывания крови показало, что длительная алкоголизация вызывает существенное нарушение свертывания крови, что очевидно связано с нарушениями функции печени, продуцирующей ряд факторов свертывания крови.
Таблица Изменение свертывающей системы крови у крыс с принудительной алкоголизацией и фармкоррекцией в условиях низкогорья (Мm) Ам, усл.
Т1, сек. Т2, сек. Т, сек. Ао, усл. ед.
ед.
Низкогорье 1 группа 485 18211 1349 3,70,09 0,0190,0(n=6) 2 группа 0,01648* 22210* 1586* 20,2* (n=8) 3 группа 0,011897х 1185х 772* 10,3*х (n=8) Обозначения (здесь и в табл. 4): Т1 - начало свертывания, Т2 - окончание свертывания, Т - продолжительность свертывания крови, Ам - вязкость крови, А - плотность кровяного сгустка.
Примечание: * - изменения достоверны по сравнению с контрольными данными;
х - изменения достоверны по сравнению с 2 группой (Р <0,05) Применение милдроната, улучшающего метаболизм и энергообеспечение тканей, в том числе и печеночных клеток, существенно корригирует имеющиеся гипокоагуляционные сдвиги, вызывая тенденцию к нормализации свертывания крови.
Изменение электролитного баланса Принудительная алкоголизация привела к гипонатриемии в плазме, милдронат нормализовал его уровень. Изучение натрия в эритроцитах и калия в плазме не выявило достоверных отличий. Калий в эритроцитах достоверно снижался, а введение препарата повышало его уровень.
Принудительная алкоголизация в условиях низкогорья вызвала снижение калия в сердце, мозге, печени, поджелудочной железе, а вот в почках наблюдалось его увеличение. Такой же эффект наблюдался и в уровне натрия. При применении милдроната имелась тенденция к повышению калия во всех исследуемых органах, за исключением почек, где была тенденция к снижению. Со стороны натрия в головном мозге, почках и поджелудочной железе наблюдалась тенденция к повышению его уровня, а в печени и сердце - к снижению.
Морфофункциональные изменения в органах крыс Изменения в сердечной мышце В сердечной мышце после длительного употребления алкоголя (рис.
3.б.) проявления были следующие: полнокровие, стазы, очаговые кровоизлияния, дистрофия миоцитов, мелкоочаговый межуточный серозный миокардит (лимфоцитарная инфильтрация).
а б в Рис. 3. Морфологическая картина изменений в сердечной мышце крыс в условиях низкогорья. (Окраска гематоксилином и эозином) а - Контроль. Контуры клеток чткие, ядра сохранены во всех клетках, не увеличены, чтко окрашены. Сосуды нормального тонцса, их стенки не уплотнены. В просветах сосуды содержат достаточное количество эритроцитов (Х 63); б - сердце после принудительной алкоголизации. Картина мелкоочагового межуточного серозного миокардита (Х 400); в - сердце после принудительной алкоголизации с фармкоррекцией милдронатом. Картина мелкоочагового межуточного серезного миокардита (Х 400).
В группе животных, которым вводили препарат (рис. 3.в.) в сердце наблюдался: очаговый межуточный серозный миокардит, местами вакуольная дистрофия миоцитов (внутриклеточный отек эпителиальных клеток с появлением в цитоплазме вакуолей, разрушающих клетки), стазы.
Т.е. милдронат не оказал положительного влияния.
Изменения в печени В печени у животных с принудительной алкоголизацией (2 группа) была обнаружена (рис. 4.б.) гиалиново-капельная дистрофия гепатоцитов, слабая регенерация, видны единичные двуядерные гепатоциты и очаговые кровоизлияния в печеночной ткани. При применении препарата (рис. 4.в.) видна умеренная лимфогистиоцитарная инфильтрация трактов, наблюдалась регенераторная активность, проявляющаяся крупноядерными и двуядерными гепатоцитами, также видны умеренная мелко- и крупнокапельная дистрофия гепатоцитов (признаки хронического гепатита признаки воспаления). Можно отметить, что у животных с введением милдроната регистрировалось уселение регенерации гепатоцитов.
Изменения в почках Алкоголь вызвал признаки слабо выраженного хронического пиелонефрита, подкапсульную гиалиново-капельную дистрофию эпителия канальцев, которая выявлялась появлением в цитоплазме крупных гиалиноподобных белковых капель, сливающиеся между собой и заполняющих тело клетки, при этом происходит деструкция ультраструктурных элементов клетки.
а б в Рис. 4. Морфологическая картина изменений в печени крыс в условиях низкогорья. (Окраска гематоксилином и эозином) а - Контроль. Гистоархитектоника органа сохранена (Х 100).
б - печень после принудительной алкоголизации (Х 400). Картина хронического гепатита; в - печень после принудительной алкоголизации с фармкоррекцией милдронатом (Х 400).
После применения милдроната обнаружилась пролиферация мезангии, очаговый гиалиноз капиллярной мембраны, лапчатые клубочки, гиалиновокапельная дистрофия эпителия извитых канальцев, скопление гранул уробилина в просвете извитых канальцев, очаговая перигломерулярная лимфоцитарная инфильтрация (признаки слабо выраженного гломерулонефрита).
Изменения в поджелудочной железе После употребления алкоголя в морфологической картине поджелудочной железы была обнаружена субтрофия долек, выраженный липоматоз (патологические изменения клеток и их замещение жировой тканью), мелкокистозные расширения выводных протоков, а также очаговая периваскулярная лимфогистиоцитарная инфильтрация. После применения милдроната в железе наблюдалась практически тотальная атрофия паренхимы с замещением жировой тканью, паренхима представлена единичными фрагментами экзокринного отдела долек, островки Лангерганса не просматриваются, выявляется очаговая периваскулярная лимфоцитарная инфильтрация. Т.е. изменения были более выражены по сравнению с группой, где препарат не применялся.
Изменения в головном мозге Изменение в структуре головного мозга на действие этанола (рис. 5.б.) проявилось в виде выраженного периваскулярного и перицеллюлярного отека, стазов, а также периваскулярных мелкоочаговых диапедезных кровоизлияний (поражение стенок капилляров, представленные фрагментацией базальной пластинки, некрозом эндотелиальных клеток).
Применение препарата не оказало эффекта на структуру головного мозга (рис. 5.в.).
а б в Рис. 5. Морфологическая картина изменений в головном мозге крыс в условиях низкогорья. (Окраска гематоксилином и эозином) а - контроль. (Х 400); б - головной мозг после принудительной алкоголизации (Х 400). Картина отека; в - головной мозг после принудительной алкоголизации с фармкоррекцией милдронатом (Х 400). Картина отека.
ВЫСОКОГОРНАЯ СЕРИЯ Изменение содержание алкоголя в крови В 5 группе после приема алкоголя в течение 60 дней (рис. 1) его уровень составил 0,420,013Й. У крыс, которым с 40-го по 60 день алкоголизации вводили милдронат, его концентрация снизилась до 0,330,014Й (22%) (Р <0,05).
Изменение электрокардиограммы В результате 60 дневной адаптации к высокогорью (3200 м. над ур. м) у животных на ЭКГ зубец Т имел тенденцию к снижению в I отведении, а во II отведении у 25% животных он был двугорбый, что говорит о нарушении коронарного кровообращения.
У животных, получавших алкоголь в условиях высокогорья (5 группа), по сравнению с 4 и 6 группами, отмечалась тахикардия. Частота ЧСС возросла на 149 ударов в минуту при продолжительности сердечного цикла 0,120,01 против 0,160,02 и 0,170,01 сек. Произошло изменение вольтажа зубцов Р и Т, смещение сегмента S-T выше изолинии, глубокий зубец S свидетельствуют об ишемии сердечной мышцы.
У животных 6 группы наблюдалась брадикардия. Так, ЧСС урежалась до 36927 уд/мин против контрольной группы (40915). У части животных наблюдалась синусовая аритмия. Интервал S-T стал выше изолинии в I отведении у 25% и у 75% во II отведении.
Величина зубца Р во всех отведениях не изменялось, по сравнению с контрольными низкогорными животными, но достоверного увеличилась во всех отведениях по сравнению с животными 4 группы. Появился глубокий зубец Q во всех отведениях, что свидетельствует о ишемических изменениях в сердечной мышце. Вольтаж зубца Т увеличивался (по сравнению с группой) в I отведении (0,60,23 против 0,120,1 мм) и в III отведении, (1,30,23 против 0,60,2 мм).
Таким образом, у животных получавших алкоголь + милдронат наблюдались выраженная брадикардия, удлинился интервала Q-T, наблюдалась элевация сегмента S-T, высокий заостренный зубец Т в I и II отведениях, глубокий Q, что свидетельствует о ишемии миокарда.
Изменение ориентировочно-приспособительной активности и физической работоспособности Исследование пробежек по наружным квадратам у животных, адаптирующихся в условиях высокогорья, показало (табл. 3) снижение к дню на 50%, норкового рефлекса более чем в 2 раза, стоек в 2 раза. При алкоголизации наблюдалось их дальнейшее снижение. Введение препарата привело к достоверному повышению всех параметров.
Таблица Изменение поведенческих реакций (количество) у животных при принудительной алкоголизации и фармкоррекции (Мm) Нар.кв. Внут. кв. Норки Стойки Груминг Дефекац. Мочеисп.
Исходные низкогорные 384 20,4 71,0 4,20,4 50,6 1,50,4 0,20,животные (n=6) 10 дней адаптации (n=8) 334 1,80,4 6,51,2 3,60,4 4,81,2 1,70,4 0,20,20 дней адаптации (n=8) 305 1,80,4 61,3 4,81,1 20,5 0,20,2,40,4* 40 дней адаптации (n=8) 1,70,3 41,1 4,71,0 2,10,4 0,160,254* 2,30,6* 60 дней адаптации (n=8) 20,5 4,70,9 1,90,6 0,150,196* 30,9* 2,20,6* 5% спирт (n=8) 306 20,3 50,3 4,71,0 1,70,4 0,20,2,50,5* 10% спирт (n=8) 1,30,2 3,50,8 1,60,5 0,30,205* 3,20,2* 1,80,4* 15% спирт (n=8) 1,60,134*+ 0,60,2* 2,30,4* 1,20,3* 2,90,6* 0,40,05+ 20% спирт (n=8) 1,50,72*+ 0,30,2*+ 0,90,2*+ 0,50,2*+ 2,00,5*+ 0,50,05*+ 20% спирт + 1,50,143*х 1,10,3х 1,50,3* 1,30,2*х 4,10,4х 0,20,05х милдронат (n=8) Примечание: * - изменения достоверны по сравнению с данными у низкогорных животных; + - изменения достоверны по сравнению с данными у интактных животных в эти же сроки пребывания в горах; х - изменения достоверны по сравнению с группой без коррекции милдронатом (Р <0,05).
Исследование физической работоспособности (рис. 6) показало, что на 10 день пребывания в горах она снижалась на 27% (с 30010 до 24815 г, Р <0,05). При дальнейших сроках адаптации наблюдалось постепенное увеличение работоспособности, которая к 60 дню даже превысила низкогорные показатели (35015 г., Р <0,05).
При употреблении 5% р-ра этанола работоспособность снизилась на 23% (Р <0,05). К концу опытов работоспособность уменьшилась на 34%.
Введение милдроната повысило работоспособность на 32%, по отношению к 5 группе.
Адаптация к Принудительная Принудительная низкогорье высокогорью алкоголизация алкоголизация + милдролнат Рис. 6. Изменение работоспособности при адаптации к высокогорью, принудительной алкоголизации и фармкоррекции милдронатом.
Примечание: * - изменения достоверны по сравнению с данными у интактных низкогорных животных; # - изменения достоверны по сравнению с данными у интактных животных в эти же сроки пребывания в горах; х - изменения достоверны по сравнению с группой без коррекции милдронатом (Р <0,05).
Обозначения: Н - низкогорье; В - высокогорье.
Изменение реологических свойств крови Изучение состояния гемокоагуляции (табл. 4) показало, что двухмесячное пребывание крыс в условиях высокогорья выявило замедление начала свертывания крови, не изменено его окончание и отмечена некоторая тенденция к уменьшению е продолжительности. Вместе с тем достоверно повышалась вязкость крови (с 3,70,09 до 1,00,08, Р <0,05).
Таблица Изменение свертывающей системы крови при принудительной алкоголизации и фармкоррекции в условиях высокогорья (Мm) Т1, сек. Т2, сек. Т, сек. Ам, усл. ед. Ао, усл. ед.
1 группа (n=6) 485 18211 1349 3,70,09 0,0190,04 группа (n=8) 687 18426 11612 0,021,00,08* 5 группа (n=8) 15015 11122 0,02397+ 1,050,13* 6 группа (n=8) 0,02391+ 9424*+ 5525*+ 1,050,25* Примечание: * - изменения достоверны по сравнению с низкогорными данными;
+ - изменения достоверны по сравнению с данными у высокогорных животных (Р <0,05).
При алкоголизации происходят изменения в системе гемостаза гиперкоагуляционного характера. Применение милдроната, по сравнению с животными без коррекции, не меняло начала свертывания крови, но отмечалось достоверное уменьшение окончания свертывания крови и е продолжительности по сравнению как с высокогорным контролем, так и с низкогорными данными. Вязкость крови и плотность кровяного сгустка не менялось по сравнению с данными высокогорной контрольной группы, т.е.
они были повышены в такой же степени как и при алкоголизации.
Достоверной разницы в показателях гемокоагуляции между животными с алкоголизацией и при коррекции милдронатом не отмечалось.
Изменение электролитного баланса У животных после 60-ти дневной адаптации к условиям высокогорья содержание натрия в плазме существенно не изменилось, а алкоголизация привела к его незначительному снижению. Введение милдроната достоверно повысило его концентрацию. Со стороны уровня натрия в эритроцитах не наблюдалось достоверных изменений.
Анализ содержания калия в плазме показал, что адаптация к высокогорью не изменяла его содержание в крови, а принудительная алкоголизация в горах привела к его снижению в плазме (P <0,01). Введение препарата повысило концентрацию калия в плазме.
В высокогорных исследованиях алкоголизация крыс привела к снижению калия и натрия в сердце, головном мозге, печени, поджелудочной железе, а в почках он остался неизменным. Применение препарата привело к достоверному повышению калия и натрия в поджелудочной железе, а в почках имелась тенденция к повышению. В других исследуемых органах препарат эффекта не оказал.
Таким образом, при воздействии высокогорной гипоксии на животных наблюдалось единая тенденция в модуляции ионного баланса для различных тканей. Об этом свидетельствует снижение как К+, так и Na+, но снижение натрия было более значительным. В связи с этим наблюдалось повышение К+/Na+ коэффициента у крыс как с принудительной алкоголизацией, так и без не. Данный факт наводит на мысль об универсальности регуляторных и ферментативных механизмов. Применение милдроната оказало нормализующее действие, которое было не так выражено, как в низкогорных исследованиях.
Морфофункциональные изменения органов Изменения в сердечной мышце После 60-ти дневной адаптации в условиях высокогорья в сердечной мышце обнаружилось (рис. 7.а.) полнокровие, стазы, кровоизлияния в эпикарде, под эндокардом выраженная дистрофия миоцитов (гипохромия ядер, цитоплазмы), умеренно выраженная периваскулярная мононуклеарная инфильтрация. Это свидетельствует об умеренно выраженном миокардите и дистрофических изменениях в миокарде. В 4 группе животных дача алкоголя в горах привела к полнокровию, стазам, периваскулярным кровоизлияниям, очаговой лимфоцитарной инфильтрации интерстиция (рис. 7.б.), разрастанию нежноволокнистой соединительной ткани с перифокальной гипертрофией миоцитов в субэндокардиальных участках, дистрофии мышечных волокон.
а б в Рис. 7. Морфологическая картина изменений в сердце крыс в условиях высокогорья. (Окраска гематоксилином и эозином) а - Здоровые крысы после 60 суток адаптации. Признаки миокардита (Х 400).
б - сердце после принудительной алкоголизации. Признаки кардионекроза (Х 400).
в - сердце после принудительной алкоголизации с фармкоррекцией милдронатом.
Картина кровоизлияния (Х 400).
Это свидетельствует о более выраженном миокардите с начальными признаками кардиосклероза. Введение милдроната привело (рис. 7.в.) к дистрофии миоцитов в субэндокардиальной области, а также наблюдалось полнокровие, стазы, кровоизлияния, очаговая периваскулярная лимфоцитарная инфильтрация. Миокардит был менее выражен чем в группе без фармкоррекции.
Изменения в печени После 60 дней адаптации в печени обнаружилось (рис. 8.а.) центрилобулярные стазы, кровоизлияния, дистрофия, некрозы гепатоцитов, мелкоочаговая лимфоцитарная инфильтрация трактов, пролиферация желчных протоков, регенераторная активность, которая выражалась появлением крупноядерных гепатоцитов (признаки выраженного хронического гепатита и влияния гипоксии). Дача алкоголя привела (рис.
8.б.) к полнокровию печеночной ткани, кровоизлиянию в ней, наблюдались очаги крупнокапельной дистрофии гепатоцитов, повышалась регенераторная активность крупноядерных гепатоцитов, видна слабо выраженная лимфоцитарная инфильтрация трактов (признаки не активного гепатита). При введении препарата морфологическая картина печени (рис. 8.в.) не изменялась, т.е. положительного эффекта не наблюдалось.
а б в Рис. 8. Морфологическая картина изменений в печени крыс в условиях высокогорья. (Окраска гематоксилином и эозином) а - Здоровые крысы после 60 суток адаптации. Признаки выраженного хронического гепатита и влияние гипоксии (Х 400); б - печень после принудительной алкоголизации. Картина неактивного гепатита (Х 400); в - печень после принудительной алкоголизации с фармкоррекцией милдронатом. Картина неактивного гепатита (Х 400).
Изменения в почках После пребывания в горах в морфокартине почки обнаружилась мелкоочаговая лимфоцитарная инфильтрация слизистой оболочки лоханки, стромы коркового слоя, с разрастанием соединительной ткани, гидропическая дистрофия эпителия канальцев в подкапсульной области (явления слабо выраженного хронического пиелонефрита). 60-ти дневная алкоголизация в горах привела к мелкоочаговой лимфоцитарной инфильтрации стромы с разрастанием соединительной ткани, дистрофии эпителия извитых канальцев.
При введении милдроната эффекта не наблюдалось.
Изменения в поджелудочной железе В поджелудочной железе после пребывания в горах обнаружилась умеренно выраженная периваскулярная лимфоцитарная инфильтрация, полнокровие. Что свидетельствует о слабо выраженных признаках панкреатита. При даче алкоголя выявлено разрастание жировой ткани в междольковом пространстве с очаговой лимфогистиоцитарной инфильтрацией, внутридольковые протоки расширены. При введении милдроната наблюдалось уменьшение признаков липоматоза, но явления хронического панкреатита сохранялись).
Изменения в головном мозге В 4 группе в головном мозге наблюдался (рис. 9.а) периваскулярный и выраженный перицеллюлярный отек, очаговые кровоизлияния (признаки отека головного мозга и нарушения микроциркуляции). Дача алкоголя привела к неравномерным перицеллюлярным отекам (рис. 9.б.), стазам, диапедезным кровоизлияниям, полнокровию сосудистого сплетения (явления отека менее выражены, но более выражены нарушения микроциркуляции).
Введение препарата уменьшило (рис. 9.в.) полнокровие в сосудистом русле и отсутствовали диапедезные кровоизлияния, что свидетельствует о положительном эффекте.
а б в Рис. 9. Морфологическая картина изменений в головном мозге крыс в условиях высокогорья. (Окраска гематоксилином и эозином) а - Здоровые крысы после 60 суток адаптации. Признаки отека головного мозга и нарушения микроциркуляции (Х 400); б - головной мозг после принудительной алкоголизации. Явления отека менее выражены, но более выражены нарушения микроциркуляции (Х 400); в - головной мозг после принудительной алкоголизации с фармкоррекцией милдронатом. Отсутствие диапедезных кровоизлияний (Х 400).
СЕРИЯ С РЕАДАПТАЦИЕЙ Изменение содержание алкоголя в крови Исследование алкоголя в крови показало (рис. 1), что у животных 1 и группы, не употреблявших алкоголь, его не обнаружено, а в 8 группе после приема алкоголя в течение 60 дней его уровень составил 0,380,14Й. У крыс, которым вводили милдронат, его концентрация в крови снизилась до 0,30,13Й (Р <0,05).
Изменение электрокардиограммы Исследование ЭКГ показало, что длительное употребление алкоголя ведет к нарушению процессов возбудимости и проводимости. Милдронат оказал положительное влияние на эти функции.
Изменение ориентировочно-приспособительной активности и физической работоспособности При исследовании пробежек по наружным квадратам в 7 группе (табл. 5) наблюдалось снижение локомоторной активности на 73%. На 60-е сутки алкоголизации снижение достигло 91% (Р <0,001). В 9-й группе животных при фармкоррекции милдронатом, двигательная активность возросла в 2,раза.
Анализируя данные по количеству пересеченных внутренних квадратов, можно отметить, что у крыс 7 группы наблюдалось их снижение на 60%, принудительная алкоголизация снизила их на 85%. При введении препарата активность возросла в три раза.
В 7 группе норковый рефлекс снизился с 71 до 20,4, принудительная алкоголизация снизила его ещ на 77% (до 0,90,4, Р <0,05), применение милдроната значительного эффекта не оказало.
Таблица Изменение поведенческих реакций (количество) при принудительной алкоголизации и фармкоррекции у реадаптирующихся к низкогорью животных (Мm) Наруж. Внурт. Норки Стойки Груминг Дефекац. Мочеисп.
квадр. квадр.
Исходные у 384 20,4 71,0 4,20,4 50,8 1,50,4 0,20,низкогорных животных (n=8) Исходные у реадаптирующихся 10,31,1* 0,80,17* 20,4* 1,60,2* 1,30,4* 0,40,1* 0,20,животных (7 группа) (n=8) 5% спирт (n=8) 9,50,6* 1,30,2* 2,40,3* 1,40,23* 1,50,13* 0,30,12* 0,10,10% спирт (n=8) 10,61,6* 1,50,3 2,20,37* 1,60,34* 1,240,3* 0,20,1* 0,050,15% спирт (n=8) 7,91,9* 0,80,3* 1,50,5* 1,40,35* 0,980,2* 0,50,1* 0,30,20% спирт (n=8) 3,71,9*+ 0,30,17* 0,90,2* 0,50,13* 1,30,13* 0,60,2 0,40,20% спирт + 91,7+х 0,90,2*х 1,10,34* 10,15*+х 1,30,25* 0,450,14* 0,30,милдронат (n=8) Примечание: * - изменения достоверны по сравнению с данными низкогорной группы;
+ - изменения достоверны по сравнению с данными 7 группы;
х - изменения достоверны по сравнению с группой без коррекции милдронатом (Р <0,05).
В 7 группе наблюдалась уменьшение стоек на 61%. При употреблении алкоголя активность оставалась сниженной и к 60 дню стала минимальной (0,50,13) и несколько увеличивалась при применении милдроната (9 группа) (10,15, Р <0,05).
Косметическое ухаживание за своим телом (груминг) в 7 группе снизилось в 3,8 раза (Р <0,05). При принудительной алкоголизации как с применением милдроната, так и без него, количество ухаживаний сохранялось на одинаковом уровне (1,30,13, Р <0,05). Количество мочеиспусканий существенно не менялось.
Изучение физической работоспособности показало (рис. 10), что при реадаптации она существенно не изменялась, а на 10 сутки употребления алкоголя наблюдалось увеличение работоспособности по отношению к низкогорным показателям (с 30010 до 36323 г, Р <0,05). На 20-й и 40-й дни она оставалась увеличенной. На 60-й день опыта вес поднятого груза возрос в среднем до 40634 г, (Р <0,05). Применение милдроната снизило работоспособность животных на 59 г (15%, Р <0,05).
Изучение реологических свойств крови У крыс при реадаптации в низкогорье (7 группа) отмечалось незначительное снижение продолжительности свертывания крови, но более поздно начиналось и заканчивалось е свертывание. Выражено и достоверно повышалась вязкость крови, которая была повышена на 51% (с 3,70,09 до 1,80,12 усл. ед., Р <0,05), при неизмененной плотности сгустка.
У животных, употреблявших алкоголь в течение 60 дней (8 группа), было отмечено достоверное укорочение продолжительности и окончания свертывания крови на 48% и 37% соответственно по сравнению с 1-й группой. Вязкость крови была повышена более значительно (до 0,780,усл. ед.). По сравнению с показателями в 7-й группе возросла и плотность кровяного сгустка.
При применении милдроната у крыс с принудительной алкоголизацией была отмечена тенденция к нормализации показателей продолжительности и окончания свертывания крови. Было менее выражено повышение вязкости крови и плотности кровяного сгустка.
Изменение электролитного баланса У реадаптирующихся к условиям низкогорья животных (7 группа), содержание натрия в плазме имело тенденцию к снижению, принудительная алкоголизация усиливала его снижение. Введение препарата нормализовало содержание натрия в плазме.
Определение содержания натрия в эритроцитах выявило, что принудительная алкоголизация животных незначительно снижала его концентрацию. Введение милдроната способствовало его нормализации.
Анализ содержания калия показал, что в плазме оно не изменялось, а в эритроцитах у крыс с реадаптацией (7 группа) имелась тенденция к его снижению на 7,9 ммоль/л. Алкоголизация привела к дальнейшему достоверному снижению его уровня (Р <0,05). Милдронат не оказал коррегирующего влияния.
У реадаптирующихся животных наблюдалось уменьшение калия и натрия в различных тканях. При принудительной алкоголизацией и без не наблюдается дальнейшее их снижение. Данный факт наводит на мысль об универсальности регуляторных и ферментативных механизмов. Применение милдроната оказало нормализующее действие, которое было не так выражено как в низкогорных исследованиях.
Морфофункциональные изменения органов Изменения в сердечной мышце У реадаптирующихся к низкогорью крыс в сердечной мышце наблюдалось полнокровие сосудов, стазы; субтотальная дистрофия миоцитов - гипохромия ядер и цитоплазмы, фрагментация цитоплазмы, а также диапедедезные кровоизлияния, что свидетельствует о дистрофических изменениях миокарда. Употребление алкоголя (8 группа) в течение 60-ти дней привело к мелкоочаговому периваскулярному разрастанию жировой ткани и субэндокардиальной очаговой дистрофии миоцитов, т.е. видна жировая дистрофия сердца. При применении милдроната также наблюдалась дистрофия миоцитов как и в группе без коррекции, т.е. положительного эффекта не обнаружено.
Изменения в печени В печени у реадаптирующихся к низкогорью крыс наблюдалась слабо выраженная мелкоочаговая лимфо-гистиоцитарная инфильтрация трактов, мелкозернистая дистрофия гепатоцитов в подкапсульной и периваскулярной зонах, видны регенераторные изменения гепатоцитов, т.е. регистрируются проявления слабо выраженного гепатита. После принудительной алкоголизации обнаружилась субтотальная мелко- и крупнокапельная жировая дистрофия с выраженным сохранением гепатоцитов в центре долек, полнокровием микроциркуляторного русла. Введение препарата привело к небольшим очагам мелкокапельной дистрофии гепатоцитов, слабо выраженной лимфоцитарной инфильтрацией трактов. Таким образом препарат уменьшил распространение жировой дистрофии, уменьшил количество жиров в гепатоцитах, но не влиял на признаки гепатита.
Изменения в почках В 7 группе животных в слизистой оболочке лоханки почек обнаружена умеренно выраженная лимфо-гистиоцитарная инфильтрация с очагами фиброза, в паренхиме очаговая периваскулярная лимфогистиоцитарная инфильтрация, мелкоочаговая белковая дистрофия эпителия извитых канальцев, что свидетельствует о признаках хронического пиелонефрита. Употребление алкоголя в течение 60-ти дней привело к мелкоочаговой белковой дистрофии эпителия извитых канальцев. При даче препарата наблюдалась мелкоочаговая гиалиново-капельная дистрофия эпителия извитых канальцев, полнокровие мозгового слоя (микроциркуляторного русла), т.е. положительного эффекта не обнаружено.
Изменения в поджелудочной железе В морфологической картине поджелудочной железы у реадаптирующихся животных обнаружилась субтотальная атрофия долек с массивным замещением жировой тканью (субтотальный липоматоз). Дача алкоголя привела к слабо выраженному мелкоочаговому разрастанию жировой ткани внутри долек. При даче препарата не наблюдалось явлений липоматоза железы.
Изменения в головном мозге В 7 группе крыс в головном мозге регистрировался периваскулярный и перицеллюлярный отек, стазы, т.е. видны отечные явления. Принудительная алкоголизация привела к диапедезным кровоизлияниям, полнокровию сосудов мягкой мозговой оболочки. При введении препарата не обнаруживалось полнокровия сосудов мягкой мозговой оболочки, т.е. нет признаков кровоизлияний.
ВЫВОДЫ 1. При длительном употреблении алкоголя в условиях низко- (760 м), высокогорья (3200 м) и при реадаптациии к низкогорью, после пребывания в горах, его концентрация в крови повышалась практически одинаково, применение милдроната достоверно снижало его уровень в одинаковой степени во всех группах.
2. При принудительной алкоголизации в условиях низко-, высокогорья и у реадаптирующихся к низкогорью животных на ЭКГ регистрируются нарушения реполяризации, функции проводимости и признаки ишемии сердца, а также наблюдается снижение поведенческой активности и физической работоспособности.
3. В условиях низкогорья принудительная алкоголизация вызывает гипокоагуляционные сдвиги, а высокогорье и при реадаптации к низкогорью - гиперкоагуляционные.
4. При воздействии высокогорной гипоксии и алкоголя наблюдается единая тенденция в модуляции ионного баланса в крови, в >Захаров, В.М. Петров, В.А. Лемешенко, Г.И. Горохова // Медицина Кыргызстана. - 2011. - № 7. - С. 50-52.
17. Петров В.М. Влияние алкоголя и милдроната на морфологическую структуру печени в условиях высокогорья / Козьмина Ю.В., Захаров Г.А., Петров В.М., Лемешенко В.А., Горохова Г.И. // Хирургия, Морфология, Лимфология. - 2011. - Т. 8, № 16. - С. 17-20.
18. Петров В.М. Влияние алкоголя и милдроната на морфологическую структуру сердечной мышцы в условиях низкогорья / В.М. Петров // Вестник КРСУ. - 2012. - Т. 12, № 2. - С. 109-112.
19. Петров В.М. Изменение содержания электролитов в тканях крыс и их коррекция при принудительной алкоголизации в условия высокогорья / В.М. Петров // Вестник КРСУ. (принята в печать).
20. Петров В.М. Влияние высокогорья, алкоголя и милдроната на ЭКГ / Г.А. Захаров, В.М. Петров, Г.И. Горохова, С.А. Улумбекова // Вестник КРСУ.
(принята в печать).
21. Петров В.М. Влияние алкоголя на нервную, сердечно-сосудистую систему, обменные процессы, гемокоагуляцию, электролитный обмен (литературный обзор) / В.М. Петров // Медицина Кыргызстана. (принята в печать).
22. Петров В.М. Влияние алкоголя и милдроната на морфологическую структуру сердечной мышцы в условиях высокогорья / Г.А. Захаров, Ю.В.
Козьмина, В.М. Петров, Г.И. Горохова, В.А. Лемешенко // Вестник КРСУ.
(принята в печать).
Объем 1,75 п.л.
Тираж 100 экз. Заказ Типография ОсОО Алтын тамга 720000, г. Бишкек, ул. Орозбекова, Тел.: (+996 312) 62-13-e-mail: romass@front.ru
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по медицине